细胞为骨髓瘤细胞SP20
实验动物助理技师习题及答案
实验动物助理技师习题及答案1、下列哪种小鼠的各种肿瘤发生率低()A、DBA小鼠B、C57B1小鼠C、A系小鼠D、BA1B/CAnN小鼠答案:B2、在实验动物微生物学检测中,清洁动物每3月至少检测()次。
A、1B、4C、2D、3答案:A3、3%-5%苦味酸溶液为()。
A、黄色B、绿色C、红色D、蓝色答案:A4、下列品系中,肺腺细胞癌高发的小鼠品系是()。
A、C3H∕He∕∕01AB、C3H∕HeC、DBAD、A/He答案:D5、大鼠的体温为:()A、37>5-38>5℃B、39-395℃C、38、5-39、5℃D、39、5-40℃答案:C6、()皮肤与人非常相似,故常用于实验性烧伤研究。
A、猴B、犬C、兔D、猪答案:D7、一种对多种病毒细菌敏感、产血清量多,常用于生产抗血清的动物是()OA、狗B、猫C、猴D、兔答案:D8、狂犬病的潜伏期是()周,最短()天。
A、2-8周,2天B、3~5周,4天C、2-8周,4天D、2-4周,3天答案:C9、下述()对大鼠在药物学研究中的描述不正确。
A、评价药物对肾功能的影响可通过大鼠服药后5小时的尿量来评价。
B、大鼠踝关节对炎症反应敏感。
C、大鼠血压和血管阻力对药物的反应很敏感。
D、大鼠常作为药物急性试验的动物,评价和确定最大给药量。
答案:D10、《关于善待实验动物的指导性意见例》第六条规定:提倡的“3R”原则,科学合理人道地使用动物。
A、减少、替代、优化B、必须保证其有充足的饮水和食物C、必须保证其有表达天性的自由D、必须减少对其的伤害答案:A11、传染病和非传染病的区别是()。
A、传染病可引起动物死亡B、患病机体内发生特异性反应C、传染病具有传染性和流行性D、传染病可影响干扰实验结果答案:D12、实验猴常用于的实验与研究是()A、药品的热原实验B、新药临床使用前的毒性试验与外科实验C、青霉素敏感性实验D、帕金森综合症、脊髓灰质炎病毒疫苗检定答案:D13、第一个《实验动物质量国家标准》是()颁布的?A、2002年B、1978年C、1994年D、1988年答案:C14、3R原则具体是指在动物实验设计中,对使用实验动物遵循()原则。
骨髓瘤化疗方案
骨髓瘤化疗方案1. 引言骨髓瘤是一种良性或恶性的血液疾病,病变部位主要位于骨髓内。
随着疾病的进展,骨髓瘤会严重影响患者的生活质量,并可能危及生命。
因此,针对骨髓瘤的治疗方案显得尤为重要。
本文将介绍一种常用的骨髓瘤化疗方案。
2. 骨髓瘤化疗方案的目标骨髓瘤化疗方案的主要目标是消除或控制患者体内的恶性克隆细胞,以达到患者的生存延长或疾病缓解的效果。
具体来说,骨髓瘤化疗方案的目标包括: - 控制病情进展,阻止克隆细胞的增殖和扩散; - 达到疾病缓解,减轻患者的症状和不适;- 延长患者的生存期; - 提高患者的生活质量。
3. 骨髓瘤化疗方案的常见药物骨髓瘤化疗方案中常用的药物包括: - 碱化剂:如环磷酰胺(CTX)、甲氨蝶呤(MTX)等; - 糖皮质激素:如地塞米松(DEX)等; - 靶向药物:如他法替尼(Thalidomide)、莫达非尼(Lenalidomide)等; - 其他:如多柔比星(Doxorubicin)、辅酶Q10等。
4. 骨髓瘤化疗方案的具体步骤(1)诱导治疗:该步骤旨在控制疾病的进展,并使患者达到疾病缓解。
常用的诱导方案是:CTX联合莫达非尼和Dex,或CTX联合辅酶Q10和MTX。
诱导治疗通常持续数个周期,周期间隔为21-28天。
(2)移植前治疗:如果患者符合移植条件,那么在进行移植前需要进行移植前治疗。
该治疗步骤的目标是减少患者体内的癌细胞负荷,消除微小残留病灶,提高移植后的疗效。
常用的移植前治疗方案是:Thalidomide或Lenalidomide联合CTX和Dex。
移植前治疗通常持续2-4个周期。
(3)移植治疗:移植治疗是一种高剂量化疗方案,旨在通过高剂量的化疗药物或放射治疗来杀死患者体内的癌细胞。
移植治疗可以分为自体干细胞移植和异体干细胞移植。
自体干细胞移植常常是首选的治疗方式,它可以避免供体排异反应。
(4)维持治疗:维持治疗是指在移植治疗后的一段时间内持续使用化疗药物,以维持疾病缓解的状态,并控制白细胞的增殖。
2011湖北实验动物考试复习题Word 文档
