壳聚糖絮凝法精制川牛膝总多糖酶提取液的工艺研究
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基金项目：国家大学生创新创业训练计划，项 目 编号 ： 131025159；华东理工大学本科教育教学改革项目（2013年）
进红细胞免疫、抗肿瘤、对抗环磷酰胺所致外周白 细胞减少等疗效。
絮凝技术是一种简单有效的固液两相体系分 离方法，壳聚糖作为一种天然的链状高分子絮凝 剂，由葡萄糖胺通过β-1，4-糖苷键连接而成。 由于 分子中含有氨基，使壳聚糖在酸性条件下带有正电 荷，可发挥电中和与吸附架桥的双重絮凝作用，并 具有安全、无毒、稳定的优点。
UV1900PC 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 ， 上 海 亚 研 电 子科技有限公司；pHS-2C数字式pH计，上海雷磁仪 器厂；AL204分析天平，上海梅特勒-托利多仪器有 限公司；SHB-Ⅲ型循环水真空泵，巩义市英峪予华 仪 器 厂 ；DF-101S 集 热 式 恒 温 加 热 磁 力 搅 拌 器 ， 巩 义市英峪予华仪器厂；RE-52C旋转蒸发器，上海予 华仪器有限公司；RJ-TGL-16C台式高速离心机，无 锡市瑞江分机仪器有限公司。 1.2 样品及试剂的制备 1.2.1 样品溶液的制备
（Engineering Center for Tradition Chinese Medicine Modernization,East China University of Science and Technology, Shanghai 200237）
. All ARbistgrahctt：sTheReesssaeyrwvaesda.imed at studying flocculating purification of total polysaccharides by using chitosan.
纤 维 素 酶 ， 上 海 Fra bibliotek 洋 生 物 技 术 有 限 公 司 ； 95 % 工业乙醇；36%浓盐酸、 氢氧化钠、5%苯酚溶液、 98%浓硫酸等均为国产分析纯； 葡萄糖为标准品
. Al（l＞R95i%g）h，t上s海R凌es峰e化rv学ed试.剂有限公司；牛血清白
蛋白和考马斯亮蓝G-250均为分析纯，上海源聚生 物科技有限公司；壳聚糖，上海伟康生物制品有限 公司。 1.1.3 主要仪器
关键词：壳聚糖；絮凝；川牛膝；总多糖；试剂
Study on the Flocculating Purification Process of Total Polysaccharides from Cyathula Officinalis Kuan by Using Chitosan
Cheng Yue Liu Aoxia Xia Yuting Gu Xuhan Han Wei
Key words：chitosan; flocculate; Cyathula officinalis Kuan; total polysaccharide; reagent
0 引言
川牛膝为苋科植物川牛膝（Cyathula officinaIis Kuan）的干燥根，为著名川产药材，具有补肝肾、强 筋骨、治疗腰膝酸麻及肝阳眩晕、散癖血、消肿痛等 功效。 川牛膝多糖是从川牛膝根中提取的一种生物 活性多糖，相对分子质量1 000～2 200，是高度分支 的果聚糖。 现代药理研究表明，川牛膝多糖具有促
本文以多糖保留率和脱蛋白率为指标，考察壳 聚糖对川牛膝总多糖酶提取液的絮凝纯化工艺，并
31
工艺与装备◆Gongyi yu Zhuangbei
通过数据分析优化工艺参数。
1 材料与方法
1.1 材料与设备 1.1.1 药材
川牛膝，产地为四川，购于上海雷允上药店。 将 川牛膝粉碎过筛成干粉后进行预处理：用10倍量的 体积分数95%的工业乙醇回流1 h，冷却至室温，取 上清液回收乙醇，烘干药渣，装袋于阴凉处储存 备用。 1.1.2 主要试剂
Gongyi yu Zhuangbei◆工艺与装备
壳聚糖絮凝法精制川牛膝总多糖酶 提取液的工艺研究
成 悦 刘傲霞 夏玉婷 谷旭晗 韩 伟
（华东理工大学中药现代化工程中心，上海 200237）
摘 要：以壳聚糖为絮凝剂对川牛膝的总多糖进行了絮凝纯化研究。 通过单因素考察及正交试验得到优化 的工艺条件为：絮凝温度45 ℃、壳聚糖用量0.4 mL/g生药量、絮凝时间2 h、药液浓缩比1:12、药液pH＝4。 此时， 多糖保留率76.32%、脱蛋白率64.25%，与传统醇沉工艺相比，絮凝法得到的多糖保留率和纯度较高。
The optimum conditions were obtained through single factor and orthogonal experiment. The results were as follows: the temperature was 45 ℃ , dosage of chitosan was 0.4 mL/g raw material, flocculation time was 2 h, solution concentration ratio was 1:12, pH of solution was 4. Under this condition, polysaccharides retention rate was 76.32%, deproteinizing rate of 64.25%. Compared with the traditional alcohol precipitation process, the retention rate and purity of the polysaccharide of the flocculation purification process are higher.
