显微镜种类ppt课件
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六. 思考题 比较真核细胞和原核细胞的形态结构及其区别。
26
24
(2) 兔肝细胞苏木精-伊红(H·E·)染色玻片标本的观察
先在干燥系物镜下观察肝小叶的概况，辨认肝细胞，然后用油镜仔细 观察肝细胞的显微结构。注意肝细胞的形状，细胞核和核仁的形状和数 量，细胞核和细胞质的染色区别等。
25
四. 注意事项 1.低、高倍镜的使用。 2.合轴调节。
五. 实验结果 1.描绘一个兔肝细胞的基本形态结构。 2.熟练显微镜的调节。
物镜 镜口率(N.A.) 工作距离(mm)
10× 0.25
5.40
40× 0.65
0.39
100× 1.30
0.11
显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积， 公式为: M = K1xK2
焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的 上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全 厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。
显微镜的分辨率: 也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离， 分辨距离越大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨 距离来表示的。
其计算公式为: D=0.61入/N·A N·A·=n ·sina/2 式中D为分辨率，A为光波波长，N·A·为物镜的数值孔径(镜口率)。
12
在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字 越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：
(3)转到高倍镜，并百度文库焦到看清标本，然后去掉标本，拔出目 镜，眼睛直接向镜筒观察，并把可变 光栏关小，看其亮点是否在 视野中心，如果不是，就要转动聚光器的调节螺旋，把亮点调到 视野中 央，再慢慢开启可变光栏，使视野看到光栏边缘和聚光镜 的边缘相接为止。
23
3. 观察操作：
(1) 低、高倍镜的使用: 先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片 0.5cm处，然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移 到视野中心，用细调焦螺旋把物镜调至最清晰处，若要用高倍镜观察时， 把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直接顺时针转换成高倍物镜， 然后用细调焦螺旋调焦，至看清物像。
和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透 镜进行必要的清洁工作。然后进行合轴调节。
15
2. 显微镜的调节
瞳距调节
16
屈光度调节
17
调节
粗调松紧调节旋钮
18
②10X物 镜
聚光镜中心调节
①标 本
④ 聚光镜升降 旋钮
③ 孔径 光栏
⑤ 光轴中心调节 螺钉
③ 视场 光栏
19
孔径光栏调节
N.A聚=(0.6-0.8)N.A物
实验一 细胞形态结构观察和光学显微镜的使用
一. 实验原理 细胞是生物体的基本结构单位。构成生物机体的细胞是
多种多样的。要对细胞进行研究，首先要从其形态结构人 手。所以，要借助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下， 才能观察到细胞的基本形态结构。 二.试剂与器械
普通光学显微镜，兔肝细胞玻片标本，草履虫玻片标本。
20
孔径光栏开度与图象
100% 70%
30%
21
孔径光栏的运用
22
操作步骤如下:
(1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水平 是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可变 光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的中 心孔对准聚光镜下方的透镜中心。
(2)载物台上放置观察标本，把聚光器上升到它上端透镜平面 稍低于载物台平面的高度，并将它的可变光栏开到最大，用低倍 物镜，进行调焦到能看见标本，可调反射镜使视野得到最亮和最 均匀 的照明，或把光栏关小，最亮的照明区正处在视野的中央。
包括镜台(载物台) 、调节器和、
物镜转换器(旋转器)等。
尼康E-600显微镜
2
基础知识
2.荧光显微镜
尼康E800荧光DIC显微镜
荧光显微镜照片（微管呈 绿色、微丝红色、核蓝色）
3
3. 激光共聚 焦扫描显微镜
LCSM照片 蓝色为细胞核， 绿色为微管
4
4.暗视野显微镜
暗视野显微镜（dark field microscope）的聚光镜中央有当光 片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线 进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种 显微镜能见到小至 4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高
1
显微镜概述：
显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为 光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显 微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。
1.光学显微镜
普通生物显微镜由3部分构成：
①照明系统：包括光源和聚光器。
②光学放大系统：由物镜和目镜组成，
是显微镜的主体。
③机械装置：用于固定材料和观察方便，
50倍。 5.相差显微镜
一种介壳虫的染色体
5
6. 偏光显微镜
偏光显微镜（polarizing microscope）用于检测具有双折射性的 物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。
7.微分干涉差显微镜
DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜 相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。
13
厚标本和薄标本
4 - 5 um
2um
14
基础知识
三. 实验步骤 (一)显微镜的使用 1. 观察前的准备工作
(1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要双 眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。
(2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备好。 (3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整
DIC显微镜下的 硅藻（伪彩色）
6
8. 倒置显微镜
7
9. 透射电子显微镜
JEM-1011透射电子显微镜
莱卡超薄切片机
8
内质网透射电镜图（伪彩色）
冰冻蚀刻电镜照片
9
10. 扫描电子显微镜
JEOL扫描电子显微镜
人类血细胞SEM照片
10
11. 显微操作技术
尼康NT-88NE显微操作/注射 仪
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(2) 兔肝细胞苏木精-伊红(H·E·)染色玻片标本的观察
先在干燥系物镜下观察肝小叶的概况，辨认肝细胞，然后用油镜仔细 观察肝细胞的显微结构。注意肝细胞的形状，细胞核和核仁的形状和数 量，细胞核和细胞质的染色区别等。
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四. 注意事项 1.低、高倍镜的使用。 2.合轴调节。
五. 实验结果 1.描绘一个兔肝细胞的基本形态结构。 2.熟练显微镜的调节。
物镜 镜口率(N.A.) 工作距离(mm)
10× 0.25
5.40
40× 0.65
0.39
100× 1.30
0.11
显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积， 公式为: M = K1xK2
焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的 上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全 厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。
显微镜的分辨率: 也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离， 分辨距离越大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨 距离来表示的。
其计算公式为: D=0.61入/N·A N·A·=n ·sina/2 式中D为分辨率，A为光波波长，N·A·为物镜的数值孔径(镜口率)。
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在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字 越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：
(3)转到高倍镜，并百度文库焦到看清标本，然后去掉标本，拔出目 镜，眼睛直接向镜筒观察，并把可变 光栏关小，看其亮点是否在 视野中心，如果不是，就要转动聚光器的调节螺旋，把亮点调到 视野中 央，再慢慢开启可变光栏，使视野看到光栏边缘和聚光镜 的边缘相接为止。
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3. 观察操作：
(1) 低、高倍镜的使用: 先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片 0.5cm处，然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移 到视野中心，用细调焦螺旋把物镜调至最清晰处，若要用高倍镜观察时， 把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直接顺时针转换成高倍物镜， 然后用细调焦螺旋调焦，至看清物像。
和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透 镜进行必要的清洁工作。然后进行合轴调节。
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2. 显微镜的调节
瞳距调节
16
屈光度调节
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调节
粗调松紧调节旋钮
18
②10X物 镜
聚光镜中心调节
①标 本
④ 聚光镜升降 旋钮
③ 孔径 光栏
⑤ 光轴中心调节 螺钉
③ 视场 光栏
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孔径光栏调节
N.A聚=(0.6-0.8)N.A物
实验一 细胞形态结构观察和光学显微镜的使用
一. 实验原理 细胞是生物体的基本结构单位。构成生物机体的细胞是
多种多样的。要对细胞进行研究，首先要从其形态结构人 手。所以，要借助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下， 才能观察到细胞的基本形态结构。 二.试剂与器械
普通光学显微镜，兔肝细胞玻片标本，草履虫玻片标本。
20
孔径光栏开度与图象
100% 70%
30%
21
孔径光栏的运用
22
操作步骤如下:
(1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水平 是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可变 光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的中 心孔对准聚光镜下方的透镜中心。
(2)载物台上放置观察标本，把聚光器上升到它上端透镜平面 稍低于载物台平面的高度，并将它的可变光栏开到最大，用低倍 物镜，进行调焦到能看见标本，可调反射镜使视野得到最亮和最 均匀 的照明，或把光栏关小，最亮的照明区正处在视野的中央。
包括镜台(载物台) 、调节器和、
物镜转换器(旋转器)等。
尼康E-600显微镜
2
基础知识
2.荧光显微镜
尼康E800荧光DIC显微镜
荧光显微镜照片（微管呈 绿色、微丝红色、核蓝色）
3
3. 激光共聚 焦扫描显微镜
LCSM照片 蓝色为细胞核， 绿色为微管
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4.暗视野显微镜
暗视野显微镜（dark field microscope）的聚光镜中央有当光 片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线 进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种 显微镜能见到小至 4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高
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显微镜概述：
显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为 光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显 微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。
1.光学显微镜
普通生物显微镜由3部分构成：
①照明系统：包括光源和聚光器。
②光学放大系统：由物镜和目镜组成，
是显微镜的主体。
③机械装置：用于固定材料和观察方便，
50倍。 5.相差显微镜
一种介壳虫的染色体
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6. 偏光显微镜
偏光显微镜（polarizing microscope）用于检测具有双折射性的 物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。
7.微分干涉差显微镜
DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜 相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。
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厚标本和薄标本
4 - 5 um
2um
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基础知识
三. 实验步骤 (一)显微镜的使用 1. 观察前的准备工作
(1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要双 眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。
(2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备好。 (3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整
DIC显微镜下的 硅藻（伪彩色）
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8. 倒置显微镜
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9. 透射电子显微镜
JEM-1011透射电子显微镜
莱卡超薄切片机
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内质网透射电镜图（伪彩色）
冰冻蚀刻电镜照片
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10. 扫描电子显微镜
JEOL扫描电子显微镜
人类血细胞SEM照片
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11. 显微操作技术
尼康NT-88NE显微操作/注射 仪
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