用于治疗不孕症的卵泡刺激激素(FSH)的应用[发明专利]

[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公开说明书
[11]公开号CN 1418107A [43]公开日2003年5月14日
[21]申请号01806573.2[21]申请号01806573.2
[22]申请日2001.01.09[30]优先权
[32]2000.01.27 [33]EP [31]00300591.5
[32]2000.04.04 [33]EP [31]00302840.4
[86]国际申请PCT/GB01/00065 2001.01.09
[87]国际公布WO01/54715 EN 2001.08.02
[85]进入国家阶段日期2002.09.13[71]申请人应用研究系统ARS股份公司
地址荷属安的列斯群岛库拉索市
[72]发明人E·卢马耶 L·迪伦－迈尔斯
[74]专利代理机构上海专利商标事务所代理人余颖
[51]Int.CI 7A61K 38/24A61P 5/06
权利要求书 1 页 说明书 21 页
[54]发明名称
用于治疗不孕症的卵泡刺激激素(FSH)的应用
[57]摘要
本发明涉及FSH和/或其生物衍生物在制备妇女
不育治疗药物上的应用。

药物以100～600 IU范围
内的起始剂量给药，随后在刺激阶段的至少三天后
采用第二种剂量。

在一个实施例中，药剂是在刺激
阶段第一个六天的每个第三天以300～600 IU范围
内的剂量给药。

在另一个实施例中，起始剂量是在
100～500 IU范围内，第二种剂量在起始剂量后3－
6天之间、较佳在4天后给药。

01806573.2权 利 要 求 书第1/1页
1.FSH和/或其生物活性类似物在制备妇女不孕症治疗药物上的应用，所述药物
以100～600IU范围内的起始剂量给药，随后在刺激阶段的至少三天后采用第
二种剂量。

2.如权利要求1所述的应用，其中药剂是在刺激阶段第一个六天的每个第三天以300～600IU范围内的剂量给药。

3.如权利要求2所述的应用，其中药物是在400～500I U范围内。

4.如权利要求3所述的应用，其中剂量是在430～470I U范围内。

5.如权利要求4所述的应用，其中剂量约为450IU。

6.如权利要求2-5中任何一项所述的应用，其中的药物是在刺激阶段的第1和
第4天、第2和第5天或者第3和第6天给药。

7.如权利要求1所述的应用，其中起始剂量是在100～500I U范围内。

8.如权利要求7所述的应用，其中起始剂量是在200～400I U范围内。

9.如权利要求8所述的应用，其中起始剂量是在200～400I U范围内。

10.如权利要求9所述的应用，其中起始剂量约为300IU。

11.如权利要求7-10中任何一项所述的应用，其中第二种剂量是在采用起始剂量后的3到6天之间给药。

12.如权利要求11所述的应用，其中第二种剂量是在起始剂量的4天后给药。

13.如权利要求7-9中任何一项所述的应用，其中第二种剂量是在50～200IU的
范围内。

14.如权利要求13所述的应用，其中第二种剂量是在70～100IU范围内。

15.如权利要求14所述的应用，其中第二种剂量约为75I U。

16.如权利要求7-15中任何一项所述的应用，其中第二种剂量每天重复，持续1
到4天，较佳为2天。

17.如权利要求7到16中任何一项所述的应用，其中起始剂量是在刺激阶段的第1、2、4天给药，或较佳在第3天给药。

18.如上述权利要求中任何一项所述的应用，其中卵泡刺激激素是重组的卵泡刺激激素(r-FSH)。

19.如上述权利要求中任何一项所述的应用，其中卵泡刺激激素是人卵泡刺激激素(hFSH)。

01806573.2说 明 书第1/21页
用于治疗不孕症的卵泡刺激激素(FSH)的应用
发明领域
本发明涉及在治疗低生育力和不孕妇女中促性腺激素的使用或应用。

发明背景
对于不孕症的评估显示出大约有15～25％的夫妻存在排卵失调(H u l l，G y n e c o l.
E nd o c r i no l.1：235-245(1987)；S p e r o ff e t al.，C l in i c a l G y n e c ol o g i c E n d o c ri n o l o gy a n d I n f e r t i l i t y，5t h E d i t i o n，B a l t i m o r e，W i l l i a m s a n d W i l k i n s(1994))。

