生化实验指导
生物化学实验指导实验一蛋白质的性质实验（一）（呈色反应）一、目的1
生物化学实验指导实验一蛋白质的性质实验（一）（呈色反应）一、目的1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要联接方式。
2.了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、虽色反应：(一)双缩脱反应：1.原理：尿素加热至180℃左右生成双缩脲并放出一分子氨。
双缩脲在碱性环境中能与cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。
可用于蛋白质的定性或定量测定。
一切蛋白质或二肽以上的多肽部有双纳脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
2.试剂：(1)尿索： 10克(2)10%氢氧化钠溶液 250毫升(3)1%硫酸铜溶液 60毫升(4)2％卵清蛋白溶液 80毫升3.操作方法：取少量尿素结晶，放在干燥试管中。
用微火加热使尿素熔化。
熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。
冷后，加10％氢氧化钠溶液约1毫升，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。
观察出现的粉红颜色。
避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。
向另一试管加卵清蛋白溶液约l毫升和10％氢氧化钠溶液约2毫升，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇，观察紫玫色的出现。
(二)茚三酮反应1.原理：除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
该反应十分灵敏，1：1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分于和氨缩合生成有色物质。
反应机理如下：此反应的适宜pH为5—7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
2.试剂：(1)蛋白质溶液 100毫升2％卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液(蛋清：水＝1：9)(2)0.5％甘氨酸溶液 80毫升(3)0.1％茚三酮水溶液 50毫升(4)0.1％茚三酮—乙醇溶液 20毫升3.操作方法：(1)取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升，再各加0.5毫升0.1％茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1—2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。
生物化学实验指导：酶的活性测定实验
生物化学实验指导：酶的活性测定实验1. 引言在生物化学领域，测定酶的活性是一项重要的实验技术。
酶是生物体内参与许多生化反应的催化剂，能够加速反应速率。
通过测定酶的活性，我们可以了解其催化效率和特性。
本实验旨在教授如何测定某一种酶的活性，并提供相应步骤和分析方法。
我们选择一种常见的酶作为例子，详细介绍实验操作步骤和数据处理方法。
2. 实验材料•酶提取物•底物（适合所选酶催化反应的底物）•缓冲溶液（pH值适合所选酶催化反应的缓冲溶液）•辅助试剂（如辣根过氧化物酸）•试剂盒或相关仪器设备3. 实验步骤步骤1：制备必要溶液1.准备合适浓度并调整pH值适合实验目标的缓冲溶液。
2.准备底物溶液，确保其浓度符合实验要求。
步骤2：制备标准曲线1.准备一系列不同底物浓度的标准溶液。
2.按照指定的方法将不同底物浓度的标准溶液与酶提取物混合。
3.在一定时间间隔内，记录反应进程中释放的产物（如颜色变化）。
步骤3：样品预处理1.从所需生物样品中提取目标酶。
可以采用相关提取方法，如超声波法、机械破碎法等。
2.将提取得到的酶溶液进行适当稀释，以便后续操作过程中能够在合适浓度范围内工作。
步骤4：活性测定实验1.将提取得到的目标酶与底物溶液以及其他必要试剂加入适当容器中，形成反应体系。
2.控制温度和pH值，确保反应条件符合要求。
3.运行反应体系一段时间，并记录反应进程。
步骤5：数据处理和分析1.使用已经制备好的标准曲线，根据测试产生的光吸光度（或其他测量结果）计算出底物的浓度。
2.根据所得底物浓度和反应时间，计算出酶催化反应速率。
3.通过对不同条件组的实验数据进行比较和统计分析，可以进一步了解酶活性受到哪些因素影响。
4. 结论通过本实验指导，我们能够学会如何进行酶的活性测定实验，并熟悉基本的数据处理和分析方法。
这一实验可以为进一步探究酶催化机制、优化酶工艺等提供基础。
实践中，可以根据具体需求对该实验设计进行适当调整和补充。
生化实验指导
实验一氨基酸的分离鉴定――纸层析法一、目的通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
层析溶剂由有机溶剂和水组成。
物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示的：Rf = 原点到层析中心的距离/ 原点到容剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
