烟草组培苗实验步骤
烟草组织培养实验方案
烟草组织培养实验方案摘要本实验通过配制四种培养基来实现烟草种子萌发，种子苗叶片诱导、分化及植株再生，从而获得课题所需要的基因受体植株。
关键词烟草组织培养前言组织培养不仅是一种植物快速繁殖的手段,同时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径。
烟草是典型的基因工程模式植物,易于进行组织培养,容易得到再生的转化植株。
一实验植物：华烟6号二实验材料：华烟6号种子三实验方法与步骤1．培养基的配制本次实验使用（1）种子萌发培养基：MS培养基+GA30.7mg/L；（2）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L；（3）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L；（4）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。
上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8，培养温度25±2℃，光照强度2 000 lx。
2. 培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）3. 无菌苗的获得把烟草种子用市售丝袜（或纱布）包好，先分别用75%乙醇或无菌水浸泡30 s，用无菌水洗净表面抑制种子萌发的药物，待洗涤的水清澈透明，然后将烟草种子用70%酒精浸泡1 min, 10%NaClO消毒10 min,经无菌水漂洗后，在超净工作台处（紫外灭菌20～30min）接种于以配置好的（1）培养基,放入(27±1)℃的光照培养架中培养。
光照周期为10 h(8:00~18:00)光照,12 h暗培养。
种子苗具4~5叶时继代扩繁备用。
4. 烟草叶片愈伤诱导及不定芽分化在超净工作台上取上述烟草无菌苗幼嫩叶片1~2片于无菌培养皿中，将叶片切成1.0～1.5平方厘米的小方块，接入（2）中培养。
约2～3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀，15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织，愈伤组织诱导率为100%。
30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点。
普生实验报告烟草幼苗培养
普生实验报告
实验名称烟草幼苗的组织培养
实验目的：
1.掌握植物组织培养中无菌操作技术。
2.学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法。
记录一：周次：14
6-BA:NAA=1:5 2-4D
6-BA:NAA=5:1 对照组
记录二：周次：15
6-BA:NAA=1:5 2-4D
6-BA:NAA=5:1 对照组
记录三：周次：16
6-BA:NAA=1:5 2-4D
6-BA:NAA=5:1 对照组
作用：6-BA ：促进芽的形成,诱导愈伤组织发生。
NAA ：促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根。
差异：培养基中生长素、细胞分裂素浓度不同，可以诱导烟草幼片生根或生芽。
细胞的全能性：植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化的细胞发生脱分化，成为重新具有分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。
烟草的组织培养技术
烟草的组织培养技术一、目的与要求1.验证“植物细胞全能性”理论。
2.学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法。
二、实验原理植物组织培养是指在无菌条件下，分离、并在培养基中培养离体植物组织（器官或细胞）的技术。
植物组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个活细胞都有相同的遗传组成，在适当条件下具有繁殖出完整植株的能力。
植物组织当中原本已经分化的细胞，组织、器官一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出细胞的全能性，从已经分化的细胞通过脱分化，成为重新具有分裂能力的胚性细胞，并能再分化重新生长发育成完整的植株。
愈伤组织：是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的细胞团。
脱分化：已经分化的细胞，发生生理、生化的改变，退回到胚性细胞的过程。
再分化：经过脱分化的细胞或组织再次获得分化成不同功能的细胞、组织、器官或完整植物体。
三、材料和用具1.材料：无菌烟草叶盘（已经诱导成芽），拟南芥。
2.用具：超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、电子天平、移液器、手术解剖刀、大、小镊子、30ml烧杯、500ml烧杯、药勺、玻璃棒、培养瓶、平皿、试纸（PH5.4-7），报纸等。
3.试剂：MS培养基、0.5mol/LNaOH、1mol/L HCl。
四、操作步骤（一）诱导培养基配制（见表1）1.加MS储液（储液配置见附表）大量元素和微量元素的母液都是高浓度的，为防止混合后发生沉淀，建议加完大量元素后先加水（约总体积3/4），再加各微量元素和有机成分。
铁盐也是微量元素，因为易发生沉淀，所以与其它微量元素分开配。
储液中的铁盐存于棕色瓶中。