大多数不孕无卵性病人属于世界卫生组织第II组类别(WHO Scientific Group Rcport(B Lunenfeld，
C h a i r m a n)，W H O T e c h n.R e p S e r.514：1-28(1973))，这些妇女中的绝大多数被诊断患有多囊卵巢综合症(PCOS)(Hill et al.In Gynecologic Endocrinology and
Infertility，AC Wenta，CM Herbert III，GA Hill(eds.)Baltimore，Williams and Wilkins，pp147-160(1988)；Speroff et al.，Clinical Gynecologic Endocrinology and Infertility，5t h E d i t i o n，B a l t i m o r e，W i l l i a m s a n d W i l k i n s(1994))。

在这些病人中，一种抗—雌激素诸如克罗米酚柠檬酸盐是用于排卵诱导治疗的第一线药物，但是对那些不排卵
或是不对氯芪酚柠檬酸盐重复治疗作出响应而怀孕的患有PCOS的妇女，另一种
供选择的治疗方法通常是促性腺激素治疗(F r a n k s a n d G i l l i n g-s m i t h，C u r r.O p i n. Obstet.Gynecol.6：136-140(1996)；The ESHRE Capri Workshop，Hum.Reprod.
11：1775-1807(1996))。

虽然尿促性腺激素对于P C O S病人排卵诱导已经证明是有用的(Balasch et al.，J.Assist Reprod.Genet.13：551-556(1996))；Hamilton-Fairley et al.，H u m.R e p r o d.6：1095-1099(1991)；W h i t e e t a l.，J.C l i n.E n d o c r i n o l M e t a b.81：3821-3824(1996))，但是，今天，r-FSH由于它的更高功效已经成为诱导这类妇女排卵
的更加有用的工具(B a l a s c h e t a l.，(1998)(s u p r a)；C o e l i n g h-B e n n i n k e t a l.，F e r t i l. Steril.69：19-25(1998))。

在排卵诱导中，最重要的原则是提供尽可能接近的周期性卵巢功能的生理性
恢复；尤其是目标应达到单卵泡的排卵。

多卵泡发育是一种并发症，它具有以外
源促性腺激素排卵诱导的特征，尤其在那些对促性腺激素非常敏感的患有PCOS
的妇女中(F r a n k s a n d G i l l i n g-S m i t h，(1996)(s u p r a))。

事实上，大约有75％医源性多胎妊娠是由排卵诱导引起的，剩下的25％是采用辅助生殖技术的结果(L e v e n e e t a l.，B r：J.O b s t e t.G y n a e c o l.99：607-613(1992)；H e c h t，A s s i s t.R e p r o d.R e v.3：75-
87(1993)；E v a n s e t a l.，A m.J O b s t e t.G y n e c o l.172：1750-1755(1995)；C o r c h i a e t a l.，A m.J.P u b l i c H e a l t h 86：851-854(1996))。

对于卵巢过度刺激综合症，P C O S也是一种主要的危险因素(Schenker，Hum.Reprod.8：653-659(1993))。

采用辅助生殖技术(ART)如体外授精(IVF)和胚胎移植(ET)治疗低生育力和不
孕症，需要卵巢的刺激来增加雌性配子数量和成功治疗结果的机会(Healy et al，
L a n c e t，1994，343：1539-1544)。

目前，卵巢刺激的标准方案包括一个向下调节的阶段，在这个阶段中，通过给予促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂来抑制内源性促
黄体激素(LH)，接着的是一个刺激阶段，在这一阶段中，每天给予外源性促卵泡
激素(FSH)，诱导多卵泡发育(卵泡生成)。

