(完整版)第14章 临床免疫检验的自动化分析

目录
第三节 荧光免疫测定的自动化分析 一、时间分辨荧光免疫测定的自动化分析 二、荧光偏振免疫测定的自动化分析 第四节 酶联免疫测定的自动化分析 第五节 临床免疫检验自动化分析的选择与应用 一、临床免疫检验自动化分析的选择原则 二、临床免疫检验自动化分析的临床应用
重点提示
临床免疫检验的自动化分析(automation of immunoassays)
采用抗原过量检测方法，保证了结果的准确性。 但仪器和试剂价格比较贵, 对抗体的质量要求很高。
免疫比浊分析的影响因素
1.抗原抗体比例 2.抗体的质量 3.增浊剂的使用 4.伪浊度 5.入射光光源和波长 6.校准曲线制备与质量控制
第二节 发光免疫测定的自动化分析
发光免疫测定的自动化分析
发光免疫测定的自动化分析是通过抗原或抗体标记 技术、抗原或抗体的抗原抗体反应、固相分离技术、发 光技术和计算机信息技术进行有机整合，实现了加样、 温育、固相载体分离清洗、发光信号检测和数据处理等 过程自动化。
式I θ中为与入射光成θ角处散射光强度；λ和I0为入射光的波长和强度；
dn/dc为校正因子，反映了溶液折射指数和颗粒浓度的变化；M为颗粒分子量；
c为浓度；N为阿佛加德指数；γ为颗粒到检测器的距离；θ为散射光与入射光
的夹角（散射夹角）。
定时散射比浊法（fixed time nephelometry）
Fra Baidu bibliotek
免疫散射比浊仪
粒子对光线的散射作用是溶液中 的微粒子受到光线照射后，微粒子对 光线产生反射和折射而形成散射光。 悬浮微粒对光散射形成的散射光强度 与微粒的大小、数量、入射光的波长 和强度、测量角度等因素密切相关， 其公式如下：
Iθ＝ I0［4π2（dn/dc) 2 Mc(1+cosθ)］ Nγ2λ4
第一章 血液标本采集与处理
临床免疫学检验技术
第十四章临床免疫检验的自动化 分析
陶志华
目录
第一节 免疫浊度测定的自动化分析 一、免疫散射比浊测定的自动化分析 二、免疫散射比浊测定的影响因素 第二节 发光免疫测定的自动化分析 一、吖啶酯标记化学发光测定的自动化分析 二、酶联发光免疫测定的自动化分析 三、电化学发光免疫测定的自动化分析 四、发光氧通道免疫测定的自动化分析
顺磁性微粒示意图
Y
磁微粒标记抗体
磁微粒在
电磁场中分离
仪器测定技术要点
双抗体夹心法
+ + 磁微粒 抗体
被测抗原
带丫啶 酯标记
物抗体
（1） 加入酸性H2O2 （pH<10）
（2） 加入碱 （pH>10）
冲洗后
发光
吖啶酯标记化学发光免疫分析仪
ACS：180 SE
ACS∶CENTAUR
i2000sr
ci8200
抗原抗体反应速率的动态变化
速率散射比浊法（rate nephelometry）
仪器测定技术要点： 开启机器，进行校准 反应阶段 抗原过量检测
免疫散射比浊仪
BN ProSpec全自动特定蛋白分析仪
IMMAGE全自动特定蛋白分析仪
方法评价
散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法，本 法自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密等优 点。
辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析仪
检测原理： 定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下， 加入待测抗原，此时反应立即开始，在反应的第一 阶段，溶液中产生的散射光信号波动较大，所获取 的信号计算出的结果会产生一定的误差。定时散射 比浊法是避开抗原抗体反应的不稳定阶段，即散射 光信号在开始反应7.5s～2min内的第一次读数，专 门在抗原抗体反应的最佳时段进行读数，将检测误 差降到最低。
有些免疫检验如免疫透射比浊则可采用全自动生化分 析仪进行检测，有些则整合在其它一些自动化分析系统中 ，如自动化血凝分析仪。
重点提示
通过本章学习，学生将全面掌握临床上 常用的全自动免疫分析仪的类型、仪器检测技 术要点和影响因素。
通过本章学习，学生还将了解临床实验 室选择选择原则和临床应用。
第一节 免疫浊度测定的自动化分析
定时散射比浊法（fixed time nephelometry）
仪器测定技术要点： 1.抗原抗体预反应阶段 2.反应阶段 3.信号检测 4.抗原过剩检测 (1) 抗体适当过量 (2) 对抗原过量进行阈值限 定
速率散射比浊法（rate nephelometry）
速率散射比浊法是抗原抗 体结合反应的动力学测定法。 所谓速率是指抗原抗体反应在 单位时间内形成免疫复合物的 量（不是免疫复合物累积的量 ），连续测定各时间复合物形 成的速率与其产生的散射光信 号联系在一起，形成动态的速 率散射比浊法，每项检测仅 1min～2min即可完成。
一、吖啶酯标记化学发光免疫分析仪
吖啶酯标记的化学发光免疫分析仪是一种用发光剂直 接标记抗体或抗原的一类免疫分析法。该仪器利用化学发 光技术和磁性微粒子分离技术，以吖啶酯为化学发光剂， 以细小的顺磁性微粒为固相载体。其测定原理与双抗体夹 心法、双抗原夹心法和竞争结合法等相同。
磁微粒分离技术
磁微粒技术
是将免疫学检验过程中的取样、加试剂、混合、温 育、固相载体分离、信号检测、数据处理、结果报告和检 测后的仪器清洗等步骤由计算机控制，仪器自动完成整个 免疫检验过程。
重点提示
各种自动化免疫分析仪都使用一种或两种免疫分析技 术，如酶联免疫分析技术、生物素-亲合素技术、化学发 光分析技术、荧光偏振免疫测定技术、时间分辨荧光免疫 测定技术、电化学发光免疫分析技术等。
免疫浊度分析的基本原理
抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免 疫复合物（<19S），在增浊剂（如PEG等）的作用下，迅速 形成免疫复合物微粒（>19S），使反应液出现浊度。
在抗体稍微过量且 固定的情况下，形成的 免疫复合物量随抗原量 的增加而增加，反应液 的浊度亦随之增大，即 待测抗原量与反应溶液 的浊度呈正相关。
酶联发光免疫分析仪
酶联发光免疫分析仪是用参与催化某一化学发光或 荧光反应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反应后， 加入底物(发光剂)，由酶催化和分解底物发光，通过光 信号的强弱来进行被测物的定量。
常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷 酸酶(ALP)，常用的发光底物有鲁米诺、AMPPD和4-MUP 等。