小鼠的生殖周期最短,一般小鼠的妊娠期为16天。
(×)1.小鼠和大鼠一样无胆囊。
(×)2.小鼠属于脊椎动物门,哺乳纲,啮齿目,鼠科,鼠属的动物。
(√)3.小鼠淋巴系统特别发达,性成熟时胸腺最大,35—80 日龄渐渐退化。
(√)4.小鼠的门齿终生不断生长,通过啃咬磨牙控制牙的长度。
(√)5.小鼠的繁殖力很强,每胎产仔数多于20只。
(×)6.雌性小鼠交配后10—12小时,阴道口有白色阴道栓,是交配过的典型标志。
(√)7.成年雌性小鼠一年四季都有性的活动,性周期4—5天。
(√)8.根据阴道涂片的细胞学改变,可以推断小鼠的性周期变化。
(√)9.两个不同的近交系小鼠杂交所生的第一代小鼠,称为F1代小鼠。
(√)10.KM小鼠、BALB/c小鼠等是常用的封闭群小鼠。
(×)11.BALB/c、C57BL/6J等是常用的近交系的小鼠。
(√)12.对于清洁级及其以上级别的小鼠而言,饮用水只要是干净的自来水即可。
(×)13.大鼠很聪敏,易于调教,嗅觉发达,味觉很差。
喜居安静环境,夜间活跃。
(√)14.大鼠为全年多发情动物。
(√)15.大鼠汗腺少,只有爪垫上有,尾巴是散热器官。
(√)16.大鼠、小鼠一样一出生就有视力,也能吃食物。
(×)17.大鼠和小鼠一样都有5对乳头。
(×)18.Wistar大鼠、SD大鼠是目前常用封闭群大鼠。
(√)19.SHR、BN大鼠等是常用的近交系的大鼠。
(√)20.维生素A过量可导致小鼠繁殖紊乱和胚胎畸形。
(√)21.饲喂大鼠的饲料应为全价颗粒饲料。
(√)22.处于发情期和发情后期的雌性大鼠可以接受雄性大鼠交配。
(×)23.通过阴道涂片可以判断大鼠是否交配过。
(√)24.新生仔大鼠周身无毛,皮肤赤红,两眼不睁。
(√)25.豚鼠头大、颈短、耳圆、无尾,全身被毛,四肢紧缩,有极为紧凑的身体。
(√)26.豚鼠自动调节体温能力较强,受外界温度变化影响不大。
实验动物选择题题库
第一章无选择题,均为单选,后面附答案:第二章环境与设施1、一种会引起动物心跳、呼吸次数及血压增加,血糖值出现明显不同,白细胞数、免疫机能变化,大鼠出现高血压,心脏肥大的环境因素是AA 噪音B 温度C 湿度D 光照2、一种会引起动物的姿式、摄食量、饮水量、母性行为、心跳。
呼吸、新陈代谢等出现相应改变的环境因素是B。
A 噪音B 温度C 湿度D 光照3、一种对动物的散热率有显著影响的环境因素是C。
A 噪音B 温度C 湿度D 光照4、能控制垂体中促性腺激素和肾上腺皮质激素的分泌的环境因素是DA 噪音B 温度C 湿度D 光照5、与体热的发散有关的环境因素是A。
A 风速B 氨浓度C 饲养密度D 粉尘6、一种引起呼吸器官粘膜异常,发生流泪、咳嗽、粘膜发炎,肺水肿和肺炎且是动物室中臭气物质主要来源的环境因素是B。
A 风速B 氨浓度C 饲养密度D 粉尘7、一种引起动物群体增重慢、饲料报酬低,肠内异常菌丛增加,并导致传染病的发生率增加、动物寿命缩短的环境因素是C。
A 风速B 氨浓度C 饲养密度D 粉尘8、能形成气溶胶,不仅刺激动物机体产生不良反应,也是各种病原微生物的载体,人类变态反应的变应元的环境因素是D。
A 风速B 氨浓度C 饲养密度D 粉尘9、国家标准中实验小鼠饲养房的温度是18?28℃,这个温度指的是小鼠的CA 最适温度B 高、低临界温度C 实验动物饲育室的温度范围D 温度中性区10、湿度是大气中水分的含量,空气中含水量占同等温度下饱和含水量的百分比称之为BA 绝对湿度B 相对湿度C 饱和湿度D 不饱和湿度11、国家标准中小鼠房的湿度是40??70%,这指的是小鼠房的BA 绝对湿度B 相对湿度C 饱和湿度D 不饱和湿度12、实验动物体温失去恒定开始上升或下降时的环境温度称之为BA 最适温度B 高、低临界温度C 实验动物饲育室的温度范围D 温度中性区问13、实验动物基础代谢最低时的环境温度称之为D,其又可称之为AA 最适温度B 高、低临界温度C 实验动物饲育室的温度范围D 温度中性区14、温度与基因表达有密切的关系,A兔在20℃环境下毛色全白,10℃环境下,耳、尾、鼻和四肢末端均为黑色。
骨髓瘤的治疗方案有哪些
骨髓瘤的治疗方案有哪些骨髓瘤的治疗方案有哪些骨髓瘤是一种恶性肿瘤,主要发生在骨髓中的浆细胞。
其临床表现主要包括骨痛、疲乏、贫血、肾功能障碍等。