另一种选择是在自然或诱发月经后开始
刺激，通过给予GnRH拮抗剂来防止LH水平在不适当的时间发生起伏。

当达到
足够的卵泡发育后，给予单剂量的尿人绒毛膜促性腺激素(u-hCG)来模拟内源性
L H水平的起伏和促进卵母细胞的成熟(L o u m a y e e t a l，H u m a n R e p r o d u c t i o n U p d a t e，1995；1：188-199)。

采用常规治疗，给予每日剂量的FSH直至获得合适的卵巢响应。

这种方法包
括长期接触高水平FSH，这能阻止选择优势成熟卵泡，并导致在刺激过程中的初
级和次级卵泡多卵泡发育。

(Salat-Baroux et al Submitted 1998 to Human
Reproduction)。

由于在过去几年中治疗在不断发展，对于IVF治疗的FSH起始治疗剂量也下
降了(例如，原来是最初5天先给予225IU然后调整剂量，后来是最初6天给予
150IU然后调整剂量)。

在过去的十年中，长期低剂量促性腺激素在递增的治疗方案中广泛使用，开
始FSH的每日剂量是75IU，在试验中以一到两个星期的间隔缓慢并慎重地逐渐
增加(每天半安瓿)到超过卵泡复原的个体F S H阈值(B a l a s c h e t a l.，J.A s s i s t R e p r o d.
G e n e t.13：551-556(1996)；H a m i l t o n-F a i r l e y e t a l.，(1991)(s u p r a)；W h i t e e t al.，(1996)(supra)；Buvat et al.，Fertil.Steril.52：553-559(1989)；Sagle et al.，Fertil. S t e r i l.55：56-60(1991)；S h o h a m e t a l.，F e r t i l.S t e r i l.55：1051-1056(1991)；H o m b u r g e t a l.，F e r t i l.S t e r i l.63：729-733(1995))。

然而，低剂量递增促性腺激素治疗仍然可能导致在PCOS病人中产生多卵泡发育的过度刺激循环发生(Herman et al.，Hum.
R e p r o d.8：30-34(1993))。

因而，由一个杰出的医疗小组公开了基于934个治疗周期的、迄今为止最大的系列(Hamilton-Fairley et al.，(1991)(supra)；White et
a l.，(1996)(s u p r a))，显示了它们中的20％在完成前放弃了，大多数的情况是由于超过三个的大卵泡发育了。

在72％的排卵周期中有77％是单个排卵。

总体来说，这
些数据表明，在只有约50％开始用促性腺激素治疗的周期中，获得了单个优势卵
泡的排卵(H a m i l t o n-F a i r l e y e t a1.，(1991)(s u p r a)；W h i t e e t a l.，(1996)(s u p r a))。

在另一个方面，有人报道了一种低剂量递减的时间表，为模拟内源性FSH释
放的生理性分泌而在开始的两或三天给予大剂量的促性腺激素(150～225
I U)(M i z u n u m a e t a l.，F e r t i l e.S t e r i l.55：1195-1196(1991)；v a n S a n t b r i n k e t a l.，H u m. Reprod.10：1048-1053(1995))。

随后或者采用类似于递增的方法(Mizunuma et
a l.，(1991)(s u p r a))或者采用逐渐减少(每三天)每日F S H剂量至最小75I U/天来达到所设计的亚阈值剂量，只维持主要卵泡的生长(v a n S a n
b r i n k e t a l.，(1995)(s u p r a))。

