增强型绿色荧光蛋白转染对大鼠骨髓间充质干细胞体外神经元样细胞分化的影响

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DAPI标记的原理

DAPI标记的原理，应用以及优缺点一、DAPI的特性DAPI荧光染料是由Dann等人于1971年合成的，共化学名称为4',6-diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride (DAPI) 的中文名称是4，6-联脒-2-苯基吲哚，其结构式为是一种常用的荧光染料，分子量为350．3．这种二价阳离于的荧光染料是一种黄色晶体易镕于水，最大溶解度为2．5％．可按高浓度的两价或高价阴离于(硫酸盐离子和磷酸盐离子)所沉淀，其作用机理与溴化乙锭等染色剂的机理类似：DAPI具有与各种来源的、富古A—T碱基对的DNA专一结合的特点．DAPI与DNA形成的复合物发出志强度的浅蓝色荧光．共最大的激发波长为372nm，最大的发射波长为454nm，其荧光可按适当浓度的SO42－加强．DAPI最初是作为一种杀锥虫剂合成的，以后用于DNA的检测．Brunk等和Coleman等人证明了DAPI荧光强度与细胞内的DNA含量呈正比，并指出，在pH4—8范围内，DAPI－DNA 复合物的荧光强度不受pH 变化的影响．用DAPI染色法可以测出2x10－16g DNA。

近年来，DAPI多用于细胞生物学和细胞遗传学的研究，由于死、活细胞的细胞膜对DAPI的通透性不同，极低浓度(0.5ug／ml)的DAPI 就可与死亡细胞的DNA结合，产生明亮而稳定的荧光，所以人们开始把这一理想的话体荧光染科用于微生物、植物和动物细胞的细胞生物学和生物化学的研究。

作为一种新型的DNA荧光染科，它具有专一性强、灵敏度高、稳定性好等特点，而且迄今尚来见到DAPI致癌。

致畸等毒性报告．有文献称之为无毒性荧光染料(Renard，1982)．利用DAPI能与细胞DNA稳定结合这一特性，最近被人们用于干细胞的体内示踪。

如造血干细胞和间充质干细胞的体内移植。

DAPI是一种标记细胞核的荧光染料，因其与dsDNA有高度的亲和力，与DNA结合后会发出强烈的荧光。

CM-Dil标记示踪间充质干细胞可行性的体外试验

CM-Dil标记示踪间充质干细胞可行性的体外试验陈小莹;李欣然;王清;付霞霏【摘要】Objective To investigate feasibility of CM-Dil labeling mesenchymal stem cells in vitro.Methods We separate,culture and identify rat bone marrow mesenchymal stem cells,after labeling MSCs with CM-Dil concentration respectively in 1,2,4μg/mL,observe label rate of MSCs after 15 min,24 h,48 h,72 h,5 passage and 8 passage,then detect cell cycle with FCM and cell proliferation capability with CCK8.Results MSC cultured with the whole bone marrow adherent method were strongly positive forCD44,CD29 and negative for CD34,CD45.The label rates of MSC 15 min after labeled with CM-Dil 1,2,4 μg/mL were respectively(31.60±1.25)％,(88.73±1.79)％,(96.89±1.31)％,and there has statistically difference (F=1 757.21,P=0.000);the growth curve of the 4 groups was similar,and the percentages of G1 phase,S phase and G2/M phase between the 4 groups have no statistically difference (P＞0.05).Conclusion CM-Dil in concentration 4 μg/mL has high label rate and low cytotoxicity,therefore could be a efficient and stable method of labeling MSCs.%目的探讨氯苯甲酰氨-1,1'双十八烷基-3,3',3',3'-四甲基吲哚羰基花青高氯酸盐(CM-Dil)体外标记骨髓间充质干细胞的可行性.方法分离培养并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞,分别用1、2、4 μg/mL的CM-Dil标记间充质干细胞,观察标记后15 min、24 h、48 h、72h、传5代、传8代的标记率;用流式细胞仪检测标记前后细胞周期的变化;用细胞计数Kit-8 (CCK8)法检测细胞增殖能力.结果采用全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞CD44、CD29表达阳性,CD34、CD45表达阴性.1、2、4μg/mLCM-Dil标记15 min后标记率分别为(31.60±1.25)％、(88.73±1.79)％、(96.89±1.31)％,差异有统计学意义(F=1 757.21,P=0.000);4组间生长曲线趋势大致相同,且4组间G1期、S期及G2/M期细胞百分比差异无统计学意义(P＞0.05).结论4μg/mL CM-Dil细胞标记率高,无细胞毒性,可作为一种高效而稳定的体外标记间充质干细胞的方法.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2018(047)011【总页数】4页(P1436-1439)【关键词】骨髓间充质干细胞;CM-Dil;细胞标记示踪【作者】陈小莹;李欣然;王清;付霞霏【作者单位】南方医科大学珠江医院妇产科,广州510282;南方医科大学珠江医院妇产科,广州510282;南方医科大学珠江医院妇产科,广州510282;南方医科大学珠江医院妇产科,广州510282【正文语种】中文【中图分类】R394.2干细胞是一类能自我增殖、具有多向分化潜能的细胞，由于其临床应用的可行性及其生物学的重要特性，干细胞治疗成为现代医学研究领域的热点[1]。

