宫颈癌及结肠癌动物肿瘤诱发实验具体步骤及方法

宫颈癌及结肠癌动物肿瘤诱发实验具体步骤及方法宫颈癌
1．二甲基胆蒽（MC）诱发宫颈
取雌性小白鼠，以附有0.1 mgMC的棉纱线结在动物不麻醉的状态下，借助于阴道扩张器及磨纯的弯针，将线穿入宫颈。

经右宫角背部穿出，使线结固定于宫颈口。

线的另一端则固定于背部肌肉，缝合皮肤，挂线以后，同日开始连续注射青霉素2～3天。

以防术后感染。

至一定时间（半年左右）处死动物，宫颈组织用10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片。

结肠癌
1．二甲基苄肼（Dimethlhydrazine，DMH）诱发鼻咽癌
（1）给四周龄的雄性大白鼠，皮下注射二甲基苄肼（Dimethlhydrazine，DMH）每周一次，连续21周，每次DMH21 mg/kg；
（2）最后一次给药后1～4周，处死动物；
（3）降结肠部位用Bouin液固定，脱水，石蜡包埋，切片。

所用之DMH先配成每100 ml含400 mg的母液，并加EDTA37 mg，用氢氧化纳（0.1 N）液将pH调至6.5备用。

注意事项：
1．要设计不同的实验组和对照组，每组动物数一般为5-10 只；
2．一般接种肿瘤6-8 周后，小鼠的肿瘤可生长至直径为15-20mm ( 即小鼠会濒临死亡) 时，可眼球取血，分离血清并保存血清，处死小鼠，取肿瘤组织照相，取部分肿
瘤组织作冰冻组织切片( 或- 80℃保存)，作相应的免疫组织化学染色，取部分肿瘤组织用3%中性的甲醛固定，石腊包埋，作常规HE 染色。

（1）致癌性强，小剂量一次给药即可致癌；
（2）对多种动物（包括猴、豚鼠等不易诱发肿瘤的动物）的许多器官（包括食管、脑、鼻窦等不易引起癌的器官）能致癌，甚至可以通过胎盘致癌，如给怀孕大鼠以二乙基亚硝胺（Diethy lnitrosamine,DEN）可比较快地引起仔鼠的神经胶质细胞瘤；
（3）具有不同结构的亚硝胺有明显的器官亲和性，例如二甲基亚硝胺等对称的衍生物常引起肝癌，不对称的亚硝胺如甲基苄基亚硝胺常诱发食管癌；在大鼠，二丁基亚硝胺能引起膀胱癌，二戊基亚硝胺能诱发肺癌，而N-甲基-N-硝基-N-1-亚硝基胍则能引起胃肠癌。

3．黄曲霉毒素的致癌特点
（1）黄曲霉毒素的毒性很强，很小剂量（1mg/kg体重）即可使狗、幼龄大鼠、火鸡或小鸭致死；
（2）其致癌性也极强，最小致癌剂量比亚硝胺还要小数十倍，是已知化学致癌物中作用最强者；
（3）它能诱发多种动物（从鱼到猴）的肝癌，也可引起肾、胃及结肠的腺癌，滴入气管内可引起肺鳞状细胞癌；
（4）注入皮下可引起局部的肉瘤，还有报告认为，它可引起泪腺、乳腺、卵巢等其它部位的肿瘤。

4．其他
在动物实验中早已确定：乙硫氨酸可诱发大鼠肝癌；乌拉坦（氨基甲酸乙酯，C２H５O－CONH２）、氨乙胺可引起小鼠的肺癌；一些卤代烃如四氯化碳、氯仿等可引起大鼠或小鼠的肝癌。