（1）药 材 的 预 处 理 ： 将 川 牛 膝 粉 碎 过 筛 成 干 粉 后进行预处理，用10倍量的体积分数95%的工业乙 醇回流1 h，冷却至室温，回收乙醇，烘干药渣，装袋
于阴凉处储存备用。 （2）样品溶液的制备：称取20 g已处理的药材
进红细胞免疫、抗肿瘤、对抗环磷酰胺所致外周白 细胞减少等疗效。
絮凝技术是一种简单有效的固液两相体系分 离方法，壳聚糖作为一种天然的链状高分子絮凝 剂，由葡萄糖胺通过β-1，4-糖苷键连接而成。 由于 分子中含有氨基，使壳聚糖在酸性条件下带有正电 荷，可发挥电中和与吸附架桥的双重絮凝作用，并 具有安全、无毒、稳定的优点。
UV1900PC 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 ， 上 海 亚 研 电 子科技有限公司；pHS-2C数字式pH计，上海雷磁仪 器厂；AL204分析天平，上海梅特勒-托利多仪器有 限公司；SHB-Ⅲ型循环水真空泵，巩义市英峪予华 仪 器 厂 ；DF-101S 集 热 式 恒 温 加 热 磁 力 搅 拌 器 ， 巩 义市英峪予华仪器厂；RE-52C旋转蒸发器，上海予 华仪器有限公司；RJ-TGL-16C台式高速离心机，无 锡市瑞江分机仪器有限公司。 1.2 样品及试剂的制备 1.2.1 样品溶液的制备
（Engineering Center for Tradition Chinese Medicine Modernization,East China University of Science and Technology, Shanghai 200237）
. All ARbistgrahctt：sTheReesssaeyrwvaesda.imed at studying flocculating purification of total polysaccharides by using chitosan.
纤 维 素 酶 ， 上 海 Fra bibliotek 洋 生 物 技 术 有 限 公 司 ； 95 % 工业乙醇；36%浓盐酸、 氢氧化钠、5%苯酚溶液、 98%浓硫酸等均为国产分析纯； 葡萄糖为标准品
. Al（l＞R95i%g）h，t上s海R凌es峰e化rv学ed试.剂有限公司；牛血清白
蛋白和考马斯亮蓝G-250均为分析纯，上海源聚生 物科技有限公司；壳聚糖，上海伟康生物制品有限 公司。 1.1.3 主要仪器
关键词：壳聚糖；絮凝；川牛膝；总多糖；试剂
Study on the Flocculating Purification Process of Total Polysaccharides from Cyathula Officinalis Kuan by Using Chitosan
Cheng Yue Liu Aoxia Xia Yuting Gu Xuhan Han Wei
Key words：chitosan; flocculate; Cyathula officinalis Kuan; total polysaccharide; reagent
0 引言
川牛膝为苋科植物川牛膝（Cyathula officinaIis Kuan）的干燥根，为著名川产药材，具有补肝肾、强 筋骨、治疗腰膝酸麻及肝阳眩晕、散癖血、消肿痛等 功效。 川牛膝多糖是从川牛膝根中提取的一种生物 活性多糖，相对分子质量1 000～2 200，是高度分支 的果聚糖。 现代药理研究表明，川牛膝多糖具有促
本文以多糖保留率和脱蛋白率为指标，考察壳 聚糖对川牛膝总多糖酶提取液的絮凝纯化工艺，并
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工艺与装备◆Gongyi yu Zhuangbei
通过数据分析优化工艺参数。
1 材料与方法
1.1 材料与设备 1.1.1 药材
川牛膝，产地为四川，购于上海雷允上药店。 将 川牛膝粉碎过筛成干粉后进行预处理：用10倍量的 体积分数95%的工业乙醇回流1 h，冷却至室温，取 上清液回收乙醇，烘干药渣，装袋于阴凉处储存 备用。 1.1.2 主要试剂
Gongyi yu Zhuangbei◆工艺与装备
壳聚糖絮凝法精制川牛膝总多糖酶 提取液的工艺研究
成 悦 刘傲霞 夏玉婷 谷旭晗 韩 伟
（华东理工大学中药现代化工程中心，上海 200237）
摘 要：以壳聚糖为絮凝剂对川牛膝的总多糖进行了絮凝纯化研究。 通过单因素考察及正交试验得到优化 的工艺条件为：絮凝温度45 ℃、壳聚糖用量0.4 mL/g生药量、絮凝时间2 h、药液浓缩比1:12、药液pH＝4。 此时， 多糖保留率76.32%、脱蛋白率64.25%，与传统醇沉工艺相比，絮凝法得到的多糖保留率和纯度较高。
The optimum conditions were obtained through single factor and orthogonal experiment. The results were as follows: the temperature was 45 ℃ , dosage of chitosan was 0.4 mL/g raw material, flocculation time was 2 h, solution concentration ratio was 1:12, pH of solution was 4. Under this condition, polysaccharides retention rate was 76.32%, deproteinizing rate of 64.25%. Compared with the traditional alcohol precipitation process, the retention rate and purity of the polysaccharide of the flocculation purification process are higher.
（1）药 材 的 预 处 理 ： 将 川 牛 膝 粉 碎 过 筛 成 干 粉 后进行预处理，用10倍量的体积分数95%的工业乙 醇回流1 h，冷却至室温，回收乙醇，烘干药渣，装袋
于阴凉处储存备用。 （2）样品溶液的制备：称取20 g已处理的药材