不同优质粳稻花药对低温和激素处理的培养响应
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（ Ｃｏｌｇ ｆ Ｆｉｈ ｒ ｎ ｆ ｉｎ ｅ， ｈ ｎ ｈ ｉ ｅ ｎ Ｕｎ ｖ ｒ ｉｙ， ｈ ｎ ｈ ｉ ０ ３ ６ Ｃｈ ｎ ｌｅ ｅｏ ｓ ｅ ｙ ａ ｄ Ｌｉ ｅＳｃｅ ｃ Ｓ ａ ｇ ａ ａ ｉ ｅ ｓｔ Ｓ ａ ｇ ａ １ ０ ， ｉ ａ； Ｏｃ ２
受基 因型的制 约 ； 无论 是“ 粳 ２ ７ 还是“ 但 辽 ８” 武运 粳 ２ ” 低 温预 处 理 １ １， ０ｄ的材 料 其愈 伤 组 织诱 导 率 和绿 苗分 化率 均高 于处理 ５ｄ和 １ ５ｄ的材 料 。经 １ ０ｄ低温 预处理 后 ， 辽粳 ２ ７ 的花药 愈伤诱 导率 比处 理５ｄ “ ８”
中 图 分 类 号 ： ５ １ （ Ｓ １．１ ） 文 献 标 识码 ： Ａ
Ｃｕ ｔ ｒ ｅ ｐ ｎ ｅ ｆ ａ ｔ ｒ ｒ ｍ ｕ ｅ ｉ ｒ ｋ ｎ ｉ ｅ ｃ ｌｉ ａ ｓ ｌｕ ｅ ｒ ｓ ｏ ｓ ｓ ｏ ｎ ｈｅ ｓ ｆ ｏ ｓ ｐ ｒ ｏ ｅ ｇ ｒ ｃ ｕ ｔｖ ｒ
度（ １。 表 ）
表 １ 愈 伤组 织 诱导 因素 水 平
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１２４ ．．
数 据 统 计
愈伤组 织诱 导率 ＝（ 形成 愈 伤组织 块数 ／ 接种 花药 数 ） ０ ％ ； 苗分 化率 ＝（ 苗数／ 养 愈伤 组 织 Ｘ １０ 绿 绿 培
随着 人 们生 活水 平 的提高 ， 费者对 粮 食 品质 的要 求也 不 断 上升 ， 消 因此 ， 种工 作 者 育成 了一批 优 质 育 水 稻 新 品种 ＿ ］ 深受 消 费者欢 迎 。然 而 ， 些 优 质水 稻 品种 在 抗病 、 逆 性 方 面 仍存 在不 足。 。水 分 １ ， 这 抗 卜 紧缺 是影 响我 国农 业生 产和 人 民生 活 质量 极 为重 要 的 限制 因素 ， 育 节 水稻 是 节 约 用 水 的 有 效 途径 ， 选 改 良现 有优质 水 稻 的抗 旱 性 ， 以育成 优 质 抗 旱水 稻 。如何 在 保 证 优 质 水 稻 品种 基 本 优 良特 性 的 基础 上 ， 可 改 进一 个或 少数 不 良性状 ， 已成 为遗 传 改 良 的热 点 。花 药培 养 技 术 可 以迅 速 地 聚合 优 良性 状嘲 ， 花 ］ 且 粉 无性 系变 异 可 以改 良个 别 不 良性状 。基 因型 、 温 预处 理 和 培养 基 中激 素 是 影 响水 稻花 药 培 养效 果 低
数 ） ０ ％ ×１ ０
２ 结 果 与分 析
２ １ 不 同粳稻 品种 离体 花药对 低温 预处 理的培 养 响应 ．
由表 ２可 知 ， 辽粳 ２ ７ 和 “ 运 粳 ２ ” “ ８” 武 １ 的愈 伤 组 织诱 导率 和绿 苗 分 化 率 差 异 较 大 ， 伤 诱 导 率 为 愈 １ ．３ ３ ３ ％～６ ． ７ ， 苗 分化 率 为 ６ ２ ％～２ ． ６ ， 明在 水稻 的花 药培养 中 ， 养效 率 在很 大程 度 上 ６６ ％ 绿 ．５ ３８ ％ 说 培