四次穿膜蛋白tetraspanin

四次穿膜蛋⽩tetraspanin外泌体（Exosome）是⼀种由细胞分泌的膜性囊泡⼩体，其直径通常为30-100 nm，⽐其它的⼀些囊泡（凋亡⼩体）要⼩得多。

外泌体⼴泛存在于各种体液中，可携带蛋⽩质、脂类、核酸（miRNAs，ncRNAs）等多种⽣物功能⼤分⼦。

新的研究表明，外泌体形成了⼀种特殊的细胞间信息传递系统，它不仅影响细胞的⽣理状态，⽽且还与多种疾病的发⽣与发展密切相关。

外泌体领域的研究已经在癌症的诊断及治疗等领域发挥重要作⽤，基于质谱的⾼通量蛋⽩质组学是研究外泌体不可或缺的⼀项技术⼿段。

中⽂名称：四次穿膜蛋⽩英⽂名称：tetraspanin定义：⼀种蛋⽩质超家族，其名称来⾃tetra+span+protein的组合。

该超家族成员很多，如质膜中CD9、CD18、CD81和CD151等；也存在于溶酶体膜中，如溶酶体相关膜蛋⽩。

应⽤学科：⽣物化学与分⼦⽣物学（⼀级学科），⽣物膜（⼆级学科）。

四次跨膜蛋⽩（tetraspanin）家族的蛋⽩质通过与γ-分泌酶相互作⽤调节Aβ的产⽣的⽅法⽅法研究⼈员在AD⼤脑中搜寻差异表达的四次跨膜蛋⽩（tetraspanins）。

在体外研究所选择的四次跨膜蛋⽩的功能，并在体内证实所发现的⽣理相关性。

结果Taspaspinin-6（TSPAN6）在AD⼤脑中表达增加，在细胞中的过度表达对淀粉样前体蛋⽩（APP）代谢产⽣⽭盾的影响，同时增加APP-C末端⽚段（APP-CTF）和Aβ⽔平。

TSPAN6影响⾃噬体溶酶体融合，减缓APP-CTF的降解。

TSPAN6也招募胞质，外泌体形成适配器syntenin，增加含有APP-CTF的外泌体的分泌。

结论TSPAN6是在溶酶体依赖性降解和外泌体介导的APP-CTF分泌之间的关键调控参与者。

这证实了⾃噬体/溶酶体途径在APP代谢中的中⼼作⽤，并且显⽰TSPAN6在APP-CTF周转中的关键作⽤。

⼈源肝癌细胞HepG2外泌体胰腺β细胞外泌体HPV阳性头颈部鳞状细胞癌外泌体⼈脐带间充质⼲细胞来源的外泌体⼩胶质细胞外泌体⼈⾻髓间充质⼲细胞（BM-MSC）来源的外泌体⼤⿏⾻髓间充质⼲细胞外泌体钙化⾎管平滑肌细胞（CVSMC）分离的外泌体⼼肌梗死⾎清中的⼼肾外泌体外泌体miR-20b-5p⼈类原发性垂体腺瘤中提取外泌体lncRNA H19脂毒性肝细胞分泌的外泌体miR-192-5p肝脏外泌体来源的miR-130a-3p神经元外泌体转移性⿊⾊素瘤外泌体PD-L1外泌体miR-21膀胱癌细胞分泌的外泌体外泌体LNMAT2⼈真⽪成纤维细胞分泌的外泌体CAR-T细胞分泌的外泌体⼼脏祖细胞（CPC）来源的外泌体叶酸-外泌体胶质瘤衍⽣的外泌体（GDEs）常氧胶质瘤衍⽣的外泌体（N-GDEs）缺氧胶质瘤衍⽣的外泌体（H-GDEs）肿瘤细胞分泌的包裹仿⽣多孔硅纳⽶颗粒的外泌体（E-PSiNPs）成⽛本质细胞分泌外泌体神经元来源的外泌体Aβ42、T-tau和P-T181-ta外周循环外泌体miR-155宫颈癌细胞分泌的外泌体miR-221-3pM2型⼩胶质细胞衍⽣的外泌体（M2-EXO）活化肝星状细胞分泌外泌体间充质⼲细胞外泌体⼈⼼肌球源细胞分泌外泌体⼼脏祖细胞分泌外泌体肾⼩管上⽪细胞分泌外泌体内⽪细胞分泌具有⾻靶向作⽤的⽣物相容性外泌体EC-Exos⽐成⾻细胞衍⽣的外泌体⼈⽺膜上⽪细胞外泌体HPV阳性头颈部鳞状细胞癌分泌的外泌体胆管细胞来源的外泌体⾎管内⽪细胞分泌的外泌体（endothelial cell-secreted exosomes，EC-Exos）巨噬细胞外泌体荧光标记的外泌体红⾊荧光DiI-CT26.WT细胞外泌体iRFP682-⼈乳腺癌外泌体近红外荧光蛋⽩iRFP682标记的⼈乳腺癌MDA-MB-231细胞外泌体荧光染料DiI标记⼩⿏结肠癌CT26.WT细胞外泌体红⾊荧光DiI标记巨噬细胞外泌体荧光染料PKH67标记SACC-83来源的外泌体pCDH-CMV-CD63-SBP-ZsGreen1-EF1-PuropCDH-CMV-CD9-SBP-ZsGreen1-EF1-Puro 绿⾊荧光蛋⽩基因ZsGreen1标记的外泌体标记物的慢病毒载体绿⾊荧光PKH67标记的A549细胞外泌体PKH67-BMSCs外泌体绿⾊荧光PKH67标记的⼈髓核细胞（NPCs）外泌体PKH67-NPCs外泌体绿⾊荧光PKH67标记的⼈⾻髓间充质⼲细胞（BMSCs）外泌体荧光DiI标记胰腺癌细胞分泌的外泌体红⾊DiI/绿⾊PKH67 标记Siha-Exo 宫颈癌细胞Siha分泌的外泌体(Exosomes）DiI-HCC-Exo 红⾊荧光DiI标记肝细胞癌(HCC)分泌的外泌体ZsGreen1-OP-Exo 绿⾊荧光蛋⽩基因ZsGreen1标记质疏松症(osteoporosis,OP)发⽣发展的⾎浆外泌体ZsGreen1-hDPSC-exosomes 绿⾊荧光蛋⽩基因ZsGreen1标记⼈⽛髓间充质⼲细胞来源外泌体PKH67-Renca-exosomes 绿⾊荧光PKH67标记Renca细胞来源的外泌体(exosomes)PKH67-SCAP-exosomes 绿⾊荧光PKH67标记根尖⽛乳头⼲细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)来源的外泌体DiI-HLA-G-exosomes 红⾊荧光DiI⼈类⽩细胞抗原G( human leukocyte antigen G,HLA-G)外泌体DiI-MenSCs--Exo 红⾊荧光DiI宫⾎⼲细胞(Menstrual blood derived mesenchymal stem cell,MenSCs)来源的外泌体PKH67-ACC-2-EXO 荧光染料PKH67标记腺样囊性癌ACC-2细胞来源的外泌体染料DiR或DiI标记内脏脂肪来源外泌体荧光探针CM-DIO标记BMSCs⼤⿏⾻髓间充质⼲细胞荧光探针CM-DIL标记髓核细胞外泌体wyf 01.12。

