实验四 酵母菌形态观察

四、 实验内容
• 1.水浸片法观察酵母菌的死活细胞（啤酒 酵母） 载片中央滴一滴0.1%的美蓝染液 无菌操作取菌并将菌体与染液混匀 盖上盖玻片 镜检并绘图
2. 子囊孢子的观察（面包酵母）
1.菌种的活化 麦氏培养基上产初染10min 95%乙醇脱色30s 水洗 沙黄复染5min 水洗 干燥镜检 (子囊孢子绿色、营养菌体和子 囊呈红色) 3.制美蓝水浸片观察面包酵母.
子囊孢子是子囊菌类真菌的有性生殖产生的 有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其 形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。麦氏培 养基有利于面包酵母子囊孢子的产生。子囊孢子 壁厚，不易染色亦不易脱色，可采用芽孢染色法 染色观察。子囊孢子呈现绿色，而子囊壁和营养 细胞呈红色。
子囊孢子
三、实验材料
• 1. 菌种：啤酒酵母、面包酵母 • 2. 培养基：豆芽汁斜面、麦氏培养基 • 3. 溶液或试剂：0.1%的美蓝染色液、芽孢 染色液一套 • 4. 仪器及其他用具：载玻片、显微镜等

放线菌的插片培养
接种位置
4 霉菌小培养装片
培养小室的灭菌：在平皿皿底铺一张略 小于皿底的圆滤纸片，再放一U形玻棒， 其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖 上皿盖，包扎后于121℃灭菌30min，烘 干备用。
五、实验结果
• 绘制啤酒酵母的芽殖，示芽体、营养体及死 活细胞
• 绘制面包酵母，示子囊孢子、营养菌体和子 囊。
请确保油镜镜 头擦拭干净！
六、 思考题
1. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征 区别于一般细菌？ P43 ，2（2）
2.如何区别酵母菌的营养细胞和释放出子 囊外的子囊孢子？p44，2
上次试验习题解答
1.你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪 些环节？ P28，2（1） ① 载玻片要洁净无油迹，制片时取水和菌量不宜 过多，涂片时应均匀涂开呈一薄层。 ② 热固定温度不宜过高（酒精灯火焰上方 3 ～ 4 次），否则会改变甚至破坏细胞形态。 ③ 水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻 片的侧面或背面流下。水流不宜过急、过大， 以免涂面薄膜脱落。
• 2.为什么要求制片完全干燥后才能用油镜 观察？P28，2（2）
制片未完全干燥就滴油观察，水油不 相混溶，视野易滑动而无法清晰观察。
• 3.你认为那些环节会影响革兰氏染色结果的正确 性？其中最关键的环节是什么？P30，2（1） ① 菌龄：要用活跃生长期的幼龄培养物 • ② 涂片：不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳 性 • ③ 火焰固定：不以过热（酒精灯火焰上方3～4 次） ④ 脱色程度 革兰氏染色乙醇脱色程度为实验成功的关键 步骤。脱色不足，阴性菌误认为阳性菌，脱色过 度，阳性菌被误染成阴性菌，脱色时间一般为 30s。
4. 说明芽孢染色法的原理。用简单染色法能否观 察到细菌芽孢？P 32，2（1） ① 芽孢染色的原理：细菌的芽孢壁厚、不易染色 亦不易着色，用着色力强的染色剂孔雀绿通过 加热或延长染色时间而使菌体和芽孢着色，菌 体的染料经水洗后已被脱色，而芽孢一经着色 就不易被洗脱，再经番红复染后，芽孢仍保留 初染液的绿色，而菌体和芽孢囊被染成复染液 的红色。 ② 用简单染色法可以观察到细菌的芽孢，芽孢成 无色透明状。
实验四 酵母菌形态观察
一、目的要求
1.学习并观察酵母菌的形态及出芽生殖方式， 学习区分酵母菌的死活细胞的试验方法和子 囊孢子的观察方法。 2.掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区 别。
二、基本原理
酵母菌是单细胞真核微生物，大小通常比 常见的细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以 出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖。有性 生殖是通过接合产生子囊孢子。 美蓝是一种无毒性的染料，氧化型呈蓝色 ，还原型呈无色。酵母菌的活细胞新陈代谢作 用强，有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的 氧化型变为无色的还原型。而死细胞或代谢作 用较弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即 可对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。
染色法观察子囊孢子
水浸片法观察子囊孢子
3 放线菌的插片培养
插片培养法：倒平板（将融化的高氏合成1号培 养基无菌操作倒平板） 插片（将无菌的盖 玻片以大约45°角插入培养基中（9片/皿/组） 接种（无菌操作取灰色链霉菌或紫色链霉 菌划线接种于插片和培养基接触处） 培养 （将插片平板倒置，28℃培养3~5天）