细胞化学与组织化实验一~实验四
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３）凝血细胞，又称血栓细胞，相当于其他家畜的血小板；凝血细 胞具有典型细胞形态和结构，比红细胞稍小，两端钝圆，核呈椭圆 形．染色质致密．其他细胞与家畜的血细胞相似．
血栓细胞
成熟红细胞
鱼血细胞图
小淋巴细胞
大淋巴细胞
淋巴细胞
嗜 中 性 粒 细 胞
单 核 细 胞
八、实验结果
经碱性固绿染色片中，胞质、核仁不着色,细胞核大 部分被染成绿色，是为碱性蛋白质存在处。经酸性 固绿染色片中，因胞质和核仁中有酸性蛋白，被染 成绿色。
２）中性粒细胞，又称嗜性粒细胞，圆形，有2～5个分叶核．
３）凝血细胞，又称血栓细胞，相当于其他家畜的血小板；凝血细 胞具有典型细胞形态和结构，比红细胞稍小，两端钝圆，核呈椭圆 形．染色质致密．其他细胞与家畜的血细胞相似．
人 血 涂 片
3.鱼类血涂片
１）红细胞，呈椭圆形，中央有一椭圆形的细胞核．
２）中性粒细胞，又称嗜性粒细胞，圆形，有2～5个分叶核．
三、实验用品
1．材料
鲫鱼
2．试剂
1)carnoy固定液(无水乙醇：氯仿：冰醋酸按6：3：1配制) 一次要配制1L. 2)0.1%碱性坚牢绿染液：取0.1 g坚牢绿加入100毫升蒸馏 水，再加少量0.1M NaoH 调节pH至8.0-8.1. 3)5% 三氯醋酸 4)70%乙醇 5)香柏油
3．器材
A液（0.2mol/L乙酸液）：冰醋酸1.2ml加蒸馏水100ml 。 B液（0.2mol/L乙酸钠液）：NaAc.3H2O 2.72g加蒸馏 水至１00毫升。 取A液３０毫升＋B液70毫升＋蒸馏水300毫升。 6)6%淀粉肉汤:牛肉膏0.3g ,蛋白胨1.0g,NaCl 0.5g,可溶性 淀粉６.0g，蒸馏水１00ml，煮沸灭菌，４℃保存，使 用时热水浴融化。 3.仪器、 用具：注射器、恒温水箱、显微镜、擦镜纸、 解剖盘、解剖剪、盖玻片、吸水纸。
对照片
不进入5％三氯醋酸中抽提出核酸。其他步骤同 上。.
五、实验中注意事项
(1)用5%TCA提取DNA是该实验中的关键。 DNA必须 被提取，以使染色质的负电荷下降，用热TCA提取核 酸后，酸性染料（固绿）在碱性pH下，碱性蛋白可以 选择性地被染色，如未被提取，不能染色，或整个切 片染成蓝绿色，水洗或进入酒精即褪色。 (2)染液pH必须高（ pH8.0~8.1），从而使其他蛋白质 染色极微。
3.小鼠的处死
脊柱脱臼法 用左手拇指和食指捏住小白鼠头的后部，并用力下 压，右手抓住鼠尾，用力向后上方拉，即可使颈椎脱臼，瞬间 死亡 。 皮肤和腹膜要分别剪开，并确保皮肤血液 不流入腹腔。 腹腔内的冲洗液要全部吸干。
六、实验结果与分析
巨噬细胞的细胞质中，出现许多棕色或棕 黑色的颗粒和斑块。部分细胞内，酸性磷 酸酶极为丰富。整个细胞质区域都有黑色腹腔注射可以用5ml的注射器，配合5.5～7号针头。
2. 腹腔注射时右手持注射器，左手的小指和无名指抓住小鼠的 尾巴，另外三个手指抓住小鼠的颈部，使小鼠的头部向下。这 样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大 肠、小肠等器官。进针的动作要轻柔，防止刺伤腹部器官。 3. 尤其是对于体重较小的小鼠，腹腔注射时针头可以在腹部皮 下穿行一小段距离，最好是从腹部一侧进针，穿过腹中线后在 腹部的另一侧进入腹腔，注射完药物后，缓缓拔出针头，并轻 微旋转针头，防止漏液。
三、实验材料、试剂和仪器
1.材料