第一种选择伴随的是单个优势卵泡发育的低比例(35％)(Mizunuma et
al.，(1991)(supra))，而后者导致了在234个周期中有62％为单卵泡生长(van
S a n t b r i n k e t a l.，(1995)(s u p r a))，但需要更加深入细致的的监控(F r a n k s & H a m i l t o n-F a i r l e y，O v u l a t i o n i n d u c t i o n：G o n a d o t r o p i n s.I n A d a s h i E Y，R o c k J A，R o s e n w a k s Z(e d s.)，R e p r o d u c t i v e E n d o c r i n o l o g y，S u r g e r y，a n d T c c h n o l o g y，L i p p i n c o t t-R a v e n，P h i l a d e l p h i a，p p1207-1223(1996))，它的重现性可能难以达到，主要因为F S H制备的长半衰期(B a i r d，U s e o f g o n a d o t r o p i n s t o i n d u c e o v u l a t i o n i n p o l y c y s t i c o v a r y s y n d r o m e.I n F i l i c o r i M a n d F l a m i g n i C(e d s.)T h e O v a r y：R c g u l a t i o n，D y s f u n c t i o n and Treatment.Elsevirer Science B.V，Amsterdam，pp391-401(1996))。

人们也尝试过其它FSH给药的方案。

Sharma等人(Hum Reprod.，1987；
2：553-556)在先用GnRH治疗的病人中比较了每天和隔天用150IU FSH对隔无用
300IU FSH的反应。

可是，这项研究是在相对较少的病人中进行，因此，所得结
果不能作为最后结论来评估。

而且，这项研究是在1987年进行，那时只可获得来
自尿的FSH的制备方法。

最近，R e d d y等人(1996，A b s t r a c t s o f t h e 12t h A n n u a l M e e t i n g o f t h e E H S R E)在英国多中心的研究中测试了一种“友好使用者”的隔天递减方案的安全性和功效。

在第1天和第3天以450IU/天的起始剂量用皮下注射Gonal-F(重组人FSH)开始
刺激，然后在第5天递减至300IU/天。

300IU的隔天给约方案一直继续到达到
hCG的标准。

Gonal-F治疗的平均持续时间为十天，中值剂量为1800IU(相当于
24支75IU的安瓿)，有83.7％的病人在第12天达到了hCG给药的标准。

在hCG
给药这天，治疗导致了平均有8.6个卵泡的直径≥14mm。

结论是简单的隔天递减
给药方案与常规给药方案相比因为病人接受程度高、促性腺激素消耗减少及妊娠
率相当，因此而被推荐。

然而此项研究却没有包含接受常规IVF治疗的对照组来
对数据的评估提供参考。

L o l i s等人(F e r t i l.S t e r i l.，1995：63；1273-1277)证明在正常妇女卵泡早期阶段中高剂量FSH的单次IM注射诱导血清FSH浓度升高3天，这足以刺激多卵泡的发
育。

然而，除了优势的一个，在生理浓度FSH的存在下，这些卵泡不能维持雌激
素的生成并发育超过某种尺寸。

通过在卵泡中期和晚期阶段给予额外剂量的FSH
使血清FSH浓度的升高来施加强的FSH刺激时，见血清中雌二醇(E2)的值稳定升
高，前排卵卵泡的数量也成比例地增加。

虽然这些研究提出了以较长时间间隔给予更高剂量FSH的使用方法，但是有
人建议超过300I U的每日剂量是徒劳的(L a s h e n e t a l，J.A s s i s t.R e p r o d a n d G e n e t. 1998，15(7)：438-443)。

因此有必要对排卵刺激方法进行改进。

发明的概述
依照本发明的第一个方面，是提供FSH和/或其生物活性类似物在制备用于
妇女不孕症治疗药物上的应用，所给药物的起始剂量在100-600IU范围内，随
后在刺激阶段的至少三天后采用第二种剂量。