增强型绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞移植对帕金森病大鼠模型的治疗作用

摘要目的
探讨骨髓间充质干细胞（ｓｎｈｍｌｔｍｃｌ，Ｃ）移植对帕金森病（ａｋｎｏ ’ ｉａｅＰｍｅｅｃｙａｓｅｅｌＭＳｓｓＰｒｉｓｎｓｄｓｓ，Ｄ）ｅ
将造模成功的ＰＤ大鼠随机分为两组，增强型绿色荧光蛋白（ｎ将ｅ—
ｔａｓｌｎｅｎｏｔｅＰａｋｎｏ ’ ｓａｅＰＤ）ｒｔ．ＭｅｈｄＴｈ－ｙｒｘｄｐｍｉｅ６ＯＨＤＡ）ｉｄｃｄｈｍｉａｋｎｏａｓｒｎｐａｔｄｉｔｈｒｉｓｎｓＤｉｅｓ（ａｓｔｏｓｅ６ｈｄｏｙｏａｎ（－一ｎｕｅｅｐｒｉｓｎｒｔ
ＡｂｔａｔＯｂｅｔｅＴｏｓｕｙｃｒｔｅｅｆｃｓｓｒｉａ，ｉｒｔｎａｄｄｆｅｅｔｔｏｆｍｅｅｃｙ１ｓｅｃｌ（Ｓｓｓｒｃｊｃｉｖｔｄｕａｉｆｅｔ，ｕｖｖ１ｍｇａｉｎＩｒｎｉｉｎｏｓｎｈｍａｔｍｅｌＭＣ）ｖｏｆａｓ
增强型绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞移植对帕金森病大鼠模型的治疗作用＊
胡琦康慧聪刘晓艳许峰李巷朱遂强△
华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科，汉武
４０３３００
大鼠的疗效及其在脑内存活、徙、化规律。方法迁分
ｈｎｅｒｅｕｒｓｅｔｒｔｉ，ＧＰ标记的ＭＳｓＰＳ分别移植入两组Ｐ模型纹状体。术后每周进行旋转试ａｃｄｇｅｎｆｏｅｃｎｏｅＥＦ）ｌｐｎＣ及ＢＤ验，１和第９周行脑神经元特异性核蛋白（ｕ）胶质细胞源性蛋白（ＡＰ及酪氨酸羟化酶（第周Ｎｅｎ、ＧＦ）ＴＨ）免疫组化鉴的定，９周行Ｗｅｔｒｌｔ测两组模型纹状体内ＴＨ的表达。结果移植前ＭＳ第ｓｅｎｂｏ检Ｃ组及ＰＳ组旋转次数分别为（． ± Ｂ８２０６、８３．）ｍｎ差异无统计学意义（．）（． ±０６圈／ｉ，Ｐ＞００）术后第３分别为（． ±０５、８１．）／ｎ差异有统计．５；周７５．）（． ±０６圈ｍｉ，学意义（＜Ｏ０）并持续至术后第９周。移植后第１ＭＳｓ主要分布于针道附近，９周则迁徙至两侧大脑半球，Ｐ．５，周Ｃ第以移植侧半球为主，远迁徙至胼胝体的末端。小脑及脑干未见移植细胞。全脑未见畸胎瘤的形成。术后第１免疫组最周化染色仅见ＧＦＡＰ和Ｎｅｎ表达，９ＧＦ、ｕｕ第周ＡＰＮｅｎ仍有表达，ＧＡ以ＦＰ居多，时在纹状体内还可见少量ＴＨ表达，同提示ＭＳｓ脑内主要分化为胶质细胞，分为神经元，数分化为多巴胺能神经元（ｏａｎｒｉｎｕｏ，Ｎ）ＢＣ在部少ｄｐｍｉｅｇｃｅｒｎＤ。ＰＳ组免疫组化染色未见上述蛋白的表达。Ｗｅｔｒｌｔ测仅ＭＳｓ组大鼠纹状体有ＴＨ的表达。结论ＭＳｓ植入ｓｅｎｂｏ检ＣＣ移纹状体后可分化为Ｄ从而改善ＰＮ，Ｄ症状，移植治疗Ｐ大鼠模型可能是安全有效的。其Ｄ

绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞培养及鉴定

绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞培养及鉴定刘慧娟;胡若愚;戴王娟;刘元果;闵波;蒋犁【摘要】目的体外分离、培养和鉴定增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs).方法取EGFP转基因大鼠胫、股骨骨髓,全骨髓贴壁法分离培养、纯化BMSCs;荧光显微镜观察细胞形态;流式细胞仪分析细胞表型;CCK-8法绘制细胞生长曲线并与野生型BMSCs增殖情况相比较;分别向成脂、成骨、成软骨诱导分化鉴定;将细胞经鼠尾静脉移植入大鼠体内,观察其在体内定植情况.结果获得稳定表达EGFP的BMSCs,以长梭形为主,融合后呈漩涡状排列;生长曲线示EGFP-BMSCs增殖能力旺盛,与野生型BMSCs相比差异无统计学意义(t=-0.023,P=0.982);细胞CD29、CD90、CD34、CD49d、CD45表达率分别为99.4％、96.4％、0.171％、0.049％、0.038％;成脂、成骨、成软骨诱导后,分别给予油红O、茜素红、甲苯胺蓝染色,结果均呈阳性;在肺组织内可检测到稳定的绿色荧光.结论成功获得高纯度、稳定表达EGFP的BMSCs,干细胞特性不受EGFP 影响.细胞定植后,示踪效果良好,可用于后续实验研究.【期刊名称】《中国医学科学院学报》【年(卷),期】2016(038)001【总页数】7页(P9-15)【关键词】骨髓间充质干细胞;绿色荧光蛋白;诱导分化【作者】刘慧娟;胡若愚;戴王娟;刘元果;闵波;蒋犁【作者单位】东南大学附属中大医院儿科,南京210009;东南大学附属中大医院心胸外科,南京210009;东南大学附属中大医院儿科,南京210009;东南大学附属中大医院心胸外科,南京210009;东南大学附属中大医院心胸外科,南京210009;东南大学附属中大医院儿科,南京210009【正文语种】中文【中图分类】R394.2间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是来源于中胚层的一类多能干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中[1- 3]。

大鼠骨髓间充质干细胞分离培养标记及向移植肺趋化的实验研究

清（美国Ｈｙｃｌｏｎｅ公司），ＤＡＰＩ试剂（美国Ｓｉｇｍａ公司），ＣＤ３４ＦＩＴＣ抗体（美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司）、ＣＤ４４一ＰＥ抗体（英国ＳＥＲＯＴＥＣ公司），ＣＤ１１ｂ — ＰＥ
１．２．１ＭＳＣ的分离、培养及鉴定全骨髓贴壁法分离培养ＭＳＣｓ。取大鼠股骨及胫骨，骨髓细胞以２ ×１０ｅｍ密度接种，使用低糖ＤＭＥＭ培养。通
高度增殖的能力。１９７６年由Ｆｒｉｅｄｅｎｓｔｅｉｎ发现并描
ＭＳＣｓ向移植肺的趋化现象。方法全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠ＭＳＣｓ，流式细胞法检测细胞表型。观察
包括细胞形态学、生长曲线在内的生物学特征。通过定向诱导ＭＳＣｓ向成骨和成脂肪分化鉴定其多向分化潜能。
发现ＭＳＣｓ在肺缺血再灌注损伤、急性心肌梗死、急性肝功能损伤、脑梗死等组织损伤修复方面，优势
显著。］。目前研究发现ＭＳＣｓ具有分化为脂肪细胞、成骨细胞、心肌细胞、软骨细胞、肝细胞以及神经细胞等多种类型细胞的潜能，已成为重要的组织工程种子细胞。本实验对ＭＳＣｓ进行分离培养及表型鉴定，并应用ＤＡＰＩ和ＧＦＰ双重标记观察其能否趋化到同种异体移植肺内。

增强型绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞体外诱导分化成心肌样细胞研究

为ＩＡｇＮ的发病机制带来崭新的解释和诊断技术。利用流式
ＣｌＲｓ２０，０４：５－６．ｅｌｅ，０１１（）４１４３
细胞仪检测ＩＡ病尿ＮＫ细胞含量可间接反映出ＩＳｇＡＮ肾小
球病变程度。协助判断ＩＡ肾病患者的预后，ｇ是一种具有较好应用价值的非创伤性检测手段。参考文献
的差异较大。这可能与肾活检以及观察病例的人选标准以及观察时间不同有关。本研究利用ＦＭ技术发现：随着ＩＡＣｇＮ
Ｎｅｈｏ，９８４（）１８ｐｒｌ１９，９１：－．
４陈香美，院生．ｇ谢ＩＡ肾病的发病与治疗．中西医结合肾病中国
以便确定转染浓度对转染效率的影响，并明确经蛋白标记后
特异性肌钙蛋白Ｔｃｎ）克隆抗体、Ｄ１（Ｔ单ＴＣ３单克隆抗体、连
接蛋白４３多克隆抗体（国Ｇｂｏ司）横纹肌肌动蛋白美ｉｃ公；一
是理想的种子细胞和基因转移的载体细胞．但其在体内的转
归是研究的难点『。近期，２１我们采用不同浓度的转染液转染，
１林宜，朱斌，军等．ｇ王ＩＡ与非ＩｇＡ系膜增生性肾炎患者外周血
７任野平，长宏，赵刘素雁，慢性肾炎患者红细胞免疫与Ｎ等．Ｋ
细胞活性的相关性．中华微生物学和免疫学杂志，０１２２０，１
（）６．１：９
ｉｌｃｔｎｏｈｒｐｆｈｍａｉｅｓ．ＪＨｅｔｔｅｔｍｍｐｉａｉｓｆｒｔｅａｙｏｕｎｄｓａｅｏｍａｏｈｒＳｅ