目前,骨髓瘤的治疗方案主要包括放疗、化疗、手术等多种方法。
下面将从六个方面详细介绍骨髓瘤的治疗方案。
一、放疗治疗放疗是一种常见的治疗骨髓瘤的方法。
它通过使用高能量的X射线来杀死癌细胞。
放疗通常用于治疗局部病变,如单个骨髓瘤、局限性骨髓瘤等。
放疗治疗骨髓瘤的优点是操作简单,无需住院,且可有效缓解疼痛。
但其治疗范围有限,无法根治骨髓瘤。
二、化疗治疗化疗是通过使用化学药物来杀死癌细胞的方法。
化疗是骨髓瘤治疗的主要手段之一。
目前常用的化疗方案包括联合使用多种药物,如VAD、VCD、PAD等。
化疗的优点是治疗范围广,能够根治骨髓瘤,且可减轻病人的疼痛。
但其毒副作用较大,需要密切监测。
三、手术治疗手术治疗骨髓瘤是一种较为激进的治疗方法,主要用于治疗局部病变。
手术治疗通常分为开放手术和闭合手术两种方式。
开放手术主要是通过手术切除骨髓瘤组织,而闭合手术则是通过介入手术将治疗药物直接注入病变部位。
手术治疗的优点是可根治病变,但其创伤和并发症较大,而且容易复发。
四、干细胞移植干细胞移植是一种治疗骨髓瘤的新技术,主要是通过干细胞移植来重建病人的免疫系统。
干细胞移植通常分为自体干细胞移植和异体干细胞移植两种。
自体干细胞移植是采集病人自身的干细胞进行移植,而异体干细胞移植则是采集他人的干细胞进行移植。
干细胞移植的优点是能够重建免疫系统,防止病情复发,但其费用较高,治疗过程中需密切监测。
五、靶向治疗靶向治疗是一种治疗骨髓瘤的新技术,主要是通过针对癌细胞的特定靶点进行治疗。
目前常用的靶向治疗药物有沙利度胺、他莫昔芬等。
靶向治疗的优点是能够针对癌细胞的特定靶点进行治疗,减少毒副作用,但其疗效有限,不适用于所有病人。
六、中药治疗中药治疗是一种治疗骨髓瘤的辅助方法,主要是通过中药的调理来改善病人身体状况,增强其免疫力。
高中生物骨髓瘤细胞的特点
高中生物骨髓瘤细胞的特点
高中生物骨髓瘤细胞的特点
骨髓瘤是一种由增生的恶性浆细胞引起的癌症。
在高中生物教育中,
骨髓瘤是一个重要的研究对象。
本篇文章将介绍骨髓瘤细胞的特点。
1. 细胞形态
骨髓瘤细胞的形态比正常浆细胞更大、更圆,并且存在大量的细胞核
和胞浆。
在显微镜下观察,可见细胞核的形状呈椭圆形或肾型,核仁
呈浅色。
此外,骨髓瘤细胞胞浆内含有丰富的免疫球蛋白和轻链。
2. 细胞分裂
骨髓瘤细胞的分裂速度非常快,常常以1-2天的速度增生。
相比之下,正常的浆细胞增生速度要慢得多。
这使得骨髓瘤细胞在体内迅速扩散,从而影响身体的其他部位。
3. 免疫
由于骨髓瘤细胞含有大量的免疫球蛋白和轻链,在体内它们能够干扰
正常的免疫系统的运作,从而导致病患容易感染。
4. 肿瘤细胞的特殊标记
骨髓瘤细胞上表面的一些特殊标记,如CD38和CD138,可用于疾病的诊断和治疗。
这些标记给医生提供了追踪病情进展和诊断病人反应的方式。
总之,骨髓瘤细胞的形态、分裂速度、免疫和特殊标记等方面都存在较大的不同于正常浆细胞,这使得它成为高中生物教育中重要的研究对象之一。
单克隆抗体制备的关键因素
单克隆抗体制备的关键因素单克隆抗体在实验室和临床上有广泛的应用,它是基础免疫研究、诊断测试和疫苗质量控制方面必要的研究工具。
单克隆抗体生产中的关键步骤,特别是抗原的准备、细胞和动物的考虑( 选择) 、佐剂及复合物的制备、注射方式、细胞融合和腹水收集方法,以期在单抗制备过程中减少动物的痛苦,获得最佳的免疫反应。
当机体受抗原刺激时,抗原上的各个抗原决定簇激活具有不同基因的B 细胞。
单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb) ,简称单抗,是仅由一个祖先B 细胞分裂繁殖产生针对单一抗原决定簇的抗体。
1975年,分子生物学家G. J. F. 克勒和 C. 米尔斯坦发现单克隆抗体与骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞具有无限增殖的能力并且可以产生大量的单克隆抗体。
单克隆抗体在生物学实验、医药、生物医药研究、诊断测试和治疗等方面有着广泛的应用。
单克隆抗体的制备实验周期长(需要3~6 个月),影响因素多。
单克隆抗体生产过程中的关键步骤与因素,以便能产生有效的抗体反应,同时降低动物的疼痛和不良反应。
