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裂解 液 ， 均 为碧 云天 生 物 技 术 研 究 所 产 品 ； Ｄ Ｃ Ｆ Ｈ—
２ ０ ０ ３ 《 食品中氨基酸的测定》 ， 采用氨基酸 自动分析 仪对 小麦 低 聚肽 中的氨基 酸 组成进 行 测定 。
１ ． ３ ． ２ 相对分子质量分布分析 采 用 高 效 液 相 色
谱法对小麦低聚肽相对分子质量进行分析 ， 色谱条
件 如下 。色谱 柱 ： Ｔ Ｓ Ｋ ｇ ｅ ｌ Ｇ ２ ０ ０ ０ Ｓ ＷＸ Ｌ ３ ０ ０ ｍｍＸ ７ ． ８ ｍ ｍ； 流 动相 ： ｖ（ Ｌ腈 ） ： （ 水） ： （ 三氟 乙酸） ＝ ４ ５ ： ５ ５ ： ０ ． １ ； 检测波长 ： Ｕ Ｖ ２ ２ ０ ｎ ｍ； 体积流量 ０ ． ５ ｍＬ ／
过 氧 化 氢是 一 种 重 要 的活 性 氧 ， 极 易透 过 细 胞
膜， 其具有易于获得及性质相对稳定 的特点 ， 因而 成 为 研究 细胞 氧 化损 伤 的重 要工 具 。虽 然 Ｈｅ ｐ Ｇ ２
细 胞是 一 种 肿 瘤 细胞 ， 但 其 所 含 的生 物 转化 代 谢 酶 与人 正常 肝 实 质 细胞 具 有 同源 性 ， 因此 被广 泛 应 用 于体 外 实 验 的筛 选 。过 氧 化 氢进 入 细胞 后 可 形 成 高 活 性 的 自由基 ， 作用于生物大分子物质 ， 引起 脂
软件公 司制造 ； Ｌ Ｃ 一 ２ ０ Ａ高效液相色谱仪 ， 日本岛津 公 司 制造 ； Ａ ３ ０ ０ 型 氨 基 酸分 析 仪 ， 德 国 Ｍｅ ｍｂ ｒ ａ ｐ ｕ ｒ ｅ
公 司制造 ； ３ Ｋ 一 １ ５型 冷 冻 离 心 机 ， 德国Ｓ ｉ ｇ ｍａ 公 司
制造 。
１ ． ３ 试 验 方法
活性 。
司制造 ； ２ ４ ０ ｉ 二氧化碳培养箱 ， 美 国Ｔ ｈ ｅ ｒ ｍｏ 公 司制 造； Ａ Ｃ ２ — ６ Ｓ １ 型生物安 全柜 ， 新 加坡 Ｅ Ｓ Ｃ Ｏ公 司制 造； Ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ａ ＭＲ型 酶 标 仪 ， 美 国Ｄ ｙ ｎ ｅ ｘ公 司 制 造 ； Ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ｉ Ｃ ６型 流式 细胞 仪 ， 美国Ｂ Ｄ生 物 科 学 仪 器及
本 实 验 中 以小 麦 低 聚肽 为 研究 对 象 ， 对 其 氨基 酸 组 成 和 相 对 分 子 质 量 分 布 进 行 了 分 析 。 选 取 Ｈ ： ０ 为诱 导 Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ 细胞 氧化 应 激损 伤 的工具 ， 建 立 肝 细 胞 氧 化 损 伤 模 型 。采 用 此 模 型 评 价 小 麦 低 聚 肽对 Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ 细胞存 活率 、 细胞 内 Ｒ Ｏ Ｓ 及 ＭＤ Ａ含 量 的影 响 ， 旨在 为 小麦 低 聚 肽在 健 康 保健 食 品 中的开 发及 利 用提 供理 论依 据 。