小白鼠
2.试剂
1)甲醛钙固定液：甲醛10ml,10%氯化钙 10ml,蒸馏水 80毫升。 2)酸性磷酸酶作用液:称取硝酸铅25mg,加0.05mol/L 乙酸缓冲液22.5ml,搅动使之全部溶解后,再缓慢地 滴加3% β -甘油磷酸钠液2.5ml,边加边搅动防止产 生沉淀,总量25ml.(现配制,不能储存) 。 3)2％硫化铵溶液：硫酸铵2毫升＋98毫升水。 4)0.05mol／L乙酸缓冲液。
铅离子的浓度作用时间?作用液中铅离子的浓度是至关重要的必须现配现用当铅离子浓度过低时产生的磷酸离子不能被捕捉而引起弥散并可进入细胞核内造成细胞核染色的假阳性孵育时间过长也可发生酶扩散和核染色的现象
细胞化学与组织化学实验须知
1．自觉遵守课堂纪律,维持课堂秩序,不迟到、不 早退,保持整洁、安静、有序的实验环境。 2．认真预习实验课内容熟悉实验目的、原理和方 法，了解所需使用仪器。 3．实验台面保持整洁，书包等物品按规定放置整 齐，仪器、药品摆放整齐、有序，公用试剂用毕, 物归原处。地面及水池内不得乱丢废物。 4．使用药品、试剂和各种药品注意节约，爱护器 材。洗涤和使用仪器时应仔细，防止损坏仪器。 严格遵守 仪操作规程，在未知正确操作程序时， 不要独自使用，须在老师的指导下进行。
3.对照实验:
标本放入作用液前先用高温（50℃）处理30min, 使酶失去活性，做好标记，其它步骤同上3-7步。
五、实验中的注意事项
1.铅离子的浓度，作用时间
作用液中铅离子的浓度是至关重要的，必须现配现用，当铅 离子浓度过低时产生的磷酸离子不能被捕捉而引起弥散，并 可进入细胞核内造成细胞核染色的假阳性，孵育时间过长也 可发生酶扩散和核染色的现象．
实验三、 细胞中酸性磷酸酶的定位
南昌大学生命科学与食品工程学院 范 丽 华
一、实验目的
1.了解并掌握酸性磷酸酶定位的原理及操作 步骤。 2.观察酸性磷酸酶在细胞中的分布。
二、实验原理
酸性磷酸酶（ACP）是溶酶体的特征性酶，主 要存在于巨噬细胞,定位于溶酶体内。正常条件下, 巨噬细胞处于休止状态,酶活性很低。但在合适的 pH条件下，经过活化，其形态、代谢和功能上表 现出一系列显著的变化， 如膜活性增高和酸性磷 酸酶活性增强，从而改变其渗透性底物可以渗入, 酶活力被显示。
嗜酸性粒细胞：比中性粒细胞略大，数量少，胞核常分两叶． 嗜碱性粒细胞：数量很少体积与嗜酸性粒细胞相近或略小．胞核呈 Ｓ形或双叶状． 单核细胞：是白细胞中体积最大的一种，胞核呈肾形，马蹄形或不 规则形．细胞质丰富． 血小板：体积小，常三五成群散布在红细胞中． ２．家禽血涂片．鸡血的有形成分与其他家畜比较有以下不同: １）红细胞，呈椭圆形，中央有一椭圆形的细胞核．
在高等动物中存在大小两类吞噬细胞（巨噬细胞和嗜中性粒细 胞），专司吞噬作用，在细胞的非特异免疫功能中发挥重要作 用。
1.单核细胞
单核细胞来自骨髓的前单核细胞，发育成熟后释放到血液中。 血液中单核细胞已向全身各组织并进一步分化成各种组织的巨噬 细胞。血液中单核细胞为圆形或椭圆形，直径14-20微米，在形态 上很难和其他独核细胞相区分。胞质中含有嗜天青颗粒，它是一 种溶酶体，其中含有过氧化物酶，酸性磷酸酶，非特异性酯酶和 溶菌酶等，这些酶与单核细胞的杀伤和消化功能有关。单核吞噬 细胞在血液中约占白细胞的1%-3%，其在血液中的半衰期约为810个小时，一旦进入组织分化为巨噬细胞后，其生命周期可长达 数月至数年。