为方便起见，下文称作FSH意欲包括其生物活性类似物。

关于这里使用的“刺激阶段”是想确定在辅助生殖周期(通常用于帮助低生育
力和不育妇女怀孕)，医生认为能诱导卵泡生成的时间点。

这可能在内源性的LH
被有效地抑制住后(通常给予GnRH激动剂)，如当雌二醇的水平是200pmol和/
或使用超声波没有看见卵泡生长和/或子宫内膜很薄时。

或者，这可能在自发或诱
发月经和给予GnRH拮抗剂来防止不恰当时间LH水平的起伏后。

在本发明中，“不育”妇女包括不能排卵的，包括那些患有多囊卵巢综合症
(PCOS)的，也同样包括那些正常排卵却不能怀孕的妇女。

依照本发明中的FSH给药方法能促进单卵泡的发育，减少多卵泡的发育，降
低多胎妊娠的机会。

另外，这种给药方法能导致很高的妊娠率。

而且，只需要不
多的注射次数，这对于病人而言是显著的优点。

注射可以自己进行并只需要次数
很少的注射，这就减少了因错过注射而不得不放弃治疗的机会。

甚至当不是自己
注射给药时，本发明也提供了这种优点，不管是病人上医院，还是医生或护士上
门注射，只需要较少次数的往返。

在一个实施例中，FSH是在刺激阶段最初六天的每个第三天以300～600IU
范围中的剂量给药。

剂量优选400～500IU，更好的是430～470IU，最好是约为
450IU。

本实施例能提供在卵泡发育方面，与常规每天150IU给药至少一样的结
果，实际上能导致更高的妊娠率。

然而，就如上面所讨论的，只需较少的注射次
数(与常规治疗方案比较为2比6)。

依照本发明的这一实施方案，FSH在刺激阶段
的每个第3天给药。

虽然可在第2和第5天或者第3和第6天给药以FSH，但是
如果在第1和第4天给药，则是优选的。

在最初6天的刺激阶段之后，FSH可以以医生所决定的足以达到卵泡发育的
水平给药。

例如，如果卵巢响应足够的话，可以每天150IU剂量给予FSH，或者
如果响应不足的话可以225IU的剂量给予。

如果有必要，这些剂量可以逐渐增加，
如每天增加75IU的FSH。

在另一个实施例中，起始的剂量是在100～500IU的范围内，第二种剂量优
选在3至6天间，最好是4天以后给药。

起始的剂量以200～400IU为宜，更好
的是250～350IU，最好的是约为300IU。

在这一个实施例中，第二种剂量可以是在50～200IU的范围内，较好为70～
100IU，最好的是约为75IU。

本实施例在促进单卵泡发育和减少多卵泡发育方面
尤其有效。

第二种剂量最好每天重复，持续1至4天，优选2天，紧接着可以以
医生所决定的足以达到卵泡发育的FSH水平给药。

例如，如果卵巢响应足够的话，
可以给予75IU的FSH每日剂量。

如果有必要，这种剂量可以逐渐增加，如每天
增加37.5IU的FSH。

在本发明的这一实施例中，虽然可在第1，2或第4天给药，但是如果起始剂
量是在第3天给药则是优选的。

在足够的卵泡发育之后，可给予单剂u-hCG或r-hCG或r-hLH来引发卵母细
胞的成熟。

这可以使比如当最大的卵泡平均直径达到至少18mm时，至少有另外
两个卵泡的平均直径≥16mm，同时对于存在的卵泡的数目，雌二醇的水平也在可
接受的范围之内。

本发明能被用于多卵泡发育的刺激，可先于自然授精，但优选先于体外授精
(IVF)或者胞质内精液注射法(ICSI)。

LH、FSH和hCG可以从天然资源中获得，如从尿液脑垂体或者胎盘中提取，
或者使用重组D N A技术获得(参阅W O85/01959 a n d L o u m a y e e t a l，H u m a n R e p r o d.，11：95-107，1996)。