配好的储液应当4℃保存。
表1是4瓶培养基（1组）的配置方案。
表1 诱导培养基配制表成分实际称取量蒸馏水120 mlMS母液15 mL蔗糖 4.5 g用蒸馏水粗略定容至100mlpH值 5.8琼脂 1.2 g2.加蔗糖（3%）（m/v）。
实训三 烟草苗情观察
实训三烟草苗情观察
一、实训目的
通过观察烟草幼苗长势长相，了解其生长规律，分辨苗期各个生育期，为今后到工作烟草站育苗打下基础。
二、实训场地
教室。
三、实训形式
以个人为单位进行观察。
四、实训材料用具
腐叶土、营养钵、云烟87种子、水、铅笔、记载表等。
五、实训内容
营养钵装一半腐叶土，并播2-3粒云烟87种子，盖土不见种子，浇足水，每天观察1次，并填写观察记载表。
六、作业
1、管理好营养钵培育烟苗
2、烟苗观察记载
①烟苗观察记载表
②烟苗生育期观察记载表。
实验室本氏烟草种植技术：从基础到实践
标题：实验室本氏烟草种植技术：从基础到实践
导言
烟草是一种重要的经济作物，其种植技术的不断革新对于提高产量、改善品质至关重要。
实验室本氏烟草种植技术作为一种现代化的种植方式，受到了广泛的关注。
本文将探讨实验室本氏烟草种植的方法及其实践意义。
实验室本氏烟草种植方法
1.种子选择与预处理：选择具有良好遗传性状的烟草种子，并进行适当的
预处理，如浸种、消毒等，以增强种子的萌发率和抗病能力。
2.基质培育：选择适宜的基质（土壤或无土培养基），在控制温湿度的条
件下进行培育，为幼苗的生长提供良好的环境。
3.灌溉与营养管理：确保灌溉水量和营养液的配比适宜，满足烟草生长的
水分和营养需求，避免水肥过剩或不足。
4.光照与温度控制：维持适宜的光照和温度条件，利用人工光源和温控设
备，模拟自然环境，促进烟草幼苗的生长和发育。
5.病虫害防治：定期检查烟草植株，及时发现并采取措施防治病虫害，如
使用生物农药或化学农药进行喷雾处理。
实践意义与应用前景
1.提高烟草品质：实验室本氏种植技术可以精确控制环境条件，优化烟草
生长过程，提高烟叶的品质和产量。
2.减少种植成本：相比传统的露地种植方式，实验室本氏种植技术可以减
少对土地、水资源的需求，降低种植成本。
3.科研与创新：实验室本氏种植技术为烟草育种、病虫害防治等研究提供
了良好的平台，推动烟草产业的科技创新。
结语
实验室本氏烟草种植技术在现代农业中具有重要的应用前景和实践意义。
通过不断的科研探索和实践验证，我们有信心可以进一步完善这一种植技术，为烟草产业的可持续发展做出更大的贡献。
一种烤烟育苗方法
一种烤烟育苗方法
烟育苗是指将烟草种子在特定的环境中培育成苗。
以下是一种常见的烤烟育苗方法：
1. 选种：选择适合自己地区气候和土壤条件的优质烟草种子。
2. 浸种：将烟草种子放入温水中浸泡12-24小时，使种子吸水膨胀。
3. 播种：在育苗盘或培育箱中均匀撒播种子，不要密植。
4. 培育基质：使用透气、保水性好的培育基质，如腐叶土和沙土混合。
在育苗盘或培育箱底部放一层混合基质。
5. 覆土：将一层培育基质轻轻覆盖在种子上，约厚度为种子的两倍左右。
6. 浇水：用喷雾器或水龙头小水流轻轻浇水，保持培育基质湿润但不过湿。
7. 光照：烤烟喜欢充足的阳光，将育苗盘或培育箱放置在明亮的位置，每天保证至少6-8小时的日照。
8. 温度控制：种子萌发需要适宜的温度，一般为20-25摄氏度。
可使用温度控制设备，如加热垫等，保持适宜的温度。
9. 管理：定期检查湿度和温度，保持适宜的条件。
防止病虫害的发生，如蚜虫、介壳虫等，可以使用安全的农药进行防治。
10. 移植：苗长到3-4片真叶时，可以进行移植到室外苗床或温室中继续生长。
以上是一种常见的烤烟育苗方法，具体的方法可能会因地区和个人需求有所不同，可以根据实际情况适当调整。
同时，也可以参考相关的育苗技术书籍和专业人士的建议。
烟草叶片组织培养及植株再生
1、选取的叶片应尽可能健康， 无病虫害。
2、消毒过程中要避免过度浸泡， 以免对叶片造成损伤。
3、培养基的成分和浓度是诱导愈伤组织的关键因素，需要根据实验目的进 行调整。
4、培养过程中的温度和光照也是影响愈伤组织生长的重要环境因素，需要 保持恒定。
步骤2：红花烟草叶片愈伤组织诱导后的处理措施以及后续的筛选和优化 在红花烟草叶片愈伤组织诱导成功后，需要进行以下处理措施：
谢谢观看
通过对红花烟草叶片愈伤组织的诱导与植株再生研究，可以为提高烟草的产 量和品质以及植物生物技术的进一步发展提供有力的支持。
步骤1：红花烟草叶片愈伤组织 诱导的基本步骤和注意事项
红花烟草叶片愈伤组织的诱导主要分为以下几个步骤：
1、选取健康的红花烟草叶片， 将其用自来水冲洗干净。
2、将洗净的叶片置于消毒液中浸泡一定时间，以杀死叶片表面的微生物。 常用的消毒液有70%酒精和0.1%升汞等。
烟草叶片组织培养及植株再生
01 一、引言
目录Leabharlann 02二、烟草叶片组织培 养
03 三、烟草植株再生
04 四、分析比较叶片组 织培养和植株再生
05 五、总结
06 参考内容
一、引言
随着生物技术的迅速发展，植物组织培养技术已成为一种重要的研究手段， 广泛应用于农业、林业、医药等领域。在烟草行业，叶片组织培养和植株再生技 术的运用对于提高烟草产量、品质以及抗病抗逆性等方面具有重要意义。本次演 示将详细介绍烟草叶片组织培养和植株再生的基本原理、方法及应用，并对其优 缺点进行分析和比较。
（1）方法：烟草叶片组织培养的主要流程包括选取叶片、消毒、接种、培 养、增殖和移栽等步骤。
（2）设备：实验室进行烟草叶片组织培养需要的基本设备包括超净工作台、 酒精灯、解剖刀、镊子、培养皿、三角瓶、摇床等。
烟草幼苗的组织培养实验报告
烟草幼苗的组织培养实验报告一，实验名称：烟草幼苗的组织培养二，实验原理：植物组织培养是指在无菌条件下，分离并在培养基中培养立体植物组织（器官和细胞）的技术。
