玉米赤霉烯酮定量检测卡说明书

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玉米赤霉烯酮ELISA说明书

玉米赤霉烯酮ELISA快速检测试剂盒操作说明书1、简介本试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附ELISA原理快速定量检测谷物、饲料中的玉米赤霉烯酮（ZearaLenone,ZEN）。

谷物/饲料的前处理包括：提取、过滤、稀释，处理时间大约为20-40分钟。

本试剂盒的检测限为：10 ppb；谷物/饲料中ZEN的回收率≥80%；批内、批间变异系数<15% 。

2、试剂盒组成A. 24/48/96孔ZEN酶标板: 3/6/12条×8孔B. 20×浓缩洗涤液：25mL (用蒸馏水稀释20倍使用) 1瓶C. ZEN抗体: 3/6/12mL 1瓶(红盖)D. 酶标二抗：3/6/12 mL 1瓶(绿盖)E. 显色液：3/6/12 mL 1瓶(蓝盖)F. 终止液:3/6 mL 1瓶(黄盖)G. ZEN标准品:1.5/2mL/瓶（0、30、60、200、500ppb）各1瓶H. 操作说明书1份注意：标准品含有低浓度ZEN、终止液含2 N H2SO4，需小心取用；勿在有效期外使用本试剂盒。

3、贮存条件与有效期2-8℃避光贮存，忌0℃以下冻存，有效期见试剂盒内盖。

4、样品处理程序●实验准备：配制60%甲醇水溶液（v/v，60:40）和20%甲醇水溶液（v/v，20:80）。

注意：请精确配制上述溶液，以免影响检测的准确性。

●称取5 g 具有代表性的粉碎样品于100 mL带塞三角瓶内，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液。

●将加入了甲醇水溶液的样品放入振荡器内（或用手强力振荡），充分振荡3分钟后，用whatman 1号滤纸过滤，收集滤液。

●取滤液2mL，加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，用whatman 1号滤纸过滤，此为样品待检液。

注意：某些样品待检液(如花生等)久置影响检测结果的准确性，为保证检测的准确性，样品提取后请即时检测。

若样品待检液不立即检测，请将其存储于棕色玻璃瓶内，2-8℃避光保存。

试剂盒在使用前，请将试剂盒内所有试剂放到室温（20-25℃）进行温度平衡。

玉米及玉米油中玉米赤霉烯酮快速定量检测方案

玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮快速定量检测方案--10min快速定量一、玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮ZEN污染情况玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）是由镰刀菌产生的一种霉菌毒素，属于二羟基苯甲酸内酯类化合物，具有雌激素活性，分子式为C18H2205，相对分子量318.4。

玉米赤霉烯酮ZEN主要污染玉米、小麦、大米、棉籽等粮谷作物，可引起动物和人的雌激素过多综合征，还具有生殖毒性、免疫毒性、基因毒性及可疑致癌性等。

2003年止，根据世界粮农组织公布已有19个国家制定了食物中玉米赤霉烯酮ZENDE 限量标准，欧盟规定精炼玉米油中玉米赤霉烯酮ZEN不得超过200μg/kg。

中国标准规定，玉米、小麦及其制品中玉米赤霉烯酮ZEN不得超过60μg/kg，但没有规定植物油中玉米赤霉烯酮的限量标准。

但农作物特别是玉米种的玉米赤霉烯酮ZEN检出率很高，而植物油均是以这些农作物为基本原料，因此非常有必要对玉米及玉米油中的玉米赤霉烯酮ZEN进行检测与控制。

二、玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮ZEN国家残留限量标准食品类别限量标准（μg/kg）玉米、玉米面（渣、片） 60大麦、小麦、麦片、小麦粉（面粉） 60引自：《GB 2761-2011 食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》三、飞测生物玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮快速定量检测方案--10min快速定量上海飞测生物基于全球领先的荧光定量POCT技术平台，在国内率先推出了玉米赤霉烯酮荧光定量检测试纸条，本产品可在10min快速定量的检测出玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮的残留含量，样品前处理简单（仅需8min），检测操作简便，采用荧光免疫定量分析仪读数，结果准确可靠且可现场打印，准确性符合HPLC法的检测结果，适用于各类玉米及玉米油加工企业及检测机构。