1 抗原的准备抗原纯度是决定免疫反应特异性和免疫反应质量的重要因素。
尤其是细菌抗原,<1%的杂质都有可能主导整个免疫反应。
纯化的抗原可以获得特异的免疫反应,同时简化单克隆抗体后期的筛选时间。
依据制备抗原的理化特性,设计超速离心、超滤膜过滤、沉淀、透析、有机试剂提纯等抗原纯化方式。
抗原的毒性是免疫前首要考虑的因素,抗原稀释剂中不能有内毒素、脂多糖的污染。
未灭活的抗原要考虑病原微生物对动物的影响。
抗原的pH 要在动物可以接受的范围内,过高或过低的pH 都会给动物带来很大的损害,影响抗体的产生。
抗原的免疫剂量要依据待免疫动物体积的大小,过多或过少的抗原会导致免疫抑制、免疫耐受或免疫紊乱,不能产生有效的免疫反应。
计算方法常用蛋白含量( mg /mL) = ( 1. 45 × OD280nm -0. 74×OD260nm ) × 样品稀释倍数; 或蛋白含量= OD280× 样品稀释倍数/3。
骨髓瘤细胞
2、骨髓瘤细胞的选择和培养骨髓瘤细胞能产生并分泌大量的免疫球蛋白,与脾细胞融合后,可能影响或降低所分泌抗体的滴度,所以必须选育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤细胞。
所选择的骨髓瘤细胞需满足以下条件:①该瘤细胞系的来源应与制备脾细胞小鼠为同一品系,以便两者的组织相容性抗原一致;②骨髓瘤细胞必须是静息状态,不产生γ球蛋白或不分泌到细胞外;③骨髓瘤细胞生长需要一个较高的细胞密度,最好106个细胞/ml;④生长速度快,繁殖时间短。
本实验选择满足上述条件的SP2/0细胞株,取出冻存的细胞株进行复苏:从液氮中取出冻存管,立即置37℃水浴中融化细胞。
将细胞直接加入10ml含15%小牛血清的RPMI-1640培养液中,置37℃ 5%CO2饱和水汽二氧化碳培养箱中培养。
悬浮细胞待细胞全部沉降后小心吸去上清液,更换新鲜的上述培养液,继续培养。
复苏时需注意:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。
将预先消毒好的细胞培养瓶、吸管等,经高温灭菌冷却后转入消毒柜保存并待使用时取出。
采用基础培养基DMEM进行培养,由于配制培养基的水的质量是影响融合的关键素,所以至少应用三蒸水或四蒸水,并定期检查制成的纯水质量。
所添加的血清成分也对培养基的影响很大,故通常使用初生犊牛血清配制培养基,血清的质量也要进行严格的筛选和把关。
最后在进行细胞融合前还需将骨髓瘤细胞经过8-AG的培养基筛选,防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性。
在融合前24h给细胞培养瓶换液一次,并使细胞处于对数增长期。
3、饲养细胞在体外的细胞培养中,饲养细胞的加入使其它单个的或数量很少的活的细胞更易生存与繁殖。
单克隆的选择过程就是在少量的或单个细胞的基础上使其生长繁殖成群体,故在细胞融合这一过程中须使用饲养细胞。
它们可以释放非种属特异性的生长刺激因子,为杂交瘤细胞提供必要的生长条件;也可以控制新生杂交瘤细胞的细胞密度。
考题实验动物
第一章无选择题,均为单选,后面附答案:第二章环境与设施1、一种会引起动物心跳、呼吸次数及血压增加,血糖值出现明显不同,白细胞数、免疫机能变化,大鼠出现高血压,心脏肥大的环境因素是AA 噪音B 温度C 湿度D 光照2、一种会引起动物的姿式、摄食量、饮水量、母性行为、心跳。
呼吸、新陈代谢等出现相应改变的环境因素是B。
A 噪音B 温度C 湿度D 光照3、一种对动物的散热率有显著影响的环境因素是C。
A 噪音B 温度C 湿度D 光照4、能控制垂体中促性腺激素和肾上腺皮质激素的分泌的环境因素是DA 噪音B 温度C 湿度D 光照5、与体热的发散有关的环境因素是A。
A 风速B 氨浓度C 饲养密度D 粉尘6、一种引起呼吸器官粘膜异常,发生流泪、咳嗽、粘膜发炎,肺水肿和肺炎且是动物室中臭气物质主要来源的环境因素是B。
A 风速B 氨浓度C 饲养密度D 粉尘7、一种引起动物群体增重慢、饲料报酬低,肠内异常菌丛增加,并导致传染病的发生率增加、动物寿命缩短的环境因素是C。
A 风速B 氨浓度C 饲养密度D 粉尘8、能形成气溶胶,不仅刺激动物机体产生不良反应,也是各种病原微生物的载体,人类变态反应的变应元的环境因素是D。
