感受态细胞制备流程之欧阳索引创编
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感受态细胞的制备：
1.
欧阳家百（2021.03.07）
2.以1:100的比例吸取过夜菌液（250ul）加入25ml LB液体培养基中，37℃，200r/min振荡培养2-3h至OD600达到0.5左右（OD600范围0.4-0.6）。
3.将25ml菌液移至预冷的50ml聚丙烯离心管中，在冰上放置30min，使培养物冷却到0℃。
4.于4℃，以4000rpm离心10min，回收细胞。
5.倒出培养液，将管倒置1min（于滤纸/吸水纸上），使最后残留的痕量培养液流尽。
6.每50ml菌液用10ml预冷的0.1mol/L的CaCl2，重悬每份沉淀，放置于冰浴上30min。
7.于4℃，以4000rpm 离心10min，回收细胞。
8.倒出培养液，将管倒置1min（于滤纸/吸水纸上），使最后残留的痕量培养液流尽。
9.每50ml初始培养物用2ml 用冰预冷的0.1mol/L的CaCl2（含15%甘油）重悬每份细胞沉淀。
10.在冰上将细胞分装成小份，100ul/份，防御-70℃冻存。
11.如果当天要用，最好将制好的感受态细胞在4℃放置4h后再用，效果较好。
制备好的感受态细胞在4℃放置24-48h内使用，不影响效果。
感受态细胞制备流程图：
过夜菌250ul加入25ml LB液体培养基37℃，200r/min 振荡培养2-3h OD600测
达0.5左右转移至50ml聚丙烯离心管冰上放置30min 培养物到0℃
4℃，4000rpm ，离心10min 回收细胞弃培养液倒置放置1min 加入
5ml 0.1mol/LCaCl2 悬浮细胞沉淀，冰上放30min 4℃，4000rpm ，离心10min 回收细胞
弃培养液倒置放置1min 加入1ml预冷0.1mol/LCaCl2（含15%甘油）悬浮细
胞沉淀冰上分装，10ul/份70℃冻存（当天实验4℃放置4h，最多可放置48h）。