植物组织培养的理论基础是植物细胞具有全能型。
植物组织当中原本已经分化的细胞，在脱离原有机体环境成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化的细胞发生脱分化，成为重新具有分裂能力的细胞（本实验中用到的是愈伤组织，是由植物的一个离体的细胞，一块组织或一个器官的细胞脱分化形成的），并重新生长发育成完整的植株。
生长素，细胞分裂素浓度之间的平衡可以决定烟草组织幼苗的叶片或茎髓将产生根，茎或仅仅是愈伤组织。
三，实验材料和用具：1、材料：烟草幼茎2、用具：超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、电子天平、移液器、手术器械、20ml量筒、PH试纸、烧杯、玻璃棒、三角烧瓶、封口膜、高压橡皮筋。
3、试剂：MS培养基、NAA、6-BA四，实验步骤：1、培养基的配置成分实际称取量大量元素（10×）40 ml蒸馏水300 ml微量元素（100×） 4 ml有机成分（100×） 4 ml铁盐（100×） 4 ml蔗糖12 g定容至400 ml激素（1 mg/ml）每130 ml MS加：生根6-BA=13 μl NAA=65 μl生芽6-BA=65 μl NAA=13 μl对照组（不加激素）pH值 5.8分瓶30 ml/瓶琼脂0.24 g2、培养基、剪子、镊子、枪头需在高压灭菌锅120摄氏度灭菌20分钟。
3、接种前打开无菌间和超净台紫外灯照射30分钟4、肥皂洗手和手腕，关闭无菌间棚顶紫外灯，打开超净台风机，并关掉超净工作台上的紫外灯。
再用百分之七十的酒精喷手。
5、点燃酒精灯6、将橡皮筋解开（不掀开封口膜），放到无菌风道侧面。
将镊子见到放到酒精灯外焰灼烧，冷却后剪取外肢体。
迅速用另一手持三角瓶，去下封口膜，瓶口略倾斜，在酒精灯外焰上灼烧数秒。
烟草的组织培养与植株再生
烟草的组织培养与植株再生作者：梁程李一鹏来源：《读天下》2017年第10期摘要：在MS培养基上，接种烟草无菌苗的叶片，分别放在光照和黑暗条件下诱导愈伤组织，接种于MS分化培养基上，在光照下分化再生植株。
结果表明：光照和植物生长调节剂对植物愈伤组织的诱导和植株再生产生影响。
关键词：烟草；愈伤组织；植株再生一、实验目的1. 掌握植物组织培养的方法和要点。
2. 学习培养基配制方法、步骤及叶片培养环节中，外植体灭菌、接种、培养观察等技术环节。
3. 了解外植体脱分化及再生过程。
二、材料与器材1. 植物材料：烟草叶片。
2. 实验药品：MS培养基、蔗糖、琼脂、升汞、NAA、6-BA、NaOH。
3. 仪器设备：高压灭菌锅、光照培养箱、天平、pH计、超经工作台、酒精灯。
4. 器械及用具：镊子、手术刀、记号笔等。
5. 玻璃器皿：培养瓶、量筒、容量瓶等。
三、实验步骤（一） MS培养基母液配制大量元素配成50倍母液，使用时每1L培养基需要从母液中取20mL。
配制母液时应做到分别称量，充分溶解，在混合次序上应最后加入Ca2+，混合时要边加边混合。
微量元素配成100倍母液，使用时每配制1L培养基从母液中取10mL，配制时应注意充分溶解后再依次混合。
铁盐单独配制，与其他元素混合易造成沉淀。
一般采用螯合铁，即FeSO4与EDTA钠盐的混合物，一般扩大100倍。
EDTA钠盐须用温水溶解，然后与FeSO4液混合，在75℃～80℃之间让其螯合1h。
使用螯合铁的目的是避免沉淀，并使培养基能缓慢不断地供应Fe2+。
有机物质可配成100倍浓缩液，使用时每1L培养基加10mL。
（本次实验采用培养基粉末代替较为方便）（二）培养基的配制取1000mL烧杯，先加入500mL的蒸馏水，然后根据培养基成分及用量，吸取各种母液加入烧杯，称取蔗糖（一般用量3%）、琼脂（一般6～8g/L），按需要的浓度加入植物激素，加水至800mL，加热使琼脂融化，定容到1000mL，用1NNaOH或HCl调pH至5.8。
组培实验报告——烟草的再生
植物组织培养题目：烟草的再生姓名：专业班级：学号：指导老师：2012年10月13日烟草的再生前言植物组织培养是指用无菌方法使植物体的离体器官、组织和细胞在人为提供的条件下生长和发育的所有培养技术的总称，也称之为离体培养或试管培养。
细胞全能性是指植物体的每一个具有完整细胞核的细胞都具有该物种全部遗传的物质，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。
细胞全能性是植物组织培养的理论基础。
一个细胞一旦沿着某一条特定的途径分化发育后，一般不会再回复到未分化状态，但在组织培养条件下，可能发生脱分化和再分化。
脱分化：将已分化的不分裂的静止细胞，放在培养基上培养后，细胞重新进入分裂状态。
一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化。
再分化：经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可转变为各种不同的细胞类型，形成完整植株的过程。
植物组织培养的过程：植物组织培养的类型，按材料分为：愈伤组织培养、器官培养（胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、叶、花和幼果的部分组织的培养）、细胞培养（悬浮细胞培养和单细胞培养）、原生质体培养。
本次实验采用的就是器官培养，以烟草叶作为培养材料。
植物组织培养可以分为初代培养和继代培养。
初代培养是指外植体的最初培养。
继代培养是将初代培养得到的培养体移植于新鲜培养基中这种反复多次移植的培养，成为继代培养。
植物组织培养的特点：1、培养条件可以人为控制。
2、生长周期短，繁殖率高。