5．实验废弃物、毒害性实验材料应倾倒在指定地 点，统一处置。 6．实验时一律穿工作服，不允许穿拖鞋进实验室， 以免溅落的腐蚀性药品或掉下的玻璃器皿伤 及裸露的皮肤。 7．节约水、电、气，燃气灯应随用随关。最后离 开实验室时，要将室内检查一遍，关好水、电、 气，锁好门窗。 8．实验室内一切物品，未经本室负责教师批准， 严禁携出室外。借物必须办登记手续。 9．实验结束，将实验记录交指导教师审阅并做好 室内清洁工作。
通常酸性磷酸酶在pH5.0左右发生作用，能分解磷 酸酯而释放出磷酸基，磷酸基能与铅盐反应形成磷 酸铅沉淀物。但因其是无色的，需再经过与硫化铵 作用，形成棕黄到棕黑色的硫化铅沉淀，由此能显 示酸性磷酸酶在细胞中的存在与分布。
反应如下：
β-甘油磷酸钠---β- 甘油 +PO4 3PO43-+Pb(NO3)2 -----Pb3(PO4)2（沉淀） Pb3(PO4)2 +(NH4)2S----PbS (棕黑色)
九、思考题
1.细胞内碱性蛋白显示的基本原理?
2.制作一张好的血涂片应掌握什么技巧? 3.家禽,家畜及鱼类的血细胞有何区别?
十、 实验报告要求
1.绘制自制血涂片中的各种血细胞。 2.示意出细胞中的碱性蛋白（组蛋白）的分布。 3.在每类细胞正下方标注该细胞名称及放大倍率， 并注明细胞膜，细胞质，核膜，用实心小圆点示 意碱性蛋白的分布。颜色用文字说明，禁用彩笔 描绘 。
四、实验方法与步骤
１.前处理
（１）小白鼠每日腹腔注射６％淀粉肉汤１ml， 连续注射３天．
（２）在第３－４天,再向腹腔注射１ml生理盐 水，过３～５min用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹 腔，吸取腹腔液．
２.制片
1.将腹腔液滴一滴于冰冻的干净载玻片上，涂开， 自然干燥。 2.放入作用液中，37℃ 保温30min 。 3.蒸馏水漂洗片刻。 4.放入甲醛钙固定液中固定5min 。 5.蒸馏水漂洗片刻。 6.放入2%硫化铵液3-5min 。 7.蒸馏水漂洗,镜检。
解剖盘，注射器，载玻片，显微镜,水浴锅等。
四、实验方法
1．将鲫鱼放入盘中，尾静脉取血,滴一滴血在干净载玻 片一端，推片，按此法制备二张血涂片，室温晾干。 2. 将涂片作好标记放在现配制的Carnoy固定液中固定10 分钟，室温晾干。 3．放入现配制的5％三氯醋酸中90℃(10-15分钟)，抽提 出核酸。 4. 将玻片放在70%乙醇中5-10分钟．清水冲洗多次（3分 钟以上），以冲去痕迹的三氯醋酸。 5．滤纸吸干玻片上水分。 6. 一张片放入0.1％碱性固绿(pH8.0～8.1)中染色15～20分 钟。 7．清水冲洗（3分钟），盖上盖片镜检。
六、血涂片的制作
１.取一滴鲫鱼新鲜的血液，置于玻片的一端，以左手 拿该片的两端，迅速用右手拿住另一载玻片的一端， 在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成 ４５°角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向 后推为一均匀的薄片。 ２.室温下自然晾干。待晾干后进入到Ｃａｒｎｏｙ固 定液中进行固定。 注意：在制作血涂片的过程中要用力均匀，避免来回 推拉及刮片．好的血涂片在显微镜下观察到的细胞应 成单层均匀排列。
实 验
报
告
格
式
实验(编号)(实验名称) 1.实验目的和要求 2.实验内容 3.实验原理 4.实验操作方法(或步骤) 5.实验结果与分析
实验一 细胞内碱性蛋白的显示 - 组蛋白的显示
南昌大学生命科学学院
主讲: 范 丽 华
一 、实验目的