3.1. 玉米赤霉烯酮荧光定量检测试◆ 检测灵敏度：5μg/kg；◆ 定量线性范围：10.0μg/kg ◆ 样品前处理时间：8min； ◆ 检测时间：10min；◆ 准确度：回收率为80%-125%◆特异性：在1000μg/kg 浓度3.2. 检测所需配备的仪器和耗材编号 1 荧光免疫定2 20-2003 100-1004 1-5ml 5 粉碎机6 旋转摇床或者漩涡7 4000转低速离8检测试纸条性能 /kg - 500.0μg/kg； 125%；浓度水平下与其它真菌毒素无交叉反应；耗材名称配备免疫定量分析仪飞测生物配备 200ul 移液器用户配备 1000ul 移液器用户配备 5ml 移液器用户配备碎机（500g）用户配备者漩涡振荡器（选配）用户配备低速离心机（选配）用户配备 10ml 离心管用户配备数量 1台 1把 1把 1把 1台 1台 1台若干93.3. 样品前处理过程3.4. 检测操作过程3.5. 结果判读和输出所有产品均采用便携式荧光误判。

食品中玉米赤霉烯酮的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201913)

附件13食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法(KJ201913)1.范围本标准规定了食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法。

本标准适用玉米、小麦及其碾磨加工品中玉米赤霉烯酮快速筛选测定。

第一法比色法2.原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。

样品中的玉米赤霉烯酮经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条中检测线（T线）上的抗原结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。

通过检测线（T线）与控制线（C线）颜色深浅的比较，对样品中玉米赤霉烯酮进行结果判定。

3.试剂及材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，试验用水为GB/T 6682规定的二级水。

3.1.试剂3.1.1.乙腈。

3.1.2.甲醇+水（7+3，体积比）。

3.1.3.稀释缓冲液（胶体金免疫层析检测试剂盒专用提取液或根据产品使用说明书配置）。

3.2.参考物质玉米赤霉烯酮的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥95%。

表1 玉米赤霉烯酮参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量注：或等同可溯源物质。

3.3.标准溶液的配制3.3.1.标准储备液：称取适量标准品，用乙腈（3.1.1）溶解，配制成浓度为100 μg/mL的标准储备液。

﹣18 ℃避光保存，有效期6个月。

3.3.2.标准工作液：准确量取标准储备液（100 μg/mL）（3.3.1）100 μL，置于10 mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1 μ稀/mL的玉米赤霉烯酮标准工作液，2 ℃～8 ℃避光保存，有效期1个月。

3.4.材料玉米赤霉烯酮胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为玉米、小麦及其碾磨加工品。

4.仪器和设备4.1.移液器：100 μL、200 μL、1 mL和5 mL。

4.2.旋涡混合器。

4.3.离心机。

4.4.电子天平：感量为0.01 g。

5.环境条件环境温度：20 ℃～30 ℃。

空气相对湿度：最佳测定湿度45 %～65 %。

动物饲料中玉米赤霉烯酮的检测方法

养殖与饲料2017年第6期摘要玉米赤霉烯酮（Zearalenone ，简称ZEN ）亦称F-2毒素，其来源于赤霉病的玉米。

ZEN 产毒菌有三线镰刀菌（）、禾谷镰刀菌（）等。

玉米赤霉烯酮具有雌激素作用，可致使畜禽急性、慢性中毒，造成畜禽繁殖机能异常，严重者引起死亡，给畜牧业带来严重的经济损失。

本文阐述当前饲料中玉米赤霉烯酮的检测方法。

关键词玉米赤霉烯酮；气相色谱法；高效液相色谱法；生物学检测法；免疫学检测方法；薄层层析法动物饲料中玉米赤霉烯酮的检测方法代荣逵1吕刚2王亮21.湛江中科技术服务有限公司，广东湛江524043；2.渔仁堂生物科技（湛江）有限公司，广东湛江524043收稿日期：2017-03-29代荣逵，男，1988年生。