3、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制。
故植物组织培养具有良好的前景，可用于快速繁殖、种苗脱毒、远缘杂交、突变育种、单倍体育种等。
一、实验目的1、了解掌握组织培养的基本概念和基本原理。
2、了解开展组织培养工作的基本设施。
3、了解无菌操作和组织培养的操作技术。
二、实验原理植物体细胞具有细胞全能性。
细胞一旦脱离了母体植株，拜托了原来所受到的遗传上的控制和生理上的制约，在一定的培养条件下，就会发生一种回复变化，从而失去分化状态，变为分生细胞，实现脱分化过程。
烟草组织培养实验方案
烟草组织培养实验方案摘要本实验通过配制四种培养基来实现烟草种子萌发，种子苗叶片诱导、分化及植株再生，从而获得课题所需要的基因受体植株。
关键词烟草组织培养前言组织培养不仅是一种植物快速繁殖的手段,同时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径。
烟草是典型的基因工程模式植物,易于进行组织培养,容易得到再生的转化植株。
一实验植物：华烟6号二实验材料：华烟6号种子三实验方法与步骤1．培养基的配制本次实验使用（1）种子萌发培养基：MS培养基+GA30.7mg/L；（2）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L；（3）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L；（4）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。
上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8，培养温度25±2℃，光照强度2 000 lx。
2. 培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）3. 无菌苗的获得把烟草种子用市售丝袜（或纱布）包好，先分别用75%乙醇或无菌水浸泡30 s，用无菌水洗净表面抑制种子萌发的药物，待洗涤的水清澈透明，然后将烟草种子用70%酒精浸泡1 min, 10%NaClO消毒10 min,经无菌水漂洗后，在超净工作台处（紫外灭菌20～30min）接种于以配置好的（1）培养基,放入(27±1)℃的光照培养架中培养。
光照周期为10 h(8:00~18:00)光照,12 h暗培养。
种子苗具4~5叶时继代扩繁备用。
4. 烟草叶片愈伤诱导及不定芽分化在超净工作台上取上述烟草无菌苗幼嫩叶片1~2片于无菌培养皿中，将叶片切成1.0～1.5平方厘米的小方块，接入（2）中培养。
约2～3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀，15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织，愈伤组织诱导率为100%。
30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点。
烟草叶片培养
实验六烟草叶片培养
一、目的要求
1、了解烟草叶片组织培养植株再生的途径。
2、熟练掌握叶片外植体的消毒与接种技术。
二、材料、仪器与试剂
1、材料：带有3-5片以上真叶的烟草实生苗；
2、仪器：超净工作台、培养皿、接种工具、酒精灯等；
3、试剂：固体培养基（MS无机+B5有机+2mg/L 6-BA）、消毒剂、无菌蒸馏水等
三、方法步骤
1、选取大小合适的烟草幼嫩叶片，剪下后放入小烧杯中用清水冲洗去掉叶片表面灰尘，70%酒精处理30s，10%次氯酸钠溶液10min，无菌水冲洗3-5次后，无菌水浸润备用。
2、将一片消毒处理后的烟草叶片放置于培养皿中，用无菌解剖刀切成0.5c m×0.5cm大小左右的碎片，并将其接种至已配制好的无菌固体培养基表面。
3、将接种好的材料放置于25±2℃的培养室中进行培养。
4、观察叶片的生长状况，并记录过程。
四、作业
将本次实验过程写成实验报告，并写出实验观察结果。
烟草植物组织培养
烟草植物组织培养实验一实验目的学习和掌握植物组织培养技术，理解植物细胞的全能性。
二实验原理植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。
在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。
①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。
用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。
起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。
机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。
在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。
外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有生长素（2，4-二氯苯氧乙酸2，4-D、萘乙酸NAA、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸IBA）细胞分裂素（6-苄氨基嘌呤6-BA、6-糠氨基嘌呤（KT）氯吡苯脲（KT-30，CPPU））等。
分裂期是指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。