Sofast介导增强性绿色荧光蛋白基因转染骨髓间充质干细胞

ＫｅｒｓＳｆｓ；ｅｈｎｅｒｅｌｏｅｃｎｒｔｉｙｗｏｄｏａｔｎａｃｄｇｅｎｆｕｒｓｅｔｐｏｅｎ；ｂｎｒｏｍｅｅｃｙｌｓｅｃｌ；ｔａｓｅｔｎｏｅｍａｒｗｓｎｈｍａｔｍｅｌｓｒｎｆｃｉｏ
ＡｓａｔＯｂｅｔｅｒｔｄｈａｉｉｔｆａｉｉｐｌｒｏａｔｒｎｆｃｏｅｇｎｔｏｅｒｏｓｎｈｍａｂｔｃｒｊｃｖ：ｒｓｙｔｅｆｓｌｙｔｎｃｏｙｆｓｔｓｔｎｒａｅｔｎｏｂｎｒｗｍｅｅｃｙｌｉ０ｕｅｂｉｏｃｏｍｅＳａｅｉｉｍａ
ＪａＸｉｏｉａｌ，ＣｈｎＳａｑａｇｉｅｈｏｉｎ △
（ｐｒｒｅｔｌｎｔｎｓｌｇ￣ｍｂｙｌｙ，ｉｎｄｃｌＵｉｅｓｙ，ｕｈｕ３００，ｈｎ）Ｄｅａｔｎ，ＡａｏａｄＨｉｏｏ３ＥｒｏｏｎｏｍｙｔｇＦａｉｎｖｒｉＦｚｏ５０４ＣｉＭｅａｔａ
（建医科大学解剖学与组织胚胎学系，州３００）福福５０４
摘要目的：研究新型阳离子聚合物Ｓｆｓ基因转染试剂（ｏａｔ对大鼠骨髓间充质干细胞（ＭＳｓ进行基因修饰的可行ｏａｔＳｆｓ）ＢＣ）
性。方法：在体外分离和扩增ＭＳｓ在Ｓｆｓ介导下行ｐＧＦ－１转染ＢＣ，置荧光ＭＳｓ倒
ｓｅｃｌＢＭＳ）ＭＰｈｄ：Ｅｈｎｅｒｅｌｏｅｃｎｒｔｉ（ＧＦｔｍｅｌｓ（Ｃｓ．ｔｏｓｎａｃｄｇｅｎｆｒｓｅｔｐｏｅｎＥｕＰ）ｗａｒｎｆｃｅｔｏａｔｉｔｓｔａｓｅｔｄｗｉＳｆｓｎｏＢＭＳｓｓｌ — ｈＣ，ｉｏａｔｄａｄａｌｉｄｉｉｒ．Ｔｒｎｆｃｉｎｅｆｉｎｙａｄｔａｓｅｔｅｐｅｓｎｗｅｅｅａｕｔｄｂｎｅｔｄｆｏｅｃｎｃｏｅｎｍｐｉｅｎｖｔｏｆａｓｅｔｆｉｅｃｎｒｎｉｎｘｒｓｉｒｖｌａｅｙｉｖｒｅｌｒｓｅｔｍｉｒ — ｏｃｏｕｓｏｅｃｐ．ＴｈｉｌｙｏｒｎｆｃｅｅｌｓｄｔｃｅｙＭＴＴｅｔｅｖｔｉｆｔａｓｅｔｄｃｌｗａｅｅｔｄｂａｔｓｔｓ．Ｒｅｕｔ：ＴｈｘｒｓｉｎｏｓｌｓｅｅｐｅｓｏｆＥＧＦｅａｎ２ｏｒｆｅＰｂｇｎｉ４ｈｕｓａｔｒｔａｓｅｒｎｒｎｆｒｉｇ．ｒａｈｄｍａｉｍｎ４ — ２ｈｕｓａｄｄｃｅｓｄａｔｒｏｅｗｅｋｅｃｅｘｍｕｉ８７ｏｒｎｅｒａｅｆｅｎｅ．ＷｈｎｔｅｖｌｍｅｒｔｆｐａｍｉｎｏａｔｅｈｏｕａｉｏｌｓｄａｄＳｆｓｏｗａ：１ｈｆｉｉｎｙｏｒｎｆｒｉｇｐｓ３，ｔｅｅｆｅｃｆａｓｅｒｎＥＧＦＰＮ１ｉｔＭＳｏｌｃｉｖｏ８．Ｔｈｅｌｉａｉｙｗａ４２．ｏｃｕｃｔ－ｎｏＢＣｓｃｕｄａｈｅｅｔ５ｅｃｌｖｔｌｓ９．Ｃｎｌ — ｔｓｏｉｎ：Ｓｆｓ，ｕｅｏｍｅｉｔＧＦｒｎｆｃｉｇＢＭＳｓＳａｂｔｅａｅｍｅｈｄｏａｔｓｄｔｄａｅＥＰｔａｓｅｔｎＣ，ｉｅｔｒｌｂｌｔｏ．