1气相色谱法（Gas Chromatography ，简称GC ）气相色谱法一般用MS 检测器，能够对不同的镰刀菌毒素进行同时检测，灵敏度也相对较高。

相关学者在检测饲料中玉米赤霉烯酮时采用GC 法，结果显示在50～600ng/L 玉米赤霉烯酮浓度范围内，与峰面积响应值的线性关系较为良好，最低检出限为50ng ；饲料中毒素在添加浓度100～500ng/L 范围内，回收率达80%以上。

利用气相色谱法检测饲料中玉米赤霉烯酮具有较高的应用范围和回收率，能够应用于定性、定量分析饲料中玉米赤霉烯酮，但是值得提出的是由于设备的实用性问题，该方法并不能作为常规方法进行饲料中玉米赤霉烯酮的检测。

2高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography ，简称HPLC ）高效液相色谱法作为当前国内外最常用和最权威的一种真菌毒素检测方法，是一种以液体为流动相的新型色谱技术，可以同时实现定性、定量检测毒素；然而因真菌的毒素不同，其性质不同，需对已达到最佳的分析条件进行综合考虑，以期实现较为理想的分离效果。

高效液相色谱法（HPLC ）原理如下，基于适当的流动相条件，利用适宜的色谱柱，对样品中毒素通过色谱柱柱层分离后，采用一些设备诸如突光检测器（FLD ）、紫外检测器等进行检测，对出色谱峰的面积进行测量计算含量。

饲料中玉米赤霉烯酮检测方法概况

生物学检测法是检测饲料中玉米赤霉烯酮毒素存在与否及毒性强弱的一种基本方法，具有操作简便、仪器成本低、耗时短等特点，可以应用于大量饲料样品玉米赤霉烯酮毒素的初步筛选。如对禾谷镰抱菌中玉米赤霉烯酮生物合成途径中的必需基因PKS4设计特异性引物，通过检测PKS4基因间接检测禾谷镰抱菌玉米赤霉烯酮毒素存在与否，同时结合ELISA检测方法
试验研究空
饲料中玉米赤霉烯酮检测方法概况
高琳王磊 (天津市农业生态环境监测与农产品质量检测中心300193)
摘要：玉米赤霉烯酮是由禾谷镰刀菌、三线镰刀菌、粉红镰刀菌等多种镰刀菌分泌的真菌毒素，可污染多种谷物和饲料。
玉米赤霉烯酮具有雌激素样作用，畜禽食用后可引发慢性中毒或繁殖技能障碍，严重影响畜禽机体健康。本文对饲料中玉米赤霉烯酮常用检测技术进行总结和概述，以期为建立精准、灵敏的饲料玉米赤霉烯酮检测方法提供理论参考，更好地促进饲料业绩畜牧业健康发展。
在兽医临床血清学检测上，正向间接凝血试验、固相阻断 ELISA和液相阻断ELSIA都是常用的疫苗抗体效价检测方法。但液相阻断ELISA具有敏感性良好，特异性较高，重复性优良，检测速度更快等优势，因此，在检测大批量样本时通常表现岀良好的适用性，可以更准确地评估疫苗免疫效能。
本试验为某羊羊牲畜养殖家庭农场所使用代号JYBL2014-5-21的口蹄疫O型灭活疫苗抗体效价检测提供了可靠的试验数据，能有效指导该场口蹄疫防治工作，为本县的O型口蹄疫防控工作提供了坚实的保障。
此次试验结果表明，抗体效价保护率为97.2%遥
参考文献: ［1］李冰，王涛，郑勇.羊口蹄疫的流行病学［J］.饲料博览,2020(7):70-71. ［2］胡珊莲.口蹄疫O型液相阻断ELISA免疫抗体检测方法的运用［J］.浙