处于分裂期的愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。
外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。
例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难；花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难；幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织脱分化比较难。
彭勇 烟草组织培养实验报告
烟草组织培养 实验报告单位：华中师大一附中姓名：彭 勇完成时间：2016.10.14烟草组织培养（彭 勇 华中师大一附中）一 实验目的1．熟悉植物组织培养技术的基本原理2．掌握培养基制备、外植体处理、接种、培养观察等技术方法3．理解外植体脱分化及再分化过程二 实验原理植物体细胞具有细胞全能性。
在无菌且光照、温度、营养等培养条件适宜的情况下，离体的植物组织会经过脱分化过程形成愈伤组织，经再分化形成丛芽、生根最终发育成新的幼苗。
三 实验材料、药品及仪器1．实验材料：脱毒烟草幼苗（川布兰公司提供）2．实验药品：70%酒精、超纯水、MS培养基试剂盒等（试剂盒包含MS培养基干粉、pH试纸、激素A/B，川布兰公司提供）3．仪器设备：微波炉、高压蒸汽灭菌锅、光照培养箱、电子天平、pH计、超经工作台、酒精灯等4．器械及用具：镊子、手术剪、酒精灯、记号笔等5．玻璃器皿：培养瓶（川布兰公司提供）、量筒、容量瓶、烧杯、培养皿等四 实验简要过程与操作1．操作间超净工作台的准备将组培室操作间、超净工作台、光照培养箱等打扫清理干净，并用70%酒精对超净工作台等设备进行擦拭消毒，然后将操作间和超净工作台的紫外灯和风机打开，消毒30-60min。
2．培养基的制备按照试剂盒附带说明书称量、溶解培养基干粉并用微波炉煮沸，定容后浓度浓度为42g/L；然后调节pH至6.0。
其中用叶片诱导愈伤组织时，1L培养基需添加激素A 2mL、激素B 20μL；愈伤组织诱导丛芽、根的分化，以及用带芽的茎段直接诱导培养幼苗时，则无需添加激素A和B。
3．培养基的分装将煮沸并定容后的培养基（呈现澄清透明状），冷却至约50℃（不烫手）时分装至培养瓶，每瓶分装约20-30mL，适当拧紧培养瓶盖。
4．器具及培养基的高压蒸汽灭菌将分装好的培养瓶以及用牛皮纸包好的镊子、手术剪、培养皿等一并放入高压蒸汽灭菌锅内，121℃加热20min；灭菌完成后取出置于消毒好的超净工作台，待其自然冷却，培养基灭菌后在瓶底有少量铁锈色颗粒沉淀。
细胞工程实验-烟草叶片的组织培养.
细胞工程学实验报告专业：_ 09级生物技术一班__ 姓名：___ __ 学号：____ _ _实验一实验室的设计及基本设备一、实验室的设计1、实验室设计的原因：植物细胞工程实验室的流程是：清洗玻璃器皿、配制培养基、高压气灭菌、无菌操作、培养室培养植物、植物材料的检测。
因此实验室需要有清洁器皿和配制培养基的准备室，无菌操作室或超净工作台，供培养材料用的培养室，检查培养情况并做记录的实验室。
一般在设计上，每个组分最好按工作的自然程序连续排列，如：准备室、灭菌室、无菌操作室、植物材料培养室、检测室。
实验室的安排应合理简洁，并要求无尘、灭菌、光洁、清净。
2、实验室的布局要求：（1）准备室准备室可以是一大间或几小间，主要用于进行一切与实验有关的准备工作：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器脿醮涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。
必要的设备有:准备室应具备实验台、药品柜、水池、仪器、药品、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器等。
洗涤灭菌区功能：完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。
要求：洗涤灭菌室根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制在30-50m2。
在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。
中央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。
如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。
准备1-2个洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿，地面应耐湿并排水良好。
设备：水池、落水架、中央实验台、高压灭菌锅、超声波清洗器、干燥灭菌器（如烘箱）等。
（2）无菌室（接种室）进行植物细胞、组织培养操作的关键是无菌条件。
室内的墙壁要求光滑平整；地面为光洁的水磨石，平坦无缝，避免灰尘积累，便于清扫。
紫外灯一般在3到4平方米内安装1到2只；在工作台下安置紫外灯紫外灯可使灭菌彻底。
同时，工作台上方安装平板玻璃，以防操作时落灰。
条件不好时，用无菌箱代替无菌室，箱内用紫外灯灭菌。
实验室本氏烟草种植方法
实验室本氏烟草种植方法
一、准备种子与介质
在开始种植之前，需要准备好本氏烟草的种子以及合适的栽培介质。
选择的栽培介质应具有良好的排水性和透气性，以确保植株健康生长。
将种子浸泡在温水中，促进发芽。
二、播种与育苗
将准备好的种子均匀播撒在介质中，轻轻覆盖一层薄土。
保持适宜的温度和湿度，促进种子发芽。
当幼苗长出真叶后，逐渐增加光照，促进光合作用的进行。