其生物活性类似物包括突变蛋白质、多肽类似物、非多肽类似物和嵌合体。

合适的FSH嵌合体例子在WO-A-90/09800、WO-A-93/06844、
WO-A-91/16922和WO-A-92/22568中描述。

如果在本发明中使用人FSH，则是优
选的。

为了提供所需剂量的FSH，可以对药剂进行包装，如装入单位剂量的容器中，
比如小瓶中。

然而，有可能在一天中有两次或更多次的FSH给药(当然一天中总
的FSH给药量与所需剂量相等)，因而药剂包装在如多剂量的容器中。

这种决定
将由给药的医生根据参数作出，比如病人的身体质量指数(BMI)、用药历史、对治疗的反应、药物的半衰期等等。

本发明中有用化合物可以以任何便利途径的方式给药，经常与药学和/或兽
医可接受的载体合用。

优选的是化合物以非肠道方式给药。

优选的是，FSH以皮下注射方式给药，最好注射进入腹部前壁。

用于非肠道给药的制剂通常是无菌的。

所采用的非肠道给药的药物制剂包括水相和非水相无菌注射溶液，其中可以含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和使制剂与欲容纳其的血液等渗的溶质；包括悬浮试剂和增稠剂的水相和非水相无菌悬浮液同样也在本发明的保护范围内。

制剂可以是在单剂量或是多剂量的容器中，如封口的安瓿和小瓶中，可以在冻干(冷冻干燥)条件下储存，只需在使用前立即加入无菌液体载体如注射用水。

临时注射溶液和悬浮液可以从无菌粉末、颗粒和药片制备。

可通过预装的注射器、自动注射器或者多剂量自动注射器给药。

口服和其它肠用制剂不需无菌，可以单剂或多剂的方式提供。

口服剂型可以是固体的形式，比如粉末、颗粒、片剂、胶囊(例如硬或软明胶胶囊)或锭剂，或者是液体剂型，如糖浆或是配剂。

填充物和/或载体可以以合适方式提供，药学制剂领域技术人员将能够根据需要或者期望提供这种另外的或可供选择的赋形剂；调味剂是一个例子。

任何想采用的口服给药的制剂可以做成对肠有抵抗的剂型，通过避免或是减轻任何可能在胃或是小肠邻近部分可能出现的对化合物的消化来帮助输送药物到小肠。

片剂或是胶囊可以是肠衣包裹的，例如以常规的程序包衣。

液体剂型可以通过包含或与合适的试剂如中等链的甘油三酯同服来产生对肠的有效抗性。

除了口服组合物外，肠溶组合物还包括直肠组合物，它可以是栓剂的形式。

栓剂通常包含一种栓剂基质，比如可可脂。

此外，药学制剂领域技术人员可以常规方法制备包含活性成份的特殊剂型。

依照本发明的第二个方面，是提供在低生育力或是不孕妇女中诱导卵泡生成的方法，包括在100～600IU范围内以起始剂量给予FSH和/或其生物活性类似
物，接着在刺激阶段中的至少三天后采用第二种剂量给药。

本发明每个方面的优选特征是关于彼此方面的，在细节时已作必要的修正。

所有遍及本说明书的参考专利和文献是以法律允许的最完整范围引入作为参考的。

本发明将以下列非限制性的实施例作进一步描述。

较佳实施例的详细描述
实施例1
设计下面的研究用于(a)以3天间隔给予r-hFSH最初6天刺激后，从第7天
起每天给药，与从刺激第1天起每天给药相比较，使用有效终点，如在刺激阶段中总的注射次数、累积的r-hFSH剂量和r-hFSH治疗的持续时间，进行多卵泡发
育评估和(b)证明改变剂量方案导致至少具有等价的临床功效，以功效终点来评价，比如在第7天和hCG给药当天≥11和14mm的卵泡数目和和回收的卵母细胞
数目。

总的来说，参与本项研究的病人是想要怀孕的不孕妇女，至少采用过一年无保护措施的性交和证明是正当的辅助生殖技术(ART(IVF，ICSI))而怀孕失败的，她们符合下面要详细描述的某些合格的标准。

