自身对照法在阿司匹林肠溶片溶出曲线一致性评价中的应用

自身对照法在阿司匹林肠溶片溶出曲线一致性评价中的应用聂延君;郑静;陈真;谢元超
【摘要】目的建立自身对照法测定阿司匹林肠溶片溶出曲线,探讨自身对照法在仿制药质量一致性评价中的应用,并比较3个厂家的样品在3种溶出介质中的溶出曲线,考察仿制制剂与参比制剂是否一致。

方法采用自身对照法测定阿司匹林肠溶片溶出度并和高效液相色谱法进行比较,采用篮法,溶出介质为p H 1.0盐酸溶液、p H6.8缓冲液和p H 7.4缓冲液3种,转速100 rpm。

结果自身对照法在10-
120μg·m L-1浓度范围内呈线性（r=1.000）,3种介质的方法回收率为100.7%-101.8%,RSD为0.71%-0.94%,溶出量测定结果与高效液相色谱法基本一致。

在p H 1.0盐酸溶液中3个生产厂家的阿司匹林肠溶片溶出度基本一致,在其他2种溶出介质中,仿制制剂的溶出曲线均与参比制剂不相似。

结论自身对照法方法简便、准确、可行,可作为仿制药质量一致性评价中溶出度测定的方法加以推广应用。

【期刊名称】《药学研究》
【年(卷),期】2017(036)011
【总页数】5页(P652-655)
【关键词】阿司匹林肠溶片溶出曲线自身对照法紫外分光光度法高效液相色谱法仿制药质量一致性评价
【作者】聂延君;郑静;陈真;谢元超
【作者单位】山东省食品药品检验研究院,山东济南250101;山东省食品药品检验研究院,山东济南250101;山东省食品药品检验研究院,山东济南250101;山东省食品药品检验研究院,山东济南250101
【正文语种】中文
【中图分类】R927.1
阿司匹林又名乙酰水杨酸(acetylsalicylic acid，ASA)，具有良好的解热镇痛、抗
炎抗风湿[1－2]作用，还是预防脑血栓、心肌梗死和治疗动脉血栓再发的药物[3－5]，是医药史上的三大经典药物之一。

溶出度是评价制剂处方、生产工艺、制剂生物利用度的重要指标，能间接反映药物的质量与体内疗效的关系。

在仿制药质量一致性评价工作中，通过比较多条溶出曲线相似性来判定仿制制剂与参比制剂溶出曲线是否一致，是评价口服固体制剂质量的重要指标[6－7]。

本文按照仿制药质量一致性评价指导原则和国内外相关的研究技术资料，选择国内两家阿司匹林肠溶片(规格100 mg)仿制制剂和拜耳参比制剂(规格100 mg)进行溶出曲线比较，选用pH 1.0盐酸溶液、pH 6.8缓冲液和pH 7.4缓冲液为溶出介质，采用自身对照法
和高效液相色谱(HPLC)法两种方法测定溶出量，结果显示两种测定方法的结果基
本一致。

阿司匹林性质不稳定，易降解成水杨酸(SA)[8]，自身对照法能够有效排
除辅料和降解的影响，测得的结果为SA和ASA的总量，不必使用SA和ASA的
对照品，具有操作简单、省时省力的特点，因此自身对照法在阿司匹林肠溶片仿制药质量一致性评价工作中有良好的应用前景。

1.1 仪器 RCZ－8M溶出试验仪(天津市天大天发科技有限公司)；ZKT－18F真空
脱气仪(天津市天大天发科技有限公司)；LC－20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司)；Shimadzm UV－2550紫外分光光度计(日本岛津公司)等。

1.2 试药阿司匹林对照品(中国食品药品检定研究院，批号:100113－201104，含量:100.0%)，水杨酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号:100106－201104，含量:99.9%)；阿司匹林肠溶片分别由拜耳参比厂、国内A公司和国内B公司提供，各3批样品；盐酸、磷酸钠、氢氧化钠、磷酸二氢钾、冰醋酸均为分析纯；甲醇、
乙腈、四氢呋喃为色谱纯。

