油红染色方法

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油红染色方法
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原代细胞的脂类染色方法苏丹红Ⅲ染色法原理：
苏丹红染料在脂类物质中的溶解度大于其在溶剂中的溶解度，如果染料与含有脂类的试样接触，便有大量染料进入脂类物质的结构内，使这些结构呈红色。

多用苏丹红染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色，使脂质呈色。

也可用四氧化锇染色，脂肪酸或胆碱可使四氧化锇还原为二氧化锇而呈黑色。

配制试剂：
1.苏丹红Ⅲ染色液：将1g苏丹红Ⅲ溶于加温的70%乙醇溶液中过滤备用；
2.甲醛钙固定液：将10ml甲醛和1g CaCl2混合加水至100ml；
3.甘油明胶：将12g明胶加入120ml蒸馏水中水浴加热使其完全溶解，再加入60ml甘油和1g苯酚，充分混匀后即得。

于4℃储存备用；
染色步骤：
1.用Hanks液漂洗盖玻片3次；
2.用甲醛钙固定液固定20min；
3.用蒸馏水漂洗盖玻片3次；
4.用70%乙醇将盖玻片冲洗3次；
5.用苏丹红Ⅲ染色液覆盖盖片样品，染色10―30min；
6.用70%乙醇漂洗盖片3次；
7.用甘油明胶封片后观察；
结果：
原代细胞含脂类的区域呈橘红色；
1.染色液的配制
材料：油红染料棕色可密封瓶异丙醇研钵漏斗定性滤纸
称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封（或锡箔纸包裹避光）4℃保存，为储存液，可长期保存。

用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。

2.10%中性甲醛的配制
材料：中性甲醛（多聚甲醛）密封瓶
称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。

配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。

3.染色对象间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。

4.培养载体 3毫升培养瓶。

如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。

5.染色步骤：
5.1 先小心轻缓倒去培养夜。

5.2 用pbs轻缓漂洗（不洗没问题）。

5.3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。

固定液用95%酒精也可）。

固定的是细胞膜。

5.4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min （除去一些杂质，染色结果更清晰）。

5.5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。

5.6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。

5.7 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。

5.8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。

5.9 显微镜观察。

注意事项：
脂肪油红染色，有的是动物/人体脂肪组织切片，或细胞爬片。

各有操作差异。

以下是各论坛方法小结，不全。

1.完全成熟饱满的脂肪细胞，容易破裂，脂滴泄漏，所以压片，切片都要考虑到这个问题。

2.细胞爬片细胞溶液脱落，特别是脂滴大的。

操作务要轻柔。

不要把细胞冲掉。

3.如果做脂肪组织冰冻切片，冰冻温度比普通要低，切片厚度加厚。