微生物学检验(第3版)2012铜绿假单胞菌与痰液
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血清斜面培养基 鸡蛋培养基
百日咳杆菌培养 鲍-金培养基
菌落形态、涂片染色 初步报告
亚碲酸钾血平板纯培养
菌落形态、涂片染色
生化反应、血清学鉴定
15
肉眼观察 涂片染色观察
初步报告
检验程序
痰液标本
血平板
普通培养 35℃、18~24h
培养前处理
巧克力平板
普通培养 35℃、18~24h
中国蓝平板
普通培养 35℃、18~24h
革兰阳性细菌
α和γ链球菌、微球菌、 表皮葡萄球菌、四联球 菌、白喉以外的棒状杆 菌、乳杆菌
化脓性链球菌、金黄色 葡萄球菌、白喉棒状杆 菌、结核分枝杆菌、白 色念珠菌
化脓性链球菌 、金黄色 葡萄球菌、肺炎链球菌、 白喉棒状杆菌、结核分 枝杆菌、厌氧菌、放线 菌、奴卡菌
革兰阴性细菌
除脑膜炎和淋病奈瑟 菌外的其他奈瑟菌、 其他嗜血杆菌
➢ 如发现形态典型、有特殊结构，初步可以 确定所属菌属或种的细菌，可直接报告。
➢ 如查见革兰阳性葡萄状排列的球菌，可报 告“痰液涂片查见革兰阳性球菌，形似葡萄 状”；
18
痰液标本检验操作流程
➢ 如查见革兰阳性双球菌、矛头状、有明显 荚膜时，可报告“痰液涂片查见革兰阳性双 球菌，形似肺炎球菌”。
➢ 如不能直接确定菌属或种的细菌，可报告 “痰液涂片查见革兰×性×菌”。如果痰片 中均为鳞状上皮细胞，则应视为不合格标本。
❖ 3.百日咳鲍特菌的培养：将标本直接接种在鲍-金 培养基上，置有盖的玻璃缸（缸内加少量的水，并 在水中加少许硫酸铜，防止细菌及霉菌生长）中， 35℃ 孵育3—5天。
23
特殊菌的培养
❖ 4. 白喉棒状杆菌培养：将标本接种于血清斜面或 鸡蛋培养基，35℃ 孵育8-10h观察；
❖ 5.流感嗜血杆菌培养：将标本接种于血平板和巧克 力平板，并在平板中央接种一直线金黄色葡萄球菌 （或四角点种），35℃、5%-10% CO2环境孵育1824h。
38
19
痰液标本检验操作流程
3、分离培养： 1）痰液标本的前处理
❖ A. 均质化法：加入等量的PH 7.6 的1% 胰 酶溶液，放置35℃、90 min使痰液均质化；
❖
20
痰液标本检验操作流程
❖ B. 洗涤法：取无菌平皿4个，加入无菌生 理盐水20ml ，将痰液标本放入第1个平皿中， 用接种环用力震摇，将脓痰分散为小块悬浮 于盐水内，将小块脓痰取出依次放入第2、3、 4个平皿中重复以上操作。最后在第4个平皿 收集脓痰小块，接种于平皿。同时接种未经 洗涤的痰液标本，作为对照。
脑膜炎奈瑟菌、流感 嗜血杆菌、百日咳鲍 特菌、肺炎克雷伯菌、 大肠埃希菌、铜绿假 单胞菌
脑膜炎奈瑟菌、流感 嗜血杆菌、肺炎克雷 伯菌、大肠埃希菌、 铜绿假单胞菌、产气 肠杆菌、嗜肺军团菌
14
直接涂片染色检 查 革兰染色 异染颗粒
初步报告
检验程序
鼻咽拭子
常规培养
血平板 巧克力平板 中国蓝平板
白喉棒状杆菌培养
下这些细菌并不致病，但在机体抵抗力下 降或某些因素作用下，可以侵入下呼吸道 致病。特别是在抗生素作用下或在大量正 常菌群掩盖下，致病菌难以检出。
26
具体实验操作
第一天的主要操作：
❖ 一、痰液标本 分区画线接种到血平板、中国蓝平板
❖ 二、提供的菌落 ❖ 1、进行涂片G染色观察细菌形态； ❖ 2、触酶试验、氧化酶试验； ❖ 3、接种于半固体、克式双糖培养基； ❖ 4、接种到各种非发酵菌生化鉴定培养基中； ❖ 三、放入35℃恒温培养箱进行培养