掌握细胞内碱性蛋白的鉴别方法并了解碱性 蛋白在细胞内的分布。 学会制作血涂片并掌握制作技巧。
七、相关理论知识
１．家畜血涂片。低倍镜下观察可见大量圆形而细小的红
细胞。白细胞很少，稀疏地散布于红细胞之间，选白细胞较多 的部位（一般在血膜边缘和血膜尾部，因体积大的细胞常在此 出现） 。 红细胞:呈圆盘状,边缘厚,中间薄,无核。 中性粒细胞:是白细胞中较多的一种,体积比红细胞大,核呈杆状 (为幼稚型,胞核细长,弯曲盘绕成马蹄形,S形,W形或U形等多种 形态)或分叶状,一般分3~5叶或更多，跟该细胞年龄有关。 淋巴细胞：有大中小三种类型，其中小淋巴细胞最多，血膜上 很易看到，体积与红细胞相近．具核，核大而圆．大淋巴细胞 在正常细胞中不常见到，体积与单核细胞相近或略小，胞核圆 形，胞质较小淋巴细胞多。
七、相关理论知识
巨噬细胞（MΦ）发育：骨髓多能干细胞→定向干 细胞（髓样干细胞）→单核母细胞→前体单核细 胞→单核细胞→血液→组织（分化为巨噬细胞） MΦ分布：单核细胞主要于血液中，巨噬细胞几乎 存在于所有表皮和黏膜下组织。 MΦ形态：有伪足，马蹄状单核，细胞形体大。 MΦ分离纯化：小鼠和大鼠腹腔内有丰富的巨噬细 胞，可用腹腔清洗的方法获得较多细胞悬液。正 常小鼠每只可收集腹腔渗出细胞106，其中30%为 巨噬细胞，如果给小鼠腹腔注射某种刺激物，可 使巨噬细胞渗出增加，易于分离更多的巨噬细胞。
二、实验原理
由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目 不同，在pH值不同的溶液中，蛋白质分子所带的净电 荷多少不同。如在生理条件下，整个蛋白质所带负电 荷多，则为酸性蛋白质；带正电荷多，则为碱性蛋白 质。据此，可将标本经三氯醋酸处理提出核酸后用不 同pH值的固绿染液分别染色，细胞内的酸性蛋白和碱 性蛋白质显示出来。
血栓细胞
成熟红细胞
鱼血细胞图
小淋巴细胞
大淋巴细胞
淋巴细胞
嗜 中 性 粒 细 胞
单 核 细 胞
八、实验结果
经碱性固绿染色片中，胞质、核仁不着色,细胞核大 部分被染成绿色，是为碱性蛋白质存在处。经酸性 固绿染色片中，因胞质和核仁中有酸性蛋白，被染 成绿色。
２）中性粒细胞，又称嗜性粒细胞，圆形，有2～5个分叶核．
３）凝血细胞，又称血栓细胞，相当于其他家畜的血小板；凝血细 胞具有典型细胞形态和结构，比红细胞稍小，两端钝圆，核呈椭圆 形．染色质致密．其他细胞与家畜的血细胞相似．
人 血 涂 片
3.鱼类血涂片
１）红细胞，呈椭圆形，中央有一椭圆形的细胞核．
２）中性粒细胞，又称嗜性粒细胞，圆形，有2～5个分叶核．
三、实验用品
1．材料
鲫鱼
2．试剂
1)carnoy固定液(无水乙醇：氯仿：冰醋酸按6：3：1配制) 一次要配制1L. 2)0.1%碱性坚牢绿染液：取0.1 g坚牢绿加入100毫升蒸馏 水，再加少量0.1M NaoH 调节pH至8.0-8.1. 3)5% 三氯醋酸 4)70%乙醇 5)香柏油
3．器材
A液（0.2mol/L乙酸液）：冰醋酸1.2ml加蒸馏水100ml 。 B液（0.2mol/L乙酸钠液）：NaAc.3H2O 2.72g加蒸馏 水至１00毫升。 取A液３０毫升＋B液70毫升＋蒸馏水300毫升。 6)6%淀粉肉汤:牛肉膏0.3g ,蛋白胨1.0g,NaCl 0.5g,可溶性 淀粉６.0g，蒸馏水１00ml，煮沸灭菌，４℃保存，使 用时热水浴融化。 3.仪器、 用具：注射器、恒温水箱、显微镜、擦镜纸、 解剖盘、解剖剪、盖玻片、吸水纸。
对照片
不进入5％三氯醋酸中抽提出核酸。其他步骤同 上。.
