重组卡介苗热休克蛋白70的纯化及内毒素去除的效果评价

重组卡介苗热休克蛋白70的纯化及内毒素去除的效果评价李贺;于永利;张培因;卫红飞;曹昭;王影;王华;胡小平;万敏;王丽颖
【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2010(036)001
【摘要】目的:表达、纯化重组卡介苗热休克蛋白70(BCG HSP70)并去除其中的内毒素.方法:采用10 L发酵罐经IPTG诱导表达含有重组表达质粒pET28a/HSP70的BL21(DE3)工程菌(pET28a/HSP70/BL21),SDS-PAGE检测BCG HSP70的表达.超声破碎菌体,裂菌后上清依次经过Ni Sepharose 4B亲和层析、TritonX-114洗涤、Superdex C-25凝胶过滤层析、Q-Sepharose FF离子交换层析进行纯化.SDS-PAGE鉴定纯化蛋白,Lowry法检测蛋白浓度,37℃水浴孵育0～4 h检测纯化蛋白的稳定性,鲎试剂法检测内毒素含量.结果:工程菌pET28a/HSP70/BL21在发酵表达3 h后获得96 g湿菌,其中相对分子质量约为70 000的蛋白约占菌体总蛋白量的29.6%;表达产物纯化后在相对分子质量约70 000处可见特异性条带,该分子质量蛋白约占总蛋白量的96.5%;纯化后蛋白浓度约1.2 g·L~(-1);37℃水浴中放置4 h后相对分子质量为70 000的蛋白约占总蛋白量的95.1%;纯化产物内毒素含量<0.01 EU·μg~(-1).结论:成功表达、纯化了重组BCG HSP70,并有效地去除了其中的内毒素.
【总页数】5页(P35-39)
【作者】李贺;于永利;张培因;卫红飞;曹昭;王影;王华;胡小平;万敏;王丽颖
【作者单位】吉林大学基础医学院免疫学教研室,吉林长春,130021;北华大学药学院药理学教研室,吉林吉林,132013;吉林大学基础医学院免疫学教研室,吉林长
春,130021;吉林大学基础医学院分子生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院分子生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院分子生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院分子生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院分子生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院分子生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院分子生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院分子生物学教研室,吉林长春,130021
【正文语种】中文
【中图分类】R392.11
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