秋葵茎的成分筛查及多糖活性研究

秋葵茎的成分筛查及多糖活性研究
目的以秋葵茎为原料,筛查秋葵茎中有效成分,并测定多糖、黄酮、蛋白质等有效成分的含量。

然后优化秋葵茎中多糖的提取和纯化工艺方法,并分析纯化后秋葵茎多糖的单糖组成,最后考察纯化秋葵茎多糖体外的抗氧化活性和体内降糖、保肝活性。

方法采用化学定性分析方法确定秋葵茎中的有效成分;采用苯酚-硫酸法、HPLC法、凯式定氮法、EDTA滴定法测定了秋葵茎中的多糖、黄酮、蛋白质、水溶性维生素、钙等成分含量;采用超声波辅助提取秋葵茎中的多糖,探讨了料液比、超声功率、超声温度及超声时间四个因素对秋葵茎多糖提取率的影响,结合正交实验设计确定了秋葵茎中多糖提取的最佳工艺;应用乙醇-硫酸铵双水相体系对
秋葵茎中的粗多糖进行纯化;柱前衍生HPLC色谱法分析了秋葵茎多糖的单糖组成;以维生素C为对照,采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH）法和羟自由基（·OH）法对纯化秋葵茎多糖的抗氧化活性进行研究。

采用四氧嘧啶腹腔注射法制造糖尿病小鼠模型,将造模成功的糖尿病小鼠分为五组,阴性对照组、阳性组（二甲双胍组）、秋葵多糖低、中、高剂量组,用正常小鼠做对照,灌胃给药,
测定各组小鼠的体重、空腹血糖值、血清中丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-P_X）含量,研究秋葵茎多糖的降糖活性;采用0.2%的
CCl₄橄榄油溶液造小鼠急性肝损伤模型,将造模成功的急性肝损伤
小鼠分为五组,阴性对照组、阳性组（联苯双酯组）、秋葵多糖低、中、高剂量组,用正常小鼠做对照,灌胃给药,测定各组小鼠的体重,并摘眼球采血,分离血清后
测定谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、球蛋白（GLB）、白蛋白（ALB）和总蛋白（TP）的含量,同时取肝脏测定肝组织匀浆中的谷胱甘肽
过氧化物酶（GSH-P_X）和丙二醛（MDA）含量,研究秋葵茎多糖保肝作用。

结果通过对秋葵茎中化学成分的筛查,经试验证实:秋葵茎中含有多糖、蛋白质、槲皮素、木犀草素、VC、VB₂、VB₃、钙等活性成分,其中含多糖45.52 mg·100g^-1、蛋白质35.13 mg·g^-1、钙120.28 mg·100g^-1,槲皮素57.2 mg·100g^-1、木犀草素61.8 mg·100g^-1,VC
26.99mg·100g^-1,VB₂ 9.59
mg·100g^-1,VB₃ 13.03 mg·100g^-1。

秋葵茎多糖的最佳提取工艺条件为:料液比1∶25,超声时间140 min,超声温度90℃,超声功率450W,是提取秋葵茎多糖的最佳条件,在此条件下秋葵茎多糖平均提取率为23.59%;纯化多糖的最佳乙醇-硫酸铵双水相体系为28%硫酸铵（w/w）、18%乙醇（w/w）和pH值6.8,其多糖收率达到83.75%,脱色率达63.28%,脱蛋白率达为57.92%。

由此所得的秋葵茎多糖组成有葡萄糖醛酸、木糖、岩藻糖、半乳糖醛酸和阿拉伯糖五种单糖。

体外抗氧化性研究结果表明:秋葵茎多糖和维生素C对·OH、DPPH自由基的半数清除率IC₅₀值分别为2.25 mg·mL^-1和0.67 mg·mL^-1、11.16 mg·mL^-1和0.005 mg·mL^-1;体内降糖活性研究结果表明:阴性对照组和秋葵多糖低剂量组与正常组小鼠相比,体重明显减轻（p<0.01）,血糖显著升高
（p<0.01）,MDA含量较高（p<0.05）,GSH-P_X活性明显更低（p<0.01）;秋葵茎多糖高、中剂量组与正常组相比,体重、血糖值、MDA含
量与GSH-P_X活性均无显著差异（p>0.05）。

秋葵茎多糖对CCl₄引起的急性肝损伤的保护作用的研究结果
表明:阴性组与正常组相比,小鼠的肝指数明显升高,血清TP、ALB、ALT、AST、ALP、GLB活力有极显著性差异（p<0.01）,肝组织中丙二醛（MDA）含量下降,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-P_X）活力上升（p<0.01）,证明造模成功。

秋葵茎多糖高、中剂量组及联苯双酯与阴性组相比,TP、ALB的活性显著升高,小鼠血清中ALT、AST、ALP、GLB活性显著降低。

肝组织MDA含量有所降低,GSH-P_X活力明显增强。

结论秋葵茎含有多糖、蛋白质、槲皮素、木犀草素、VC、VB₂、VB₃、钙等多种活性成分,且含量丰富。

采用超声波水提醇沉法能够有效的将多糖从秋葵茎中提取出来,工艺操作简单,省时省力。

采用乙醇-硫酸铵双水相体系的萃取工艺能有效的对多糖进行纯化,而且能够同时脱去蛋白和除去其中的色素。

纯化后的秋葵茎多糖的单糖组成包括葡萄糖醛酸、木糖、岩藻糖、半乳糖醛酸和阿拉伯糖五种,具有较强的抗氧化性,对CCl₄所致的急性肝损
伤有良好的保护作用,降血糖效果亦较强。

因此,秋葵茎是可被利用有开发价值的新资源。