小 麦 低 聚 肽 是 以小 麦 谷 朊 粉 为 原 料 ， 经 过 酶
１ ． ２仪器 与 设备 Ｃ Ｋ Ｘ一 ４ １ 型倒置相差显微镜 ， 日本 奥 林 巴斯 公
解、 提纯等步骤加工制得 ， 具 有 均 衡 的氨 基 酸 组 成
的肽类混合 物。其水溶性好 、 稳定性高 、 易于消化 吸收 、 蛋 白质含 量 高 。大 量研 究 表 明 ， 小麦 低 聚 肽 具 有 免疫 调 节 、 保护 肠 黏膜 、 抗 氧 化 等 多 种功 能
ｒ ａ ｉ ｎ ， 柱温 ３ ０ ℃， 进样 体积 ｌ ０ 。４ 种不同相对分 子 质 量 的 肽标 准 品 为 ： 细胞 色 素 Ｃ（ ‰ １ ２ ５ ０ ０ ） ， 杆
菌酶（ １ ４ ５ ０ ） ， 乙氨酸一 乙氨 酸 一 酪氨 酸一 精 氨 酸
（ Ｍｗ ４ ５ １ ） ， 乙氨酸 一 乙氨 酸一 乙 氨酸 （ Ｍｗ １ ８ ９ ） 。
小麦低聚肽 ， 样品为淡黄色粉末 ， 由北 京 中食
海 氏生 物 技术 有 限 公 司提 供 ， 由浙 江海 氏生 物科 技 有 限公 司制 造 。
人 肝 癌 细胞 Ｈｅ ｐ Ｇ ２ ， 购 自中 国 医学 科 学 院基 础
医学研 究 所 细胞 中心 。
Ｄ ＭＥ Ｍ（ 高糖 ） 培养 基 ， Ｈｙ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ 公 司产 品 ； 胎 牛 血清 （ Ｆ Ｂ Ｓ ） ， 浙江 天杭 生 物科 技 有 限公 司产 品 ； 胰 蛋 白酶 ， Ｐ Ｂ Ｓ ， 双 抗溶 液 （ 青 霉素 ＋ 链霉素 ） ， Ｂ Ｃ Ａ蛋 白质 浓 度测 定 试 剂 盒 （ 增强 型） ， ＭＤ Ａ测 定 试 剂 盒 ， 细 胞
１ ． ３ ． ３ Ｈｅ ｐ Ｇ ２ 细胞 培养
将Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ 细胞 按 ３ × １ ０ 个／
ｍ Ｌ接 种 于含 有 质 是 分 数 １ ０ ％Ｆ Ｂ Ｓ 、 １ ０ ０ Ｕ ／ ｍＬ青 霉
素、 １ ０ ０ Ｉ ｘ ｇ ／ ｍ Ｌ 链 霉素 的 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ（ 高糖 ） 培养 基 中
１ ． １ 材料 与试 剂
（ ｐ Ｈ ７ ． ２ ） ， ３ ７℃ 、 质量分数 ５ ％Ｃ Ｏ ： 及 充 分 饱 和 湿 度 条 件 下孵 育 。待 细胞 融 合 至培 养 瓶 的 ８ ０ ％后 ， 弃 去 旧培养 液 ， 用Ｐ Ｂ Ｓ冲 洗 一 次 ， 加 入 适 量 质 量 分 数 ０ ． ２ ５ ％胰 蛋 白酶 消化 ， 按照 １ ： ３ 传代 培养 。 １ ． ３ ． ４ 实验 分 组及 药物 处理 实 验 分为 ： 正 常对 照
１ ． ３ ． １ 氨 基 酸组 成分析
依据 Ｇ Ｂ ／ 化等反应 ， 破坏细胞结构 。研究表 明， 机体 的氧化应激及氧化损伤与炎症 、 免疫力 降低 、 衰 老－ ｓ 、 动 脉 粥 样 硬 化 １ 、 糖尿病ｕ 。 Ｉ 、 癌 症 ｕ 等 疾病 的发 生 发展 密切 相关 。