27
非发酵细菌生化鉴定编码表
1
2
3
4
O-F试验 厌氧 需氧
拘 氧橼 化酸 酶盐
麦 芽 糖
精 氨 酸 酶
精 对
甘 露 醇
木 糖
硝
酸
盐
还 原
酶
DNA
乙 酰 氨 酶
原来 颜色
淡绿
淡绿
无色 淡绿
淡绿
黄 黄色 色
淡 绿
淡 绿
无 色
绿 色
黄 色
阳性 颜色
黄色
黄色
紫色
蓝色 黄色 红色
黄 色
黄 色
黄红灰红 色色白色
2．咽拭子 将拭子用无菌生理盐水湿润，用压舌板轻压舌
根，暴露整个口咽部。先用拭子轻擦扁桃体表面后 弃去，再取1支湿润的拭子轻压扁桃体，擦取挤压 出的分泌物，或擦取伪膜等病变部位。
10
11
标本的采集
3. 痰液标本
（1）自然咳痰法：受检者用清水溯口数次后， 用力咳嗽自气管深部将痰咳出吐至无菌容器中。 对痰量少或无痰等咳痰困难者，可雾化吸入
微生物学检验(第3版)2012铜绿 假单胞菌与痰液
铜绿假单胞菌
❖ 1、革兰阴性杆菌，无芽孢，动力阳性
❖ 2、产生荧光素和水溶性的绿脓素，培养物呈 蓝绿色；
❖ 3、在血平板上形成大而扁平、湿润、有金属 光泽、蓝绿色、透明溶血环菌落，有生姜味；
❖ 4、在中国蓝平板上形成不发酵乳糖菌落（不
发酵乳糖细菌的菌落是半透明，淡紫红色，分解乳 糖的细菌是大而浑浊的蓝色菌落 ）
标记为红色的加石腊油
28
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖ 1. 取出标本分离培养的血平板、中国蓝平 板观察平板上的菌落形态、颜色以及气味；
29
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖2. 观察半固体培养基
30
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖3. 观察克式双糖培养基
31
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖4. 压片法观察动力情况
绿 色
黄 色
阳性 颜色
黄色
黄色
紫色
蓝色 黄色 红色
黄 色
黄 色
黄红灰红 色色白色
标记为红色的加石腊油
36
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖5. 根据以上的鉴定，报告出鉴定结果
37
问题与思考
❖ 大肠杆菌与铜绿假单胞菌的氧化酶试验有 什么不同？
❖ 大肠杆菌、铜绿假单胞菌菌落在中国蓝平 板上有什么不同？
标本的采集14革兰阳性细菌革兰阴性细菌正常菌群和链球菌微球菌表皮葡萄球菌四联球菌白喉以外的棒状杆菌乳杆菌除脑膜炎和淋病奈瑟菌外的其他奈瑟菌其他嗜血杆菌上呼吸道常见致病菌化脓性链球菌金黄色葡萄球菌白喉棒状杆菌结核分枝杆菌白色念珠菌脑膜炎奈瑟菌流感嗜血杆菌百日咳鲍特菌肺炎克雷伯菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌下呼吸道常见致病菌化脓性链球菌金黄色葡萄球菌肺炎链球菌白喉棒状杆菌结核分枝杆菌厌氧菌放线菌奴卡菌脑膜炎奈瑟菌流感嗜血杆菌肺炎克雷伯菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌产气肠杆菌嗜肺军团菌痰液标本常见的分离菌15血平板巧克力平板中国蓝平板鼻咽拭子直接涂片染色检查查革兰染色异染颗粒初步报告白喉棒状杆菌培养菌落形态涂片染色初步报告生化反应血清学鉴定检验程序常规培养百日咳杆菌培养血清斜面培养基鸡蛋培养基鲍鲍金培养基亚碲酸钾血平板纯培养菌落形态涂片染色16血平板巧克力平板中国蓝平板普通培养普通培养普通培养351824h351824h351824h痰液标本肉眼观察涂片染色观察初步报告培养前处理菌落形态和涂片染色生化反应血清学鉴定报告检验程序17?11肉眼观察
