血清学鉴定实验培训课件
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血清学诊断技术PPT课件
集,此孔稀释倍数为1个工作单位
12
中国农大动物医学院
鸡新城疫红细胞凝集试验（HA试验） (过程图)
孔号
1
稀释倍数
5
生理盐水（毫升） 4*
病毒液（毫升）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
10
20
40 80 160 320 640 1280
对照
25
25
25 25 25 25
25
25
25
25
25
25 25 25 25
3
中国农大动物医学院
三 器材 1.血凝板、 2.微量移液器 3.标准抗原 4.1%红细胞悬浮液 5.被检血清 6.稀释液
4
中国农大动物医学院
四 操作程序 （一）0.5％――１％红细胞的准备
1.阿氏液(抗凝剂)的配制
葡萄糖
1.866ｇ
柠檬酸钠 0.8ｇ
柠檬酸
0.055ｇ
氯化钠 0.418g
蒸馏水 100ml
15
中国农大动物医学院
2 操作步骤 (1) 每孔加25ul的稀释液: (2) 第1孔加25ul待检血清，反复吸吹10次; 吸取25ul于第 (3) 2孔，以此类推倍比稀释至第11孔; 最后从第11孔取2 (4) 5ul弃去,第12孔为抗原对照; (3) 每孔加4单位抗原;室温下( 18-22℃)作用30分 (4) 取1％红细胞25ul加于各孔中 (5) 将血凝板振荡1分钟 (6) 室温作用30-45分钟（禽流感 37℃）观察结果 (7) 结果判定 将血凝板呈45°竖起观察
5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白 细胞薄膜，将沉淀的细胞加稀释液（生理盐水）洗 涤，再用离心机3000转/分钟离心5-10分钟，充 去上清液，再加稀释液洗涤，
《临床检验课件-血清学方法》
间接Байду номын сангаас查血清法
间接检查血清中的物质，例如通过血清中的抗体 来检测抗原。
血清学方法在临床检验中的应用
1
药物监测
2
血清学方法可以监测药物在体内的浓度，
帮助医生确定药物治疗的剂量和频率。
3
疾病诊断
血清学方法能够帮助医生诊断各种疾病， 例如感染性疾病和自身免疫性疾病。
免疫学研究
血清学方法在免疫学研究中有广泛的应 用，例如检测抗体水平和细胞免疫功能。
《临床检验课件——血清 学方法》
这个课件将介绍血清学方法的定义、分类、直接和间接检查血清法、在临床 检验中的应用以及优缺点。通过本课件的学习，您将对血清学方法有全面的 了解。
血清学方法的定义
血清学方法是临床检验中用于研究血清中特定物质的一种方法。
血清学方法的分类
直接检查血清法
直接检查血清中的物质，例如抗体或抗原。
血清学方法的优缺点
1 优点
非侵入性且易于操作，提供准确和可重复的 结果。
2 缺点
有些血清学方法的结果可能受到其他因素的 干扰，例如感染状态或免疫状况的变化。
结论和要点
• 血清学方法是研究血清中特定物质的重要工具。 • 血清学方法可用于疾病诊断、药物监测和免疫学研究。 • 血清学方法具有优点和缺点，需要根据具体情况进行选择。
实验八血清学实验PPT幻灯片
【实验目的】
❖ 掌握人体血型的测定方法，同时了解 自己的血型
❖ 观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型 鉴定的原理
❖ 熟悉沉淀反应中双向免疫扩散、对流 电泳和免疫比浊的原理、操作方法和 用途
【实验原理】
❖ 一、凝集反应
❖ 血型是指红细胞的血型，是根据红细胞膜 外表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞 膜上的糖蛋白和糖脂）来确定的，这种抗 原或凝集原是由遗传决定的。
❖ 停止电泳后，在与电泳方向平行的槽内加入 相应抗血清，使抗原和抗体呈双向扩散，已 分离的各抗原与相应抗体在琼脂中扩散而相 遇，在二者比例合适处形成肉眼可见的沉淀 弧。
【注意事项】
❖ 采血时注意消毒，采血针不可混用，避免污 染。
❖ 抗体和红细胞混合后，应即刻混匀，避免红 细胞粘附板底，影响凝集的观察。
❖ 抗体或凝集素存在于血清中，它与红细胞 的不同抗原起反应，发生凝集，最后溶解。 由于这种现象，临床上输血必须提前验血 型，以确保输血安全。
❖ 二、沉淀反应