2.1 溶出曲线方法采用溶出度测定法第一法装置，以pH 6.8和pH 7.4两种缓冲
液进行试验。

其中pH 6.8缓冲液为法定标准规定的溶出介质。

由于纯化水的pH
可能变化，而肠溶衣对pH变化较为敏感，所以未采用水做溶出介质。

2.2 酸中溶出量取本品，pH 1.0的盐酸溶液为溶出介质(在pH 6.8缓冲液实验中，pH 1.0的盐酸溶液体积为750 mL，pH 7.4缓冲液试验中pH 1.0的盐酸溶液体
积为1 000 mL)，转速为100 rpm，依法操作，2 h时取溶液10 mL，滤过，取
续滤液作为供试品溶液。

2.3 缓冲液中溶出量
2.3.1 pH 6.8缓冲液中溶出量在酸中溶出量检查项下的溶液中继续加入(37±0.5)℃的0.2 mol·L－1磷酸钠溶液 250 mL，混匀，用2 mol·L－1盐酸溶液或2 mol·L －1氢氧化钠溶液调节溶液pH值至6.8±0.05，继续运转，在10、15、30、35、40、45、60 min，取溶液5 mL，滤过，取续滤液作为供试品溶液，并同时补液
5 mL。

2.3.2 pH 7.4缓冲液中溶出量弃去酸中溶出量检查项下的各溶出杯中酸液，立即加入温度为(37±0.5)℃的pH 7.4磷酸盐缓冲液1 000 mL(取250 mL 0.2 mol·L－1磷酸二氢钾溶液与195.5 mL 0.2 mol·L－1氢氧化钠溶液混合后，再加水稀释至1 000 mL，摇匀，即得)，继续运转，在 10、15、30、35、40、45 min时取溶
液5 mL，滤过，取续滤液作为供试品溶液，并同时补液5 mL。

2.4 溶出量测定方法
2.4.1 HPLC法[9] 参照《中国药典》2015年版(二部)阿司匹林肠溶片含量测定方法。

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈－四氢呋喃－冰醋酸－水
(20∶5∶5∶70)为流动相；检测波长为 276 nm，流速1.0 mL·min－1，柱温30℃。

酸中溶出量对照品溶液:取阿司匹林对照品，精密称定，加1%冰醋酸的甲
醇溶液溶解并定量稀释制成每l mL中含阿司匹林10 μg的溶液；缓冲液中对照品溶液:取阿司匹林对照品，精密称定，加1%冰醋酸的甲醇溶液溶解并定量稀释制成每l mL中含阿司匹林50 μg的溶液，作为阿司匹林对照品溶液。

另取水杨酸对照品，精密称定，加1%冰醋酸的甲醇溶液溶解并定量稀释制成每1 mL中含水杨酸5.5 μg的溶液，作为水杨酸对照品溶液。

精密量取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出每片中阿司匹林在
酸中和缓冲液中的溶出量，其中缓冲液中溶出量为水杨酸含量乘以1.304后，与
阿司匹林含量相加所得。

2.4.2 自身对照法(UV法) 取本品10片，精密称定，研细，取细粉适量(约相当于
一片的重量)，置100 mL量瓶中，加相应溶出介质适量超声使溶解并稀释至刻度，过滤，精密量取续滤液5 mL置100 mL容量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，制成约50 μg·L－1的自身对照溶液。

在200～400 nm波长范围内进行全波长扫描，得到最大吸收波长，在此波长下测定各个时间点供试品溶液和自身对照溶液的吸光度，并计算出溶出量。

2.5 自身对照(UV法)方法学验证
2.5.1 线性关系考察取阿司匹林肠溶片10片，研成细粉，混合均匀，称取适量，
分别加3种溶出介质(pH 1.0盐酸溶液，pH 6.8缓冲液和pH 7.4缓冲液)制备成
浓度分别为 10、20、40、80、100、120 μg·mL－1的自身对照溶液(按阿司匹林标示量计算)，在最大吸收波长处测定其吸光度，以吸光度A对浓度C作线性回归，得到:pH 1.0:A＝0.006C，r＝1.000； pH 6.8:A＝0.003C，r＝1.000；pH 7.4:A
＝0.003C，r＝1.000；表明该法在 3 种介质中 10～120 μg·mL－1浓度范围内，线性关系均良好。

2.5.2 加样回收率分别取已知浓度的供试品液(约相当于阿司匹林10 μg·mL－1)，加入已知浓度的自身对照溶液，制备成相当于自身对照液20%、50%、110%的
低、中、高3种浓度溶液，在相应波长处测定吸光度。