A 风速B 氨浓度C 饲养密度D 粉尘9、国家标准中实验小鼠饲养房的温度是18?28℃,这个温度指的是小鼠的CA 最适温度B 高、低临界温度C 实验动物饲育室的温度范围D 温度中性区10、湿度是大气中水分的含量,空气中含水量占同等温度下饱和含水量的百分比称之为BA 绝对湿度B 相对湿度C 饱和湿度D 不饱和湿度11、国家标准中小鼠房的湿度是40??70%,这指的是小鼠房的BA 绝对湿度B 相对湿度C 饱和湿度D 不饱和湿度12、实验动物体温失去恒定开始上升或下降时的环境温度称之为BA 最适温度B 高、低临界温度C 实验动物饲育室的温度范围D 温度中性区问13、实验动物基础代谢最低时的环境温度称之为D,其又可称之为AA 最适温度B 高、低临界温度C 实验动物饲育室的温度范围D 温度中性区14、温度与基因表达有密切的关系,A兔在20℃环境下毛色全白,10℃环境下,耳、尾、鼻和四肢末端均为黑色。
湖北实验动物考试复习题之07小鼠
小鼠111不是利用小鼠下颌骨形态测量进行遗传监测的原因D下颌骨分析是一种定性分析,简单、易行。
13叙述正确的是A由于胃容量小,小鼠灌胃给药剂量的体积不能超过1ml。
4、对小鼠消化系统描述错误的是。
B肝脏是腹腔内最大的脏器,分左、右、中3叶。
15对小鼠呼吸系统结构的描述正确。
C小鼠肺脏分为五叶,左一右四,气管与支气管腺不发达2、由我国科学家研究、培育的一种自发低乳腺癌系近交系小鼠是 C TA13、与SP20骨髓瘤细胞配合,用于研制单克隆抗体和生产单抗腹水的小鼠品系是C BALB/c4、继人类之后第二个完成基因组测序工程的哺乳类动物是A小鼠小鼠品系是B C57BL/6 6、在近交系小鼠中使用量最大,并常作为遗传工程小鼠背景品系的小鼠是B C57BL/68、实验小鼠的最适温度是,相对湿度为40%-60%,氨浓度≤14mg/m3,噪声≤60DB B 22士2℃1、小鼠适做计划生育研究是因为小鼠繁殖力强、妊娠期短,且小鼠A全年多发情、发情周期4-5天9、小鼠染色体对数为A 20对12 小鼠的的生理结构有利于灌胃操作C食管内壁有一层厚的角质化鳞状上皮16、小鼠心尖位于近胸骨端A第四肋间17、小鼠的淋巴系统D很发达,腭或咽部无扁桃体,外界刺激可使淋巴系统增生,导致淋巴系统疾病。
18、小鼠子宫为双子宫型,呈“Y”形,左右子宫角在膀胱背部汇合成子宫体,C其前部以中隔分成两部,后部中隔消失,逐渐形成子宫颈。
10、小鼠自发性肿瘤中发生率最高。
A乳腺肿瘤11、小鼠乳腺肿瘤中,发生率最高。
AC3H小鼠12、小鼠白血病发生率较高的品系是C AKR小鼠19、小鼠卵巢D有系膜包绕,不与腹腔相通,故无宫外孕62、小鼠的需要量比大鼠高。
B 生物素20、小鼠出生体重为B 1.5g21、小鼠出生一个月后,体重可达到B 12-19g22、小鼠在部位受精开始卵裂发育A输卵管壶腹部23、小鼠从受精后,胚胎进入子宫B 3天42、小鼠在环境温度区内生长较快,产仔多,活力强A 21-25℃43、小鼠比其它哺乳动物对饮水量不足更敏感B 小鼠体表蒸发面与整个身体相比所占比例比其他动物大44、小鼠可通过来保持水分A呼出的气体在鼻腔内冷却以及尿液的高度浓缩45、小鼠能从其尿液中排出较多量的蛋白质,但不排出D色氨酸39、小鼠性活动可维持左右,作为种鼠使用时间一般为A 1年;6-8个月25、小鼠发育迅速,性成熟早,性成熟时间为。
骨髓瘤细胞SP20 培养过程中遇到的问题及对策
骨髓瘤细胞SP2/0 培养过程中遇到的问题及对策
1,细胞长的慢或细胞死亡
正常生长情况下,细胞一天传代一次,生长越好,贴壁越多
对策:①培养基配方不对;②接种密度太低,低于10的4次方;③污染了支原体或者其他不明细菌,支原体的现状是出现小黑点;细菌污染是浑浊;霉菌污染是出现白色肉眼可见菌落;不明细菌污染出现砂状平铺背景,视野发暗。
④细胞瓶刷洗不干净
2,细胞形态异常
正常生长情况下,细胞浑圆,透亮,成对数生长,生长越好,贴壁多,悬浮少
对策:①培养基配方不对;②接种密度太低,低于10的4次方;③污染了支原体或者其他不明细菌,支原体的现状是出现小黑点;细菌污染是浑浊;霉菌污染是出现白色肉眼可见菌落;不明细菌污染出现砂状平铺背景,视野发暗。
④细胞瓶刷洗不干净。
骨髓瘤分期标准
骨髓瘤分期标准
Durie-Salmon分期系统是一种较早期的骨髓瘤分期系统,主要