本实验利用纸层析法分离氨基酸。
三、器材1、层析缸2、毛细管3、喷雾器4、培养皿5、层析滤纸(新华一号)四、试剂1、扩展剂650mL是4份水饱和的正丁醇和1份醋酸的混合物。
将20 mL正丁醇和5 mL冰醋酸放人分液漏斗中，与15mL水混合，充分振荡，静置后分层，放出下层水层。
取漏斗内的扩展剂约5mL 置于小烧杯中做平衡溶剂，其余的倒人培养皿中备用。
2、氨基酸溶液0．5％的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液(各组份浓度均为0．5％)。
各5mL3、显色剂50～lOOmL0．1％水合茚三酮正丁醇溶液。
五、操作1、将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。
2、取层析滤纸(长22 cm、宽14 cm)一张。
在纸的一端距边缘2～3 cm处用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号。
3、点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在这6个位置上，干后再点一次。
每点在纸上扩散的直径，最大不超过3 mm。
4、扩展用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。
将盛有约20 mL扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中(点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1 cm)。
待溶剂上升15―20 cm时即取出滤纸，铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。
5、显色用喷雾器均匀喷上0。
1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
6、计算各种氨基酸的Rf值。
生物化学实验指导1
生化实验室的一般规则1. 进入实验室应穿着工作服。
留长发的同学应挽短、戴帽。
2. 整洁。
实验台必须洁净，各种仪器放置要有秩序。
实验完毕，必须将仪器洗净、放好，拭净台面，方可离开实验室。
3. 安静。
实验时不可谈笑，如有问题可以小声请教师解答。
4. 废物及废液处理。
实验完的废液应倾入水槽中，并用水冲净。
但浓酸、浓碱及氰化物等不可倒入水槽，应倾入预先准备的废液盆或污物桶中。
少量浓酸、浓碱可直接倾入水槽，然后以大量流水冲净。
火柴梗、废滤纸、棉花等不可扔入水槽，应弃入废物盆或垃圾箱中，以免堵塞水管。
5. 试剂与标准溶液。
取用试剂后，应立即将瓶塞盖好；放回原处。
取用有毒试剂时，须用滴定管或滴管。
取样时，应注意用多少取多少。
如未用完只可弃去，不可倒回瓶中；6. 凡可产生烟雾或有毒气体的实验必须在通风橱中操作。
7. 在用恒温水浴箱保温时，应注意随时盖好箱盖。
调节温度到所需温度后，即不再旋动调温旋扭。
8. 贵重仪器如分光光度计、离心机等必须爱护，使用前应熟读使用方法，记住操作要点，按操作规程工作。
如有问题应请教师帮助，不得自行拆卸检修。
9. 防火。
勿使酒精、乙醚或其它易燃试剂靠近火焰。
若蒸发此类溶液时，应用水浴，不得直火加热，以免发生火灾。
10. 实验前应熟读实验指导，记住要点。
实验时应仔细操作并注意观察现象及结果，及时记录。
生化实验的基本操作-1-一、玻璃器皿的洗涤玻璃器皿的洗涤在生物化学实验中是一项重要的工作。
实验性质不同所采取的洗涤方法也不同。
例如研究酶制备的反应时，组织匀浆对金属的污染是非常敏感的，至于细菌的悬浮液对少量的金属可能不敏感，但少量的维生素和其它有机物质则有较大的影响。
一般氧化剂洗液如重铬酸洗液不能有效地除去油脂、硫酸钡等污迹。
因此污迹不同所应采用的洗涤试剂和方法也不同。
如可用汽油或洗涤剂（洗衣粉液或洗洁净）除去油脂，用酸性硫代硫酸钠溶液或热草酸除去氧化性污迹MnO2等，用40％尿素除去附着管内壁的血凝块等。
生化技术实验指导
实验一 DNS（3,5-二硝基水杨酸）比色法测定还原糖一、实验目的掌握还原糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；精密pH试纸。
2．主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3．试剂（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂四、操作步骤1．制作葡萄糖标准曲线取7支20mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
生化实验室作业指导书
生化实验室作业指导书
1. 实验目的，指导书会明确列出每个实验的目的，即该实验的重点是什么，学生需要通过实验达到什么样的学习目标。
2. 实验原理，指导书会详细介绍实验涉及的生化原理和相关背景知识，以便学生能够理解实验的理论基础。
3. 实验步骤，具体的操作步骤是指导书中非常重要的一部分，会详细描述每个实验的步骤和操作方法，以及所需的实验器材和试剂。
4. 安全注意事项，在进行生化实验时，安全是非常重要的，指导书会列出实验室的安全规定和注意事项，包括化学品的使用、实验器材的操作注意事项等。
5. 数据记录与分析，指导书通常会要求学生记录实验过程中的数据，以及进行数据分析和实验结果的总结与讨论。
