靶向型辅助腺病毒的构建及其功能研究

靶向型辅助腺病毒的构建及其功能研究
杨月峰;李泽良;鲁茁壮;王华;肖凤君;张群伟;孙慧燕;王立生
【期刊名称】《中国医药生物技术》
【年(卷),期】2014(000)001
【摘要】目的构建一种新型辅助腺病毒，并用于靶向型第三代腺病毒载体的制备，提高其对造血细胞的感染效率。

方法采用重叠 PCR 的方法合成含有不完全包装信
号序列 A1-A4和 loxP 序列的 DNA 片段 SynES，替换穿梭质粒 pShuttle 中原有的包装信号序列，得到穿梭质粒pShuttle-SynES；将所得穿梭质粒与骨架质粒
Ad5/F11p 在大肠杆菌 BJ5183中同源重组，获得重组腺病毒质粒载体
pAd5/F11p-HV，将其转染293细胞包装重组腺病毒 Ad5/F11p-HV。

参照第三
代腺病毒包装策略，利用 Ad5/F11p-HV包装获得携带绿色荧光蛋白（GFP）基
因的第三代腺病毒HD-Ad5/F11p-GFP；将其以不同的感染强度感染人白血病细
胞系 K562、U937、Jurkat 和人脐带血 CD34+细胞后，采用荧光显微镜和流式细胞术检测 GFP 的表达。

结果采用 DAN 片段 SynES 替换穿梭质粒 pShuttle 上的
包装信号，获得新的穿梭质粒 pShuttle-SynES；进一步构建获得重组腺病毒质粒pAd5/F11p-HV，并制备了辅助腺病毒 Ad5/F11p-HV。

采用该辅助腺病毒包装pC4HSU-GFP，获得了第三代腺病毒 HD-Ad5/F11p-GFP；CsCl 密度梯度离心分离 HD-Ad5/F11p-GFP 和 Ad5/F11p-HV，获得了高质量的 HD-Ad5/F11p-GFP。

与对照病毒 HD-H14-GFP 相比， HD-Ad5/F11p-GFP 可明显提高对人白血病细
胞 U937、Jurkat 和人脐带来源 CD34+细胞的感染效率。

结论设计并构建了一种靶向性辅助腺病毒，并以此为基础成功制备了对造血细胞高效感染的第三代重组腺病毒。

【总页数】7页(P6-12)
【作者】杨月峰;李泽良;鲁茁壮;王华;肖凤君;张群伟;孙慧燕;王立生
【作者单位】100850 北京，军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究室;100850 北京，军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究
室;100850 北京，军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究
室;100850 北京，军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究
室;100850 北京，军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究
室;100850 北京，军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究
室;100850 北京，军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究
室;100850 北京，军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究室
【正文语种】中文
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