大鼠骨髓间充质干细胞体外培养转化为神经细胞的实验

大鼠骨髓间充质干细胞体外培养转化为神经细胞的实验
徐龙强;隋静;丁钰;刘广义;王清;郭云良
【期刊名称】《中国组织工程研究》
【年(卷),期】2007(011)007
【摘要】目的:观察成年大鼠体外愿代培养骨髓间充质干细胞向神经细胞的转化情况.方法:实验于2005-08/2006-02在青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所细胞生物工程实验室进行,取2只4个月龄Wistar大鼠,获取胫骨和股骨骨髓,提取骨髓间充质干细胞,无血清和有血清培养基进行细胞克隆,应用碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子进行细胞扩增及诱导分化.采用IX-70型荧光倒置显微镜进行形态追踪观察.诱导分化后的细胞分别用巢蛋白抗体、神经元特异性烯醇化酶抗体、胶质原性纤维酸性蛋白抗体进行标记.结果:2只实验大鼠均进入结果分析.①源代细胞的生长情况和形态变化:初接种的细胞呈悬浮状态,接种后1 d内,骨髓间充质干细胞逐渐开始贴壁,2 d后贴壁细胞开始增殖.3 d后细胞呈长梭形及扁平状,出现聚集细胞团并有纤维发出,细胞间呈单层成纤维网状结构,纯化的骨髓间充质干细胞随培养时相的推进,细胞数呈幅度性扩增,细胞分化扩增呈散在性和聚集性细胞集落,出现干细胞克隆团.②诱导分化细胞的生长情况和形态变化:两周后分别加入碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞定向性分化.第3周换液,细胞克隆球趋于衰老期呈分裂崩解过程,形成片状细胞,向神经元分化.4周后片状干细胞发出大量的轴突及树突丝状纤维向神经元及神经胶质细胞分裂增殖.③神经细胞特异性标志的表达:镜下观察(×200/视野)结果显示:经培养一两周后,分化细胞经巢蛋白抗体标记呈棕黄色深染为神经干样细胞,约占80%;3周后,分化细胞经神经元特异性烯醇化酶抗体标记呈棕黄色深染为神经元,约占70%;4周后,分化细胞
经神经胶质纤维酸性蛋白抗体标记呈棕黄色深染为神经胶质细胞,约占90%. 结论:骨髓间充质干细胞具有较强的自我更新能力和多分化潜能,在合适的环境条件下,可诱导分化出神经元和神经胶质细胞,是较为理想的种子细胞.
【总页数】4页(P1243-1246)
【作者】徐龙强;隋静;丁钰;刘广义;王清;郭云良
【作者单位】青岛大学医学院附属医院检验科,山东省青岛市,266003;青岛大学医学院附属医院妇产科,山东省青岛市,266003;青岛大学医学院附属医院检验科,山东省青岛市,266003;青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所,山东省青岛市,266003;青岛大学医学院附属医院检验科,山东省青岛市,266003;青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所,山东省青岛市,266003
【正文语种】中文
【中图分类】R3
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