6. 实验报告要求，最后，指导书通常会明确要求学生完成实验报告的格式和内容要求，包括实验目的、原理、步骤、结果分析等
内容。
生化实验室作业指导书的编写需要考虑到学生的实际水平和实
验条件，以及实验的教学目标和要求。
指导书的内容应该清晰明了，能够帮助学生顺利完成实验并达到预期的学习效果。
同时，指导书
也应该注重培养学生的实验操作能力、数据处理能力和实验报告撰
写能力。
希望这些内容能够帮助你更好地理解生化实验室作业指导
书的内容和要求。
生化技术实验指导书(20学时)
生化技术实验指导书湖北工业大学生物工程学院二0一0年三月修订实验一酵母RNA的提取及其组分的鉴定一、实验目的1.了解稀碱法提取RNA及提取物组分鉴定的基本原理；2. 掌握稀碱法提取RNA及提取物组分鉴定的具体操作方法。
二、实验原理酵母中RNA的含量比较丰富（2.67%~10%），而DNA的含量相对地较少（据资料报道，酵母DNA的含量低于RNA的20%），因此从酵母中提取RNA比较方便。
RNA溶于碱性溶液，碱性溶液使蛋白质带负电荷，促进RNA(带负电荷)与蛋白质的分离，碱性溶液可使酵母细胞壁变性，同时进行加热，可增加细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
因此，酵母粉用稀碱液加热抽提时，可将其中的RNA抽提出来。
当碱性抽提液中和后，加入2倍体积的95%乙醇时，可以使抽提物沉淀出来。
抽提物的主要成分是RNA的钠盐，并带有少量的蛋白质。
用碱抽提时，RNA会有不同程度的降解。
地衣酚（3，5-二羟基甲苯）是比较灵敏的测定戊糖的试剂，常用于测定RNA。
核糖与地衣酚试剂反应呈现鲜绿色。
地衣酚试剂反应灵敏，也易被其他物质干扰。
DNA中的脱氧核糖也可与地衣酚反应，因此，单靠地衣酚显色实验不能作为RNA 与DNA鉴别依据。
二苯胺试剂是常用于测定DNA中脱氧核糖的试剂，脱氧核糖与二苯胺试剂反应产生蓝色物质，而RNA中的核糖一般不与苯胺起反应。
嘌呤碱可与硝酸银反应生成白色的嘌呤银化合物的沉淀。
双缩脲反应是检验蛋白质常用的颜色反应。
双缩脲或含有两个以上肽键的化合物（蛋白质、肽等）在碱性条件下与硫酸铜反应生成紫红色的配合物。
如果蛋白质含量很低时，此颜色反应不易观察到。
三、试剂与器材1. 试剂：（1）酵母粉（药用）；（2）0.5%NaOH溶液；（3）乙酸；（4）10%硫酸溶液；（5）氨水；（6）5%硝酸银溶液；（7）95%乙醇；（8）地衣酚试剂（硫酸铁铵1.35g，地衣酚2g，用蒸馏水配成50mL作为母液，保存于冰箱中。
使用前，取母液2.5mL，加浓盐酸41.5mL再加蒸馏水60mL）；（9）二苯胺试剂（1.5g二苯胺溶于100mL高纯度的冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸）；（10）10%氢氧化钠溶液；（11）1%硫酸铜溶液。
1_生物化学实验指导2020.09
保山中医专生物化学实验手册保山中医专生物化学教研室目录实验一生化实验的基本操作实验二酶的专一性实验三影响酶活性的因素实验四尿淀粉酶的测定和尿葡萄糖定性实验实验五血糖的测定实验六血清谷丙转氨酶活性的测定实验七血清尿素的测定（二乙酰一肟法）实验八血清肌酐的测定实验九血浆二氧化碳结合力的测定（滴定法）实验一生化实验的基本操作一、实验目的1．了解实验室的一般规则2．掌握刻度吸量管、微量移液器的使用二、操作：1．吸量管的操作种类：移液管或移液吸量管、刻度吸量管1.1移液管规格：1ml、5ml、10ml、20ml、25ml、50ml及100ml特点：只有一个刻度，放液时管尖残留液体不得吹出。
1.2刻度吸量管规格：0.5ml、1ml、2ml、5ml及10ml特点：吸量管刻度分到尖端者和不到尖端者两种所有刻度有自上而下或自下而上的两种实验室多为刻度到尖端者，要吹出残留在尖端的液体，供量取10ml以下的任意体积的液体之用。
2．吸量管的使用方法2.1 拿法：将中指和拇指拿住吸量管上端，食指指腹顶住吸管顶端。
2.2 取液：将吸量管插入液体内，用洗耳球吸取液体至最高刻度以上，然后迅速用食指按紧吸量管顶端，使液体不致从管内流出。
2.3 调刻度：将已充满液体的吸量管提出液面，用碎滤纸片抹干吸量管外面的液体。
然后持吸量管与地面保持垂直，放松食指控制液体缓慢地下降刚好至最上刻度（液体凹面、刻度和视线应在一水平面上），立即按紧吸量管顶端。
4．放液：吸量管靠壁，容器大约倾斜45度，放松食指，让液体缓慢地放入容器内。
3．吸量管的选用原则3.1量取整数量液体时，应选用移液管。
3.2选用与取液量最近的吸量管如欲取0.15ml液体，应选用0.5ml刻度吸量管。
实验二酶的专一性一、实验目的通过实验，验证酶的专一性，即酶对底物的选择性。
二、实验原理液淀粉酶催化淀粉水解，生成麦芽糖和少量的葡萄糖，它们均属还原性糖，可使班氏试剂中的二价铜离子（Cu2+）还原成亚铜（Cu+），生成砖红色的氧化亚铜（Cu2O）沉淀。
生化实验指导
生物化学实验指导成都中医药大学生化教研室编二00六年三月目录实验须知实验一基本操作技术实验二蛋白质的沉淀反应实验三蛋白质的等电点实验四核糖核酸的提取及成分鉴定实验五影响酶的作用的因素实验六麦芽淀粉酶的提取和鉴定实验七分光分析法实验八维生素C的定量测定（碘滴定法）实验九饱食、饥饿对肝糖原含量的影响实验十血糖的测定实验十一胰岛素和肾上腺对血糖浓度的影响实验十二剧烈运动对尿中乳酸含量的影响实验十三血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验十四脂肪酸的β-氧化与酮体的生成和利用实验十五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳实验十六血清谷丙转氨酶活性的测定结合力测定实验十七血浆CO2实验十八茯苓多糖、猪苓多糖的水解和鉴定实验十九标准曲线及回收实验（以血糖的测定为例）实验二十氨基酸的薄层层析法实验二十一胡萝卜素的柱层析分离法附录试剂配制实验须知一、实验目的1.培养研究自然科学的正确态度和思维方法，提高分析问题和解决问题的能力。