五、实验中注意事项
(1)用5%TCA提取DNA是该实验中的关键。 DNA必须 被提取，以使染色质的负电荷下降，用热TCA提取核 酸后，酸性染料（固绿）在碱性pH下，碱性蛋白可以 选择性地被染色，如未被提取，不能染色，或整个切 片染成蓝绿色，水洗或进入酒精即褪色。 (2)染液pH必须高（ pH8.0~8.1），从而使其他蛋白质 染色极微。
3.小鼠的处死
脊柱脱臼法 用左手拇指和食指捏住小白鼠头的后部，并用力下 压，右手抓住鼠尾，用力向后上方拉，即可使颈椎脱臼，瞬间 死亡 。 皮肤和腹膜要分别剪开，并确保皮肤血液 不流入腹腔。 腹腔内的冲洗液要全部吸干。
六、实验结果与分析
巨噬细胞的细胞质中，出现许多棕色或棕 黑色的颗粒和斑块。部分细胞内，酸性磷 酸酶极为丰富。整个细胞质区域都有黑色腹腔注射可以用5ml的注射器，配合5.5～7号针头。
2. 腹腔注射时右手持注射器，左手的小指和无名指抓住小鼠的 尾巴，另外三个手指抓住小鼠的颈部，使小鼠的头部向下。这 样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大 肠、小肠等器官。进针的动作要轻柔，防止刺伤腹部器官。 3. 尤其是对于体重较小的小鼠，腹腔注射时针头可以在腹部皮 下穿行一小段距离，最好是从腹部一侧进针，穿过腹中线后在 腹部的另一侧进入腹腔，注射完药物后，缓缓拔出针头，并轻 微旋转针头，防止漏液。
三、实验材料、试剂和仪器
1.材料
小白鼠
2.试剂
1)甲醛钙固定液：甲醛10ml,10%氯化钙 10ml,蒸馏水 80毫升。 2)酸性磷酸酶作用液:称取硝酸铅25mg,加0.05mol/L 乙酸缓冲液22.5ml,搅动使之全部溶解后,再缓慢地 滴加3% β -甘油磷酸钠液2.5ml,边加边搅动防止产 生沉淀,总量25ml.(现配制,不能储存) 。 3)2％硫化铵溶液：硫酸铵2毫升＋98毫升水。 4)0.05mol／L乙酸缓冲液。
铅离子的浓度作用时间?作用液中铅离子的浓度是至关重要的必须现配现用当铅离子浓度过低时产生的磷酸离子不能被捕捉而引起弥散并可进入细胞核内造成细胞核染色的假阳性孵育时间过长也可发生酶扩散和核染色的现象
细胞化学与组织化学实验须知
1．自觉遵守课堂纪律,维持课堂秩序,不迟到、不 早退,保持整洁、安静、有序的实验环境。 2．认真预习实验课内容熟悉实验目的、原理和方 法，了解所需使用仪器。 3．实验台面保持整洁，书包等物品按规定放置整 齐，仪器、药品摆放整齐、有序，公用试剂用毕, 物归原处。地面及水池内不得乱丢废物。 4．使用药品、试剂和各种药品注意节约，爱护器 材。洗涤和使用仪器时应仔细，防止损坏仪器。 严格遵守 仪操作规程，在未知正确操作程序时， 不要独自使用，须在老师的指导下进行。
3.对照实验:
标本放入作用液前先用高温（50℃）处理30min, 使酶失去活性，做好标记，其它步骤同上3-7步。
五、实验中的注意事项
1.铅离子的浓度，作用时间