根据患者的血清白蛋白水平、血清β2微球蛋白水平、骨髓瘤细胞
百分比和骨髓瘤骨病变进行分期。
根据Durie-Salmon分期系统,骨
髓瘤分为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期三个阶段,其中Ⅲ期又分为ⅢA和ⅢB两
个亚阶段。
这种分期系统主要用于指导患者的治疗方案选择和预后
评估。
国际骨髓瘤工作组(IMWG)制定的分期标准是目前应用较为广
泛的骨髓瘤分期系统,该系统主要根据患者的肿瘤负荷(包括血清
白蛋白水平、血清β2微球蛋白水平、血清钙水平、血清肌酐水平)和临床表现(包括骨髓瘤细胞百分比、骨髓瘤骨病变、贫血、高钙
血症、肾功能不全)进行分期。
根据IMWG分期系统,骨髓瘤分为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期三个阶段,其中Ⅲ期又分为ⅢA和ⅢB两个亚阶段。
这种分期系统能够更准确地评估患者的疾病状态,指导临床治疗和
预后评估。
在临床实践中,对于骨髓瘤患者的治疗和预后评估,选择合适
的分期系统非常重要。
通过对患者进行分期,可以更好地了解患者
的疾病状态,指导临床治疗方案的选择。
此外,分期系统还可以帮
助医生对患者的预后进行评估,为患者制定个性化的治疗方案提供重要依据。
总的来说,骨髓瘤的分期标准对于患者的治疗和预后评估具有重要意义。
Durie-Salmon分期系统和IMWG分期系统是目前常用的骨髓瘤分期系统,它们都能够有效地评估患者的疾病状态,指导临床治疗和预后评估。
在临床实践中,医生应根据患者的具体情况选择合适的分期系统,并结合临床表现和实验室检查结果,制定个性化的治疗方案,以提高患者的生存质量和延长生存期。
湖北实验动物考试复习题Word文档
湖北实验动物考试复习题Word文档湖北省2011实验动物第二期考试复习小鼠的生殖周期最短,一般小鼠的妊娠期为16天。
(×)1. 小鼠和大鼠一样无胆囊。
(×)2. 小鼠属于脊椎动物门,哺乳纲,啮齿目,鼠科,鼠属的动物。
(√)3. 小鼠淋巴系统特别发达,性成熟时胸腺最大,35―80 日龄渐渐退化。
(√)4. 小鼠的门齿终生不断生长,通过啃咬磨牙控制牙的长度。
(√)5. 小鼠的繁殖力很强,每胎产仔数多于20只。
(×)6. 雌性小鼠交配后10―12小时,阴道口有白色阴道栓,是交配过的典型标志。
(√)7. 成年雌性小鼠一年四季都有性的活动,性周期4―5天。
(√)8. 根据阴道涂片的细胞学改变,可以推断小鼠的性周期变化。
(√)9. 两个不同的近交系小鼠杂交所生的第一代小鼠,称为F1代小鼠。
(√)10. KM小鼠、BALB/c小鼠等是常用的封闭群小鼠。
(×)11. BALB/c、C57BL/6J等是常用的近交系的小鼠。
(√)12. 对于清洁级及其以上级别的小鼠而言,饮用水只要是干净的自来水即可。
(×)13. 大鼠很聪敏,易于调教,嗅觉发达,味觉很差。
喜居安静环境,夜间活跃。
(√)14. 大鼠为全年多发情动物。
(√)15. 大鼠汗腺少,只有爪垫上有,尾巴是散热器官。
(√)16. 大鼠、小鼠一样一出生就有视力,也能吃食物。
(×)17. 大鼠和小鼠一样都有5对乳头。
(×)18. Wistar大鼠、SD大鼠是目前常用封闭群大鼠。
(√)19. SHR、BN大鼠等是常用的近交系的大鼠。
(√)20. 维生素A过量可导致小鼠繁殖紊乱和胚胎畸形。
(√)21. 饲喂大鼠的饲料应为全价颗粒饲料。
(√)22. 处于发情期和发情后期的雌性大鼠可以接受雄性大鼠交配。
(×)23. 通过阴道涂片可以判断大鼠是否交配过。
(√)24. 新生仔大鼠周身无毛,皮肤赤红,两眼不睁。
试验骨髓瘤细胞的培养
实验一、骨髓瘤细胞的培养骨髓瘤细胞系应和免疫动物属于同一品系,这样杂交融合率高,也便于接种杂交瘤细胞在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb常用骨髓瘤细胞系有:NS1、SP2/0、X63 Ag8.653等。
骨髓瘤细胞的培养适合于一般的培养液,如RPMI1640, DMEM&养基。
小牛血清的浓度一般在10〜20%,细胞的最大密度不得超106/ml, 一般扩大培养以1 : 2稀释传代,每2〜 3天传代一次。