2.学习生物化学的基本技术操作和方法3.通过实验验证某些基本理论，以巩固和加深对基本理论的理解。
二、实验前的准备学生在实验前必须按教学计划进行预习:1.复习有关理论2.明确实验目的3.熟悉实验中的主要步骤4.判断实验预期结果预习是做好实验的关键，事先做好必要的预习才能主动思考和独立操作，并且获得良好的结果三、实验时注意事项1.实验时必须严肃认真、一丝不苟，按照操作规程，细心的独立地进行操作，仔细地观察和综合分析所出现的现象和结果，客观地有条理地及时地记录实验记录本内2.实验室一切器材设备应加以爱护，使用试剂、水、电、火柴、酒精、蒸馏水、肥皂等消耗品时应注意节约，避免浪费。
使用仪器如生疏，或以前未曾用过，应先请教带习教师指导。
玻璃器皿使用时，既要大胆、又要小心谨慎，稳拿轻放，尽量避免损坏。
如有损坏应立即报告带习教师，并说明损坏原因，以便吸取经验教训。
凡能阻塞下水管之废品，如用过的滤纸，火柴梗以及沉淀物等，或浓酸、浓碱，均须倾倒入实验室内的废物缸中，勿倾入水槽中，以免将其阻塞和损坏。
生物化学实验指导
《生物化学Ⅰ》实验指导一、实验内容在网络课件中所给的六个具体实验中，至少完成其中《血清蛋白质的盐析与双缩脲法定量》、《血清蛋白的醋酸纤维膜电泳》两个实验，其它为选做实验。
二、实验要求（一）理论部分明确实验目、原理、操作关键步骤及注意事项，掌握生物化学实验基本知识和技能。
（二）实验部分1．原始记录实验中要仔细观察，如实记录实验现象。
实验记录要真实、准确、清晰、完整，不得随意涂改数据。
内容包括：实验名称、目的及要求、实验原理、所用仪器和试剂、实验方法步骤、观察到的现象等。
2．实验报告每次实验完成后，要求写出实验报告。
实验报告要求文字清楚有条理，语言简洁扼要。
报告的内容包括：实验名称、实验目的、方法原理、实验步骤（可用流程示意图，要求简明扼要）、原始数据和现象记录、计算结果、结论（简明扼要）、讨论（用所学理论知识对实验现象和结果的分析和解释、对所做实验的小结、改进意见等）。
注：实验成绩占课程总成绩的20%。
实验报告格式请到：网院主页-教学服务-教务表格中下载。
实验一基本操作一、要求1．熟悉实验室规则及常用生化仪器；2．清点洗刷实验用具；3．掌握各种仪器的正规操作及维护。
二、实验内容1．常用生化仪器烧杯（beaker）试管（test tube）NPN管（NPN tube）：带有3.5，5，10ml刻度，用于血中非蛋白质（nonprotein nitrogen）的测定。
离心管（centrifuge tube）吸量管（pipet）刻度吸量管（scaled pipet）其上部的标志彩环与其容量的关系：红色单环：0.1，5ml红色双环：0.5ml黑色单环：0.2,2ml黄色双环：1ml桔色单环：10ml奥氏吸量管（Ostwald-Folin pipet）滴管（dropper）搅棒（Stirring rod）漏斗（funnel）枪式移液器（pipettman）及其配适吸头（tips）混匀器（vortex）恒温水浴箱（water bath）离心机（centrifuge）分光光度计（spectrophotometer）点收仪器：根据仪器清单，逐项查点是否完好（如有缺损向教师声明及时补充更换）。
生物化学实验指导
一般玻璃皿器用肥皂或去污粉以毛刷洗涤即足以满足要求，洗后应将肥皂或去污粉仔细冲掉，将水倾去后，器壁不挂水珠，视为合格。铬酸洗液仅用于毛刷不能洗净的器皿，切勿滥用于普通玻璃器皿洗涤。使用铬酸洗液时，玻璃器皿应干燥；过多的水份将使洗液迅速失效。用过的铬酸洗液须加以保存以反复使用，直至变为绿色后方可舍弃；其舍弃法与浓硫酸液相同。用洗液浸洗过的玻璃器皿，应先用自来水冲洗，然后再用蒸馏水或去离子水清洗，清洗时，宜采用“少量多次”原则以节约蒸馏水，同时清洗的效率也高。
2．柠檬酸－Na2HPO4（Mollvaine）缓冲液，pH2.6~7.6………………… 56
3．柠檬酸－柠檬酸三钠缓冲液，pH3.0~6.2……………………………… 57
4．醋酸－醋酸钠缓冲液，pH3.7~5.6……………………………………… 58
5．琥珀酸~NaOH缓冲液，pH3.8~6.0……………………………………… 58
4．培养学生的书面及口头表达能力。
二、实验的总要求
1．按教研室予先公布的实验进度表，了解各次实验的具体内容，并认真做好预习。弄清各步骤的意义，避免教条或机械式做实验。
2．进行实验不仅要求结果良好，而且要求敏捷高效。为达到此目的，实验者应注意：①一切步骤都按正规操作法进行；②样品与试剂勿过量取用；③宜粗者勿细（例如粗天平称量物品即足够准确时，不用分析天平，用量筒取液足够准确时，不用吸量管）；④试剂、仪器防止污染及破损，保持实验环境的整洁。⑤注意力集中，避免差错。
第五节 生化实验样品的制备……………………………………………29
实验2 改良微量凯氏定氮法测定血清蛋白质总量……………………………… 32
实验3 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳…………………………………………… 34
生化实验指导
实验一缓冲溶液的配制和氨基酸两性性质测定一、目的要求1．了解缓冲溶液的作用原理及缓冲原理，学习缓冲溶液的设计、配制及酸度计的使用方法。