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养和外源基因的导入

维普资讯
山盘医药０７２０年第４卷第２７期
大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养和外源基因的导入
王晓军崔连群。李，，４东省科技大学）山
［摘要］目的探讨绿色荧光蛋白基因转染骨髓间质干细胞的可行性。方法采用ＦｃｌＰｑｅＰｕ淋巴ｉｌａｕｌ１ｓ０— ￣
ｔｅｘａｄｄｂｕｃｌｒｕｃｓｉｅｙＴｈｒｈｌｇｓｏｓｒｅｔｈｓｃｎｒｓｃｏｃｐ．Ｔｈｈｎｅｐｎｅｙｓｂｕｔｅｓｃｅｓｖｌ．ｕｅｍｏｐｏｏｙｗａｂｅｖｄｗｉｈｐａｅｏｔａｔｍｉｒｓｏｅｅ
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神经干细胞——精选推荐

神经生物干细胞定义干细胞是指机体在其毕生过程中、某些特定时期具有自我更新(self-renewal)和分化(differentiation)能力的细胞群。

干细胞也称前体细胞(precursor cell)或祖细胞(progenitor cell)。

干细胞的概念最早由Evans于20世纪80年代初提出，他们在实验中发现来源于小鼠囊胚的内皮细胞团，能在体外培养，是一种高度未分化的细胞，具有发育成为各种细胞的潜能，一旦生理需要，这些干细胞可按照发育途径通过分裂而产生分化细胞。

干细胞具有两个基本功能：多种潜能和自我更新能力。

按照分化潜能的大小，干细胞可以分为3种类型：(1) 全能干细胞(totipotent stem cells)，能产生机体任何细胞类型，进一步形成机体的组织、器官并形成个体，如胚胎干细胞能够产生来自所有3个胚层的细胞，依所在组织不同而特化为不同类型的细胞；(2) 多能干细胞(multipotent stem cells)，这种细胞具有分化为多种组织细胞的潜能，但是不能形成个体，发育潜能受到一定限制，最典型的例子是骨髓造血干细胞；(3) 单能干细胞(unipotent stem cells)，常指成体中的细胞，这类细胞只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化，能够保证组织的稳定自我更新，补充因正常衰老或损伤而丧失的细胞，如上皮组织基底层的干细胞。

总之，生命体通过干细胞的分化增殖来实现细胞的更新及保证持续生长。

1、神经干细胞的定义1989年，Temple等从13天大鼠胚胎脑隔区取出细胞进行培养，发现这些细胞发育成神经元和神经胶质细胞。

其后从成年鼠纹状体、海马齿状回等处分离出能在体外不断增殖，并具有向神经元和星形胶质细胞分化潜能的细胞群。

20世纪90年代初，Reynolds 等从成年小鼠脑纹状体分离出能在体外不断分裂增殖，具有多种分化潜能的细胞群，正式提出了“神经干细胞”的概念，以一种新的观念代替了传统的认为神经组织一成不变的观念。

不同转染方式对腺病毒介导的基因转染效率的影响

不同转染方式对腺病毒介导的基因转染效率的影响孔霞;郭凌郧;张蕾;郑飞;杨建业;黄永章;唐俊明;王家宁【期刊名称】《郧阳医学院学报》【年(卷),期】2010(29)1【摘要】目的:研究携带绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)基因的重组腺病毒在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达。

方法:将纯化的GFP重组腺病毒分别用单次转染和多次转染两种不同方法转染MSC,观察其感染效率和GFP表达水平。

结果:培养的MSC呈CD90和CD105强阳性,且具有成骨、成脂肪等多向分化能力;携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒单次转染和多次转染P3代MSC都呈现出浓度依赖性;单次转染在80MOI时转染效率最高,而多次转染在20MOI时转染效率即已达90%。

结论:建立稳定、高效表达Ad-GFP的骨髓间充质干细胞实验体系,为MSC的标记及示踪奠定基础。

【总页数】5页(P1-4)【关键词】腺病毒;绿色荧光蛋白;转染;骨髓间充质干细胞【作者】孔霞;郭凌郧;张蕾;郑飞;杨建业;黄永章;唐俊明;王家宁【作者单位】郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所;郧阳医学院附属人民医院心内科【正文语种】中文【中图分类】Q784【相关文献】1.不同转染方式介导基因转染效果的评价 [J], 丁尚伟;张艳容;吴文谦;任萍萍;黄晓宇;张培歌;武彧;于艾嘉;谢明星2.重组腺病毒对Hela、MCF-7的转染效率及其介导的hTRAIL基因体外抑瘤作用[J], 朴春姬;孙晓玲;王彬;付鑫;刘晓丽3.腺病毒介导的hNT-3基因转染对兔前交叉韧带重建术后本体感觉恢复的影响[J], 蔡东高;傅永慧;吕游;曾辉;孙旭4.腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓间充质干细胞的效率及毒性 [J], 武成聪;荣树;任静;吴铮;刘涛;刘克廷;朱博;黄合飞;王芳5.腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓间充质干细胞的效率及毒性 [J], 武成聪;荣树;任静;吴铮;刘涛;刘克廷;朱博;黄合飞;王芳;;;;;;;;;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