❖ 血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶 性抗原与相应机体结合后出现沉淀物，此类 反应称为沉淀反应。沉淀反应中的抗原叫沉 淀原，与沉淀原发生反应的抗体叫沉淀素。
❖ 1、免疫扩散
❖ 根据沉淀线的有无、形状和位置对抗原或抗 体进行定性分析，也可用于抗体的半定量检 测。
○○ ○
三孔型
○○ ○○
双排孔型
○○
双孔型
○
❖ 免疫电泳是一种将区带电泳和双向免疫扩散 相结合的免疫化学分析技术。
❖ 先将抗原样品在琼脂平板上进行电泳，使其 中的各种成分因电泳迁移率的不同而被分离 成肉眼不可见的区带。
❖ 掌握人体血型的测定方法，同时了解 自己的血型
❖ 观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型 鉴定的原理
❖ 熟悉沉淀反应中双向免疫扩散、对流 电泳和免疫比浊的原理、操作方法和 用途
【实验原理】
❖ 一、凝集反应
❖ 血型是指红细胞的血型，是根据红细胞膜 外表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞 膜上的糖蛋白和糖脂）来确定的，这种抗 原或凝集原是由遗传决定的。
❖ 停止电泳后，在与电泳方向平行的槽内加入 相应抗血清，使抗原和抗体呈双向扩散，已 分离的各抗原与相应抗体在琼脂中扩散而相 遇，在二者比例合适处形成肉眼可见的沉淀 弧。
【注意事项】
❖ 采血时注意消毒，采血针不可混用，避免污 染。
❖ 抗体和红细胞混合后，应即刻混匀，避免红 细胞粘附板底，影响凝集的观察。
❖ 抗体或凝集素存在于血清中，它与红细胞 的不同抗原起反应，发生凝集，最后溶解。 由于这种现象，临床上输血必须提前验血 型，以确保输血安全。
❖ 二、沉淀反应
❖ 血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶 性抗原与相应机体结合后出现沉淀物，此类 反应称为沉淀反应。沉淀反应中的抗原叫沉 淀原，与沉淀原发生反应的抗体叫沉淀素。
❖ 1、免疫扩散
❖ 根据沉淀线的有无、形状和位置对抗原或抗 体进行定性分析，也可用于抗体的半定量检 测。
○○ ○
三孔型
○○ ○○
双排孔型
○○
双孔型
○
❖ 免疫电泳是一种将区带电泳和双向免疫扩散 相结合的免疫化学分析技术。
❖ 先将抗原样品在琼脂平板上进行电泳，使其 中的各种成分因电泳迁移率的不同而被分离 成肉眼不可见的区带。
血清学实验技术课件
•本质：间接凝集试验
•原理：不完全抗体(单价抗体)与颗粒抗原结合不出现可见凝集反应，用单价抗体免
疫动物,将获得的抗抗体与结合有单价抗体的颗粒载体混合，出现可见的凝集反应 •应用：初生动物自身免疫溶血性贫血诊断，布氏杆菌病的不完全抗体检测，抗组织细 胞不完全抗体的检测
Step 1 Step 2
+
不完全Ab
原分析和疾病诊断的基础；但不同微生物的 部分共同抗原或不同抗原的相同表位可出现 交叉反应，后者是区分血清型或亚型重要依 据
• 结合比例:抗原抗体结合在比例适当时才出现 明显可见反应,抗原或抗体过多可抑制可见反 应,称为带现象
• 可逆性:抗原抗体结合力与非共价键性质、数
量和距离有关,形成的复合物可以解离, 离解 常数(K)反映抗体与抗原之间的亲合力,高亲
=
颗粒性抗原 如：RBCs
+
=
Anti-AbFc
第14页，幻灯片共36页
沉淀试验分类
液体沉淀试验 沉淀试验
凝胶内沉淀试验
絮状沉淀试验 环状沉淀试验 免疫浊度测定
免疫扩散试验 免疫电泳 对流免疫电泳 火箭免疫电泳
第15页，幻灯片共36页
环状沉淀试验
• 在小口径玻璃管内进行 • 主要用于抗原的定性检测(如诊断
• 分类 • 凝集试验：细菌、红细胞等颗粒性抗原或与颗粒性载体
（红细胞、乳胶等）结合的可溶性抗原与相应抗体结合， 在电解质参与下形成肉眼可见的凝集团块 • 沉淀试验：可溶性抗原与相应抗体结合，在电解质参与 下形成肉眼可见的沉淀物
第8页，幻灯片共36页
凝集试验分类
直接凝集性试验 凝集性试验 间接凝集性试验
(Enzyme-linked immunosorbant assay, ELISA)
•原理：不完全抗体(单价抗体)与颗粒抗原结合不出现可见凝集反应，用单价抗体免
疫动物,将获得的抗抗体与结合有单价抗体的颗粒载体混合，出现可见的凝集反应 •应用：初生动物自身免疫溶血性贫血诊断，布氏杆菌病的不完全抗体检测，抗组织细 胞不完全抗体的检测
Step 1 Step 2
+
不完全Ab
原分析和疾病诊断的基础；但不同微生物的 部分共同抗原或不同抗原的相同表位可出现 交叉反应，后者是区分血清型或亚型重要依 据