32
33
34
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖4. 观察生化反应，查表鉴定
35
非发酵细菌生化鉴定编码表
1
2
3
4
O-F试验 厌氧 需氧
拘 氧橼 化酸 酶盐
麦 芽 糖
精 氨 酸 酶
精 对
甘 露 醇
木 糖硝酸盐还 原酶
DNA
乙 酰 氨 酶
原来 颜色
淡绿
淡绿
无色 淡绿
淡绿
黄 黄色 色
淡 绿
淡 绿
无 色
3
铜绿假单胞菌在血琼脂平板上的菌落特征
4
5、生化特征
❖ 氧化酶 ＋ ❖ O/F：O ❖ KIA：K/K ❖ 枸櫞酸盐利用：＋ ❖ 精氨酸双水解：＋ ❖ 明胶液化：＋ ❖ 硝酸盐还原：N2
5
硝酸盐还原试验
还原
亚硝酸盐 （红色）
阳性
硝 未还原 酸 盐
硝酸盐
还原
亚 硝
还原
氨 、
酸
氮
盐
气
亚
锌粉还原
硝 酸
45℃左右的10%氯化钠水溶液，使痰容易排出。
对于幼儿，可轻轻压迫胸骨上部气管，使其咳 嗽而取之。
12
标本的采集
（2）气管镜采集法：用气管镜在肺部内病灶处直 接吸取标本，或用气管刷采取标本。
（3）气管或环甲膜穿刺法：主要用于厌氧菌培养。
13
痰液标本常见的分离菌
正常菌群
上呼吸道 常见致 病菌
下呼吸道 常见致 病菌
菌落形态和涂片染色 生化反应、血清学鉴定
报告
16
痰液标本检验操作流程
➢ 1、肉眼观察：下呼吸道标本为痰液，选取 脓血性的痰液用于细菌学检验。异常恶臭的 脓性痰，常见于肺脓疡患者，而且可能与厌 氧菌有关。痰液中有颗粒状、菌块和干酪样 物质可能与放线菌病和曲霉菌感染有关。
17
痰液标本检验操作流程
➢ 2、涂片检查：挑选痰液中脓、血性部分涂 片，干燥固定后，进行革兰染色镜检。
❖ 3.如虽在平板上未发现特定的致病菌，但某种常 居菌比正常情况明显增多或近似纯培养，考虑可 能菌群失调或菌群交替症，也可进行鉴定后报告 “x x菌纯培养”或“x x菌生长旺盛”。
25
注意事项
❖ 1.上呼吸道标本要及时送检，防止干燥。 采集时尽量避免正常菌群的污染。
❖ 2.痰液标本最好采取晨痰。 ❖ 3.上呼吸道有大量的正常菌群，正常情况
❖ 6.脑膜炎奈瑟菌培养：将鼻烟拭子接种于已保温在 350C的卵黄双抗平板上，35℃、5%-10% CO2环境孵 育18—24h。
24
结果报告
❖ 1.如发现可疑致病菌落，则进行涂片染色观察、 生化反应及血清学鉴定得出报告“检出x x细菌， 并报告该菌在培养基中的大慨比例”；
❖ 2.如无致病菌落生长，则继续培养至48h，平板 上均为咽部正常菌群生长，无可疑致病菌落生长， 则报告“正常菌群生长”；
阴性
盐
不
变 色
锌粉 未反应 不
变
阳性
色
6
目的要求
❖ 掌握呼吸道标本的细菌学检验和报告方法 ❖ 掌握銅绿假单胞菌的培养特征、主要微生
物特性及鉴定方法。 ❖ 了解呼吸道标本的采集方法。
7
器材和试剂
❖ 1、标本：痰液标本 ❖ 2、菌种：铜绿假单胞菌 ❖ 3、培养基：血平板、中国蓝平板、克氏
双糖斜面培养基、半固体培养基、非发酵 菌微量生化管等。
8
器材和试剂