同时，注意控制温度，避免过高或过低的温度对幼苗造成伤害。
三、移栽与管理
当幼苗长到一定大小时，可以进行移栽。
选择适当的盆器，将幼苗移入，并加入新的栽培介质。
移栽后要立即浇水，并保持适宜的温度和光照。
随着植株的生长，要适时施肥，以满足其营养需求。
同时，注意防治病虫害，确保植株健康生长。
四、修剪与整理
在本氏烟草生长过程中，需要进行适当的修剪和整理。
及时摘除枯黄叶片，修剪过长的枝条，保持植株形态美观。
同时，要注意防治病虫害，及时发现并处理病枝病叶。
在收获前，将烟草叶片晾晒干燥，去除杂质和破损部分，确保品质优良。
通过以上步骤，可以成功种植出品质优良的本氏烟草。
在种植过
程中，要注意观察植株的生长状况，及时调整环境条件和管理措施，以确保产量和品质的稳定。
烟草栽培学实验指导书
目录实验一烟草形态与类型的观察与识别 (2)实验二育苗技术观察 (5)实验三烤烟烟苗素质考察 (10)实验四主要栽培技术与烤烟生长分析 (11)实验五打顶时期与留叶数对叶片生长的影响观察 (12)实验六烤烟叶片经济性状考察 (13)实验一烟草形态与类型的观察与识别一、目的通过观察烤烟根、茎、叶等器官构造与形态，建立对烟草初步的感性认识；观察掌握不同类型烟草的形态特征并能识别。
二、内容观察烤烟植株形态及根、茎、叶等器官特征，观察烤烟、白肋烟、香料烟、晒烟、晾烟、黄花烟六种类型的外观特征，并能描述。
1、烤烟烤烟亦称火管烤烟，源于美国的弗吉尼亚州，具有特殊的形态特征，因而也被称为弗吉尼亚型。
烤烟的主要特征是植株高大，叶片分布较疏而均匀。
一般株高120-150cm，单株着叶20-30片，叶片厚苤适中，中部的质量最佳。
栽培上不宜施用过多的氮素肥料。
叶片自下而上成熟，分次采收最初的调制方法也是晾晒。
后来（1869）年改用火管烘烤。
目前是在烤房内调制，烤后呈金黄色。
其化学成分的特点是含糖量较高，蛋白质含量较低，烟碱含量中等。
烤烟是我国也是世界上栽培面积最大的烟草类型，是卷烟工业的主要原料，也被供作斗烟。
世界上生产烤烟的国家主要有中国、美国、印度，其次是巴西、津巴布韦、泰国、加拿大、日本等。
我国烤烟种植面积和总产量都居世界第一位。
重点产区有河南、山东、云南、贵州、黑龙江、湖南、湖北、陕西、安徽等省，四川、广东、福建、辽宁、江西、广西、吉林等省（区）也有较大面积的栽培。
2、晒烟晒烟的烟叶利用阳光调制，主要有晒红烟与晒黄烟。
一般晒黄烟外观特征和所含化学成分与烤烟相近，而晒红烟则同烤烟差别较大。
晒红烟的叶片一般较少，叶肉较厚，分次采收或一次采收，晒制后多呈深褐色或褐色，以上部叶片质量最好。
烟叶一般含糖量较低，蛋白质和烟碱含量较高，烟味浓，劲头大。
晒烟主要用于斗烟、水烟和卷烟，也作为雪茄芯叶、束叶和鼻烟、嚼烟的原料。
此外，有些晒烟还可以加工成杀虫剂。
烟草幼苗的组织培养
(2) 无菌间和超净台: 紫外灯照射30min；
(3) 清洗手和手腕 ； (4) 关掉无菌间棚顶及超净工作台上的紫外灯，打开超净台风机，用70%酒精灭 喷手； (5) 坐在超净工作台前，用70%酒精棉球擦拭双手、培养基瓶和超净台面； (6) 点燃酒精灯。
四、操作步骤
2. 接种
① 将装有培养基的三角烧瓶橡皮筋解开（不掀开封口膜），放到无菌风道
烟草幼苗的组织培养一目的与要求掌握植物组织培养中无菌操作技术学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法实验原理植物组织培养在无菌条件下将植物体的一部分细胞组织器官切割下来接种到营养介质上使其增殖成一群细胞组织器官甚至完整植物体的实验技术
烟草幼苗的组织培养
一、目的与要求
掌握植物组织培养中无菌操作技术 学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法
三、材料和用具
材料：烟草幼苗 器具：超净工作台 高压灭锅 光照培养箱 三角烧瓶等 试剂：MS培养基
NAA 6-BA 2，4-D
诱导培养基配制
成 分 终 浓度要求 10% 用 量
① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ⑨ ⑩
大量元素（10×） 蒸馏水（3/4总体积） 微量元素（100× ） 有机成分（100×） 铁盐（ 100×） 蔗糖 加蒸馏水粗略定容 激素(0.1mg/ml) 调pH 分 30ml/瓶（组号、激素比例） 琼脂
侧面。
② 将镊子、剪刀在酒精灯外焰上灼烧，待其冷却后、剪取烟草叶。 ③ 取下封口膜，手持三角瓶，瓶口略倾斜，将叶片插入培养基。 ④ 在酒精灯火焰上灼烧数秒（阻断微生物进入），盖好封口膜，扎紧橡皮 筋。 ⑤ 瓶上写上姓名。 ⑥ 将培养瓶、剪刀、镊子带回实验室。
3. 培养
在光照培养箱中培养4周，25℃，光照16h，暗期8h，湿度70%-80%。
实习报告烤烟壮苗的培育
实习报告烤烟壮苗的培育（一）、实习目的（1）、通过苗床整地、施基肥、播种等实践操作掌握烤烟烟苗的播种技术。
（2）、观察出苗期、十字期、伸根期、出苗率、苗的长势和长相及苗床水肥等管理掌握苗期生育动态。
（3）、通过理论知识与实践相结合提高观察问题和分析、解决问题的能力。
（4）、通过课程实习养成独立思考、认真好学、吃苦耐劳、刻苦钻研、团结友爱、协作互助的良好作风。
（二）、实习时间、地点实习时间：2xxx年12月实习地点：xx农林大学作物科学学院教学基地（三）、实习原理与方法实习中烤烟烟苗是在温室内采用营养钵育苗，即采用个体小钵形式，实行一苗一钵培育，并由营养钵提供营养的方式。
营养钵育苗的苗距受钵体控制，能做到适宜和一致，有利于提高烟苗的整齐度，增加可用苗数。
其次，烟苗带钵移栽，根系损伤少，烟苗抗逆性强，栽后成活率高，还苗快，甚至没有还苗期，有利于烟苗移栽后的早发快长。
