水套式二氧化碳细胞培养箱使用标准操作流程。

Thermo Forma3111/3131水套式细胞培养箱使用
标准操作流程
1. 目的
标准使用本公司水套式CO2细胞培养箱Thermo Forma3111及水套式CO2、N2细胞培养箱Thermo Forma3131〔除特殊注明外，以下简称细胞培养箱〕操作流程，确保本公司细胞技术员正确使用细胞培养箱。

2. 范围和职责
仪器使用操作人员应遵循本程序操作及使用标准，适用于使用本公司细胞培养箱的所有工作人员。

3. 仪器设备及试剂
Thermo Forma3111水套式CO2细胞培养箱
Thermo Forma3131水套式CO2、N2细胞培养箱
CO2减压阀〔上海减压器厂、YQT-731〕
N2减压阀〔上海减压器厂、YQD-3〕
75%酒精
84消毒液
CO2及N2
温度计
4. CO2培养箱安装及调试
4.1根据量程购置适宜的CO2及N2减压阀，细胞培养箱位置摆放：应遵循方便使用原理，不得靠近细胞室出入口摆放，应摆放于本公司细胞室相对于更加洁净的区域，且必须注意CO2及N2钢瓶位置、培养箱开门方向和倒置显微镜位置，方便查看细胞状态及换气；
4.2 CO2/氮钢瓶摆放：应遵循钢瓶容易更换，导气管长度适宜原理；
4.3 水套式细胞培养箱在使用前必须对箱体进行超纯水加注，将随机提供的橡胶管连接超纯水仪和细胞培养箱体左上侧加水口，翻开超纯水仪阀门，缓慢给水箱加水，最好能先进行超纯水灭菌处理，以超纯水刚好从最高水位线水溢出为止；
4.4细胞室进行第一遍消毒或熏蒸后，紫外照射30分钟以上；
4.5培养箱灭菌：本公司细胞培养箱不能进行自动除菌，必须进行手动除菌，箱体内隔板可以进行撤除单独清洗及高温高压灭菌，不能撤除的部件先用75%酒精擦拭一遍，自然晾干，然后用0.15%84消毒液再次擦拭，自然晾干，最后用75%酒精再擦拭最后一遍，敞开培养箱过夜，细胞室进行第二次灭菌操作；
4.6第二天灭菌进入细胞室后，关上舱门，用导气管一端接入细胞培养箱进气口，一端连接CO2/N2减压阀，再通过减压阀上面的螺纹用扳手将减压阀连接到钢瓶上，旋紧至不漏气为止；
4.7培养箱校准〔以Thermo Forma 3111CO2培养箱为例〕：翻开细胞培养箱电源，放入一支经过消毒处理后的温度计，启动自检程序，待程序稳定后，进入以下设置；
按 Mode 键使光标移至 Cal模式,，此时显示屏显示“Cal CALIBRATE〞，按←→键使显示屏显示“TEMPCAL XX.X〞, 按动↑和↓键调整数字〔即温度计读数〕，并按动Enter键加以保存，
按动 Mode 键使光标移至 Run 模式退出设置。

注意：一般情况下，细胞培养箱的起始温度不需要校准，假设起始温度与温度计显示温度不符时才需要进行起始温度校准。

4.7.2 按 Mode 键使光标移至 Set 模式, 此时显示屏显示“SET POINTS〞, 按←→键使显示屏显示“TEMP XX.X〞, 再按↑和↓键直至显示“TEMP 37.0℃〞后按“ENTER〞键确认，按
动 Mode 键使光标移至 Run 模式退出设置。

此时 Heat灯〔即加热灯〕会亮, 箱内温度会慢慢升高至37℃。

注意：假设环境温度低，升温至37℃是一个比拟漫长的过程，且必须要等温度升至37℃才能设置起始CO2浓度。

4.7.3按 Mode 键使光标移至Cal模式，此时显示屏显示“Cal CALIBRATE〞，按动←和→键使显示屏显示“CO2 CAL XX.X〞，按动↑和↓键直至CO2 CAL 0%，并按动Enter键加以保存，按
动 Mode 键使光标移至 Run 模式退出设置。

按 Mode 键使光标移至Set模式，此时显示屏显示“SET POINTS〞，按动←和→键使显示屏显示“TEMP XX.X ℃〞，设置温度，按动↑和↓键可以选择所需的数字〔一般细胞培养用温度为37℃〕，并按动Enter键加以保存。

按动←和→键使显示屏显示“OTEMP XX.X ℃〞，设置超温报警温度，比设定高0.5℃-1℃即可，并按动Enter键加以保存。

按动←和→键使显示屏显示“CO2 XX.X %〞设定CO2浓度〔细胞培养用CO2浓度一般为5%〕，并按动Enter键加以保存，按动 Mode 键使光标移至 Run 模式退出设置。

待温度到达设定值后。

将CO2钢瓶开启，开启前应先关闭减压阀，防止减压阀输出压力过高导致输气橡皮管暴裂，减压阀上进气压力表指示钢瓶内CO2压力，然后缓慢地顺时针拧减压阀旋扭。

使减
压阀输出压力指示为0.05Mpa左右，指针处于刻度线中间。

待温度和CO2浓度到达设定值后，放入水盘，使湿度符合要求。

4.7.6 待一切准备就绪即可进行细胞培养，可先用一两株细胞试用培养箱，确定无菌后即可进行大规模培养。

5. 仪器操作及故障报警显示说明
--Mode为模式键，按动Mode键，光标会在Run、Set、Cal、Config四种模式中移动。

5.1.2—Run模式：Run为运行模式：正常运行时显示“CLASS 100〞或者“SYSTEM O K〞，有故障时会显示各种报警信息。

5.1.3—Set模式：“SET POINTS〞为设定模式，按动←和→键可以选择里面的设定功能，按动↑和↓键可以选择所需的数字，并按动Enter键加以保存。

〔1〕TEMP XX.X ℃为设定温度功能；
〔2〕OTEMP XX.X ℃为设定超温报警功能，比设定温度高0.5℃-1℃即可；
〔3〕CO2 XX.X %为设定CO2浓度功能。