❖ 4、试剂：氧化酶纸片、3%过氧化氢、革 兰染色液、无菌生理盐水及生化管配套试剂。
❖ 5、其它 ：显微镜、培养箱、小试管、载 玻片、接种针、接种环、酒精灯、火柴、非 发酵菌生化编码表等。
9
标本的采集
1. 鼻咽拭子
采集时，患者用清水漱口，对光而坐，头向 上仰张大口，用压舌板轻压舌根，取无菌鼻咽拭子 绕过悬雍垂，在鼻咽腔、悬雍垂后侧反复涂抹数次 小心取出，避免接触口腔部其他组织。
21
痰液标本检验操作流程
❖ 2）取经过前处理的痰液标本分别接种血平 板、巧克力平板和中国蓝平板。培养18— 24h ,根据菌落形态，细菌染色观察，进一步 进行鉴定。
22
特殊菌的培养
❖ 1.结核分枝杆菌培养：无菌吸管加前处理标本2-3 滴于罗-琴培养基35℃孵育至8周，每周观察一次；
❖ 2.嗜肺军团菌培养：取气管分泌物接种于活性炭酵 母琼脂(CYE)或费-高(F-G)平板，35℃、2.5%CO2培 养，每天用肉眼观察，直至第14天；
百日咳杆菌培养 鲍-金培养基
菌落形态、涂片染色 初步报告
亚碲酸钾血平板纯培养
菌落形态、涂片染色
生化反应、血清学鉴定
15
肉眼观察 涂片染色观察
初步报告
检验程序
痰液标本
血平板
普通培养 35℃、18~24h
培养前处理
巧克力平板
普通培养 35℃、18~24h
中国蓝平板
普通培养 35℃、18~24h
革兰阳性细菌
α和γ链球菌、微球菌、 表皮葡萄球菌、四联球 菌、白喉以外的棒状杆 菌、乳杆菌
化脓性链球菌、金黄色 葡萄球菌、白喉棒状杆 菌、结核分枝杆菌、白 色念珠菌
化脓性链球菌 、金黄色 葡萄球菌、肺炎链球菌、 白喉棒状杆菌、结核分 枝杆菌、厌氧菌、放线 菌、奴卡菌
革兰阴性细菌
除脑膜炎和淋病奈瑟 菌外的其他奈瑟菌、 其他嗜血杆菌
➢ 如发现形态典型、有特殊结构，初步可以 确定所属菌属或种的细菌，可直接报告。
➢ 如查见革兰阳性葡萄状排列的球菌，可报 告“痰液涂片查见革兰阳性球菌，形似葡萄 状”；
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痰液标本检验操作流程
➢ 如查见革兰阳性双球菌、矛头状、有明显 荚膜时，可报告“痰液涂片查见革兰阳性双 球菌，形似肺炎球菌”。
➢ 如不能直接确定菌属或种的细菌，可报告 “痰液涂片查见革兰×性×菌”。如果痰片 中均为鳞状上皮细胞，则应视为不合格标本。
❖ 3.百日咳鲍特菌的培养：将标本直接接种在鲍-金 培养基上，置有盖的玻璃缸（缸内加少量的水，并 在水中加少许硫酸铜，防止细菌及霉菌生长）中， 35℃ 孵育3—5天。
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特殊菌的培养
❖ 4. 白喉棒状杆菌培养：将标本接种于血清斜面或 鸡蛋培养基，35℃ 孵育8-10h观察；
❖ 5.流感嗜血杆菌培养：将标本接种于血平板和巧克 力平板，并在平板中央接种一直线金黄色葡萄球菌 （或四角点种），35℃、5%-10% CO2环境孵育1824h。
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痰液标本检验操作流程
3、分离培养： 1）痰液标本的前处理
❖ A. 均质化法：加入等量的PH 7.6 的1% 胰 酶溶液，放置35℃、90 min使痰液均质化；
❖
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痰液标本检验操作流程
