细菌药敏试验报告的解读

苯唑西林 四环素敏感 氨苄西林
头孢唑啉
红霉素敏感
抗生素
预报药/提示药
预报药
（MIC法）葡萄球菌属对β内酰胺类抗生素 （头孢洛林除外） （K-B法）苯唑西林可以预测肺炎链球菌对青 霉素的敏感性
多西环素和米诺环素敏感
对非产β内酰胺酶的肠球菌，氨苄西林敏感可 以预测阿莫西林-克拉维酸，氨苄西林-舒巴坦 ， 哌拉西林，哌拉西林-他唑巴坦的敏感性， 青 霉素敏感也可预测氨苄西林，阿莫西林-克 拉 维酸，氨苄西林-舒巴坦，哌拉西林，哌拉 西 林-他唑巴坦的敏感性，然而，氨苄西林敏 感 不能认为对青霉素也敏感。
➢作用及意义：
1.了解病原微生物对各种抗生素的敏感（或耐受） 程度，以指导临床合理选用抗生素药物的微生物 学试验。 2.为了解致病菌对哪种抗菌素敏感，以合理用药， 减少体外盲药目敏试性验，是对一种抗菌药物在体内治疗有效性预测性的先决条
件
药敏试验的方法
➢定性的方法（K-B法 mm） 纸片扩散法
➢定量的方法（MIC法 mg/L） 1.肉汤稀释法 肉汤微量稀释法 肉汤微量稀释法 2. 琼脂稀释法 3. E-试验 4.自动化仪器
CLSIM100文件给出了各种细菌的天然耐药表,约有1-3%的天然耐药 菌株可能会由于方法学的差异,突变以及低水平耐药性表达的原因表现 为体外药敏试验敏感
药敏试验基本原则
➢标本中分离的细菌可能有临床意义而非定 值或污染时,才可进行药敏试验. 1.有菌部位标本:采样方法,标本是否合格, 菌 量(定量或半定量),毒力(致病性) 2.无菌部位标本:是否污染或是否感染(如 导 管定植等)
影响药敏结果的因素
培养基
➢应根据试验菌的营养需要进行配制。 ➢倾注平板时，厚度培养皿，倾注培 养基18-20ml为宜。 ➢培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物 质，如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗 菌活性，胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸 （PABA）能拮抗磺胺药和TMP的活性。
外药敏试验敏感，但体内治疗无效，不应报告敏 感。
肠杆菌科细菌
碳青霉烯类
➢ 微生物实验室 M100-S20 MHT（ 改 良 Hodge test),Carba NP,PCR怀疑菌株，MIC（MEM/IPM）2-4µg/ml 或ETP2µg/ml M100-S20-U：不必MHT 例外：流行病学，感染控制，mCIM
➢ MRSA，MRSCNS：青霉素， β-内酰胺/ β-内酰 胺酶抑制剂复合制剂，头孢菌素（除有抗MRSA 活性的）和碳青霉烯类—耐药
➢ 腐生葡萄球菌：尿液分离的Sap不进行常规试验： 腐生葡萄球菌对大部分治疗尿道感染的药物如呋 喃妥因，复方新诺明，或某一种喹诺酮类药是比 较敏感的，发现耐药的不多，同时上述几种药物 可以在尿液中达到很高的治疗浓度（呋喃妥因， 复方新诺明等是通过尿液排泄的）因此不必常规 作药敏试验
室间质评（卫生部，省）
4.药敏结果解释需结合病人,抗菌药物以及病原菌综 合考虑
病人因素(体重,年龄，性别，肝肾功能，感染严重程 度，是否怀孕等）
抗菌药物因素（药物的剂量，给药频率，在体内各 组织器官中的吸收，分布，代谢，排泄）
病原菌因素（体外药敏结果，细菌在感染部位的负 荷量，生物膜，变异（大小，CO2依赖，粘液型 等）
➢ MRS：（耐甲氧西林葡萄球菌） 对目前所有β内酰胺类抗生素耐药（头孢洛林除 外） 糖肽类结合利福平，磷霉素类，系统与局部感染， 半合成的链阳霉素类，唑烷酮类有效。
耐药表型
➢PRSP（青霉素耐药肺炎链球菌） 耐青霉素肺炎链球菌不仅对β内酰胺类
抗生素耐药，对大环内酯内，四环素类， 氟喹诺酮类都有不同程度耐药。 第三，四代头孢菌素，如头孢曲松，头孢 噻肟，头孢匹罗,头孢吡肟等,万古霉素,利福 平,格帕沙星,曲伐沙星,克林霉素敏感
➢ 变形杆菌属，普罗威登菌和摩根摩根菌 MIC（IPM）高于MIC（MEM/DOR）-非产酶机制
铜绿假单胞菌