编辑观点

9226
p lR E S 2 一 E G F P — B M P 一 2 真核表达质粒转染兔骨髓间充质千细胞 ☆
詹玉林，库热西玉努斯黄，国虹等，
千细胞转基因表达
9253
绿色荧光蛋白转染大鼠骨髓间充质干细胞及体外向神经元样细胞的分化 +
袁维路，磊
9239
人骨关节炎关节软骨间充质祖细胞的免疫磁珠分选和鉴定 ★
刘军，戴刚，杨柳
9275
溴脱氧尿苷标记滞留细胞表达干细胞标记物神经巢蛋白t
刘朝
9288
胰蛋白酶差速脱壁法分离纯化人表皮干细胞 + ☆
闫迎军，刘大庆何，丽娟等，
羁差蕉堕座篮复笾堑堡塑三壅翌苤虫王堡丝蟹苤丝量堑堡监 ! 量堑蕴丛 ! 量堑左壁丛堡量堑壁堡
。干细胞生物学特征。千细胞培养与分化。干细胞因子及调控因子 0 干细胞生长微环境
Q干细胞与异基因干细胞移植
贴壁法分离培养人骨髓间充质干细
胞初，步证实在血管内皮细胞生长因
子与碱性成纤维细胞生长因子体外
联合诱导的方式下，骨髓间充质干细
胞可定向分化为血管内皮样细胞推，
荐阅读。
( 编辑：郑姝 )
先促使骨髓间充质干细胞表面的血
管内皮细胞生长因子受体数量逐渐

2型重组腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋白在大鼠骨髓间充质干细胞的表达

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ｑｉａｎｇ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ＴｏｎｇＪｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｏｎｇＪｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅ
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［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｒａｔｅｓａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅｎｈａｎｃｅｄｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ
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ＮｅｕｒａｌＩｎｊｕｒｙａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＲｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２００７，Ｖｏ１．２，Ｎｏ．６

绿色荧光蛋白基因腺病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

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广东医学
２００８年２月第２９卷第２期Ｇｕｎｄｎｄｃｌｏｒ￣Ｆｂ０８Ｖ１９。Ｎ．２ａｇｏｇＭｅｉｕｎａＪｅ．２０。ｏ．２ｏ

绿色荧光裸鼠血液生理生化指标检测分析

绿色荧光裸鼠血液生理生化指标检测分析尤金炜，张立波，方天，田小芸，刘彪，周森妹，梁磊，董敏，胡文娟，赵志刚，恽时锋（南京军区南京总医院比较医学科，全军实验动物科普与伦理教育基地，全国科普教育基地，江苏南京，210002）摘要：目的：检测绿色荧光蛋白（Green Fluorescence Protein，简称GFP）转基因裸鼠血液生理生化指标，为将来的研究提供基础参考值。

方法：实验选用6～8周GFP转基因裸鼠及对照组BABL/C裸鼠雌雄各30只，取血测定血生化和血常规指标。

结果：①GFP转基因裸鼠与对照组BABL/C裸鼠比较，白细胞总数(WBC)、尿素(URE)、平均血红蛋浓度(MCHC)、葡萄糖(GLU)差异极显著(P <0.01)；血红蛋白(HGB)、红细胞分布宽度(RDW)、血小板计数(PLT)、尿酸(UA)差异显著(P <0.05)，其它指标差异不显著。

②GFP转基因裸鼠雌雄间比较，红细胞分布宽度(RDW)、平均血红蛋白含量(MCH)、平均血红蛋浓度(MCHC)、血小板计数(PLT)、球蛋白(G)、胆固醇(TC)、HDL-胆固醇(HDL-TC)差异极显著(P <0.01)，白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU)差异显著( P <0.05)，其它指标差异不显著。

结论：转基因GFP转基因裸鼠的生理生化指标值在雄雌间有一定的差异，为相关的生物医学研究提供了基础数据。

关键词：GFP转基因裸鼠；血常规；血生化引言转基因动物是指将外源重组基因转染并整合到动物受体细胞基因组中，从而形成在体表达外源基因的动物［1］。

来源于水母(Aequorea Victoria)的绿色荧光蛋白( Green fluorescent protein, GFP),现已成为细胞生物学和分子生物学中应用最广泛的分子标记之一，在制作转基因动物过程中更是如此［2］。

GFP转基因裸鼠是本科室工作人员通过多年的杂交回交选育而成［3］，选育方法：选择自带GFP转基因的C57BL/6小鼠与BALB/c裸鼠杂交，并与BALB/c裸鼠回交并经逐代选育，选育至第六代，产生了GFP基因表达较为稳定的BALB/c绿色荧光裸鼠。

GFP的简介和应用

GFP的简介和应用【摘要】源于多管水母属等海洋无脊椎动物的绿色荧光蛋白（GFP），是一种极具应用潜力的标记物，有着极其广泛的应用前景。

本文就GFP的理化性质、荧光特性、改进以及它在科学研究中发挥的作用进行了综述。

【关键词】绿色荧光蛋白（GFP）、标记物、荧光特性、进展、改进、应用、干细胞移植【正文】一、GFP的简介1. GFP的理化性质，荧光特性及其改进1.1 GFP的理化性质从水母体内分离到的GFP基因，长达2.6kD，由3个外显子组成，分别编码69、98和71个氨基酸。

GFP本身是一种酸性，球状，可溶性天然荧光蛋白。

Aequoria GFP分子量约27×103，一级结构为一个由238 个氨基酸残基组成的单链多肽；而Renilla GFP是分子量为54kD的同型二聚体。

两种GFP有不同的激发光谱，Aequoria GFP在395 nm具有最高光吸收峰，肩峰为473 nm；Renilla GFP在498 nm具有强烈的光吸收，肩峰为470 nm。

两种GFP含有相同的生色团，发射光谱基本相同（λmax= 508~ 509 nm）。

GFP性质极其稳定，易耐受高温处理，甲醛固定和石蜡包埋不影响其荧光性质。

其变性需在90℃或pH<4.0或pH>12.0的条件下用6mol/L盐酸胍处理，一旦恢复中性环境，或去除变性剂，虽然变性的蛋白质并不能完全复性，但是复性蛋白质同天然蛋白质对温度、pH变化的耐受性、抗胰蛋白酶消解的能力是相同的。