❖ B. 洗涤法：取无菌平皿4个，加入无菌生 理盐水20ml ，将痰液标本放入第1个平皿中， 用接种环用力震摇，将脓痰分散为小块悬浮 于盐水内，将小块脓痰取出依次放入第2、3、 4个平皿中重复以上操作。最后在第4个平皿 收集脓痰小块，接种于平皿。同时接种未经 洗涤的痰液标本，作为对照。
脑膜炎奈瑟菌、流感 嗜血杆菌、百日咳鲍 特菌、肺炎克雷伯菌、 大肠埃希菌、铜绿假 单胞菌
脑膜炎奈瑟菌、流感 嗜血杆菌、肺炎克雷 伯菌、大肠埃希菌、 铜绿假单胞菌、产气 肠杆菌、嗜肺军团菌
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直接涂片染色检 查 革兰染色 异染颗粒
初步报告
检验程序
鼻咽拭子
常规培养
血平板 巧克力平板 中国蓝平板
白喉棒状杆菌培养
下这些细菌并不致病，但在机体抵抗力下 降或某些因素作用下，可以侵入下呼吸道 致病。特别是在抗生素作用下或在大量正 常菌群掩盖下，致病菌难以检出。
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具体实验操作
第一天的主要操作：
❖ 一、痰液标本 分区画线接种到血平板、中国蓝平板
❖ 二、提供的菌落 ❖ 1、进行涂片G染色观察细菌形态； ❖ 2、触酶试验、氧化酶试验； ❖ 3、接种于半固体、克式双糖培养基； ❖ 4、接种到各种非发酵菌生化鉴定培养基中； ❖ 三、放入35℃恒温培养箱进行培养
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非发酵细菌生化鉴定编码表
1
2
3
4
O-F试验 厌氧 需氧
拘 氧橼 化酸 酶盐
麦 芽 糖
精 氨 酸 酶
精 对
甘 露 醇
木 糖
硝
酸
盐
还 原
酶
DNA
乙 酰 氨 酶
原来 颜色
淡绿
淡绿
无色 淡绿
淡绿
黄 黄色 色
淡 绿
淡 绿
无 色
绿 色
黄 色
阳性 颜色
黄色
黄色
紫色
蓝色 黄色 红色
黄 色
黄 色
黄红灰红 色色白色
2．咽拭子 将拭子用无菌生理盐水湿润，用压舌板轻压舌
根，暴露整个口咽部。先用拭子轻擦扁桃体表面后 弃去，再取1支湿润的拭子轻压扁桃体，擦取挤压 出的分泌物，或擦取伪膜等病变部位。
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标本的采集
3. 痰液标本
（1）自然咳痰法：受检者用清水溯口数次后， 用力咳嗽自气管深部将痰咳出吐至无菌容器中。 对痰量少或无痰等咳痰困难者，可雾化吸入
微生物学检验(第3版)2012铜绿 假单胞菌与痰液
铜绿假单胞菌
❖ 1、革兰阴性杆菌，无芽孢，动力阳性
❖ 2、产生荧光素和水溶性的绿脓素，培养物呈 蓝绿色；
❖ 3、在血平板上形成大而扁平、湿润、有金属 光泽、蓝绿色、透明溶血环菌落，有生姜味；
❖ 4、在中国蓝平板上形成不发酵乳糖菌落（不
发酵乳糖细菌的菌落是半透明，淡紫红色，分解乳 糖的细菌是大而浑浊的蓝色菌落 ）
标记为红色的加石腊油
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具体实验操作
第二天的主要操作：
❖ 1. 取出标本分离培养的血平板、中国蓝平 板观察平板上的菌落形态、颜色以及气味；
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具体实验操作
第二天的主要操作：