谷氨 酰胺 １ｇＬ； ／ 分化培 养基 为 ２３ＭＳ＋ＫＴ ２ｍｇＬ＋ＮＡ ０ ５ｍｇＬ＋６Ｂ ０ ５ｍｇＬ＋麦芽糖 ３ 。 ／ ／ Ａ ． ／ － Ａ ． ／ ％
１ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 取 材 与 预 处 理 ．．
在 水稻 花粉 细胞处 于小 孢子单 核靠 边期 时 （ 花浅 绿色 ， 颖 花药 伸长 至颖壳 ２５ ／） ／ ～１２ 取穗 ， 留上部 两 保 片叶子 ， 稻穗用 浸湿 的纱 布包裹 放入 保鲜 袋 中 ， 紧袋 口 ， 将 扎 减少 水 分蒸 发 ， 于 ４℃冰 箱 中 ， 温 预处 理 置 低
供 试 培养 基 ： 温 预处理 诱 导培 养基 为 Ｎ６ ，一 ２ ｍｇ ／ 低 ＋２ ４Ｄ Ｌ Ｌ＋ＫＴ ０ ５ｍｇＬ＋麦 芽 糖 ５ ＋水 解 酪 ． ／ ％
收稿 日期 ：０ １ ２—１ 稿 ；０ １—０ ２ １ —０ ５初 ２ｌ ４—２ ５二改 稿
基 金项 目： 海 市科 学技 术 委 员 会 重 大 项 目 （０ ９ １０ ５０ 资 助 上 ２ ０ ＤＪ４ ０ ０ ） 作 者 简介 ： 张艳 敏 （９ ８一） 女 ， 读 硕 士 ， 究 方 向为 作 物 遗 传 育 种 。Ｔ ｌ（２ ）２ ０ ８ ４ Ｅ ｍａｌｆｈ ａｙ １８ ＠ １３ ｔ ｍ １８ ， 在 研 ｅ：０ １６ ２ ６ ２ ； ． ｉ：ｕ ｕ ｉｕ ９ ８ ６ ．ｏ
的 主要 因素 ｊ 。本 研究 以 ３份 优质 粳稻 品种 为供 试 材料 ， 究 其 离体 培 养花 药 对低 温 预处 理 及 培 养基 中 研
激 素响应 的异 同 ， 为研 制优 质粳 稻 的高 效花 药培 养技 术 提供 依据 。
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
供试 品种 ： 稻材 料“ 粳 辽粳 ２ ７ 、武运 粳 ２ ” “ 丰 ” ８”“ １ 、金 。
转入 分化培 养基 ， （ ６ ） 、 Ｄ＝１ １ 在 ２ ±１ ℃ Ｌ： ２ｈ：２ｈ的光周期 下培 养 。
１ ２． 正 交 试 验 设 计 ． ３
选 用 Ｌ （ 进 行三 因素 三水平 的正 交试 验设计 ， ２ ４Ｄ、 。３ ） 以 ，． ＫＴ和 ＮＡＡ 为试验 因子 ， 因子设 ３个浓 各
张 艳敏 高润 红 ， 桂 梅 杜 志钊 ， ， 郭 ， 李 梁 何 婷 ， 剑 华 ， 黄
（ 上海 海 洋 大 学 水 产 与 生 命 学 院 ， 海 ２ １ ０ ； 海 市 农 业 科 学 院生 物 技 术 研究 所 ， 海 ２ １０ ； 上 ０ ３ ６ 。上 上 ０ １ ６ ’ 海 市 农 业 遗 传 育 种 重 点 实 验 室 ， 海 ２ ｌ０ ） 上 上 ０ １ ６