玉米赤霉烯酮毒素检测

玉米赤霉烯酮毒素PriboFast ○R霉菌毒素免疫亲和柱PriboFast ○R多功能净化柱产品名称产品描述产品编号规格PriboFast ○R 净化柱（柱压型） PriboFast ○R 226 多功能净化柱黄曲霉毒素,玉米赤霉烯酮 M2006 25T PriboFast ○R226 多功能净化柱黄曲霉毒素,玉米赤霉烯酮M200650TPriboFast ○R净化柱（推杆型） PriboFast ○R 260 多功能净化柱黄曲霉毒素,玉米赤霉烯酮 M2600 25T PriboFast ○R 260 多功能净化柱黄曲霉毒素,玉米赤霉烯酮M2600 50TPriboSpin TM 净化小柱 PriboSpin TM 玉米赤霉烯酮 PS-0225T PriboSpin TM 玉米赤霉烯酮PS-02050TPriboFast ○R酶联免疫试剂盒产品名称产品描述产品编号规格玉米赤霉烯酮试剂盒检测范围:0-16.2ppb EKT-020 48T 玉米赤霉烯酮试剂盒检测范围:0-16.2ppbEKT-02096T产品名称产品描述产品编号规格玉米赤霉烯酮免疫亲和柱(3ml)适用于玉米、谷物、饲料、植物油、辣椒等作物中玉米赤霉烯酮定量检测符合国标:GBT 5009.209-2008；GBT23504-2009 IAC-020-325T玉米赤霉烯酮免疫亲和柱(3ml)适用于玉米、谷物、饲料、植物油、辣椒等作物中玉米赤霉烯酮定量检测符合国标:GBT 5009.209-2008；GBT23504-2009IAC-020-3 50TPriboFast ○R快速检测卡PriboFast ○R标准品产品名称产品描述产品编号规格PriboFast ○R固体标准品玉米赤霉烯酮/F2毒Zearalenone MMS1024 1mg/5mg/10mgPriboFast ○R 液体标准品玉米赤霉烯酮 25µg/ml,溶于乙腈 STD#4011 1ml/2ml/5ml 玉米赤霉烯酮100µg/ml,溶于乙腈STD#40121ml/2ml/5mlPriboFast ○R质控样品产品名称产品描述产品编号规格玉米中玉米赤霉烯酮 1020.7±81.2ppb MRM-ZC-324 50g/100g/500g/100g 玉米中玉米赤霉烯酮 164.9±20.5ppb MRM-ZC-319 50g/100g/500g/100g 玉米中玉米赤霉烯酮 105.5±12.6ppb MRM-ZC-317 50g/100g/500g/100g 饲料中玉米赤霉烯酮3550ug/kg (2611-4489ug/kg)MRM-ZF-43250g/100g/500g/100g产品名称产品描述适用样品产品编号规格玉米赤霉烯检测卡检测限50ppb饲料谷物PR-02025T。

HPLC法测定玉米中的玉米赤霉烯酮含量

物排卵、延长发情间期、减少胎仔数或引起不孕等 … 。
４实验方法
本次实验采用市售玉米碴。经过高速粉碎机粉碎后，准
我国规定谷物及其制品中的玉米赤霉烯酮限量指标为小４１职于等于６０ｕｇ／ｋｇ，一般采用液相色谱、气相色谱和试剂盒
ｍＬ，收集佘下优化，分别对方法检出限浓度、定量限浓度、限量指标浓度上清液通过玻璃纤维滤纸过滤，弃去初滤液３等进行加标实验，结果表明，用ＨＰＬＣ法进行ＺＥＡ质量浓度滤液。；佳确吸取３ｍＬ滤液于５０ｍＬ离心管中，加入２５ｍＬ的测定，回收率和精密度均满足ＧＢ／Ｔ２７４０４ — ２００８的要求。ＰＢＳ缓冲液，混匀。
ＲｅｔＴｉｍｅ
一 … 一一
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Ａｍｔ／ＡｒｅａＲｅｆＧｒｐＮａｍｅ一ｌ … …
．
【ｍｉｎｊＳｉｇ
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２
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等方法进行检测。
确称取５ｇ（Ｏ００１ｇ）放于５０ｍＬ离心管中，加入２０ｍＬ提取液，
本文通过对国家标；佳ＧＢ５００９２０９ — ２０１６／第一法进行涡旋振荡２ｍ＿ｎ后，置于离心机中．８０００ｒｐｍ离心１０ｍｌｎ。