❖2. 观察半固体培养基
30
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖3. 观察克式双糖培养基
31
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖4. 压片法观察动力情况
绿 色
黄 色
阳性 颜色
黄色
黄色
紫色
蓝色 黄色 红色
黄 色
黄 色
黄红灰红 色色白色
标记为红色的加石腊油
36
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖5. 根据以上的鉴定，报告出鉴定结果
37
问题与思考
❖ 大肠杆菌与铜绿假单胞菌的氧化酶试验有 什么不同？
❖ 大肠杆菌、铜绿假单胞菌菌落在中国蓝平 板上有什么不同？
标本的采集14革兰阳性细菌革兰阴性细菌正常菌群和链球菌微球菌表皮葡萄球菌四联球菌白喉以外的棒状杆菌乳杆菌除脑膜炎和淋病奈瑟菌外的其他奈瑟菌其他嗜血杆菌上呼吸道常见致病菌化脓性链球菌金黄色葡萄球菌白喉棒状杆菌结核分枝杆菌白色念珠菌脑膜炎奈瑟菌流感嗜血杆菌百日咳鲍特菌肺炎克雷伯菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌下呼吸道常见致病菌化脓性链球菌金黄色葡萄球菌肺炎链球菌白喉棒状杆菌结核分枝杆菌厌氧菌放线菌奴卡菌脑膜炎奈瑟菌流感嗜血杆菌肺炎克雷伯菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌产气肠杆菌嗜肺军团菌痰液标本常见的分离菌15血平板巧克力平板中国蓝平板鼻咽拭子直接涂片染色检查查革兰染色异染颗粒初步报告白喉棒状杆菌培养菌落形态涂片染色初步报告生化反应血清学鉴定检验程序常规培养百日咳杆菌培养血清斜面培养基鸡蛋培养基鲍鲍金培养基亚碲酸钾血平板纯培养菌落形态涂片染色16血平板巧克力平板中国蓝平板普通培养普通培养普通培养351824h351824h351824h痰液标本肉眼观察涂片染色观察初步报告培养前处理菌落形态和涂片染色生化反应血清学鉴定报告检验程序17?11肉眼观察
32
33
34
具体实验操作
第二天的主要操作：
❖4. 观察生化反应，查表鉴定
35
非发酵细菌生化鉴定编码表
1
2
3
4
O-F试验 厌氧 需氧
拘 氧橼 化酸 酶盐
麦 芽 糖
精 氨 酸 酶
精 对
甘 露 醇
木 糖硝酸盐还 原酶
DNA
乙 酰 氨 酶
原来 颜色
淡绿
淡绿
无色 淡绿
淡绿
黄 黄色 色
淡 绿
淡 绿
无 色
3
铜绿假单胞菌在血琼脂平板上的菌落特征
4
5、生化特征
❖ 氧化酶 ＋ ❖ O/F：O ❖ KIA：K/K ❖ 枸櫞酸盐利用：＋ ❖ 精氨酸双水解：＋ ❖ 明胶液化：＋ ❖ 硝酸盐还原：N2
5
硝酸盐还原试验
还原
亚硝酸盐 （红色）
阳性
硝 未还原 酸 盐
硝酸盐
还原
亚 硝
还原
氨 、
酸
氮
盐
气
亚
锌粉还原
硝 酸
45℃左右的10%氯化钠水溶液，使痰容易排出。
对于幼儿，可轻轻压迫胸骨上部气管，使其咳 嗽而取之。
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标本的采集
（2）气管镜采集法：用气管镜在肺部内病灶处直 接吸取标本，或用气管刷采取标本。
（3）气管或环甲膜穿刺法：主要用于厌氧菌培养。
13
痰液标本常见的分离菌
正常菌群
上呼吸道 常见致 病菌
下呼吸道 常见致 病菌