的材料 进行 ５ １ 、 ５ｄ３种 处理 。 、０ １ １ ２ ２ 花 药 离体培 养 ．．
接种 时尽量 挑选 花药 发育 一致 的稻穗 ， １ ％ 次氯酸钠 溶 液灭菌 １ ｉ ， 用 ０ ５ｒ ｎ 无菌 水 冲洗 ４次 ，０ｍＬ三 ａ ５
角瓶 每瓶接 种 约 １ ０枚花 药 ， ２ 每处理 接 种 １ 瓶 ， 于 ２ （ 置 ） ５℃ 暗培 室 培养 ， 导 愈伤 组 织 ， 伤 组织 形 成 后 诱 愈
Ｂｉ ｔｃ ｅ ｅ ｒ ｈ Ｉ ｔｔ ｅ， ｏ ｅ ｈＲ ｓ ａ ｃ ｎｓｉｕｔ ＳＡ Ａ Ｓ ， Ｓｈａ ｎｇｈ ０１１ ａｉ２ ０６， Ｃｈｉ ａ； ｎ
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摘
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
要 ：以 ３份 优 质 粳 稻 品种 为 供 试 材 料 ， 究 了 ３种 低 温 预 处 理 和 ９个 激 素 处 理 组 合 对 离 体 花 药 培 养 的 研
影 响 。结 果 表 明 ： 试 材 料 花 药 对 低 温 预 处 理 的 响应 存 在 明 显 差 异 ， 激 素 处 理 组 合 的 响 应 也 存 在 一 定差 异 。 供 对 关 键 词 ： 稻 ； 药 培 养 ； 温 预 处 理 ； 素 处 理 粳 花 低 激
＊通 讯 作 者 ， ｅ ：０ １６ ２ １３ ； ． ｉ：ｓ ＠ ｓａ ．ｈ ｃ Ｔ ｌ（２ ）２ ０ ０ ２ Ｅ ｍａｌｃｌ ａ ｓｓ ．ａ
１２ ２
张艳 敏 ， ： 同优 质 粳 稻 花 药 对 低 温 和 激 素 处 理 的 培 养 响 应 等 不
蛋白 １ｄ ＋ Ｌ 谷氨酰胺 １ ／ ； ｒ Ｌ 激素处理诱导培养基为 Ｎ ＋不同配比激素 ＋ ｇ ６ 麦芽糖 ５ ＋ ％ 水解酪蛋白１ ／ Ｌ＋ ｇ
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和 １ ５ｄ的材料提 高 了 ２ ～３倍 ， 苗分 化率 提高 了 １ 绿 ～３倍 ； 武 运粳 ２ ” “ １ 的花 药愈 伤诱 导率 比处 理 ５ｄ和 １ ５ｄ的材料 提高 了 １ ～４倍 ， 绿苗 分化率 提 高 了 １ ～２倍 ， 差异 极显 著 。
表 ２ 低 温 预 处 理 对 花培 愈 伤 诱 导 及 分 化 影 响
上 海 农 业学 报
２ １ ，７ ２ ：２ —１ ４ ０ １ ２ （ ） １ １ ２
Ａ ｃ ａ Ａｇｒｃ ｔ ａ ｈａｎ ｈ ｔ ｉｕｌｕｒ ｅ Ｓ ｇ ａｉ
文 章 编 号 ： ０ ０３ ２ （ ０ １ ０ —２ 一 ４ １０ —９４ ２ １ ）２ １ ｌ ０
不 同优质 粳 稻 花 药 对低 温 和 激 素 处 理 的培 养 响应
ＺＨ ＡＮＧ ａ ｍ ｉ ， Ｙ ｎ－ ｎ ＧＡＯ ｎ— ｎｇ ’ ＧＵＯ ｉｍ ｅ ， Ｒｕ ｈｏ ， Ｇｕ — ｉ ＤＵ Ｚｈｉｚ ｏ ， ． ｈａ ，