２ ０ ０ ３ 《 食品中氨基酸的测定》 ， 采用氨基酸 自动分析 仪对 小麦 低 聚肽 中的氨基 酸 组成进 行 测定 。
１ ． ３ ． ２ 相对分子质量分布分析 采 用 高 效 液 相 色
谱法对小麦低聚肽相对分子质量进行分析 ， 色谱条
件 如下 。色谱 柱 ： Ｔ Ｓ Ｋ ｇ ｅ ｌ Ｇ ２ ０ ０ ０ Ｓ ＷＸ Ｌ ３ ０ ０ ｍｍＸ ７ ． ８ ｍ ｍ； 流 动相 ： ｖ（ Ｌ腈 ） ： （ 水） ： （ 三氟 乙酸） ＝ ４ ５ ： ５ ５ ： ０ ． １ ； 检测波长 ： Ｕ Ｖ ２ ２ ０ ｎ ｍ； 体积流量 ０ ． ５ ｍＬ ／
过 氧 化 氢是 一 种 重 要 的活 性 氧 ， 极 易透 过 细 胞
膜， 其具有易于获得及性质相对稳定 的特点 ， 因而 成 为 研究 细胞 氧 化损 伤 的重 要工 具 。虽 然 Ｈｅ ｐ Ｇ ２
细 胞是 一 种 肿 瘤 细胞 ， 但 其 所 含 的生 物 转化 代 谢 酶 与人 正常 肝 实 质 细胞 具 有 同源 性 ， 因此 被广 泛 应 用 于体 外 实 验 的筛 选 。过 氧 化 氢进 入 细胞 后 可 形 成 高 活 性 的 自由基 ， 作用于生物大分子物质 ， 引起 脂
软件公 司制造 ； Ｌ Ｃ 一 ２ ０ Ａ高效液相色谱仪 ， 日本岛津 公 司 制造 ； Ａ ３ ０ ０ 型 氨 基 酸分 析 仪 ， 德 国 Ｍｅ ｍｂ ｒ ａ ｐ ｕ ｒ ｅ
公 司制造 ； ３ Ｋ 一 １ ５型 冷 冻 离 心 机 ， 德国Ｓ ｉ ｇ ｍａ 公 司
制造 。
１ ． ３ 试 验 方法
活性 。
司制造 ； ２ ４ ０ ｉ 二氧化碳培养箱 ， 美 国Ｔ ｈ ｅ ｒ ｍｏ 公 司制 造； Ａ Ｃ ２ — ６ Ｓ １ 型生物安 全柜 ， 新 加坡 Ｅ Ｓ Ｃ Ｏ公 司制 造； Ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ａ ＭＲ型 酶 标 仪 ， 美 国Ｄ ｙ ｎ ｅ ｘ公 司 制 造 ； Ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ｉ Ｃ ６型 流式 细胞 仪 ， 美国Ｂ Ｄ生 物 科 学 仪 器及
本 实 验 中 以小 麦 低 聚肽 为 研究 对 象 ， 对 其 氨基 酸 组 成 和 相 对 分 子 质 量 分 布 进 行 了 分 析 。 选 取 Ｈ ： ０ 为诱 导 Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ 细胞 氧化 应 激损 伤 的工具 ， 建 立 肝 细 胞 氧 化 损 伤 模 型 。采 用 此 模 型 评 价 小 麦 低 聚 肽对 Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ 细胞存 活率 、 细胞 内 Ｒ Ｏ Ｓ 及 ＭＤ Ａ含 量 的影 响 ， 旨在 为 小麦 低 聚 肽在 健 康 保健 食 品 中的开 发及 利 用提 供理 论依 据 。