2．观察甘氨酸的两性性质和缓冲作用。
二、实验原理能抵抗一定量酸或碱的影响，而保持溶液pH值基本不变的溶液称为缓冲液。
缓冲液一般是由弱酸或弱碱与它的盐组成。
如乙酸和乙酸钠组成乙酸缓冲液、硼酸和硼砂组成硼酸缓冲液等。
缓冲液可分为一般缓冲液(或通用缓冲液)和标准缓冲液两类。
标准缓冲液pH值是一定的(与温度有关)，叫做pH标准液，当用酸度计测量溶液的pH值时，就要用pH标准液来校正仪器。
一般缓冲液的pH值可用下式计算：式中的Ca、Cb、Cs分别为弱酸、弱碱、盐的浓度(mol/L)；Ka、Kb分别为弱酸、弱碱的电离常数；Kw为水的离子积。
当温度一定时，pKa(或pKb)为一常数，因此缓冲液pH值就随着盐和酸(或碱)的浓度比值而变化。
如果制备缓冲液时所用的盐和酸的浓度相同，则配制时所取盐和酸的溶液的体积比就等于它们的浓度比，故上式可写为：可见只要按盐和酸溶液的毫升数的不同比值配制就可得到不同pH值的缓冲液。
如加水稀释，其盐和酸的浓度都以相同比例降低，比值不变，因此适量稀释不影响缓冲液的pH值。
缓冲液能抵抗一定量酸或碱的作用称缓冲作用，缓冲作用的大小称为缓冲能力或缓冲容量(β)，可定义为每升缓冲液改变一单位pH值所需加入强碱或强酸的量(摩尔数)。
一种特殊的酸和它相配对的碱在它们浓度相等(即pH值等于酸的pKa)时，缓冲能力最大。
缓冲能力除与其共轭酸碱对的比率有关外，还与总浓度有关，总浓度越大，缓冲能力越强，一般缓冲液浓度在0.05～0.20mol/L，pH=pKa±1的范围内具有满意的缓冲能力。
α－氨基酸是一类两性物质；既可以和酸作用，又可以和碱作用，对酸、碱的加入具有一定的缓冲能力；通过甘氨酸的酸、碱滴定及测量不同浓度的酸、碱条件下甘氨酸溶液的pH值，绘出—条滴定曲线，从中可以看到这种变化。
生化技术实验指导书(20学时)
生化技术实验指导书湖北工业大学生物工程学院二0一0年三月修订实验一酵母RNA的提取及其组分的鉴定一、实验目的1.了解稀碱法提取RNA及提取物组分鉴定的基本原理；2. 掌握稀碱法提取RNA及提取物组分鉴定的具体操作方法。
二、实验原理酵母中RNA的含量比较丰富（2.67%~10%），而DNA的含量相对地较少（据资料报道，酵母DNA的含量低于RNA的20%），因此从酵母中提取RNA比较方便。
RNA溶于碱性溶液，碱性溶液使蛋白质带负电荷，促进RNA(带负电荷)与蛋白质的分离，碱性溶液可使酵母细胞壁变性，同时进行加热，可增加细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
因此，酵母粉用稀碱液加热抽提时，可将其中的RNA抽提出来。
当碱性抽提液中和后，加入2倍体积的95%乙醇时，可以使抽提物沉淀出来。
抽提物的主要成分是RNA的钠盐，并带有少量的蛋白质。
用碱抽提时，RNA会有不同程度的降解。
地衣酚（3，5-二羟基甲苯）是比较灵敏的测定戊糖的试剂，常用于测定RNA。
核糖与地衣酚试剂反应呈现鲜绿色。
地衣酚试剂反应灵敏，也易被其他物质干扰。
DNA中的脱氧核糖也可与地衣酚反应，因此，单靠地衣酚显色实验不能作为RNA 与DNA鉴别依据。
二苯胺试剂是常用于测定DNA中脱氧核糖的试剂，脱氧核糖与二苯胺试剂反应产生蓝色物质，而RNA中的核糖一般不与苯胺起反应。
嘌呤碱可与硝酸银反应生成白色的嘌呤银化合物的沉淀。
双缩脲反应是检验蛋白质常用的颜色反应。
双缩脲或含有两个以上肽键的化合物（蛋白质、肽等）在碱性条件下与硫酸铜反应生成紫红色的配合物。
如果蛋白质含量很低时，此颜色反应不易观察到。
三、试剂与器材1. 试剂：（1）酵母粉（药用）；（2）0.5%NaOH溶液；（3）乙酸；（4）10%硫酸溶液；（5）氨水；（6）5%硝酸银溶液；（7）95%乙醇；（8）地衣酚试剂（硫酸铁铵1.35g，地衣酚2g，用蒸馏水配成50mL作为母液，保存于冰箱中。
使用前，取母液2.5mL，加浓盐酸41.5mL再加蒸馏水60mL）；（9）二苯胺试剂（1.5g二苯胺溶于100mL高纯度的冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸）；（10）10%氢氧化钠溶液；（11）1%硫酸铜溶液。
临床生化检验实验指导
临床生化检验实验指导实验指导书是临床生化检验的重要教学工具，通过指导学生熟练掌握临床生化检验方法、实验流程，提高学生的实验操作能力，培养学生的分析判断能力并促进其临床应用。
1. 实验前的准备工作在进行生化实验之前，一定要对实验室进行必要的准备工作。
首先，要准备好所需的生化试剂和仪器设备，并且需要按照相应的程序对仪器设备进行校准和检验。
其次，实验人员应该仔细阅读实验指导书，了解实验方法和流程，并在完成工作之前做好充分的准备和规划。
2. 实验的操作步骤完成实验需要遵循正确的操作流程，一旦开始操作，就不能有任何的不妥协议。
实验流程包括：洗手、准备工作、样品获取、样本处理、试管反应、数据汇总等步骤。
其中最关键的一步是进行样品获取，必须根据实验指导书上的详细流程操作，正确采集样品。
3. 实验时需要注意的事项在实验室，要特别重视实验安全。
切勿将独立的药剂配制在同一地点，不要吃东西，不能按照心情进行超量添加剂量以避免因此引发安全事故。
在进行实验的时候，一定要戴上实验手套和护目镜等防护措施，避免接触危险药品和化学试剂。
4. 完成实验后的数据处理完成实验之后，需要将所收集到的数据进行处理，根据实验指导书上的要求计算数据的平均值，并根据所得数据评估检测结果是否有问题。
如果发现有问题，需要进行仔细检查，并重新采集样品进行检测。