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（ Ｃｏｌｇ ｆ Ｆｉｈ ｒ ｎ ｆ ｉｎ ｅ， ｈ ｎ ｈ ｉ ｅ ｎ Ｕｎ ｖ ｒ ｉｙ， ｈ ｎ ｈ ｉ ０ ３ ６ Ｃｈ ｎ ｌｅ ｅｏ ｓ ｅ ｙ ａ ｄ Ｌｉ ｅＳｃｅ ｃ Ｓ ａ ｇ ａ ａ ｉ ｅ ｓｔ Ｓ ａ ｇ ａ １ ０ ， ｉ ａ； Ｏｃ ２
受基 因型的制 约 ； 无论 是“ 粳 ２ ７ 还是“ 但 辽 ８” 武运 粳 ２ ” 低 温预 处 理 １ １， ０ｄ的材 料 其愈 伤 组 织诱 导 率 和绿 苗分 化率 均高 于处理 ５ｄ和 １ ５ｄ的材 料 。经 １ ０ｄ低温 预处理 后 ， 辽粳 ２ ７ 的花药 愈伤诱 导率 比处 理５ｄ “ ８”
中 图 分 类 号 ： ５ １ （ Ｓ １．１ ） 文 献 标 识码 ： Ａ
Ｃｕ ｔ ｒ ｅ ｐ ｎ ｅ ｆ ａ ｔ ｒ ｒ ｍ ｕ ｅ ｉ ｒ ｋ ｎ ｉ ｅ ｃ ｌｉ ａ ｓ ｌｕ ｅ ｒ ｓ ｏ ｓ ｓ ｏ ｎ ｈｅ ｓ ｆ ｏ ｓ ｐ ｒ ｏ ｅ ｇ ｒ ｃ ｕ ｔｖ ｒ
度（ １。 表 ）
表 １ 愈 伤组 织 诱导 因素 水 平
Ｔａ ｌ Ｆ ｃ ｏ ｓ ａ ｄ ｌｖ ｌ ｎ ｃ ｌ ｓｉ ｄ ｃ ｉ ｎ ｂｅ１ ａ ｔ ｒ ｎ ｅ ｅｓ ｉ ａ ｌ ｎ ｕ ｔ ｕ ｏ ｍｇ ・Ｌ
１２４ ．．
数 据 统 计
愈伤组 织诱 导率 ＝（ 形成 愈 伤组织 块数 ／ 接种 花药 数 ） ０ ％ ； 苗分 化率 ＝（ 苗数／ 养 愈伤 组 织 Ｘ １０ 绿 绿 培
随着 人 们生 活水 平 的提高 ， 费者对 粮 食 品质 的要 求也 不 断 上升 ， 消 因此 ， 种工 作 者 育成 了一批 优 质 育 水 稻 新 品种 ＿ ］ 深受 消 费者欢 迎 。然 而 ， 些 优 质水 稻 品种 在 抗病 、 逆 性 方 面 仍存 在不 足。 。水 分 １ ， 这 抗 卜 紧缺 是影 响我 国农 业生 产和 人 民生 活 质量 极 为重 要 的 限制 因素 ， 育 节 水稻 是 节 约 用 水 的 有 效 途径 ， 选 改 良现 有优质 水 稻 的抗 旱 性 ， 以育成 优 质 抗 旱水 稻 。如何 在 保 证 优 质 水 稻 品种 基 本 优 良特 性 的 基础 上 ， 可 改 进一 个或 少数 不 良性状 ， 已成 为遗 传 改 良 的热 点 。花 药培 养 技 术 可 以迅 速 地 聚合 优 良性 状嘲 ， 花 ］ 且 粉 无性 系变 异 可 以改 良个 别 不 良性状 。基 因型 、 温 预处 理 和 培养 基 中激 素 是 影 响水 稻花 药 培 养效 果 低
数 ） ０ ％ ×１ ０
２ 结 果 与分 析
２ １ 不 同粳稻 品种 离体 花药对 低温 预处 理的培 养 响应 ．