此外，对营养土消毒经济方便，苗床病、虫、杂草害易于控制。
实习是通过田间实践操作，观察测定后，结合文献资料，对数据进行整理分析，得出烤烟苗期的生长情况。
（四）、实习内容（1）、苗床整地在无病虫害，并消毒过的温室内将苗床地浅耕、耙细、整平，并整成三个平畦，分别作为云烟8（5）、翠碧一号和K326的苗床。
注意在育苗期间温室内禁止吸烟。
（2）、营养钵制作营养土要选用无病虫害的新土，过细筛，加入1%复xx拌匀，其中复xxN、P、K比例为10：8：15。
理想的营养土要求成钵后肥沃、疏松、保水，无病原菌的特性。
营养土配成后进行装钵，装钵前须对营养土加水拌和，使之湿润，以便于装钵，营养土的湿度要掌握好，不能过干或过湿，以手握成形，掉下散开为宜。
钵体有一次性的和可回收的。
本次实习使用可回收多次利用的塑料钵。
装钵时，可先装钵一半，稍加按实后再装土满钵，形成上松下实的钵体结构。
装土完毕，即可进行播种。
（3）、播种播种时先用手指轻压每个钵的中央，形成小的凹陷，使种子播后处于一定深度，对提高出苗率有利，每钵播2-3粒种子。
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烟草叶片的组织培养一、实验原理与实验步骤在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。
植物材料：烟草植株药品：（2,4-D、NAA、6-BA浓度均可）、1mol/L NaOH、1mol/L HCL 蒸馏水、70%酒精0.01%升汞仪器：玻璃杯、玻璃棒、pH试纸(5.5-9.0)、1瓶无菌水、1个无菌烧杯、1包无菌滤纸、1个无菌白瓷板、培养瓶若干移液器、微波炉、灭菌器、超净工作台、酒精灯、解剖刀、镊子二、实验方法与步骤注意：1、大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2、微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O 和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签3、铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4、有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
（1）制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
（2）称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。
称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃）保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为0.5mg时，则取1ml母液即可。
三、培养基配制和灭菌本次实验使用（1）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D0.5mg/L+6-BA1.0mg/L；（2）幼芽增殖培养基：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L；（3）生根培养基：MS+NAA0.2mg/L。
注意事项：上述培养基均在MS固体培养基溶化后降低到50左右后，加入相应激素所得，MS固体培养基的配置过程在此不作过多赘述上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8，培养温度25±2℃，光照强2000lx。
母液吸取量的计算配制培养基的升数公式1：母液吸取量=母液体积（CC）×（配制培养基的升数/母液浓缩倍数）公式2：母液吸取量=（培养基要求的含量/ 母液每CC的含量）（各种生长调节剂）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg，NAA用少量95%酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
配制培养基（1000ml）1.琼脂:称取5~7g琼脂，加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止.2.蔗糖3%用质量较好的白糖代替，称取30g白糖，溶于溶有琼脂的300ml蒸馏水中。
3、各种母液的吸取（培养基1L）（1）用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母液（B）各100ml （2）分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐（D）母液各10ml （3）用10ml移液管或吸管吸取有机物（H）10ml（4）移取激素将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至80℃左右，用酸度计或精密PH试纸测定培养基的PH一般要求 5.8~6.0，过酸过碱则用1N NaoH和1N HCL调整。
分装：用一个接有胶管的分装器趁热装培养基，1000ml培养基分装到25-30个三角瓶中，每个三角瓶约30ml左右（一般占试管、三角瓶容量1/4~1/3左右）注：培养基勿碰瓶壁。
包装：分装好的三角瓶用封口膜包扎好，标明培养基代号即可进行灭菌。
用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。