• 结合比例:抗原抗体结合在比例适当时才出现 明显可见反应,抗原或抗体过多可抑制可见反 应,称为带现象
• 可逆性:抗原抗体结合力与非共价键性质、数
量和距离有关,形成的复合物可以解离, 离解 常数(K)反映抗体与抗原之间的亲合力,高亲
=
颗粒性抗原 如：RBCs
+
=
Anti-AbFc
第14页，幻灯片共36页
沉淀试验分类
液体沉淀试验 沉淀试验
凝胶内沉淀试验
絮状沉淀试验 环状沉淀试验 免疫浊度测定
免疫扩散试验 免疫电泳 对流免疫电泳 火箭免疫电泳
第15页，幻灯片共36页
环状沉淀试验
• 在小口径玻璃管内进行 • 主要用于抗原的定性检测(如诊断
• 分类 • 凝集试验：细菌、红细胞等颗粒性抗原或与颗粒性载体
（红细胞、乳胶等）结合的可溶性抗原与相应抗体结合， 在电解质参与下形成肉眼可见的凝集团块 • 沉淀试验：可溶性抗原与相应抗体结合，在电解质参与 下形成肉眼可见的沉淀物
第8页，幻灯片共36页
凝集试验分类
直接凝集性试验 凝集性试验 间接凝集性试验
(Enzyme-linked immunosorbant assay, ELISA)
血清学实验教学PPT课件
免疫学（分子免疫学）
血清学反应的实质
抗原抗体结合反应
•在体内表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和
毒素等作用，有时亦可引起免疫病理损伤。 •在体外，由于参与反应的抗原物理性状以及 反应条件的不同，可出现凝集、沉淀、细胞 溶解和补体结合等反应。
血清学实验的基本原理
分子表面结合（非共价键结合） 亲水胶体转化为疏水胶体
建立细胞免疫学说 建立体液免疫学说
血清学实验
免疫学（抗感染免疫）
1945年 1948年 1953年 1956年
R.Owen 同卵双生的两只小牛的不同血型可以相互耐受 C.Snell 发现组织相容性抗原 R.Billingham 成功进行了人工耐受试验 Witebsky 建立自身免疫动物模型
免疫学
1980′s~ 发现众多细胞因子， 受体、基因及其生物活性研究
水化膜
电荷
血清学反应的特点
特异性 可逆性 比例性 反应的阶段性
特异性结合阶段
可见反应阶段
影响血清学反应的因素
抗原抗体本身的性质 电解质 酸碱度 温度
血清学反应的优缺点
不需要特殊仪器设备，操作简便。 灵敏度低，绝大多数为定性测定。
血清学试验的应用
传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病、 变态反应性疾病的确诊 疫苗免疫效果监测 人群免疫水平监测 生物活性物质的超微定量、物种及微生物 鉴定和分型 基因分离，克隆筛选，表达产物的定性、 定量分析和纯化等，已经成为现代分子生 物学研究的重要手段
血清学实验教学
血清学实验的建立及概念
1883年 俄国动物学家 1890年 德国医师、日本学者 1894年 比利时血清学家 1896年 H. Durham 1897年 R. Kraus 1900年 K. Landsteiner 1900年 J. Bordet 1900′s 英国医师
血清学反应的实质
抗原抗体结合反应
•在体内表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和
毒素等作用，有时亦可引起免疫病理损伤。 •在体外，由于参与反应的抗原物理性状以及 反应条件的不同，可出现凝集、沉淀、细胞 溶解和补体结合等反应。
血清学实验的基本原理
分子表面结合（非共价键结合） 亲水胶体转化为疏水胶体
建立细胞免疫学说 建立体液免疫学说
血清学实验
免疫学（抗感染免疫）
1945年 1948年 1953年 1956年
R.Owen 同卵双生的两只小牛的不同血型可以相互耐受 C.Snell 发现组织相容性抗原 R.Billingham 成功进行了人工耐受试验 Witebsky 建立自身免疫动物模型
免疫学
1980′s~ 发现众多细胞因子， 受体、基因及其生物活性研究
水化膜
电荷
血清学反应的特点
特异性 可逆性 比例性 反应的阶段性
特异性结合阶段
可见反应阶段
影响血清学反应的因素
抗原抗体本身的性质 电解质 酸碱度 温度
血清学反应的优缺点
不需要特殊仪器设备，操作简便。 灵敏度低，绝大多数为定性测定。
血清学试验的应用
传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病、 变态反应性疾病的确诊 疫苗免疫效果监测 人群免疫水平监测 生物活性物质的超微定量、物种及微生物 鉴定和分型 基因分离，克隆筛选，表达产物的定性、 定量分析和纯化等，已经成为现代分子生 物学研究的重要手段