通过在r-hFSH治疗前给予GnRH激动剂实现脑垂体的向下调节。

r-hFSH剂
量时间表如上所述是从刺激阶段第1天至第6天。

应该指出，包括从第1天至第
6天，给予所有病人的900IU FSH固定总剂量。

从第7天起，在个体卵巢响应的
基础上允许剂量滴定(最大日剂量为450IU)。

从第7天开始，FSH以调节至个体
卵巢响应的剂量给药，直至认为卵泡发育充分(以卵巢超声波和血清雌二醇(E2)浓度来评估)。

为了在卵拾起(OPU)前达到最后的卵泡成熟，以5000IU单剂给予尿
人绒毛膜性腺激素(u-hCG)。

功效包括通过取血样分析E2、FSH、LH和P4血清水
平监测对r-hFSH的内分泌响应，也包括在刺激阶段期间常规超声波检查卵巢。

功效终点包括总的注射次数，总累积剂量和治疗的持续时间。

功效终点包括在第7天和hCG给药当天≥11和14mm的卵泡数目和回收的卵母细胞的数目。

病人的挑选
挑选了符合所有下列标准的68名病人：
●不孕病人定义为：想要怀孕并在至少一年没有保护措施的性交后怀孕失败的妇 女。

不孕必须归因于至少下列一种原因并证明IVF-ET治疗是正当的：
—输卵管因素。

包括标准
—轻度子宫内膜增生(美国生育协会分类I期或II期)
—男子不育症(看下面的条件)
—没有解释
●在过去六个月中作过精液分析男性伴侣，射精时每ml精液中有≥1.0×106活动 的精子(活动能力等级A和等级B)，在任何先前IVF试验期间有≥20％卵母细
胞的受精率。

如果符合这些标准，可以使用常规的受精或者胞质内精液注射
(ICSI)。

如果不符合这些标准，但如果仅使用过ICSI，病人才能够参加试验。

●年龄18～38岁。

●开始口服避孕和/或GnRH激动剂治疗前的妊娠被排除在外。

● 25～35天自发的排卵月经循环。

●卵泡阶段早期(2～4天)血清水平由本地实验室测试，在下面确定的范围内：
—FSH小于10IU/l。

—LH小于13.5IU/l。

—PRL小于800IU/l。

●两个卵巢均存在
●不超过先前辅助生殖技术(ART)三个周期或者自从上次临床妊娠后不超过三
次先前的ART周期。

●在第1天刺激(S1)前，在最后的ART和/或氯芪酚柠檬酸盐或促性腺激素治
疗后，至少要有一次脱洗周期。

●没有先前的ART周期，表明对促性腺激素刺激响应差(定义为：≤2个卵泡
成熟)
●没有先前中度或重度卵巢过度刺激综合症(OHSS)的历史。

●在刺激周期第1天之前的五年内，以超声波(US)或者子宫窥镜(HSC)或者
hysterosalpingography(HSG)来评估子宫腔没有能够损害胚胎着床或者妊娠进 展的异常情况。

●没有已知的对人促性腺激素制剂过敏或者高度敏感。

●正常的子宫颈PAP涂片(如果在以前12个月中没有做过涂片则要做涂片检查)。

以及不符合下列排除性标准之一的人：
●任何对妊娠或妊娠至足月的禁忌症。

●在过去三个月中有宫外孕。

●临床上重要的全身性疾病。

●身体质量指数大于30(以体重(kg)除以身高2(m2)来计算)。

●可能干扰吸收、分布、代谢或分泌FSH的任何医学的状况。

●异常的妇科出血。

●在过去五年中有药物、药疗或者嗜酒的历史。

在开始向下调节(GnRHa治疗)之前最多六个月，评估下述指标：
人口统计数据：出生日期，高度，重量和人种。

内科，目前药物治疗历史和体格检查：包括血压，心率和常规健康信息。

也
记录目前的吸烟习惯。

妇科和产科史：以前重要的回顾
妇科和产科史，包括所有来自先前ART周期的资料。

妇科检查：妇科检查(包括子宫颈PAP涂片，如果在过去的三年中没有人没
有进行过这种检查的话)。

超声波检查诊断：在早期卵泡阶段使用阴道内探针进行盆腔US检查。

两个
卵巢的描述包括三个平面的长度、通过卵巢最大截面上的≤10mm的卵泡数目、任
何≥11mm卵泡的大小和任何卵母细胞的大小。

记录下子宫的大小(长度，高度和
宽度)及其外观。

实验室筛选：收集2ml血清，送往本地实验室测定早期卵泡阶段(自发周期
的2～4天)FSH、PRL和LH的浓度。

精液分析：进行男性伴侣的精液分析。

根据计算机生成的随机选择表将病人随机分成两组。

33名病人被分配至第1
组(每天150IU)，35名病人被分配至第2组(每个第3天450IU)。

药疗，管理和检测
L e u p r o r e l i n乙酸盐(U n o-E n a n t o n e，T a k e d a)作为脑垂体促性腺细胞脱敏的激动剂使用。

