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注释: 1．如果要加在序列的 5‘端，就在酶切位点识别碱基序列（红色)的 5’端加上
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酶 Acc I Afl III Asc I Ava I BamH I Bgl II BssH II BstE II BstX I Cla I
EcoR I
PCR 设计引物时酶切位点的保护
寡核苷酸序列
GGTCGACC CGGTCGACCG CCGGTCGACCGG
CACATGTG CCACATGTGG CCCACATGTGGG
GACTAGTC GGACTAGTCC CGGACTAGTCCG CTAGACTAGTCTAG
GGCATGCC CATGCATGCATG ACATGCATGCATGT
AAGGCCTT GAAGGCCTTC AAAAGGCCTTTT
CTCTAGAG GCTCTAGAGC TGCTCTAGAGCA CTAGTCTAGACTAG
GGCGCGCC AGGCGCGCCT TTGGCGCGCCAA
CCCCGGGG CCCCCபைடு நூலகம்GGGG TCCCCCGGGGGA
CGGATCCG CGGGATCCCG CGCGGATCCGCG
CAGATCTG GAAGATCTTC GGAAGATCTTCC
GGCGCGCC AGGCGCGCCT TTGGCGCGCCAA
相应的碱基（黑色），相同如果要在 3‘端加保护碱基,就在酶切位点识别碱 基序列（红色)的 3’端加上相应的碱基（黑色)。 2．切割率：正确识别并酶切的效率 3.加保护碱基时最好选用切割率高时加的相应碱基.
GGGT（A/T)ACCC
AACTGCAGAACCAATGCATTGG AAAACTGCAGCCAATGCATTGGAA CTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT
CATCGATG GATCGATC CCATCGATGG CCCATCGATGGG
GGAATTCC CGGAATTCCG CCGGAATTCCGG
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GGGGCCCC AGCGGCCGCT TTGCGGCCGCAA
CAAGCTTG CCAAGCTTGG CCCAAGCTTGGG
GGGTACCC GGGGTACCCC CGGGGTACCCCG
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GTCGACGTCAAAAGGCCATAGCGGCCGC GCGTCGACGTCTTGGCCATAGCGGCCGCGG ACGCGTCGACGTCGGCCATAGCGGCCGCG
GAA
GAGTACTC AAAAGTACTTTT
CCCGGG CCCCGGGG CCCCCGGGGG TCCCCCGGGGGA
GTTTAAAC GGTTTAAACC GGGTTTAAACCC AGCTTTGTTTAAACGGCGCGCCGG
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GACGCGTC CGACGCGTCG
CCCATGGG CATGCCATGGCATG
CCATATGG CCCATATGGG CGCCATATGGCG GGGTTTCATATGAAACCC GGAATTCCATATGGAATTCC GGGAATTCCATATGGAATTCCC
GGCTAGCC CGGCTAGCCG CTAGCTAGCTAG
GCTGCAGC TGCACTGCAGTGCA AACTGCAGAACCAATGCATTGG AAAACTGCAGCCAATGCATTGGAA CTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT
CCGATCGG ATCGATCGAT TCGCGATCGCGA
CGAGCTCG
GCCGCGGC TCCCCGCGGGGA
TTGCGGCCGCAA ATTTGCGGCCGCTTTA AAATATGCGGCCGCTATAAA ATAAGAATGCGGCCGCTAAACTAT AAGGAAAAAAGCGGCCGCAAAAGGAAAA
TGCATGCATGCA CCAATGCATTGGTTCTGCAGTT
TTAATTAA GTTAATTAAC CCTTAATTAAGG
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注释: 1．如果要加在序列的 5‘端，就在酶切位点识别碱基序列（红色)的 5’端加上
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酶 Acc I Afl III Asc I Ava I BamH I Bgl II BssH II BstE II BstX I Cla I
EcoR I
PCR 设计引物时酶切位点的保护
寡核苷酸序列
GGTCGACC CGGTCGACCG CCGGTCGACCGG
CACATGTG CCACATGTGG CCCACATGTGGG
GACTAGTC GGACTAGTCC CGGACTAGTCCG CTAGACTAGTCTAG
GGCATGCC CATGCATGCATG ACATGCATGCATGT
AAGGCCTT GAAGGCCTTC AAAAGGCCTTTT
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CCCCGGGG CCCCCபைடு நூலகம்GGGG TCCCCCGGGGGA
CGGATCCG CGGGATCCCG CGCGGATCCGCG
CAGATCTG GAAGATCTTC GGAAGATCTTCC
GGCGCGCC AGGCGCGCCT TTGGCGCGCCAA
相应的碱基（黑色），相同如果要在 3‘端加保护碱基,就在酶切位点识别碱 基序列（红色)的 3’端加上相应的碱基（黑色)。 2．切割率：正确识别并酶切的效率 3.加保护碱基时最好选用切割率高时加的相应碱基.
GGGT（A/T)ACCC
AACTGCAGAACCAATGCATTGG AAAACTGCAGCCAATGCATTGGAA CTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT
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Mlu I Nco I Nde I
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CAAGCTTG CCAAGCTTGG CCCAAGCTTGGG
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