• 囊性纤维化分离的铜绿假单胞菌 • 药敏 CLSI推荐纸片法 • 要求 需孵育24小时或以上 • 所有抗菌药物在延长治疗期间可致钢绿假
单胞菌发性耐药，因此，初次分离的敏感 菌株在开始治疗后3-4天内可发展为耐药株， 对重复分离菌株需重新进行药敏试验。
➢菌悬液制备后 15分钟内接种为佳
➢药敏纸片 菌液涂布后15分钟内完成药敏纸片贴放
➢孵育 贴上药敏纸片后15分钟内放入孵育内
几个术语
折点 敏感(S) 中介(I) 耐药(R) 剂量依赖性敏感(SDD) 流行病学界值(EVC) 野生株(WT) 非野生株(NWT)
折点
➢折点:能预测临床治疗效果,用以判断敏感， 中介，SDD，耐药，非敏感的最低抑菌浓 度（MIC）或者抑菌圈直径（mm)的数值。
药物的抑菌圈有轻微生长
沙门志贺菌属
➢ 粪便标本常规报告--氨苄西林，一种氟喹诺酮类 和复方磺胺甲噁唑
➢ 肠外沙门菌属 第三代头孢菌素，氯霉素 ➢ 伤寒沙门氏和甲乙丙型副伤寒沙门菌属-药敏试验
（不管肠外肠内） ➢ 肠内非伤寒沙门菌-不需要常规药敏试验 ➢ 所有的志贺菌都需要做药敏 ➢ 第一，二代头孢菌素，头霉素体外有活性，即体
药敏试验注意事项
➢细菌纯度 ➢菌悬液的制备 ➢至少要三个菌落（避免耐药菌成漏网之鱼） ➢异质性耐药或诱导突变株 ➢标准的接种菌量 ➢纸片法药敏试验的结果阅读（量取整数值） ➢熟读指南遵循规范
• 异质性耐药
异质性耐药
异质性耐药 标准的接种菌量
反 射 光
透 射 光
药敏试验注意事项
纸片法：15-15-15分钟最佳原则
流感/副流感嗜血杆菌
➢分离自脑脊液的流感嗜血杆菌 常规报告氨苄西林，一种三代头孢菌素， 氯霉素和美罗培南
➢氨苄西林 1.氨苄西林可以预测阿莫西林 2.大部分耐氨苄西林和阿莫西林的流感嗜 血 杆菌产TEM型β-内酰胺酶 3.头孢硝噻吩纸片能快速检测上述两药的 耐 药性
流感/副流感嗜血杆菌
➢ BLANK （β-内酰胺酶阴性，氨苄西林耐药）的 流感嗜血杆菌较少见，认为对阿莫西林/克拉维 酸，氨苄西林/舒巴坦，头孢克罗，头孢孟多， 头孢他美，头孢尼西，头孢丙烯，头孢呋新， 氯碳头孢和哌拉西林/他唑巴坦是耐药的，即使 有些菌株对上述药物体外显示敏感。
➢注意：对于β-内酰胺类抗菌药物，过高的接 种物浓度可以出现假耐药，物别是测定产 酶的流感嗜血杆菌
流感/副流感嗜血杆菌
纸片法 ➢要求 100mm平板≤4张，HTM平板 ➢结果阅读：黑色背景，反射光（即平板背
对光源）下读取抑菌环 ➢忽略不计：借助放大镜观察小菌落，培养
基中有拮抗剂（如甲氧苄啶和磺胺类药物 的抑菌环有轻微生长）即测量比较明显抑 制的边缘
药敏试验基本原则
➢保证药敏试验方法的标准性
需氧菌纸片扩散法(M2) 需氧菌肉汤稀释法(M7) 罕见菌和苛养菌药敏（M45） 自动化仪器法（厂商的SOP） 厌氧菌药敏（M11） 分枝杆菌 奴卡菌和需氧放线菌的药敏（M24） 酵母菌肉汤稀释法(M27) 酵母菌纸片扩散法（M44） 丝状真菌肉汤稀释法(M38) 非皮肤丝状真菌纸片扩散法(M51) 室内质控
➢折点的建立： 在注释列中解释标准是建立 是基于的给药方案通常是指菌株暴露于血 浆达到的药物浓度（肝肾功能正常的成年 人）
➢当执行新的折点时，强烈建议实验室将信 息与感染医师，药剂师，药学和治疗学委 会会及感染控制委员会共享
剂量依赖性敏感（SDD）
在药敏试验中，当菌株的药敏结果位于剂 量依赖性敏感区间时，意味着该菌株的抗 菌药物治疗成功率取决于应用于病人的药 物剂量，对体外药物SDD的菌株如要达到 临床疗效，有必要使用一个相对高于制订 折点时参考药物剂量的更高剂量（可通过 使用增加剂量或高频率给药等方式实现）， 当药物有多个批准的使用剂量时，建议对 SDD的菌株治疗采用最大允许剂量，以保 证达到最高的达标概率，同时需要参照说 明和器官功能进行剂量调整。
非复杂性泌尿系统感染的大肠埃希菌，肺炎 克雷伯菌及奇异变形杆菌对口服头孢拉定， 头孢地尼，头孢克洛，头孢丙烯，头孢泊肟 ， 头孢呋新的敏感性，（某些菌株对头孢唑 啉 耐药但对头孢地尼，头孢泊肟或头孢呋新 敏 感）
克拉霉素，阿奇霉素，地红霉素敏感
耐药表型