四、培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（高压蒸汽灭菌锅的使用方法）具体操作步骤：1.高压锅放水至平把架；2.把包扎好的培养基装入高压锅;3.盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀.4.然后接通电源.5.压力计升至0.05MPa时，打开放气阀,排除冷空气(此步很重要)。
6.排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到0.11MPa位置时，开始计算灭菌时间，具体方法：当压力锅指针升至0.12MPa时，关闭电源，待指针下降至0.11MPa 时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟。
7.灭菌时间达到20分钟后，除去电源，打开放气阀(注意要逐渐放气)待高压锅内的空气完全排除后，打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍待冷后再把培养基取出。
8.经过灭菌的营养培养基不宜放置太长，应尽早使用，但为了在使用前能检查培养基有无微生物污染，可将培养基置于25℃下保存4天，如果培养基需要贮存较长时间，可在4℃低温下保存。
灭菌高压锅有大型卧式、中型立式、小型手提式等多种型号和规格，无论哪种型号，操作的步骤都很相近。
进水→放进培养基→盖紧锅盖→关上放汽阀→检查安全阀→接上加热源→待压力升至0.05MPa时排锅内冷空气，关上放气阀→0.11MPa(121℃)下灭菌20~25分钟，保持稳定压力→除热源→逐渐打开放气阀→锅内空气排除完后→开放锅盖→稍冷后取出培养基。
五、植物材料表面灭菌——消毒剂灭菌外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。
这些污染源一旦带入培养基，便会造成培养基污染。
因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上，这一过程叫做接种。
1、接种步骤：第一步：清理材料→→流水冲洗→→加入吐温（或洗衣粉）清洗→→自来水冲洗第二步：对材料的表面浸润灭菌：70%酒精浸10-30秒→→无菌水第三步：灭菌剂处理→→0.1-1%升汞5-8min（或其他灭菌剂）第四步：无菌水进行冲洗注意事项：1.灭菌剂一般要临时配制，现配现用．升汞可以短期储存。
2.对去除较容易的灭菌剂灭菌后无菌水冲洗3-4次，升汞一般5-8次，每次不少于3min。
3.灭菌时要轻轻的搅拌，消除气泡，使消毒更彻底。
4.灭菌时间是从倒入消毒液开始，至倒入无菌水时为止。
5.灭菌液要充分浸没材料。
2、无菌操作可按以下步骤进行：（1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开其内紫外线灯进行杀菌；（2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯；（3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；（4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。
然后搽拭工作台面；（5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；（6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切割。
（如叶片切成0.5cm2的小块；茎切成含有一个节的小段。
微茎尖要剥成只含1-2片叶原基）在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。
（7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭菌30分钟，若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。
六、烟草叶片愈伤组织的诱导和不定芽的分化（1）于超净台中彻底冲洗外植体；70%酒精消毒3min；无菌水冲洗3遍，每遍3min；将烟草叶片残留的水分用灭过菌的滤纸吸干；白瓷板上用消毒的解剖刀分割为1-1.5cm2的小块；接入相应的MS培养基上，每瓶接种4-5块。
接入（1）中培养。
（2）约2～3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀；（3）15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织，愈伤组织诱导率为100%（4）30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点（5）60d后，不仅从愈伤组织上分化出越来越多幼芽，芽诱导频率(芽数/块愈伤组织)为25～35，而且还可观察到，该愈伤组织较早分化产生的幼芽叶片呈现不同程度白化（或缺绿）。
但此时若将此缺绿幼芽切下，转接至不加2,4-D的幼芽增殖培养基（2）上。
（6）3～5d后即可恢复正常，缺绿症状消失，并可不断增殖，发育成绿色健壮的小苗。
七、诱导生根及移栽与数据记录取约3～4cm长的无根小苗接种于生根培养基（3）中，约7～8d后，几乎所有外植体均从其基部产生白色幼根，根诱导频率为3～5，部分在培养基表面的根具大量白色根毛。
当试管苗长至5～6cm高时，打开瓶口，在散射光下放置2d后取出，洗去根部残留培养基，种植于经过消毒的珍珠岩、泥炭土和菜园土等量混合的基质中，成活率可达95%以上。
烟草叶片愈伤组织诱导情况烟草叶片愈伤组织再生植株情况烟草叶片诱导生根情况。