通过对临床生化检验实验指导的学习与实践，学生可以熟悉各项生化方法，并锻炼自己的实验操作能力。
对于生化学相关的工作岗位，熟练掌握实验技能将是一个优秀的加分项。
因此，我相信一份好的实验指导书对学习生化学和工作有着重要的意义。
《生物化学》实验指导(8个实验)
《生物化学》实验指导(8个实验)生物化学实验指导吕杰编著新疆大学资源与环境科学学院生态学教研室内容介绍《生物化学实验指导》是新疆大学资源与环境科学学院《生物化学》课程组的教师在参考国内重点院校、科研院所的生物化学实验与实习教材的基础上，结合教师的教学经验汇编而成。
该实习指导围绕教学大纲设计了8个实验内容。
目目录实验一氨基酸纸层析4实验二DNS-CL法测定N末端氨基酸5实验三考马斯亮蓝法测定蛋白质的浓度7实验四酪蛋白的制备8实验五葡萄糖标准曲线的绘制10实验六酵母蔗糖酶的提取及活力测定12实验七酵母RNA的分离及组分鉴定14实验八维生素C的定量测定16 实验一一氨基酸纸层析一、实验目的1、通过氨基酸的纸层析分离，学习纸层析的基本原理和操作方法。
二、实验原理纸层析：是以滤纸作为支持物的分配层析法，是20世纪40年代发展起来的一种生化分离技术。
由于设备简单，操作方便，所需样品量少，分辨力较高等优点而广泛的用于物质的分离，并可进行定性和定量的分析。
缺点是展开时间较长。
分配层析法：是利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的的一种实验方法。
在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分配系数是一个常数即=溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
溶剂系统：由有机溶剂和水组成，水和滤纸纤维素有较强的亲和力，因而其扩散作用降低形成固定相，有机溶剂和滤纸亲和力弱，所以在滤纸毛细管中自由流动，形成流动相，由于混合液中各种氨基酸的分配系数值不同，其在两相中的分配数量及移动速率（即迁移率Rf值）就不同，从而达到分离的目的。
三、实验材料、仪器和试剂：1、实验材料：标准氨基酸溶液2、仪器:层析缸，层析纸，毛细管，天平，吹风机等。
3、、试剂：（1）氨基酸标准溶液：0.1M丙氨酸和0.1M谷氨酸标准溶液。
（2）溶剂系统：正丁醇：甲酸：水=15：3：2（体积比）摇匀；（3）0.1%的茚三酮丙酮溶液；茚三酮15克，丙酮100毫升四、实验步骤：纸层析(1)取一长方形滤纸，在滤纸纵向对应的两边距边沿2cm处，用铅笔轻轻的各画两条平行线，一条作前沿标志，一条作点样线，在点线上每隔2cm画一个+作为点样位置，共5个点。
生物化学实验指导书
《生物化学实验》指导书西安工程大学生物工程系二〇一一年十一月二十五日目录实验1 蛋白质的沉淀,变性反应 (3)实验2 蛋白质含量的测定 (8)实验3 氨基酸的分离鉴定—薄层层析法 (10)实验4 液化淀粉酶活力测定 (13)实验5 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法 (17)实验6 核酸浓度测定—紫外线（UV）吸收法 (20)实验7 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 (22)实验8 植物中抗坏血酸含量的测定 (24)实验1 蛋白质的沉淀,变性反应目的要求：了解蛋白质的沉淀反应,变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系。
原理：在水溶液中，蛋白质分子的表面，由于形成水化层和双电层而形成稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。
在一定物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性，则以固态形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质的沉淀反应，这种反应可以分为以下两种类型。
一、可逆沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子结构并未发生显著的变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去以后，能再溶于原来的溶剂中。
这种作用称为可逆沉淀反应，又叫做不变性沉淀反应，属于这一类的反应有盐析作用；在低温下，乙醇，丙酮对蛋白质的短时间作用以及利用等电点的沉淀等。
二、不可逆沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质分子结构，空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，这时蛋白质已发生变性。
这种变性蛋白质的沉淀不能再溶于原来溶剂中的作用叫做不可逆沉淀反应。
重金属盐，植物碱试剂，过酸，加热，震荡，超声波，有机溶剂等都能够使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
实验操作一、试剂1．蛋白质溶液取5mL鸡或鸭蛋清，用蒸馏水稀释至100mL，搅拌均匀后用4—8层纱布过滤，新鲜配制。
2．蛋白质氯化钠溶液取20mL蛋清，加蒸馏水200mL和饱和氯化钠溶液100mL，充分混匀后，以纱布过滤不溶物（加入氯化钠的目的是溶解球蛋白）。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验1 氨基酸纸层析一、实验目的通过对氨基酸的分离和鉴定，掌握纸层析的基本原理及操作方法。