作用液中铅离子的浓度是至关重要的，必须现配现用，当铅 离子浓度过低时产生的磷酸离子不能被捕捉而引起弥散，并 可进入细胞核内造成细胞核染色的假阳性，孵育时间过长也 可发生酶扩散和核染色的现象．
实验三、 细胞中酸性磷酸酶的定位
南昌大学生命科学与食品工程学院 范 丽 华
一、实验目的
1.了解并掌握酸性磷酸酶定位的原理及操作 步骤。 2.观察酸性磷酸酶在细胞中的分布。
二、实验原理
酸性磷酸酶（ACP）是溶酶体的特征性酶，主 要存在于巨噬细胞,定位于溶酶体内。正常条件下, 巨噬细胞处于休止状态,酶活性很低。但在合适的 pH条件下，经过活化，其形态、代谢和功能上表 现出一系列显著的变化， 如膜活性增高和酸性磷 酸酶活性增强，从而改变其渗透性底物可以渗入, 酶活力被显示。
嗜酸性粒细胞：比中性粒细胞略大，数量少，胞核常分两叶． 嗜碱性粒细胞：数量很少体积与嗜酸性粒细胞相近或略小．胞核呈 Ｓ形或双叶状． 单核细胞：是白细胞中体积最大的一种，胞核呈肾形，马蹄形或不 规则形．细胞质丰富． 血小板：体积小，常三五成群散布在红细胞中． ２．家禽血涂片．鸡血的有形成分与其他家畜比较有以下不同: １）红细胞，呈椭圆形，中央有一椭圆形的细胞核．
在高等动物中存在大小两类吞噬细胞（巨噬细胞和嗜中性粒细 胞），专司吞噬作用，在细胞的非特异免疫功能中发挥重要作 用。
1.单核细胞
单核细胞来自骨髓的前单核细胞，发育成熟后释放到血液中。 血液中单核细胞已向全身各组织并进一步分化成各种组织的巨噬 细胞。血液中单核细胞为圆形或椭圆形，直径14-20微米，在形态 上很难和其他独核细胞相区分。胞质中含有嗜天青颗粒，它是一 种溶酶体，其中含有过氧化物酶，酸性磷酸酶，非特异性酯酶和 溶菌酶等，这些酶与单核细胞的杀伤和消化功能有关。单核吞噬 细胞在血液中约占白细胞的1%-3%，其在血液中的半衰期约为810个小时，一旦进入组织分化为巨噬细胞后，其生命周期可长达 数月至数年。
5．实验废弃物、毒害性实验材料应倾倒在指定地 点，统一处置。 6．实验时一律穿工作服，不允许穿拖鞋进实验室， 以免溅落的腐蚀性药品或掉下的玻璃器皿伤 及裸露的皮肤。 7．节约水、电、气，燃气灯应随用随关。最后离 开实验室时，要将室内检查一遍，关好水、电、 气，锁好门窗。 8．实验室内一切物品，未经本室负责教师批准， 严禁携出室外。借物必须办登记手续。 9．实验结束，将实验记录交指导教师审阅并做好 室内清洁工作。
通常酸性磷酸酶在pH5.0左右发生作用，能分解磷 酸酯而释放出磷酸基，磷酸基能与铅盐反应形成磷 酸铅沉淀物。但因其是无色的，需再经过与硫化铵 作用，形成棕黄到棕黑色的硫化铅沉淀，由此能显 示酸性磷酸酶在细胞中的存在与分布。
反应如下：
β-甘油磷酸钠---β- 甘油 +PO4 3PO43-+Pb(NO3)2 -----Pb3(PO4)2（沉淀） Pb3(PO4)2 +(NH4)2S----PbS (棕黑色)
九、思考题
1.细胞内碱性蛋白显示的基本原理?
2.制作一张好的血涂片应掌握什么技巧? 3.家禽,家畜及鱼类的血细胞有何区别?