小 麦 低 聚 肽 是 以小 麦 谷 朊 粉 为 原 料 ， 经 过 酶
１ ． ２仪器 与 设备 Ｃ Ｋ Ｘ一 ４ １ 型倒置相差显微镜 ， 日本 奥 林 巴斯 公
解、 提纯等步骤加工制得 ， 具 有 均 衡 的氨 基 酸 组 成
的肽类混合 物。其水溶性好 、 稳定性高 、 易于消化 吸收 、 蛋 白质含 量 高 。大 量研 究 表 明 ， 小麦 低 聚 肽 具 有 免疫 调 节 、 保护 肠 黏膜 、 抗 氧 化 等 多 种功 能
ｒ ａ ｉ ｎ ， 柱温 ３ ０ ℃， 进样 体积 ｌ ０ 。４ 种不同相对分 子 质 量 的 肽标 准 品 为 ： 细胞 色 素 Ｃ（ ‰ １ ２ ５ ０ ０ ） ， 杆
菌酶（ １ ４ ５ ０ ） ， 乙氨酸一 乙氨 酸 一 酪氨 酸一 精 氨 酸
（ Ｍｗ ４ ５ １ ） ， 乙氨酸 一 乙氨 酸一 乙 氨酸 （ Ｍｗ １ ８ ９ ） 。
小麦低聚肽 ， 样品为淡黄色粉末 ， 由北 京 中食
海 氏生 物 技术 有 限 公 司提 供 ， 由浙 江海 氏生 物科 技 有 限公 司制 造 。
人 肝 癌 细胞 Ｈｅ ｐ Ｇ ２ ， 购 自中 国 医学 科 学 院基 础
医学研 究 所 细胞 中心 。
Ｄ ＭＥ Ｍ（ 高糖 ） 培养 基 ， Ｈｙ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ 公 司产 品 ； 胎 牛 血清 （ Ｆ Ｂ Ｓ ） ， 浙江 天杭 生 物科 技 有 限公 司产 品 ； 胰 蛋 白酶 ， Ｐ Ｂ Ｓ ， 双 抗溶 液 （ 青 霉素 ＋ 链霉素 ） ， Ｂ Ｃ Ａ蛋 白质 浓 度测 定 试 剂 盒 （ 增强 型） ， ＭＤ Ａ测 定 试 剂 盒 ， 细 胞
１ ． ３ ． ３ Ｈｅ ｐ Ｇ ２ 细胞 培养
将Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ 细胞 按 ３ × １ ０ 个／
ｍ Ｌ接 种 于含 有 质 是 分 数 １ ０ ％Ｆ Ｂ Ｓ 、 １ ０ ０ Ｕ ／ ｍＬ青 霉
素、 １ ０ ０ Ｉ ｘ ｇ ／ ｍ Ｌ 链 霉素 的 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ（ 高糖 ） 培养 基 中
１ ． １ 材料 与试 剂
（ ｐ Ｈ ７ ． ２ ） ， ３ ７℃ 、 质量分数 ５ ％Ｃ Ｏ ： 及 充 分 饱 和 湿 度 条 件 下孵 育 。待 细胞 融 合 至培 养 瓶 的 ８ ０ ％后 ， 弃 去 旧培养 液 ， 用Ｐ Ｂ Ｓ冲 洗 一 次 ， 加 入 适 量 质 量 分 数 ０ ． ２ ５ ％胰 蛋 白酶 消化 ， 按照 １ ： ３ 传代 培养 。 １ ． ３ ． ４ 实验 分 组及 药物 处理 实 验 分为 ： 正 常对 照
１ ． ３ ． １ 氨 基 酸组 成分析
依据 Ｇ Ｂ ／ 化等反应 ， 破坏细胞结构 。研究表 明， 机体 的氧化应激及氧化损伤与炎症 、 免疫力 降低 、 衰 老－ ｓ 、 动 脉 粥 样 硬 化 １ 、 糖尿病ｕ 。 Ｉ 、 癌 症 ｕ 等 疾病 的发 生 发展 密切 相关 。