免疫细胞标志与功能检测技术优选文档专选课件

要为（ D ） A 单核细胞和粒细胞 B 单核细胞
C 淋巴细胞 D 淋巴细胞和单核细胞
E 淋巴细胞和粒细胞
5.Percoll分离液的主要成分是E( )
A．聚蔗糖
B．泛影葡胺 C．聚乙二醇
D．聚乙烯吡咯烷酮 E．经聚乙烯吡咯烷酮处
理的硅胶颗粒
6.分离人外周血淋巴细胞分层液的最佳密度为( E ) A.1.030 B.1.035 C.1.092 D.1.020
泛影葡胺比重为1.077±0.002
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掌握
聚蔗糖泛影葡胺--Ficoll分离液
原理：单次差速密度梯度离心的分离法 组成：2份6%聚蔗糖蒸馏水溶液+1份34%
泛影葡胺生理盐水溶液。 比重：1.077±0.001(最佳)
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1.077±0.001的分层液可将细胞分离
红细胞：1.093 粒细胞：1.092 单个核细胞1.0齐7齐6哈—尔医1.学0院9免0疫
全自动细胞分选系统
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荧光激活细胞分离仪分离法
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流式细胞分析仪
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四、不同细胞分离方法的综合评价
了解
早期：根据不同免疫细胞的物理属性和 生物学属性进行分离 近期：利用细胞表面标志进行分离
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1.分离外周血单个核细胞，单次差速密度梯度离 心法常
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Percoll：经聚乙烯吡咯烷酮（PVP)处理的硅胶颗粒。
死细胞、血小板 单核细胞 淋巴细胞
粒细胞 红细胞
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三、T、B细胞和T细胞亚群 熟悉
的分离
磁珠
高分子
(一)磁性微球分离法
材料
(二)荧光激活细胞分离仪分离法
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磁珠大小可以选择
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EA．.1.聚07蔗7糖7.FicBo．ll淋泛巴影细葡胞胺分离液C．的聚主乙要二成醇分是D( )
D．聚蔗糖+泛影葡胺齐齐哈尔E医．学聚院免蔗疫糖+聚乙二醇
第二节 淋巴细胞标志及
亚群分类
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细胞表面分化抗原
(Cluster of differentiation CD)
CD1a------CD350
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一、T细胞表面标志及亚群 熟悉
(一)CD3+CD4+CD8-辅助性T细胞 (Th) CD3+CD4+CD30- Th1 CD3+CD4+CD30+ Th2
(二)CD3+CD4-CD8+细胞毒性T细胞(CTL) (三)调节性T细胞 CD4+CD25+Foxp3+ ➢ Tr1–IL-10 ➢ Th3–TFG-β
磁性微球分离法细胞分选过程
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大小免疫磁珠分离细胞的特点比较
比较项目 对细胞的影响
对流式细胞仪的影响
分离条件要求 收率 纯度
分离时间 分离成本
大磁珠
小磁珠
对细胞造成机械压力，影 对细胞温和，不影响分离
响其生物学活性，不利于 细胞的后续培养。
分离后培养。
D 血小板和血浆、单个核细胞、红细胞、粒细胞
E 血小板和血浆、红细胞、单个核细胞、粒细胞用玻璃纤
3.维或葡聚糖凝胶Sephadex-G10柱分离细胞时，从柱上
洗脱下的细胞主要是B( )
A．粒细胞 B．淋巴细胞 C．单核细胞 D．T细
胞 E．B细胞
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4.采用Ficoll密度梯度分离法分离得到的细胞主
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CD4+ Th细胞亚群分化的调节作用
T细胞表面主要CD抗原及其特性
CD抗原 特异性 CD2 全部T细胞和部分NK细胞(E受体) CD3 成熟T细胞 (特征性标志) CD4 辅助性T细胞 (HIV受体) CD8 细胞毒性T细胞 CD25 活化T细胞(IL-2R) CD28 T细胞 CD40L 活化T细胞
阻塞流式细胞仪的喷嘴， 可直接上流式细胞仪检
影响散射光。
测，不影响散射光。
技术简单，分离可在试 需要很强的磁场来分离
管中完成。
细胞。
得率高。
得率不高。
纯度低。
纯度高。
分离速度快。
分离速度慢。
成本低。
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需要很强的磁场来分离， 需要一次性分离柱，不 能在普通试管
免疫磁珠细胞分选装置
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免疫细胞标志与功能检测技术
免疫细胞标志与功能检测技术
一、免疫细胞的分离
二、淋巴细胞标志及亚群分类
三、抗原提呈细胞的表面标志
四、淋巴细胞的功能检测
五、其他免疫细胞功能检测技术
六、免疫细胞表面标志和功能检测的临床
应用齐齐哈尔Leabharlann 学院免疫齐齐哈尔医学院免疫
掌握
第一节 免疫细胞的分离
一、外周血单个核细胞分离 二、淋巴细胞的分离 三、T、B细胞和T细胞亚群的分离 四、不同分离方法的评价
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一、外周血单个核细胞分离 掌握 外周血单个核细胞(perpheral blood
mononuclear cells, PBMC)：包括淋巴 细胞和单核细胞。
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了解
细胞分离基本原理
1.不同细胞密度不同 2.不同细胞表面生物学特性不同 3.不同细胞表面分化抗原不同
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用分层液是（ C）
A 明胶
B 右旋糖酐
C Ficoll分层液 D Percoll分层液 E 葡聚糖
2.Ficoll液单次密度梯度离心后外周血细胞分布由上至下
依次为（ C）
A 单个核细胞、血小板和血浆、粒细胞、红细胞
B 血小板和血浆、粒细胞、单个核细胞、红细胞
C 血小板和血浆、单个核细胞、粒细胞、红细胞
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密度梯度离心(Ficoll)离心
细胞纯度95%；细胞收率80%；淋巴细胞90%--95%
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二 、淋巴细胞分离
掌握
目的--去除单核细胞
1.贴壁粘附法 2.吸附柱过滤法: 将PBMC加入葡聚糖
凝胶SephadexG-10中，从柱上洗脱下 来的主要是淋巴细胞。 3.Percoll分离液法：经聚乙烯吡咯烷 酮（PVP)处理的硅胶颗粒。
熟悉
不同细胞密度不同
红细胞和粒细胞密度为1.092-1.093 单个核细胞密度为1.075-1.090
选择比重为1.075-1.090 介质 分离PBMC
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对分离介质的要求 熟悉
1.对细胞无毒 2.基本等渗 3.不溶于血浆等分离物质 4.有要求的比重 2份6%聚蔗糖蒸馏水溶液+1份34%
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二、B细胞表面标志 熟悉
➢ mIg(鉴定B细胞的指标)