➢ BLAC（ β内酰胺酶） 对不稳定青霉素耐药，95%以上葡萄球菌均产 MSSA的治疗含酶抑制剂，二代头孢等有效
CLSI关于药敏试验的重要的脚注解读
肠杆菌科细菌
纸片法
➢基本要求：150mm平板≤12张，100mm平 板≤6张，纸片中心相距不少于24mm,避免 抑菌环重叠。
➢结果阅读：黑色背景，反射光（平板背对 光源）肉眼读取抑菌环（边缘无明显可视 生长）。
革兰氏阴性菌之肠杆菌科细菌
纸片法
忽略不计
➢ 测量比较明显抑制的边缘 ➢变形杆菌属迁徙现象 ➢借助放大镜观察的微小菌落 ➢培养基中的拮抗剂允许甲氧苄啶和磺胺类
细菌药敏试验报告的解读
番禺中心医院
内容
抗菌药物敏感试验 定 义 方法 影响因素 基 本原则 注意 事项
CLSI关于药敏试验的重要的脚注解读 药敏报告的审核及解读
药敏试验的定义及意义
➢定义：药物敏感试验是指测定抗感染药物 在体外对病原微生物或杀菌作用的方法， 简称药敏试验（Antimicrobial Susceptibility Testing AST)
➢ 耐药机制 1.染色体介导的PBPs改变（突变或重组）， 与 靶位亲和力降低 2.外膜蛋白（OMP）通透性下降
葡萄球菌属
纸片法
➢ 基本要求： 100mm平板≤6张，纸片中心相距 24mm，避免抑菌环重叠
➢ 结果阅读：黑色背景，反射光（即平板背对光源） 下肉眼读取抑菌环，利奈唑胺（透射光，即平板 正对光源）
影响药敏结果的因素
规范化操作是关键 ➢ 规范标准的指南
➢菌的选择：细菌的纯度 ➢方法的选择 ➢药敏卡的选择
药敏试验的基本原则
➢ 药敏试验检测获得性耐药, 天然耐药不必检测,直 接报告耐药即可
➢ 天然耐药可告知临床医生知晓,了解天然耐药的作 用
可用于评估药敏方法的准确性 可用于识别常见的耐药表型 可用于累积药敏数据的验证
影响药敏结果的因素
➢细菌接种量
细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产 酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。
➢培养时间
1.一般培养温度和时间为35℃ 16-18小时， 2.有些抗菌药扩散慢如多粘菌素，可将已放好抗 菌药的平板培养基，先置4℃冰箱内2~4小时，使 抗菌药预扩散，然后再放37℃温箱中培养，可以 推迟细菌的生长，而得到较大的抑菌圈。
➢HLAR（高浓度庆大霉素或链霉素耐药） 提示氨基糖苷与β内酰胺类抗生素（氨苄西林，
青霉素，万古霉素）无协同作用，不建议联合用 药
流感/副流感嗜血杆菌
➢CLSI M100-S26中仅限于流感嗜血杆菌和 副流感嗜血杆菌，其他的嗜血杆菌属药敏 折点参见M45
➢菌悬液浓度0.5Mcf(相当于1～ 2X108CFU/ml)
➢ 忽略不计：借助放大镜观察小菌落，培养基中有 拮抗剂（如甲氧苄啶和磺胺类药物的抑菌环有轻 微生长）即测量比较明显抑制的边缘
➢ 不可忽略：利奈唑胺抑菌环内任何可辨别的菌落 均为耐药
葡萄球菌属
甲氧西林耐药
➢ MRSA：表达mecA基因或者另一种甲氧西林耐药 的机制（例如：青霉素结合蛋白与苯唑西林亲和 力的改变=修饰的金葡菌）的金葡菌
➢ 一般情况下，苯唑西林耐药是由mecA基因介导的， 此基因编码PBP2a:检测到mecA基因或PBP2a即 可报告为苯唑西林耐药
➢ 报告：OXA-MIC，FOX-MIC或FOX-Dick任一结 果耐药，全部报告为苯唑西林耐药
葡萄球菌属
➢ mecC基因： mecA基因或PBP2a（-）OXA（R） 和或FOX（R）（2011年报道过）
耐药表型
➢ESBLs(超广谱β内酰胺酶） 对青霉素，头孢菌素，氨曲南不同程度耐 药，加酶抑制剂复合抗生素（哌拉西林/他 唑巴坦，头孢哌酮/舒巴坦）头霉素类（头 孢美唑，头孢西丁）重症感染选择碳青霉 烯类（亚胺培南，美罗培南等）氟喹诺酮 类或联合氨基糖苷类（儿童受限）
耐药表型
➢VRE（万古霉素耐药肠球菌） 氨苄西林+高浓度庆大霉素或链霉素，环丙 沙星+高浓度庆大霉素或链霉素，环丙沙星 +高浓度庆大霉素+磷霉素，替考拉宁+环丙 沙星，半合成的链阳霉素类，唑烷酮类， 达托霉素。