HPLC法测定玉米中的玉米赤霉烯酮

分析检测HPLC法测定玉米中的玉米赤霉烯酮王晨箐（湖南农业大学，湖南长沙 410128）摘要：本文采用高效液相色谱法对玉米中的玉米赤霉烯酮进行检测。

优化的提取液为乙腈、水、甲醇，比例为46∶46∶8。

得出标准曲线方程y=0.043 4x+0.011 8，相关系数R2=0.999 93。

玉米赤霉烯酮的检出限为0.12 μg·kg-1，回收率为84.0%～92.4%，偏差为-1.5%，在PBS缓冲液样品中，检测值为254.1 μg·kg-1，回收率为95.6%。

通过优化样品前处理方法和色谱条件，实现了对玉米中玉米赤霉烯酮的准确、快速的定量分析。

关键词：高效液相色谱法；玉米；玉米赤霉烯酮Determination of Zearalenone in Maize by HPLCWANG Chenqing(Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China)Abstract: High performance liquid chromatography was used to detect zearalenone in corn. The optimized extract was acetonitrile, water and methanol in a ratio of 46∶46∶8. The standard curve equation y= 0.043 4x+0.011 8 is obtained, and the correlation coefficient R2=0.999 93. The detection limit of zearalenone was 0.12 μg · kg-1, the recovery rate was 84.0 %～92.4 %, and the relative standard deviation was -1.5 %. In the sample of PBS bu ff er, the detection value was 254.1 μg·kg-1, and the recovery was 95.6%. The accurate and rapid quantitative analysis of zearalenone in corn was realized by optimizing the sample pretreatment method and chromatographic conditions.Keywords: high performance liquid chromatography; corn; zearalenone高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用且成熟的技术，具有准确性高、分离效果好、操作简便等优点[1]。

渔用饲料及原料的检测—玉米赤霉烯酮的测定

移取叔丁基甲基醚层与前述的叔丁基甲基醚提取液混合，在氮吹仪上于40℃水浴中吹干，加人1 mL溶解液，涡旋30 s溶解，待净化。
四
2.净化过程：
提取步骤
向上述鸡心瓶中加人5mL正已烷，涡动溶解残渣，转移至10 mL离心管中。再向鸡心瓶中加人 3mL 0.1 mol/ L盐酸溶液，涡动，与正己烷液合并于10 ml离心管中，手动振摇20次， 3000r/min离心1min，弃去，上层正已烷层。再加5mL正己烷于鸡心瓶中，涡动后转移至含有 0.1mol/L盐酸的离心管中,同法处理,将正己烷层去除干净，下层为备用液。
结果计算
五
试样中残留的测定我们依照内标法进行计算，最终结果保留三位有效数字。
检测原理
三
提取原理
用叔丁基甲基醚和乙酸盐缓冲液加酶解剂分别提取试样中残留的玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、已烷雌酚、双烯雌酚，经硅胶柱净化。
定量方法
1.高效液相色谱串联质谱测定 2.内标法定量。
①
四
标曲制备：
提取步骤
基质标准曲线的样品制备：称取5个阴性样品,每个样品为5 g，置于50 mL离心管中，分别加人适量混合标准工作溶液, 使各被测组分玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、已烯雌酚和双烯雌酚的浓度分别为 2.5 ng/mL、5. 0 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL 再分别加入适量内标标准工作溶液，使其浓度均为10 ng/mL。
硝基咪唑简介
一
玉米赤霉醇是一种酚的二羟基苯酸的内酯结构，分子式为C18H22O5，分子量318，熔点161-163°C ,耐热性强，110°C下处理1h才被完全破坏。玉米赤霉醇为白色晶体，不溶于水，溶于碱性水溶液、乙醚、苯、氯仿、二氯甲院、乙酸乙酯、醇类和酸类，微溶于石油醚。