二、实验原理层析法又称色谱法。
是一项重要的分离技术。
利用混合物中各组分理化性质的不同，使各组分以不同程度分配在两相中。
层析的种类： 根据原理分为： a 分配层(纸层析) b 吸附层析 c 亲和层析 d 离子交换层析 根据支持物分为： a 纸层析 b 柱层析 c 薄层层析 d 凝胶过滤层析 分配层析的原理：各种物质在两种互不溶解的溶剂中的分配系数不同，从而达到分离的目的。
分配层析用于分离在水和有机溶剂中都可溶的混合物。
一种物质在两相中达到平衡时，在两相中的浓度之比是一个常数。
物质在流动相里的浓度物质在固定相里的浓度 纸层析:分配的过程：一部分溶质随有机相移动离开原点进入无溶质区，并进行重新分配，不断向前移动。
随着有机相不断向前移动，溶质不断地在两相间进行可逆的分配。
由于各种物质的分配系数不同，随展层溶剂移动的速率也不同，从而达到分离的目的。
移动速度可用比移（Rf ）值表示：色斑中心至上样原点中心的距离K D =图1 氨基酸纸层析示意图R f =溶剂前缘至上样原点中心的距离载体：滤纸固定相：滤纸吸附的水流动相：水饱和酚极性：谷氨酸＞丙氨酸＞脯氨酸对于水－饱和酚的溶剂体系，氨基酸极性越小，KD 值越大，Ｒｆ值也越大，一定时间内随流动相迁移的距离远，反之迁移距离小。
三、实验材料仪器⑴层析缸；⑵层析滤纸；⑶电吹风机；⑸喷雾器；⑹毛细管。
试剂⑴氨基酸标准液（6mg/mL）；⑵氨基酸混合液（6mg/mL)⑶展层剂：水饱和苯酚溶液。
⑷显色剂：0.3%茚三酮丙酮溶液四、操作步骤1、层析滤纸的准备用铅笔在层析滤纸上距离一端2-3cm处划线并标记点样位置。
2、点样(少量多次)用毛细管平口端蘸取少量样品溶液，点样于滤纸的相应位置，要求样品斑点直径不超过0.5cm，干燥后再点样，重复3次。
3、展层将滤纸放入层析缸，使滤纸浸入液面以下，但不要使液面没过点样线。
展层50-60分钟，取出，用铅笔绘出前沿线。
4、显色滤纸吹干，用喷雾器把茚三酮溶液均匀细致地喷洒在滤纸有效面上，吹干。
图2 氨基酸纸层析造作图五、结果与分析用铅笔描出色斑轮廓，找出中心点。
如果斑点形状不规则或出现明显的“拖尾”，则圈出颜色集中均匀的部分。
计算各色斑的Rf值,对照标准样品，确定混合样品中氨基酸六、思考题：1、Rf值的概念、如何计算Rf值以及影响该值的各种因素。
2、纸层析分离氨基酸的原理3、分析造成色斑拖尾现象的原因。
七、操作注意事项1、点样量要适当，点样要均匀；2、尽可能不要用手去触摸滤纸有效面；3、层析时间根据层析系统的具体情况而定，使分配系数相近的氨基酸分开；4、喷茚三酮时要均匀、适量，不可过多。
实验2 酵母RNA的提取及组分鉴定一、目的：学习稀碱法提酵母RNA的原理与技术。
二、原理：由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。
其中苯酚法又是实验室最常用的。
组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好地除去DNA和蛋白质。
上述方法提取的RNA具有生物活性。
工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。
浓盐法是用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3—4h，迅速冷却，提取液经离心后，上清液用乙醇沉淀RNA。
稀碱法使用稀碱（本实验用0.2%NaOH溶液）使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA（本实验）或调pH2.5利用等电点沉淀。
提取的RNA 有不同程度的降解。
酵母含RNA达2.67—10.0%，而DNA含量仅为0.03—0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。
三、器材与试剂：1.器材：①干酵母粉（市售），②鲜酵母（市售），③pH试纸（pH1—10），④台天平（100g）。
⑤烧杯100ml（×1），⑥量筒50ml（×1）、10ml（×1），⑦抽滤瓶500ml（×1）、布氏漏斗φ10cm （×1），⑧移液管0.5ml（×1）、1ml（×2）、2ml（×2）、5ml（×1），⑨离心机5000r·min-1。
2．试剂：①0.2%氢氧化钠溶液：2g NaOH溶于蒸馏水并稀释至1000ml，②乙酸（A·R），③95%乙醇，④无水乙醚（C·P），⑤氨水（C·P），⑥ 10%硫酸溶液：浓硫酸（比重1.84）10ml，缓缓倾于水中，稀释至100ml，⑦5%硝酸银溶液：5g AgNO3溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，⑧苔黑酚—三氯化铁试剂：将100mg苔黑酚溶于100ml浓盐酸中，再加入100mg FeCl3·6H2O。
临用时配制。
四、操作步骤：1．RNA的提取：称取8g干酵母粉于100ml研钵中，干研磨，转入锥形瓶后加入0.2%NaOH溶液40ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌，冷却后离心5分钟（4000r·min-1）。
取上清液，缓慢加入至30ml酸性乙醇中，边加边搅。
加毕，静置，待完全沉淀，离心5分钟（4000r·min-1），沉淀备用。
向沉淀中加10%硫酸液10ml，转入锥形瓶中，加热至澄清，将RNA水解，即为水解液，进行组分鉴定。