由表 ２可 知 ， 辽粳 ２ ７ 和 “ 运 粳 ２ ” “ ８” 武 １ 的愈 伤 组 织诱 导率 和绿 苗 分 化 率 差 异 较 大 ， 伤 诱 导 率 为 愈 １ ．３ ３ ３ ％～６ ． ７ ， 苗 分化 率 为 ６ ２ ％～２ ． ６ ， 明在 水稻 的花 药培养 中 ， 养效 率 在很 大程 度 上 ６６ ％ 绿 ．５ ３８ ％ 说 培
谷氨 酰胺 １ｇＬ； ／ 分化培 养基 为 ２３ＭＳ＋ＫＴ ２ｍｇＬ＋ＮＡ ０ ５ｍｇＬ＋６Ｂ ０ ５ｍｇＬ＋麦芽糖 ３ 。 ／ ／ Ａ ． ／ － Ａ ． ／ ％
１ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 取 材 与 预 处 理 ．．
在 水稻 花粉 细胞处 于小 孢子单 核靠 边期 时 （ 花浅 绿色 ， 颖 花药 伸长 至颖壳 ２５ ／） ／ ～１２ 取穗 ， 留上部 两 保 片叶子 ， 稻穗用 浸湿 的纱 布包裹 放入 保鲜 袋 中 ， 紧袋 口 ， 将 扎 减少 水 分蒸 发 ， 于 ４℃冰 箱 中 ， 温 预处 理 置 低
供 试 培养 基 ： 温 预处理 诱 导培 养基 为 Ｎ６ ，一 ２ ｍｇ ／ 低 ＋２ ４Ｄ Ｌ Ｌ＋ＫＴ ０ ５ｍｇＬ＋麦 芽 糖 ５ ＋水 解 酪 ． ／ ％
收稿 日期 ：０ １ ２—１ 稿 ；０ １—０ ２ １ —０ ５初 ２ｌ ４—２ ５二改 稿
基 金项 目： 海 市科 学技 术 委 员 会 重 大 项 目 （０ ９ １０ ５０ 资 助 上 ２ ０ ＤＪ４ ０ ０ ） 作 者 简介 ： 张艳 敏 （９ ８一） 女 ， 读 硕 士 ， 究 方 向为 作 物 遗 传 育 种 。Ｔ ｌ（２ ）２ ０ ８ ４ Ｅ ｍａｌｆｈ ａｙ １８ ＠ １３ ｔ ｍ １８ ， 在 研 ｅ：０ １６ ２ ６ ２ ； ． ｉ：ｕ ｕ ｉｕ ９ ８ ６ ．ｏ
的 主要 因素 ｊ 。本 研究 以 ３份 优质 粳稻 品种 为供 试 材料 ， 究 其 离体 培 养花 药 对低 温 预处 理 及 培 养基 中 研
激 素响应 的异 同 ， 为研 制优 质粳 稻 的高 效花 药培 养技 术 提供 依据 。
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
供试 品种 ： 稻材 料“ 粳 辽粳 ２ ７ 、武运 粳 ２ ” “ 丰 ” ８”“ １ 、金 。
转入 分化培 养基 ， （ ６ ） 、 Ｄ＝１ １ 在 ２ ±１ ℃ Ｌ： ２ｈ：２ｈ的光周期 下培 养 。
１ ２． 正 交 试 验 设 计 ． ３
选 用 Ｌ （ 进 行三 因素 三水平 的正 交试 验设计 ， ２ ４Ｄ、 。３ ） 以 ，． ＫＴ和 ＮＡＡ 为试验 因子 ， 因子设 ３个浓 各
张 艳敏 高润 红 ， 桂 梅 杜 志钊 ， ， 郭 ， 李 梁 何 婷 ， 剑 华 ， 黄
（ 上海 海 洋 大 学 水 产 与 生 命 学 院 ， 海 ２ １ ０ ； 海 市 农 业 科 学 院生 物 技 术 研究 所 ， 海 ２ １０ ； 上 ０ ３ ６ 。上 上 ０ １ ６ ’ 海 市 农 业 遗 传 育 种 重 点 实 验 室 ， 海 ２ ｌ０ ） 上 上 ０ １ ６