玉米油中玉米赤霉烯酮标准物质-概述说明以及解释

玉米油中玉米赤霉烯酮标准物质-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述玉米赤霉烯酮是一种存在于玉米和其他谷物中的黄曲霉菌产生的毒素。

它具有强烈的毒性，对人体和动物的健康造成潜在威胁。

由于玉米是世界上最重要的粮食作物之一，玉米油是人们日常生活中常用的调味品之一，其中的玉米赤霉烯酮含量受到广泛关注。

本文将重点讨论玉米油中的玉米赤霉烯酮，包括其来源、危害和风险。

此外，我们还将介绍玉米赤霉烯酮标准物质的重要性以及其在食品安全领域中的应用前景。

通过深入了解玉米赤霉烯酮及其标准物质，我们可以更好地认识和评估玉米油中的潜在风险，为相关行业提供科学依据和技术支持。

着眼于食品安全和人民的健康，我们需要建立可靠的检测方法和标准，以保障人们日常生活中的食品安全问题。

接下来，我们将详细介绍玉米油中玉米赤霉烯酮的相关知识，包括其产生原因、影响因素、检测方法等，以期为解决相关问题提供参考和启示。

同时，我们还将探讨玉米赤霉烯酮标准物质的研究意义以及未来的应用前景。

在研究的过程中，我们应该高度重视玉米赤霉烯酮对人类健康的潜在危害，并主动开展一系列的控制和预防措施，以确保人们在日常生活中能够得到高质量、安全的食品。

这将为保障人类根本权益和社会稳定做出重要贡献。

在本文的结论部分，我们将对整个研究进行总结，并展望玉米赤霉烯酮标准物质的应用前景。

我们希望本文的研究结果能够对相关领域的科学研究和实践产生积极影响，为食品安全和人民的健康问题作出贡献。

1.2文章结构1.2 文章结构本文按照以下结构进行展开：第一部分为引言，包括概述、文章结构和目的。

- 在概述部分，将简要介绍有关玉米油中的玉米赤霉烯酮以及其重要性和相关问题。

- 文章结构部分将介绍本文的整体组织架构，包括各个章节的内容安排。

- 目的部分将明确本文的主要目标和意义，阐述本文的研究背景和价值。

第二部分为正文，主要涉及玉米油中的玉米赤霉烯酮、其危害与风险以及玉米赤霉烯酮标准物质的重要性。

玉米赤霉烯酮检测卡

玉米赤霉烯酮检测卡
检测原理：
玉米赤霉烯酮检测卡基于胶体金免疫层析技术。

检测时，样品中的玉米赤霉烯酮在流动过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体与固相载体膜上的玉米赤霉烯酮
-BSA偶联物的结合，如果样品中的玉米赤霉烯酮含量大于灵敏度，检测线在规定时间内不显颜色，结果为阳性，反之，检测线显红色色带，结果为阴性。

无论检测液中玉米赤霉烯酮浓度高低，C线均显红色色带。

适用情况：
玉米赤霉烯酮检测卡适用饲料、粮食、食品企业进行玉米赤霉烯酮的定性或半定量检测；
包装规格：20条/盒；40条/盒
检测样品：粮食谷物、饲料等；
检测下限：60ppb；
试纸特点：样品处理时间短。