5.1.4—Cal模式：“Cal CALIBRATE〞为校准模式，按动←和→键可以选择里面的设定功能，按动↑和↓键可以选择所需的数字，并按动Enter键加以保存。

〔1〕TEMPCAL XX.X为校准温度功能；
〔2〕CO2 CAL XX.X为CO2浓度调零功能
5.1.5—Config模式：“SYS CONFIG〞为系统配置模式，按动←和→键可以选择里面的设定功能，按动↑和↓键可以选择所需的数字，并按动Enter键加以保存。

〔1〕AUDIBLE ON/OFF 为声响报警功能〔按动↑和↓键可以选择开启/关闭〕；
〔2〕NEW HEPA XXX 为更换HEPA过滤器的剩余天数功能〔按动Enter键重新安排天数〕；〔3〕REPL HEPA XX 为设定更换HEPA过滤器的剩余月数功能〔最高月数为12〕〔4〕ACC CODE XXX为设定操作锁定模式功能，000为取消密码锁定；
〔5〕TE M P L O XX.X℃为设定温度的低限报警功能；
〔6〕TEMP HI XX.X℃为设定温度的高限报警功能；
〔7〕TMP RLY ON/OFF为附加装置功能，与标准配置无关；
〔8〕CO2 LO X.X % 为设定CO2浓度的低限报警功能；
〔9〕CO2 HI X.X % 为设定CO2浓度的高限报警功能；
〔10〕CO2 RLY ON/OFF为附加装置功能，与标准配置无关；
〔11〕T/C ZR# -XXXX为确认新CO2热导探头功能，此为ZERO数字确认；
〔12〕T/C SP# -XXXX为确认新CO2热导探头功能，此为SPAN数字确认；
〔13〕RS 485 XX 为附加装置功能，与标准配置无关。

5.1.6 --加热和CO2进气显示：
〔1〕Temp显示屏为温度显示。

〔2〕Heat为加热灯，灯亮表示正在加热，灯灭表示停止加热。

〔3〕% CO2显示屏为CO2浓度显示。

〔4〕Inject为CO2进气灯，灯亮表示正在进气，灯灭表示停止进气。

5.1.7 故障报警显示：Silence键功能为故障报警消声，报警时有红灯闪烁，同时有嘀嘀声响，按动此键可以将报警声音暂停，如果故障在15分钟内不能解决，报警声响会再次响起：
〔1〕SYS IN OTEMP 为超温报警，即时报警；
〔2〕CO2 SNSR ERR 为CO2探头故障，即时报警；
〔3〕REPLACE HEPA 为更换HEPA过滤器，即时报警；
〔4〕ADD WATER为缺水报警，即时报警；
〔5〕DOOR OPEN 为玻璃内门报警，延时15分钟报警；
〔6〕CO2 IS HIGH 为CO2浓度的高限报警，延时15分钟报警；
〔7〕CO2 IS LOW为CO2浓度的低限报警，延时15分钟报警；
〔8〕TEMP IS HIGH 为温度的高限报警，延时15分钟报警；
〔9〕TEMP IS LOW为温度的低限报警，延时15分钟报警。

6. 操作步骤
1、进入细胞室前必须进行衣服更换，穿上白大褂，换好拖鞋或鞋套，进入细胞室后即戴上无粉
乳胶手套，用75%酒精对手套进行消毒处理。

2、细胞培养箱的门分为外门和玻璃内门，外门采用的是密封条技术，内门是玻璃门，有门卡卡
住。

开启箱门前，请先对箱体外门位置喷洒75%酒精，然后一手抓住外门的边，一手内门外延，然后稍微用力即可翻开外门，切勿用力过猛，翻开最大角度为90°。

随后向上旋转门卡即可翻开玻璃内门，双手将细胞培养瓶〔皿〕端出，将细胞培养瓶〔皿〕放在超净工作台
上，随后关闭箱门。

然后将细胞放在在倒置显微镜上观察细胞状态，以确定是否进行传代等操作。

3、日常维护：
从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手〔或手套〕，尽量缩短开门时间和减少开门次数。

经常检查水套水位，假设水位低就要进行超纯水加注；
-培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。

长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。

定期检查二氧化碳钢瓶气体气压情况，在即将用完前进行换气操作；
HEPA过滤器一般使用时间一般为半年，可手动调节到12个月，到期后，细胞培养箱显示屏会显示“REPLACE HEPA 〞，此时必须更换HEPA过滤器。

培养箱需要每隔一段时间〔一般为三个月或半年〕进行一次箱体除菌和校正CO2浓度及温度，每次开关培养箱电源后必须进行CO2浓度及温度的重新校正。

培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒外表，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。

用肥皂、清水和实验室常使用的消毒剂来清洗增湿盘。

用蒸馏和浓度为70％的酒精冲洗增湿盘。

增湿盘可进行高压灭菌。

频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。

一旦发现培养箱出现报警或其他异常情况，请及时按照操作说明进行处理。

检测CO2浓度实际浓度，按 Mode 键使光标移至 Set 模式,此时显示屏显示“SET POINTS〞, 按←→键使显示屏显示“CO2 XX.X %〞, 再按↑↓键直至显“CO2 5.0%〞后按“ENTER〞键确认, 此时 Inject (进气)灯会亮, 箱内CO2浓度会慢慢升高, 并自动控制在5.0%。