血清学实验教学
血清学实验的建立及概念
1883年 俄国动物学家 1890年 德国医师、日本学者 1894年 比利时血清学家 1896年 H. Durham 1897年 R. Kraus 1900年 K. Landsteiner 1900年 J. Bordet 1900′s 英国医师
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3/11/2021
沙门氏菌的血清型鉴定步骤
1. 先用A~F多价O血清检查，确定菌株是否在A~F六个O群的范围内。
2. 再用代表六个O群的O因子血清检查，即O2（A）、O4（B）、O7（C1）、 O8（C2）、O9（D）、O3，10（E）、O11（F）。
3. 确定O群之后，分别用HA(a、b、c、d、i、z10、z29）HB、HC、HD四种 多价H血清检查。
凝集原——凝集素
玻片法
直接凝集反应 试管法
血清学鉴定实验
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3/11/2021
血清学鉴定
实验目的
掌握细菌的血清学鉴定法 。
血清学鉴定实验
10
3/11/2021
实验原理
根据抗原抗体反应具有高度特异性的特点， 用已知抗体来检测未知抗原（细菌）。
血清学鉴定实验
11
3/11/2021
实验材料
1.菌种 待检细菌 2.试剂 多价沙门菌O(A-F)诊断血清 3.其他 载玻片
侧链多糖的组成。
❖ H抗原:是一种蛋白质性鞭毛抗原，共 有63种，60 ℃加热30～60 mi3n/1及1/202酒1 精 作用均可破坏其抗原性，但能抵抗甲 醛。
❖ Vi抗原: 是一种N-乙酰-D-半乳糖胺糖 醛酸聚合物，60 ℃加热1 h即破坏其凝
集性和免疫原性。
血清学鉴定实验
14
沙门氏菌的主要抗原组成
血清学鉴定实验
7
3/11/2021
抗原抗体反应特点
反应的二阶段性 结合阶段-----反应发生快，几秒钟至几分钟 。 反应阶段-----较慢，需几分钟、几十分钟或更长时间 。
血清学鉴定实验
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3/11/2021
抗原抗体反应类凝型集--反---应凝集反应
颗粒性抗原（如细菌、红血球等）或吸附在乳 胶、白陶土、离子交换树脂和红细胞的抗原与 其特异性抗体结合后，在有电介质存在时，凝 聚成肉眼可见的凝集小块。
2
3/11/2021
细菌抗原
细菌血清的学鉴定各实验种抗原
3
3/11/2021
抗原抗体反应
抗原抗体反应（antigen-antibodyreaction）是指抗原与 相应抗体之间所发生的特异性结合反应。可发生于体内 （invivo），也可发生于体外(invitro)。体内反应可介导吞 噬、溶菌、杀菌、中和毒素等作用；体外反应则根据抗原的物 理性状、抗体的类型及参与反应的介质（例如电解质、补体、 固相载体等）不同，可出现凝集反应、沉淀反应、补体参与的 反应及中和反应等各种不同的反应类型。因抗体主要存在于血 清中，在抗原或抗体的检测中多采用血清作试验，所以体外抗 原抗体反应亦称为血清反应（erologicreaction）。
➢ 只有抗原与抗体呈适当比例时，才可出现可见的 结合反应。
➢ 当抗原过多或抗体过多，则抗原抗体的结合不能 形成大的复合物，因而抑制可见反应的出现，这 一现象称为带现象。
➢ 抗体过多出现的抑制现象称前带现象，而抗原过 多出现的抑制现象称后带现象。
➢ 为了克服带现象，在进行血清学试验时，需将抗
原或抗体作适当稀释。
例如:查考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表. 鼠伤寒沙门氏菌: O抗（1，4，[5]，12）， 第Ⅰ相H抗原（i） 第Ⅱ相H抗原(1,2)。
它的血清型应表示为:鼠伤寒沙门氏菌（ 1，4，[5]，12：i：1，2）
❖ [ ]内的O抗原可能存在或不存在。 ❖ [ ]内的H抗原可能是罕见的，正常情况下一般不存在。
O抗原：至少58种, 含相同抗原组分归为一组， 引起人类疾病的沙门菌大多数在A~F组。
H抗原：分为Ⅰ、Ⅱ相，Ⅰ相以a、b、c等表示， Ⅱ相以1、2、3等表示。
Vi抗原：抗原性弱，不稳定，可阻止O抗原与其 相应抗体的凝集反应。
血清学鉴定实验
15
3/11/2021
沙门氏菌菌型的表示方法
❖ 血清型以数字和字母表示.