2．鉴定：（1）核糖：取水解液1ml，加苔黑酚—FeCl3试剂1ml，水浴加热，观察颜色变化。
（2）嘌呤碱：取水解液2ml，加氨水2ml及5%硝酸银溶液1ml，观察是否产生絮状嘌呤银化合物（有时絮状物出现较慢，可放置几分钟）。
（3）磷酸：取水解液1ml，定磷试剂1ml，水浴加热，观察颜色变化。
五、结果与讨论：1．所得RNA是否是纯品？如何进一步纯化？2．RNA提取过程中的关键步骤及注意事项有哪些？实验3 酶促反应的影响因素一、实验目的1．了解温度、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。
2．学习检定温度、抑制剂影响酶促反应速度的方法。
二、实验原理在酶促反应中，酶的催化活性与环境温度、pH有密切关系，通常各种酶只有在一定的温度、pH范围内才表现它的活性，一种酶表现其活性最高时的温度、pH值称为该酶的最适温度、最适pH。
在酶促反应中，酶的激活剂和抑制剂可加速或抑制酶的活性，如氯化钠在低浓度时为唾液淀粉酶的激活剂，而硫酸铜则是它的抑制剂。
本实验利用淀粉水解过程中不同阶段的产物与碘有不同的颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中各种因素对其活性的影响。
淀粉（遇碘呈蓝色）→紫色糊精(遇碘呈紫色)→红色糊精(遇碘呈红色)→无色糊精(遇碘不呈色)→麦芽糖(遇碘不呈色)→葡萄糖(遇碘不呈色)。
所以淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断，以此反映淀粉酶的活性，由此检定温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。
三、实验器材试管和试管架、恒温水浴、冰浴、吸量管（1 mL12支、2 mL5支、5 mL4支）、滴管、量筒、玻棒、白瓷板、秒表、烧杯、棕色瓶。
四、实验试剂1．新鲜唾液稀释液(唾液淀粉酶液)：每位同学进实验室自己制备，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一口蒸馏水，0.5 min后使其流入量筒并稀释至200倍(稀释倍数可因人而异)混匀备用。
2．0.1%淀粉溶液3．碘液：称取2 g碘化钾溶于5 mL蒸馏水中，再加入1 g碘，待碘完全溶解后，加蒸馏水95 mL，混匀贮于棕色瓶中。
4．1%NaCl溶液5．1%CuSO4溶液6．缓冲溶液。
五、操作步骤1．温度对酶促反应的影响取4支洁净试管编号，按下表进行操作（体积单位：mL）：试管号 1 2 3 淀粉溶液 1.5 1.5 1.5 稀释唾液 1 1 煮沸的稀释唾液 1处理方式37℃恒温水浴，保温10 min0℃恒温，保温10 min，分一半至4号管，将4号管37℃恒温水浴，保温10 min碘化钾-碘液1滴1滴各1滴现象2．激活剂、抑制剂对酶促反应的影响取4支洁净试管编号，按下表加入各试剂（体积单位：mL）：试管号 1 2 3 4淀粉溶液 1.5 1.5 1.5 1.51% Na Cl 溶液0.51%Cu SO4溶液0.51%Na2SO40.5蒸馏水0.5稀释唾液0.5 0.5 0.5 0.5处理方式37℃恒温水浴，保温10 min碘化钾-碘液1滴1滴1滴1滴现象六、注意事项加入酶液后，要充分摇匀，保证酶液与全部淀粉液接触反应，得到理想的颜色梯度变化。
七、问题与思考1．什么是酶的最适温度、最适pH？它们是酶的特征物理常数吗？2．激活剂分几类? 氯化钠属哪种类型？硫酸钠对淀粉酶的活性有无影响？实验4 Vc含量测定---2,6-二氯酚靛酚滴定法一实验目的1、学习2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C的原理和方法2、掌握滴定管基本操作过程二实验原理Vc是人类营养中重要的维生素之一，绿色蔬菜和水果中含量很丰富。
Vc有强的还原性，在碱性、加热并有氧化剂存在时Vc易被氧化破坏。
2,6-二氯酚靛酚在碱性溶液中为蓝色，在酸性溶液中为红色，被还原后变为无色。
因此可用2,6-二氯酚靛酚测样品中的Vc含量，Vc 可将染料还原为无色同时Vc被氧化成脱氢Vc，Vc全部被氧化后，滴入的染料使溶液呈淡粉红色。
根据消耗染料的量可计算出样品中Vc的含量。
三实验仪器、试剂和材料仪器：（1）天平（7）量筒（2）研钵（8）漏斗（3）5ml微量滴定管（9）滤布（4）50ml容量瓶(10)1.0ml、10.0ml吸量管（5）10ml胖肚吸管（6）100ml锥形瓶试剂：（1）1%草酸溶液：称取10g草酸，加水至1000ml；（2）2%草酸溶液：称20g草酸，加水至1000ml；（3）Vc标准液：准确称10 mg Vc溶于100 ml 1%草酸中，即Vc的浓度为0.1 mg/ml；（4）0.05 %的2，6 - 二氯酚靛酚溶液：称取2，6-二氯酚靛酚500mg，溶于300ml含有104mg 碳酸氢钠的热水中，冷却后，稀释至1000ml ，过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内。
材料 猕猴桃若干四 操作步骤1、提取Vc ：称取猕猴桃40g ，加入2%草酸溶液，用研钵磨成匀浆。
两层滤布过滤取得滤液，用少量 2% 草酸溶液洗研钵几次，倒入滤渣中，合并滤液，定容至1000ml 。
（注意：切勿过量）2、标准液滴定：取Vc 标准液1ml 于100ml 锥形瓶中，加9ml 1% 草酸溶液，用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色。
记录所染料溶液的量，计算出1ml 染料溶液所能氧化Vc 的量。