一天给药一次，以每天0.1ml含0.5mg的剂量作大腿皮下注射，开始
于月经周期的中期黄体阶段，结束于注射u-hCG当天。

可以通过超声波扫描和测
定在开始治疗的最早十天的雌二醇水平来确定脑垂体的脱敏。

如果那时病人不是
向下调节，再继续单独用Leuprorelin治疗15天。

无论如何，在开始超排卵治疗
前要确定向下调节。

在向下调节确定后，开始用r-h F S H(G o n a l-F，S e r o n o)治疗。

G o n a l-F恰当地以每天一次或每个第三天一次，腹部皮下给药。

开始的固定剂量(在S1天)为150
IU/天或者450IU/第3天，连续6天(包括第6天)。

在S7天(开始r-hFSH治疗后
7天)，以US和血清雌二醇水平的监控，根据卵巢的响应作出剂量的调整。

在这
一点上，在S1，S5，S7，每次(包括u-hCG给药的当天)病人在中心检测作检查，
在本地实验室中取血，离心，用2ml血清对E2、P4、LH利FSH分析作立即评估。

在E 2测定的同一天，用阴道内探针进行超声波检查。

有时测量所有平均直径≥11mm 的卵泡。

以含有150IU FSH 、30mg 蔗糖和磷酸缓冲液冻干粉的安瓿剂型提供Gonal-F 。

每日剂量所需的安瓿数量和注射用水重新组成注射液，然后立即皮下注射。

下面的表1指出了制备用于给药的剂量时所需的特定稀释法。

表1
根据卵巢响应，在治疗的第7天调整FSH 的剂量。

在两组中，如果卵巢的响应充分了，则使用150IU 的剂量。

在两组中，如果卵巢的响应不够充分，则使用225IU 的剂量。

随后，如果剂量增加，增加值只是超过先前剂量75IU FSH/天。

这样，每日剂量只是：150，225，300，375和450IU FSH/天。

在最后r-hFSH 和GnRH 激动剂给药的后一天，当最大的卵泡平均直径达到至少18mm ；至少有另外两个平均直径≥16mm 的卵泡存在；和对于当前卵泡的数目，E2的水平在可接受的范围内时，进行5000IU u-hCG(Profasi ，Serono)单次皮下注射。

以含5000IU u-hCG 和10mg 乳糖的皮下注射用冻干粉安瓿的形式提供Profasi 。

将一支安瓿的u-hCG 用1.0ml 注射用生理盐水(0.9％NaCl)重建注射液，其后立即以1.0ml 体积皮下注射。

u-hCG 给药后34～38小时，在腹部超声波监测下从腹腔或阴道回收卵母细胞。

在卵母细胞回收2～3天后，进行卵母细胞的体外授精和胚胎移植。

不超过三个胚胎被移植。

记录下下述信息：
卵母细胞的数目：记录下回收的卵母细胞总数，包括破碎和不成熟的。

卵母细胞核成熟度：有可能的话，每次评定卵母细胞核的成熟度。

卵母细胞被分类成胚泡(人卵母细胞的胚泡或核或多或少在形状上成圆球状，通常包含单个外向的核仁。

胚泡本身在早期不成熟的卵母细胞中定位于卵质中，只是在胚泡破碎之
剂量(IU)150IU FSH安瓿数 稀释剂毫升数 注射体积(ml)150225300375450
1 1 1
2 1.3
3 12 1 13 1.2 13 1 1。