血清学诊断：是指用已知细菌的特异性抗 原检测患者血清中相应抗体的方法，以诊 断感染性疾病。（用已知抗原检测血清中 的特异性抗体）
血清学鉴定：即采用含有已知特异性抗体 的免疫血清（诊断血清）与分离培养出的 未知纯种细菌或标本中的抗原进行血清学 反应，以确定病原菌的种或型。 （用已知 抗体鉴定未知的细菌或标本中的抗原）
反应的可逆性
抗原与抗体的结合为分子表面的结合，结合的适 宜温度为0～40℃、pH在4.0～9.0范围内。如温 度超过60℃或pH降到3.0以下，或加入解离剂台 硫氰化钾、尿素等，则抗原抗体复合物又可重新 解离，解离后的抗原或抗体性质不改变。
血清学鉴定实验
6
3/11/2021
抗原抗体反应特点
最适比和带现象
血清学鉴定实验
12
3/11/2021
沙门氏菌诊断血清（11种）
O2
O4
O7
O9
Ha
Hb
Hc
Hd
A-F群多价 A-F群多价
Hi
Vi
O
O
血清学鉴定实验
13
3/11/2021
O抗原、H抗原和Vi抗原
❖ O抗原:是一种沙门氏菌细胞壁表面的 耐热多糖抗原 ，100 ℃，2.5 h不被破 坏，它的特异性依赖于细胞壁脂多糖
血清学鉴定实验
16
3/11/2021
沙门氏菌的血清鉴定的方法
❖ 用O、H 和Vi因子血清与待检的菌株作玻片凝 聚试验。
1.先用O因子血清确定菌株所属的 O群及O抗原 的各种成分。
2.再用H因子血清检查其第1相和第2相的H抗原 以确定血清型。
3.必要时还要用Vi血清检查(目前有3种)。
血清学鉴定实验
血清学鉴定实验
4
3/11/2021
抗原抗体反应条件
1. 抗原 2. 抗体
3. 环境因素： （1）电介质：0.85%NaCI；
（2）温度：37或56 （3）pH值：7.0
（4）振荡：适当的机械振 （5）反应时间
血清学鉴ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ实验
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3/11/2021
抗原抗体反应的特点
特异性和交叉性
若两种抗原之间含有部分共同抗原时，则发生交 叉反应。亲缘关系越近，交叉反应的程度也越高 。
血清学鉴定实验
1
3/11/2021
微生物抗原成分-----细菌抗原成分
菌体抗原:革兰氏阴性菌的菌体抗原称O抗原--脂多糖蛋白质的复合物
鞭毛抗原称为H抗原
表面抗原:不同细菌的表抗原名称不同.大肠杆
菌的表面抗原称为封套抗原或K抗原,肺炎双球菌
的叫荚膜抗原,伤寒沙门氏菌的表面抗原称为Vi
抗原
血清学鉴定实验
4. 用3.所确定的多价H血清所包括的所有H因子血清逐一检查定为第1相或 第2相H抗原。
5. 检出第1相H抗原而未检出第2相H抗原，或检出第2相H抗原而未检出第1 相H抗原的，要用位相变异的方法再检查其另一个相。单相菌不必作位 相变异检查。