运用cDNA-AFLP技术初步鉴定两种方法合成的cDNA的指纹图谱

运用cDNA-AFLP技术初步鉴定两种方法合成的cDNA的指
纹图谱
史胜青;张守攻;李春秀;汪阳东;齐力旺
【期刊名称】《分子植物育种》
【年(卷),期】2006(4)1
【摘要】在植物基因克隆以及构建cDNA文库时,都需要合成高质量的双链cDNA,并要达到一定的数量。

然而研究者经常受到试验样品量的限制。

特别是比较稀少的植物材料,例如植物的根尖、茎尖或花的雌、雄蕊等,难以获得足够的RNA,以致影响cDNA的合成量,无法开展下游的实验。

以PCR为基础合成第二链cD-NA的Smart技术(LD-PCR),能够以50ng的总RNA为反转录模板合成高质量的双链cDNA。

但研究者对第二链采用PCR方法是否有些基因信息丢失或丰度上发生很大的变化存有疑虑。

针对以上存在的问题,通过置换合成和长距离PCR(LD-PCR)两种方法合成3个月的梭梭幼苗茎尖双链cDNA,EcoRI和MseI限制性内切酶双酶切后,用16对选择性扩增引物对两种cDNA进行cDNA-AFLP的指纹图谱分析。

结果表明,置换合成和LD-PCR两种方法合成的cDNA指纹图谱中,分别有条带约495条和470条。

其中,相同的条带共计433条,不同的条带分别有62条和37条,分别为各自合成方法总指纹数的12.5%和7.87%,相同的指纹信息达87%以上。

这说明两种方法合成的cDNA存在着较大的差异,合成方法对cDNA合成质量的影响较大,为研究人员选用何种cDNA合成方法提供了借鉴。

【总页数】4页(P79-82)
【关键词】梭梭(Haloxylon;Ammodendron);置换合成法;LD-PCR法;cDNA-AFLP
【作者】史胜青;张守攻;李春秀;汪阳东;齐力旺
【作者单位】中国林业科学研究院林研所细胞生物学实验室
【正文语种】中文
【中图分类】S513;S565.4
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