菌落形态和涂片染色 生化反应、血清学鉴定
报告
16
痰液标本检验操作流程
➢ 1、肉眼观察：下呼吸道标本为痰液，选取 脓血性的痰液用于细菌学检验。异常恶臭的 脓性痰，常见于肺脓疡患者，而且可能与厌 氧菌有关。痰液中有颗粒状、菌块和干酪样 物质可能与放线菌病和曲霉菌感染有关。
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痰液标本检验操作流程
➢ 2、涂片检查：挑选痰液中脓、血性部分涂 片，干燥固定后，进行革兰染色镜检。
❖ 3.如虽在平板上未发现特定的致病菌，但某种常 居菌比正常情况明显增多或近似纯培养，考虑可 能菌群失调或菌群交替症，也可进行鉴定后报告 “x x菌纯培养”或“x x菌生长旺盛”。
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注意事项
❖ 1.上呼吸道标本要及时送检，防止干燥。 采集时尽量避免正常菌群的污染。
❖ 2.痰液标本最好采取晨痰。 ❖ 3.上呼吸道有大量的正常菌群，正常情况
❖ 6.脑膜炎奈瑟菌培养：将鼻烟拭子接种于已保温在 350C的卵黄双抗平板上，35℃、5%-10% CO2环境孵 育18—24h。
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结果报告
❖ 1.如发现可疑致病菌落，则进行涂片染色观察、 生化反应及血清学鉴定得出报告“检出x x细菌， 并报告该菌在培养基中的大慨比例”；
❖ 2.如无致病菌落生长，则继续培养至48h，平板 上均为咽部正常菌群生长，无可疑致病菌落生长， 则报告“正常菌群生长”；
阴性
盐
不
变 色
锌粉 未反应 不
变
阳性
色
6
目的要求
❖ 掌握呼吸道标本的细菌学检验和报告方法 ❖ 掌握銅绿假单胞菌的培养特征、主要微生
物特性及鉴定方法。 ❖ 了解呼吸道标本的采集方法。
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器材和试剂
❖ 1、标本：痰液标本 ❖ 2、菌种：铜绿假单胞菌 ❖ 3、培养基：血平板、中国蓝平板、克氏
双糖斜面培养基、半固体培养基、非发酵 菌微量生化管等。
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器材和试剂
❖ 4、试剂：氧化酶纸片、3%过氧化氢、革 兰染色液、无菌生理盐水及生化管配套试剂。
❖ 5、其它 ：显微镜、培养箱、小试管、载 玻片、接种针、接种环、酒精灯、火柴、非 发酵菌生化编码表等。
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标本的采集
1. 鼻咽拭子
采集时，患者用清水漱口，对光而坐，头向 上仰张大口，用压舌板轻压舌根，取无菌鼻咽拭子 绕过悬雍垂，在鼻咽腔、悬雍垂后侧反复涂抹数次 小心取出，避免接触口腔部其他组织。
21
痰液标本检验操作流程
❖ 2）取经过前处理的痰液标本分别接种血平 板、巧克力平板和中国蓝平板。培养18— 24h ,根据菌落形态，细菌染色观察，进一步 进行鉴定。
22
特殊菌的培养
❖ 1.结核分枝杆菌培养：无菌吸管加前处理标本2-3 滴于罗-琴培养基35℃孵育至8周，每周观察一次；
❖ 2.嗜肺军团菌培养：取气管分泌物接种于活性炭酵 母琼脂(CYE)或费-高(F-G)平板，35℃、2.5%CO2培 养，每天用肉眼观察，直至第14天；