有效期：2~30°C保存18个月。

结果解释：
阴性：C线显色，T线肉眼可见，无论颜色深浅均判为阴性。

阳性：C线显色，T线不显色，判为阳性。

无效：C线不显色，无论T线是否显色，该试纸均判为无效。

【测试】玉米赤霉烯酮检测试剂盒说明书

【关键字】测试玉米赤霉烯酮（ZEN）ELISA检测试剂盒产品描述：一、概要玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）又称F-2 毒素，主要成分为禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌等产生的2，4-二羟基苯甲酸内酯类化合物。

ZEN 主要污染玉米、麦类、谷物等作物，具有很强的雌性激素作用，可引起猪、大鼠、小鼠、家禽等动物的雌激素过多症和严重的生殖道症状及不孕症，还具有免疫毒性、基因毒性等，对人也有雌激素作用。

玉米赤霉烯酮一般用薄层色谱、高效液相色谱法检测, 但因其操作繁杂、费用昂贵而影响实际应用。

而使用玉米赤霉烯酮ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中玉米赤霉烯酮残留。

本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代真菌毒素检测产品，操作时间低于60min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被玉米赤霉烯酮抗原，样本中玉米赤霉烯酮和此抗原竞争玉米赤霉烯酮的抗体，酶标二抗催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的玉米赤霉烯酮成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中玉米赤霉烯酮的含量。

三、适用范围可定性、定量检测玉米及玉米制品、饲料等样本中的玉米赤霉烯酮。

四、交叉反应率玉米赤霉烯酮……………………………………………100%玉米赤霉酮…………………………………………13%玉米赤霉醇 (1)五、检测步骤测定前应须知：1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。

2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。

3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。

4、在所有恒温孵育过程中，躲免光线照射，用盖板膜封住微孔板。

5、标品里含有玉米赤霉烯酮，操作时应戴手套操作，躲免皮肤接触。

操作步骤：1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

玉米赤霉烯酮联免疫定量检测试剂盒说明书

ELISA kit for quantitative detection of Zearalenone一、概要玉米赤霉烯酮从有赤霉病的玉米中分离得到，其产毒菌主要是镰刀菌属(Fusarium)的菌侏，如禾谷镰刀菌(F.graminearum)和三线镰刀菌(F.tricinctum)。

玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物, 玉米赤霉烯酮的耐热性较强,110℃下处理1 h才被完全破坏。

人食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流产，死胎和畸胎。

食用含赤霉病麦面粉制作的各种面食也可引起中枢神经系统的中毒症状，如恶心，发冷，头痛，神智抑郁和共济失调等.本试剂盒利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对各种谷物及其制品中的ZEN含量进行快速、定量检测。

二、原理本试剂盒是利用间接酶联免疫吸附微孔模式进行检测，灵敏度可达1 µg/kg（ppb）。

样品或标准品中游离的玉米赤霉烯酮与包被在微孔中的抗原竞争结合游离的玉米赤霉烯酮抗体上的结合位点，形成抗原抗体结合物，经洗板洗去多余的抗体与玉米赤霉烯酮后，加入酶标记的二抗与玉米赤霉烯酮抗体结合，经再次洗板后加入显色剂与反应底物，其与酶标物作用而成蓝色，加入反应停止液后颜色由蓝色转变为黄色，黄色越深则表明呕吐毒素越少，用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的玉米赤霉烯酮污染水平。

三、试剂盒构成1、反应板支架…………………………………………………………………………1块2、玉米赤霉烯酮抗原包被反应板……………………………………………………….36孔3、玉米赤霉烯酮标准品溶液（0 ppb，1 ppb，2.5 ppb，5 ppb，10 ppb，20 ppb）…1套4、玉米赤霉烯酮抗体………………………………………………………1瓶5、样品稀释液……………………………………………………………………1瓶6、抗体稀释液……………………………………………………………………1瓶7、酶标二抗溶液………………………………………………………………1瓶8、显色剂溶液………………………………………………………………………1瓶9、反应底物溶液………………………………………………………………1瓶10、终止液………………………………………………………………………………1瓶11、浓缩洗涤液（20 X）………………………………………………………1瓶四、注意事项1、试剂盒请置放于2-8℃条件下保存，使用过程中不要让微孔干燥，使用后立即将试剂放回至2-8℃条件下冷藏。