十、 实验报告要求
1.绘制自制血涂片中的各种血细胞。 2.示意出细胞中的碱性蛋白（组蛋白）的分布。 3.在每类细胞正下方标注该细胞名称及放大倍率， 并注明细胞膜，细胞质，核膜，用实心小圆点示 意碱性蛋白的分布。颜色用文字说明，禁用彩笔 描绘 。
四、实验方法与步骤
１.前处理
（１）小白鼠每日腹腔注射６％淀粉肉汤１ml， 连续注射３天．
（２）在第３－４天,再向腹腔注射１ml生理盐 水，过３～５min用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹 腔，吸取腹腔液．
２.制片
1.将腹腔液滴一滴于冰冻的干净载玻片上，涂开， 自然干燥。 2.放入作用液中，37℃ 保温30min 。 3.蒸馏水漂洗片刻。 4.放入甲醛钙固定液中固定5min 。 5.蒸馏水漂洗片刻。 6.放入2%硫化铵液3-5min 。 7.蒸馏水漂洗,镜检。
解剖盘，注射器，载玻片，显微镜,水浴锅等。
四、实验方法
1．将鲫鱼放入盘中，尾静脉取血,滴一滴血在干净载玻 片一端，推片，按此法制备二张血涂片，室温晾干。 2. 将涂片作好标记放在现配制的Carnoy固定液中固定10 分钟，室温晾干。 3．放入现配制的5％三氯醋酸中90℃(10-15分钟)，抽提 出核酸。 4. 将玻片放在70%乙醇中5-10分钟．清水冲洗多次（3分 钟以上），以冲去痕迹的三氯醋酸。 5．滤纸吸干玻片上水分。 6. 一张片放入0.1％碱性固绿(pH8.0～8.1)中染色15～20分 钟。 7．清水冲洗（3分钟），盖上盖片镜检。
六、血涂片的制作
１.取一滴鲫鱼新鲜的血液，置于玻片的一端，以左手 拿该片的两端，迅速用右手拿住另一载玻片的一端， 在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成 ４５°角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向 后推为一均匀的薄片。 ２.室温下自然晾干。待晾干后进入到Ｃａｒｎｏｙ固 定液中进行固定。 注意：在制作血涂片的过程中要用力均匀，避免来回 推拉及刮片．好的血涂片在显微镜下观察到的细胞应 成单层均匀排列。
实 验
报
告
格
式
实验(编号)(实验名称) 1.实验目的和要求 2.实验内容 3.实验原理 4.实验操作方法(或步骤) 5.实验结果与分析
实验一 细胞内碱性蛋白的显示 - 组蛋白的显示
南昌大学生命科学学院
主讲: 范 丽 华
一 、实验目的
掌握细胞内碱性蛋白的鉴别方法并了解碱性 蛋白在细胞内的分布。 学会制作血涂片并掌握制作技巧。
七、相关理论知识
１．家畜血涂片。低倍镜下观察可见大量圆形而细小的红
细胞。白细胞很少，稀疏地散布于红细胞之间，选白细胞较多 的部位（一般在血膜边缘和血膜尾部，因体积大的细胞常在此 出现） 。 红细胞:呈圆盘状,边缘厚,中间薄,无核。 中性粒细胞:是白细胞中较多的一种,体积比红细胞大,核呈杆状 (为幼稚型,胞核细长,弯曲盘绕成马蹄形,S形,W形或U形等多种 形态)或分叶状,一般分3~5叶或更多，跟该细胞年龄有关。 淋巴细胞：有大中小三种类型，其中小淋巴细胞最多，血膜上 很易看到，体积与红细胞相近．具核，核大而圆．大淋巴细胞 在正常细胞中不常见到，体积与单核细胞相近或略小，胞核圆 形，胞质较小淋巴细胞多。
七、相关理论知识
巨噬细胞（MΦ）发育：骨髓多能干细胞→定向干 细胞（髓样干细胞）→单核母细胞→前体单核细 胞→单核细胞→血液→组织（分化为巨噬细胞） MΦ分布：单核细胞主要于血液中，巨噬细胞几乎 存在于所有表皮和黏膜下组织。 MΦ形态：有伪足，马蹄状单核，细胞形体大。 MΦ分离纯化：小鼠和大鼠腹腔内有丰富的巨噬细 胞，可用腹腔清洗的方法获得较多细胞悬液。正 常小鼠每只可收集腹腔渗出细胞106，其中30%为 巨噬细胞，如果给小鼠腹腔注射某种刺激物，可 使巨噬细胞渗出增加，易于分离更多的巨噬细胞。
二、实验原理
由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目 不同，在pH值不同的溶液中，蛋白质分子所带的净电 荷多少不同。如在生理条件下，整个蛋白质所带负电 荷多，则为酸性蛋白质；带正电荷多，则为碱性蛋白 质。据此，可将标本经三氯醋酸处理提出核酸后用不 同pH值的固绿染液分别染色，细胞内的酸性蛋白和碱 性蛋白质显示出来。