结果本法在3种溶出介质
中的加样回收率分别为 pH 1.0:100.7%(n＝9)，RSD为0.94%；pH
6.8:101.1%(n＝9)，RSD 为 0.71%；pH
7.4:101.8%(n＝9)，RSD 为0.86%。

2.5.3 精密度分别取各pH条件下的自身对照液50 μg·mL－1重复测定吸光度6次，测得吸光度值的RSD 分别为pH 1.0:0.6%(n＝6)，pH 6.8:1.2%(n＝6)，pH 7.4:0.6%(n＝6)，表明本法精密度良好。

2.5.4 最大吸收波长的测定分别取各pH条件下的自身对照液在200～400 nm波长范围内进行紫外扫描。

结果，在pH 1.0盐酸溶液中的最大吸收波长为275 nm，在pH 6.8和pH 7.4缓冲液中的最大吸收波长均为266 nm。

结果见下图。

因此，pH 1.0盐酸溶液、pH 6.8缓冲液和pH 7.4缓冲液中的溶出量测定波长分别为275、266、266 nm，这与《美国药典》《英国药典》中采用的检测波长较一致。

2.6 溶出曲线比较
2.6.1 酸中溶出量 HPLC法和自身对照法两种测定方法的结果较一致，3个厂家样
品在酸中均具有良好的耐酸性，溶出量均较小，3个厂家样品在酸中的溶出行为较一致。

2.6.2 pH 6.8缓冲液中溶出曲线拜耳参比制剂分别采用HPLC法和自身对照法测
定溶出量并绘制溶出曲线，如图2所示，两种方法测得的溶出结果较一致。

自身
对照法和HPLC法测得的参比制剂和国内制剂溶出曲线如图3和图4所示，国内
制剂与参比制剂的溶出曲线存在差异。

2.6.3 pH 7.4缓冲液中溶出量拜耳参比制剂分别采用HPLC法和自身对照法测定溶出量并绘制溶出曲线，如图5所示，两种方法测得的溶出结果较一致。

自身对
照法和HPLC法测得的参比制剂和国内制剂溶出曲线如图6和图7所示，国内制
剂与参比制剂的溶出曲线存在差异。

3.1 3种溶出介质采用自身对照法测得的结果和HPLC法基本一致，可见自身对照
法测定的结果准确性较高。

另外，溶出度采用自身对照法相比HPLC法具有独特
的优势[10－12]:①可有效消除药物辅料及复方制剂中其他成分对测定结果的干扰；
②不需对照品即可快速检验，操作简单、省时省力，数据获取直接。

由于阿司匹林性质不稳定，易降解成水杨酸，HPLC法测定溶出量时需要分别测定阿司匹林量和水杨酸量，再将水杨酸的量乘以1.304后，与阿司匹林量相加得出溶出量，因此HPLC法需要使用阿司匹林和水杨酸两种对照品。

自身对照法测定时不需使用对照品，测定结果是阿司匹林和水杨酸的总量，不受阿司匹林降解的影响，与HPLC
法比较，自身对照法在阿司匹林肠溶片的溶出曲线测定中更加方便快捷，因此自身对照法可应用于阿司匹林肠溶片溶出曲线预测定以及试制样品的质量评价中。

3.2 采用f2相似因子比较溶出曲线相似性，需要具备的条件之一是除0时外，选
取的第一个时间点溶出结果的相对标准偏差应不得过20%，自第二个时间点至最
后时间点溶出结果的相对标准偏差应不得过10%[14]。

试验中发现参比制剂和仿
制制剂在pH 6.8和7.4缓冲液中各个取样点溶出量的RSD偏高，自身对照法和HPLC法测得的结果基本一致，都不能满足f2因子比较要求。

因此f2相似因子不适合该制剂的溶出曲线相似性的比较。

3.3 从自身对照法测得的pH 6.8和7.4缓冲液的溶出曲线上可以看出，国内仿制
制剂A和B与拜耳参比制剂的溶出曲线均存在显著差异。

参比制剂溶出慢，释药
延迟15 min左右，在40 min时达到释药平台期。

国内A和B制剂没有延迟释放药物的现象，在0～30 min内一直持续不断溶出，30 min即达到平台期，与参比制剂的溶出行为差异较大，反映出国内制剂的处方、工艺与参比制剂存在较大区别，因此国内生产企业需深入研究肠溶包衣材料、辅料以及制备工艺的差异，以不断提高产品质量，做到与参比制剂质量一致。

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