苏微玉米赤霉烯酮免疫亲和柱使用说明书

苏微玉米赤霉烯酮免疫亲和柱使用说明书【产品用途】苏微玉米赤霉烯酮（ZEN）免疫亲和柱适合于和ZEN酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测ZEN。

适用于谷物、粮油、食品、饲料等样本中的ZEN净化处理，提高了样品的纯度，纯化后的提取液可用不同的分析方法测定。

【产品性能】柱吸附能力：≥100ng/支；回收率：75%~90%。

柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。

【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，玉米赤霉烯酮（ZEN）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的ZEN经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过ZEN免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，ZEN与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。

最后采用甲醇洗脱ZEN，然后进行相关分析。

【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。

（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。

【样品制备及净化】（1）谷物（玉米、小麦等）----准确称取40.0g粉碎的样品，加入4.0g氯化钠，----与100.0mL乙腈-水溶液（9+1）或甲醇-水（8+2）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用快速定性滤纸过滤，----准确移取10mL滤液并加入40mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。

----准确移取10.0mL混匀液进行过亲和柱。

（2）酱油、醋、酱及酱制品----准确称取25.0g样品到100容量瓶中，----加入乙腈（或甲醇）定容至100mL，超声提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取10.0mL滤液并加入40.0mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。

饲料中玉米赤霉烯酮快速定量检测方法的研究

饲料中玉米赤霉烯酮快速定量检测方法的研究王雄王津（北京中检维康技术有限公司）程宗佳博士（美国大豆协会北京办事处饲料技术主任）摘要：利用免疫亲和柱荧光光度法测定了饲料中玉米赤霉烯酮，检测灵敏度为0.1mg/kg，检测范围为：0～5mg/kg，变异系数为3.3%～13.3%，在其检测范围内的回收率为97%～106%，分析1个样品的时间只需25min。

关键词：玉米赤霉烯酮；饲料；检测玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN），又称F2毒素，是由禾谷镰刀菌等菌种产生的有毒代谢产物，是一种雌激素真菌毒素，化学名为6-（10羟基-6氧基-1-炭稀基）β-雷琐酸-μ-内脂，是一种白色的结晶，分子式为C18H22O5，分子量为318；熔点为164～165℃；紫外线光谱最大吸收236nm、274nm和316nm；红外线光谱最大吸收为970nm。

纯的玉米赤霉烯酮不溶于水、二硫化碳和四氯化碳；溶于碱性水溶液、乙醚、苯、氯仿、二氯甲烷、醋酸乙酯、乙腈和乙醇；微溶于石油醚（b.p.30～60℃），在紫外线照射下呈蓝绿色（刘继业，2001）。

米赤霉烯酮最初是从赤霉病玉米中分离出来的，有15种以上的衍生物，其主要存在于玉米和玉米制品中，小麦、大麦、高粱、大米中也有一定程度的分布，ZEN主要污染玉米、麦类、谷物等，在世界各地各种粮谷与饲料中均有存在。

玉米赤霉烯酮具有较强的生殖毒性和致畸作用，可引起动物发生雌激素亢进症，导致动物不孕或流产，对家禽、猪、牛和羊的影响较大，给畜牧业带来很大的经济损失。

目前玉米赤霉烯酮的测定方法有薄层色谱法（Quiroga等，1994；杨曙明等，1994）、气相色谱法-质谱（Bennett等，1994）、酶联免疫吸附法（Bagnati 等，1991）等。

Fazekas等(2001)和Visconti等(1998)利用免疫亲和柱-HPLC法测定了玉米样品中的玉米赤霉烯酮，Scott等(1999)利用免疫亲和柱-荧光法和免疫亲和柱-HPLC法快速测定了玉米样品中的玉米赤霉烯酮。