更重要的是，它们在很大的pH范围内的吸收、发射光谱也是相同的。

Renilla GFP的稳定性就更为显著。

它在上述一系列的变性条件下都很稳定，不易变性。

根据Sheen等的研究，GFP在受体内表达时，其稳定性并不亚于CAT 蛋白，因而可以得到持续时间较长的荧光。

1.2 GFP的荧光原理GFP的性质和发射光谱的稳定性是同其生色团结构的稳定性密不可分的。

GFP表达后折叠，在氧存在的条件下，使66位氨基酸残基的α、β键间脱氢。

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增强型绿色荧光蛋白转染对大鼠骨髓间充质干细胞体外神经元样细胞分化的影响
（一）Ｃ４（一）经体外培养后可诱导分化神经元样细胞，，Ｄ５，并且２组诱导分化神经元样细胞阳性率差异无统
计学意义（００）Ｐ＞．５。结论：转染Ｇ基因对ｒＣ在体外诱导分化神经元样细胞无明显影响，ＧＰ可作ＭＳＥＦ为研究ｒＣ分化潜能机制的有效示踪标志。ＭＳ［关键词］增强型绿色荧光蛋白；骨髓间充质干细胞；诱导分化；神经元样细胞
响。方法：以质粒为载体将Ｅ基因转染ｒＣ，式细胞仪检测转染后ｒＣ的表面标志物，ＧＭＳ流ＭＳ并对转染
ＥＦ的ｒＣ在体外向神经元方向诱导分化。结果：染ＥＦ基因的ｒＣ与未转染的ｒＣ在细胞形态学ＧＰＭＳ转ＧＰＭＳＭＳ和生长特性方面一致。转染ＥＦ基因的ｒＣ在细胞表面标志物上符合ｒＣ的特点，Ｃ４（＋）Ｃ１ｂＧＰＭＳＭＳ呈Ｄ４，Ｄｌ
ＤＩ１．９９ｊｉｎ１７－４．０１．１Ｏ：０３６／．ｓ．６２７７２１．２００ｓ３１
Ｅｆｅｔｏｒｎｓｅｔｏｆｅｈｎｅｒｅｕｏｅｃｎｆｃｆｔａｆｃｉｎｏｎａｃｄｇｅｎｆｒｓｅｔｌ
（ｅａｔｅｔｆＳｉｌｕｇｒ，ｅｏｄＸａｇａＨｓｉｌｅｔｌｏｔｎｖｒｔ，ｈｎｓａ４０１，ＣｉａＤｐｒｎｏｐｎｒｅＳｃｎｉｙｏｔ，ＣｎｒｕｈＵｉｓｙＣａｇｈ１０１ｈｎ）ｍａＳｙｎｐａａＳｅｉ
李亚伟，王冰，吕国华，刘伟东，李磊
（中南大学湘雅二医院脊柱外科，长沙４０１）１０１
［摘要］目的：利用质粒载体将增强型绿色荧光蛋白（ｎａｃｄｇｅｕｒｓｅｔｒｅ，ＧＰ转染大ｅｈｎｅｒｎｆｏｅｃｎｐｏｉＥＦ）ｅｌｔｎ鼠骨髓间充质干细胞（ａｍｓｎｈｍｌｔｅｓｒＣ，究ＥＦｒｔｅｅｃｙａｓｍｃｌ，ｅｌＭＳ）研ＧＰ对ｒＣ体外诱导分ｆＧＰｒＳｃｄｎｘｒｓｉｆＤ４ｈｅｕｆｅｌａｍａｋｒｏＦ — Ｃｉｌｉｇｅｐｅｓｎｏ４（＋）Ｃ１ＥＭｎｕｏＣ，Ｄｌｂ（一）ａｄＣ４ｎＤ５
（一）ｒｍａｎｄｓｌｒｔｈｓｆＭＳｅｉｅｉａｏｔｏｅｏＣ．ＥＧＰｒＣｐｅｅｔｄｔｅｄｆｒｎｉｔｄｐｔｎｉｌｏｎｕｍｉｒＦ・ＭＳｒｓｎｅｈｉｅｅｔｅｏｅｔｅ — ｆａａｔ
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ｖｃｏ．ＭｅｈｏｅｔｒｔｄｓＩｉｒｕｔｒｄｒＣｓｔａｆｃｅｔｌｓｄｖｃｏｏｔｉｉｇＥＧＦｎｖｔｏｃｌｕｅＭＳｗａｒｎｓｅｔｄｗｉｈｐａｍｉｅｔｒｃｎａｎｎＰ．ａｄｉｓｓｒａｅｍａｋｅｎｉｆｒｎｉｔｏｅｒｎ１ｅｌｒｅｅｔｄＲｅｕｌｓＴｈｅｅｗａｎｎｔｕｆｃｒｒａｄｄｆｅｅｔａｉｎｎｕｏ．ｉｃｌｗｅｅｄｔｃｅ．ｋｅｓｓｔｒｓｏｓｇｆｃｎｉｅｅｃｎｔｅｍｏｐｈｌｇｎｕｆｃｒｅｓｂｔｅｈｉｎｉａｔｄｆｒｎｅｉｈｒｏｏｙａｄｓＹａｅｍａｋｒｅｗｅｎｔｅＥＧＦＰ－ＭＳａｄｒＣ．ｉｆｒＣｎＭＳ
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