细胞的倍增时间为16〜20小时,上述三株骨髓瘤细胞系均为悬浮或轻微贴壁生长,只用弯头滴管轻轻吹打即可悬起细胞。
二材料:1.试剂:〔1〕培养基杂交瘤技术中使用的细胞培养基主要有RPMI-1640或DMEM〔 Dulberco Modified Eagles Medium〕两种根底培养基,具体配置方法按厂家规定的程序,配好后过滤除菌〔0.22um滤膜〕,分装,4C保存。
不完全RPMI-1640培养基:RPMI-1640培养基原液96ml,100 X L.G.溶液1ml,双抗溶液1ml, 7.5% NaHCO溶液1-2ml , HEPE骆液1ml。
不完全DMEI\M养基:DMEM 13.37g,超纯水或四蒸水980ml, NaHCO3.7g , 100X L.G. 溶液10ml,双抗溶液10ml, 7.5% NaHCO溶液1-2ml,用1N HCl调试pH至7.2-7.4 ,过滤除菌,分装4C保存。
完全RPMI-1640或DME牌养基:不完全RPMI-1640或DME牌养基80ml,灭活小牛血清15-20ml,用于骨髓瘤细胞SP2/0和建株后杂交瘤细胞培养。
〔2〕小牛血清灭活:从-20 C冰箱取出小牛血清,室温自然融化,56 C30min即可充分灭活,分装小瓶〔5ml/瓶〕,-20 C冻存备用,尽量防止反复冻融。
〔3〕青、链霉素〔双抗〕溶液〔100X〕取青霉素G 〔钠盐〕100万单位和链霉素〔硫酸盐〕1g 或100万单位,溶于100ml灭菌超纯水或四蒸水中,分装小瓶〔4-5ml/瓶〕,-20 C 冻存。
骨髓瘤的诊断标准
骨髓瘤的诊断标准为血清检查、骨髓检查以及骨骼检查等。
血清单克隆M蛋白高于30g/L、骨髓单克隆浆细胞比例是在10%至60%间、骨骼检查为单纯的溶骨性破坏,都可作为骨髓瘤的诊断标准。
1、血清检查:患有骨髓瘤的患者在进行血清检查后,其血清单克隆M蛋白会高于30g/L,并且24小时尿轻链也会高于0.5g。
因此可以诊断为骨髓瘤。
2、骨髓检查:患者进行骨髓检查时,可根据骨髓单克隆浆细胞比例作为诊断标准,若骨髓单克隆浆细胞比例是在10%至60%之间,则可以考虑为骨髓瘤。
3、骨骼检查:患者在进行骨骼检查后,若检查结果表现为单发或者多发,则表示为单纯的溶骨性破坏,可以诊断为骨髓瘤。
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聚乙二醇介导的细胞融合
(四)融合后混合细胞的培养
随机融合后的细胞类型
细胞类型
淋巴细胞+骨髓瘤细胞 淋巴细胞+淋巴细胞 骨髓瘤细胞+骨髓瘤细胞 未融合淋巴细胞 未融合骨髓瘤细胞
HGPRT
+ + + -
生长状态
长期生长 短期生长 不能生长 短期生长 不能生长
采用HAT培养液选择培养 1.换液(半量换液)2.观察
DNA,必然死亡。 B淋巴细胞在一般培养基中 不能长期生长,一般于2周内死亡。 融合的杂交瘤细胞由于淋 巴细胞具有次黄嘌呤磷酸核糖转化 酶,可以通过次黄嘌呤合成DNA, 克服氨基蝶呤的阻断,因此可以大 量繁殖而被筛选出来
实验材料
实验动物为纯系Balb/c小鼠,细胞为骨髓瘤细胞SP2/0; 含有一定表位的抗原; 10%DMEM培养液; HAT选择性培养基; HT选择性培养基; 融合剂为PEG2000; 兔抗鼠IgG酶标抗体; 台盼蓝溶液; 细胞培养板及常规细胞培养用试剂和器材。
(五)阳性杂交瘤细胞的克隆筛选
杂交瘤细胞在HAT培养液中生长形成克隆后,其中仅少 数是分泌预定特异性McAb的细胞,而且多数培养孔中有 多个克隆生长,分泌的抗体也可能不同,因此必须进行 筛选和克隆化。 克隆化可选择的方法有液相有限稀释法、软琼脂平板法 、显微镜操作法及应用荧光激活细胞分离仪等,其中最 常用的是液相有限稀释法及软琼脂平板法。
免疫沉淀法、ELISA方法、RIA方法、免疫荧光法
McAb识别抗原表位的测定
竞争抑制试验、相加指数法、微机集群分析、免疫印迹及基因工程技术
注意事项
免疫动物的选择 免疫方案的合理制定 骨髓瘤细胞株的选择 融合剂聚乙二醇的使用 避免操作中的污染 融合后的克隆株不生长原因分析 用液氮冻存的脾细胞进行细胞融合问题
临床应用
在血清学技术方面 在免疫学基础研究方面 在肿瘤免疫治疗方面 在抗原纯化方面 在疫苗研制方面