的材料 进行 ５ １ 、 ５ｄ３种 处理 。 、０ １ １ ２ ２ 花 药 离体培 养 ．．
接种 时尽量 挑选 花药 发育 一致 的稻穗 ， １ ％ 次氯酸钠 溶 液灭菌 １ ｉ ， 用 ０ ５ｒ ｎ 无菌 水 冲洗 ４次 ，０ｍＬ三 ａ ５
角瓶 每瓶接 种 约 １ ０枚花 药 ， ２ 每处理 接 种 １ 瓶 ， 于 ２ （ 置 ） ５℃ 暗培 室 培养 ， 导 愈伤 组 织 ， 伤 组织 形 成 后 诱 愈
Ｂｉ ｔｃ ｅ ｅ ｒ ｈ Ｉ ｔｔ ｅ， ｏ ｅ ｈＲ ｓ ａ ｃ ｎｓｉｕｔ ＳＡ Ａ Ｓ ， Ｓｈａ ｎｇｈ ０１１ ａｉ２ ０６， Ｃｈｉ ａ； ｎ
Ｓ ａ ｇ ａ ｙ Ｌａ ｏ ａ ｏ ｙ ｏ ｒｃ ｌｕ ａ ｎ ｔｃ ｎ ｅ ｄ ｎ Ｓ ａ ｇ ａ ０ １ ６， ｈ ｎ ） ｈ ｎｈ ｉ Ｋｅ ｂ ｒ ｔｒ ｆ Ａｇ ｉｕ ｔ ｒ ｌＧｅ ｅｉｓａ ｄ Ｂｒ ｅ ｉ ｇ， ｈ ｎ ｈ ｉ２ ｌ ０ Ｃ ｉ ａ
摘
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
要 ：以 ３份 优 质 粳 稻 品种 为 供 试 材 料 ， 究 了 ３种 低 温 预 处 理 和 ９个 激 素 处 理 组 合 对 离 体 花 药 培 养 的 研
影 响 。结 果 表 明 ： 试 材 料 花 药 对 低 温 预 处 理 的 响应 存 在 明 显 差 异 ， 激 素 处 理 组 合 的 响 应 也 存 在 一 定差 异 。 供 对 关 键 词 ： 稻 ； 药 培 养 ； 温 预 处 理 ； 素 处 理 粳 花 低 激
＊通 讯 作 者 ， ｅ ：０ １６ ２ １３ ； ． ｉ：ｓ ＠ ｓａ ．ｈ ｃ Ｔ ｌ（２ ）２ ０ ０ ２ Ｅ ｍａｌｃｌ ａ ｓｓ ．ａ
１２ ２
张艳 敏 ， ： 同优 质 粳 稻 花 药 对 低 温 和 激 素 处 理 的 培 养 响 应 等 不
蛋白 １ｄ ＋ Ｌ 谷氨酰胺 １ ／ ； ｒ Ｌ 激素处理诱导培养基为 Ｎ ＋不同配比激素 ＋ ｇ ６ 麦芽糖 ５ ＋ ％ 水解酪蛋白１ ／ Ｌ＋ ｇ
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和 １ ５ｄ的材料提 高 了 ２ ～３倍 ， 苗分 化率 提高 了 １ 绿 ～３倍 ； 武 运粳 ２ ” “ １ 的花 药愈 伤诱 导率 比处 理 ５ｄ和 １ ５ｄ的材料 提高 了 １ ～４倍 ， 绿苗 分化率 提 高 了 １ ～２倍 ， 差异 极显 著 。
表 ２ 低 温 预 处 理 对 花培 愈 伤 诱 导 及 分 化 影 响
上 海 农 业学 报
２ １ ，７ ２ ：２ —１ ４ ０ １ ２ （ ） １ １ ２
Ａ ｃ ａ Ａｇｒｃ ｔ ａ ｈａｎ ｈ ｔ ｉｕｌｕｒ ｅ Ｓ ｇ ａｉ
文 章 编 号 ： ０ ０３ ２ （ ０ １ ０ —２ 一 ４ １０ —９４ ２ １ ）２ １ ｌ ０
不 同优质 粳 稻 花 药 对低 温 和 激 素 处 理 的培 养 响应