HAT选择性培养基:培养基中加次 黄嘌呤HyPoxanthine (H),氨基蝶 呤Aminoopterin (A),胸腺嘧啶核
苷Thymidine (T) ]; 酶:次黄嘌呤磷酸核糖转移酶或胸 腺嘧啶核苷激酶,利用次黄嘌呤或
胸腺嘧啶核苷合成NDA 氨基蝶呤:阻断谷酰胺与鸟核苷酸
单磷酸合成DNA 结果:未融合的瘤细胞不能合成
结果判定
杂交瘤细胞染色体的检查
水仙素裂解法
McAb类型、亚类的测定
脂扩散法或ELISA夹心法
McAb特异性鉴定
免疫荧光法、ELISA法、间接血凝和免疫印迹技术,和免疫阻断试验
McAb的效价测定
McAb的效价以培养上清或腹水的稀释度表示。可采用凝集反应、ELISA 或放射免疫测定。
McAb亲和力的测定
(八)单克隆抗体的纯化
般采用盐析、凝胶过滤和离子交换层析等步骤达到纯化 目的,也有采用较简单的酸沉淀方法。
目前最有效的单克隆抗体纯化方法为亲和纯化法,多用 葡萄球菌A蛋白或抗小鼠球蛋白抗体与载体(最常用 Sepharose)交联,制备亲和层析柱将抗体结合后洗脱 ,回收率可达90%以上。蛋白可与IgG1、IgG2a、IgG2b 和IgG3结合,同时还结合少量的IgM。洗脱液中的抗体 浓度可用紫外光吸收法粗侧,小鼠IgG单克隆抗体溶液在 OD280 nm时,1.44(吸光单位)相当于1mg/mL。经低 pH值洗脱后在收集管内预置中和液或速加中液对保持纯 化抗体的活性至关重要。
具体操作方法
(一)抗原准备及小鼠免疫
抗原准备:颗粒性抗原(肿瘤细胞、细菌),可溶性抗原( 多糖、药物) 小鼠免疫:免疫间隔一般为2 ~ 3周,末次免疫后3~4天, 可分离脾细胞融合。
➢ 将PEDV S2基因克隆表达后作为免疫原免小鼠
M S1 S1 — S2 S2 —
以PEDV cDNA为模板扩增S2片段
➢ 转化后菌液PCR鉴定
M12345 678+—
送测序确定序列后再诱导表达
S2的SDS-Page结果图
6P-1 S2 M
(二)细胞悬液的制备
骨髓瘤细胞的制备
骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系,这样杂交融合率高,也便于接种杂 交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。目前常用的小鼠骨髓瘤细胞系为 SP2/0。
免疫小鼠脾细胞的制备 饲养细胞的制备
常用的饲养细胞为小鼠的腹腔细胞 。在制备饲养细胞时,切记针头刺破动 物的消化器官,否则所获细胞会有严重污染。
(三)细胞融合
诱导细胞融合的方法:生物学方法(仙台病毒)、物理 学方法(电场诱导、激光诱导等)、化学方法以及受体 指引型细胞融合法。 目前最常用的方法是聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)法,即把骨髓瘤细胞与免疫脾细胞混合后加入聚 乙二醇(PEG),使两种细胞彼此融合,再通过稀释的 方法消除PEG的毒性作用。
(六)杂交瘤细胞的保存与复苏
冻存:慢冻,分步冻存
室温
-20℃
-80℃
水浴锅中, 使其迅速融化。
意义:防止细胞污染或是产生抗体的能力丧失
(七)单克隆抗体的制备
体外培养: 悬浮培养系统 、固定化培养系统 生产量低
体内诱生 1.腹水型McAb的制备
2.血清型McAb的制备
实验三:单克隆抗体的制备
实验目的和要求
了解单克隆抗体的特性和优缺点; 学会在实验室制备针对某种抗原表位的单克隆抗 体。
单克隆抗体的制备原理
单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb)是指由一 个B细胞分化增殖的子代细胞(浆细胞)产生的针对单一 抗原决定簇的抗体。 1975年Khler和Milstein首次建立了体外淋巴细胞杂交瘤 技术,即单克隆抗体技术,而获得1984年诺贝尔医学和 生理学奖。 单克隆抗体技术:用人工方法将产生特异性抗体的B细胞 与骨髓瘤细胞融合,形成B细胞杂交瘤,这种杂交瘤既有 骨髓瘤细胞无限繁殖的特性,又有B细胞分泌特异性抗体 的能力,将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小 鼠体内可获得大量高效价、单一的特异性抗体,即McAb