薄层色谱讲座第一讲薄层色谱法的基本技术
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讲
座 薄 层 第一讲 色 谱 讲 座
薄层色谱法的基本技术 何
丽 一
（ 中国医学科学院 药物研 究所， 北京）
薄层色 谱法（ ｉ Ｌ ｙｒ ｒ ａｏｒ ｈ， Ｔｈ － ａｅ Ｃ ｏ ｔ ａ ｙ ｎ ｈ ｍ ｇｐ
简称Ｔ ） ｒｈ ｅ等人在五十年代从经典柱色 ＬＣ 是Ｋｉ ｎｒ ｃ
谱法及纸色谱法 的基础上发展起来 的一 种 色 谱 技
大分 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ物质 。
为了特殊需要可用各种方法制成具有特殊性能
的薄层， 如两种吸 附剂混合涂布的 薄层， 一块板 在同 上用不同吸附 剂涂成多区带的薄层， 在硅胶中 加入
硅酸锌或硫化镉等制成萤光薄层。加入碱或碱性缓 冲液的碱性薄层 （ 抑制某些碱性化合物在硅胶薄层 上的拖尾）。含有硫化物等沉淀剂的薄层用于分离 金属离子，含有硼酸盐等络合剂的薄层用于分离糖
ｔ ） ． ． 微量点样器（ ｃｏＡ ｐｉ ｔｒ， ｒ ｏ 及０ －２ ５ ３ Ｍｉ －ｐｌａｏ） ｒ ｃ 用于需要调节体积及没有毛细作用的键合相薄层的
点样。
硅胶是最常用的吸附剂， 市售硅胶Ｇ 即在硅胶 中已加入１－１％煅石膏，使用时只需将５硅胶Ｇ ２ ４ 加１－１ｍｌ 调成均匀的糊状，至石膏开始凝固 ５ ８ 水， 时，铺成 １ ２０ ０ ０ｃ的板四块，涂布薄层可用电动 涂布器 （ Ａ Ｇ涂布器）或自 如Ｃ ＭＡ 制有机玻璃手动
毛细管式的微量 点样器装在手动的 ｎｍ ｔ Ｎａｏ ａⅡ
型 样 置 磁性 样 上 点 头装 点 装 的 点 头 ， 样 在
簧 。 上
按下此点样头，毛细管借恒定的压力接 触 薄层表
面。点间距离由带准确的５ ｍｍ间隔的Ｖ字形缺刻装 置控制；注射器式的毫微点样器及微量点样器由测 微尺控制，也可与Ｎａｏ ａ 型点样装置配合，以 ｎｍ ｔ 使点样位置精确。 电动的Ｎａｏ ａ 型点样装置完全适用于上述 ｕｍ ｔ 各种点样器的配套使用，并且还可以自动控制点样
预饱和以克服边缘效 应。常规薄 层一般展距最多为 ２ｃ ，对难分离的物质不能靠增加展距来提高分离 ０ ｍ
度。 展距过长不仅延长展开时间， 更严重的是会引起 斑点扩散， 因此，在一般展距内分离不够满意时， 可 以调整展开剂组成或改变展开方式，如多次展开就 是不增加板长而改进分离的一种简单易行的方法。 ２ 展开剂的选择 展开剂即溶剂系统或流 ） 动相。点样后的薄层要用适当的展开剂使样品中的 各组分随展开剂的流动选择性地保留在薄层原点到 溶剂前沿之间， 理想的分离是得到一组Ｒｆ 值在０ － ． ２ ０ ． 间清晰的斑点。选择展开剂的理论推导及前 ８之 人的经验可以作为参考，更主要根据被分离物质的 性质及薄层分离机制的不同，通过试验，找到最佳 分离的展开剂。 在吸附薄层上往往先用单一的 低 极 性溶剂展 开，然后再更换极性较大的溶剂进行试验，常用的 单一溶剂的极性顺序为：己烷 （ 石油醚）＜二硫化
Ｖ Ｒ１－ＫＳ ｈｍｂｒ Ａ ０ Ｃ ａ ｅ 是为２ ２ｃ ０ ０ｍ薄层板 设计的水平展开槽， 其优点是展开剂用量少， 对同一 块薄层上的几条被隔开的样品带可以用不同展开剂 同时展开，便于选择展开剂，也可在展开时用适当 水蒸气或不同的溶剂蒸气对薄层板进行饱和。 为了使展开槽内能被展开剂蒸气饱和，使展开 剂组成不变， 得到理想的分离及重现的结果， 展开槽 必须密闭。 除用夹心槽外， 当使用极性相差较大的多 组分展开剂时，必须将点样后的薄层板置展开槽内
中仍是被广泛应 用 的一种方法。 薄层色谱法是开放型的色谱法。将要分离的混 合物点在用固定相均匀涂布的薄层上，用合适的展 开剂在密闭的层析槽中展开，被分离的成份不随展 开剂流出而选择性地保留在原点和溶剂前沿之间， 被分离化合物在薄层上的位置 用 Ｒ 值 （ ｆ 原点至样 品斑点中心的距离／ 原点至溶剂前沿的距离）来表
用于硬板。
１ 点状点样 借毛细作用吸样的定容管有 ） 两种，一是容积分别为０５１２３４ ． 、、 及５ 的定量毛 细管（ ｃｏａｓ， Ｍｉ ｅｐ）另一种是１０ ０ｎ的铂铱合金 ｒ ０及２０ｌ
定量毛细管（ａｏｉ ｔ ）注射器式的可变体积 Ｎ ｎｐ ｅｔ ； ｐ ｅ 的 点样器有５－２０ｌ ０ ３ 的毫微点样器 （ａｏＡｐ ｎ Ｎ ｎ－ ｌ － ａ ｃ ｉ
示， 当Ｒ 值为 ０ ，即样品 留在原点 ，在薄 层 上 ｆ 时
没被展开，Ｒ 值为１ 时，样品不 被保留，随溶剂 展开至前沿；合适的Ｒｆ 值应 在 ０ ０ 之间。按 ． ． ２ ８ 薄层色谱使用的固定相的性质及其 分离机制可 分 为吸附薄层、分配薄层、离子交换薄层及分子排阻
薄层等 。
离亲脂性化合物常选择氧化铝、硅胶、乙酰化纤维 素以及聚酰胺； 分离亲水性化合物常选择纤维素、 离 子交换纤维素、硅藻土及聚酰胺等；但也有例外， 如脂溶性叶绿素在氧化铝和纤维素上都能分离。常 用的吸附剂或载体有： 硅胶 硅胶表面带硅醇基，呈弱酸 性 （Ｈ＝ ｐ ４ ），活性硅胶适合分离酸性或中性化合物，如酚 ． ５ 类、醛类、生物碱类、尢体化合物以及氨基酸类， 是基于吸附作用；非活性硅胶含有一定的水， 在分 离色素时是基于分配作用。 氧化铝 有弱碱性（Ｈ＝９、酸性 （ ｐ ｐ Ｈ＝４及 中性（ ｐ Ｈ＝７ ． ５三种氧化铝。 弱碱性氧化铝用来分离 中性或碱性化合物，如多环碳氢化合物类、生物碱
胺 等高 聚物 。
１２点 样 －
点样方式、点样量及点样器的选择决定于分析 的目 的、样品溶液的浓度及被测物质 的 检 出灵敏 度。如果仅仅为了定性，用内径约０ ｍ ． ｍ管口平整 ５ 的毛细管或微量注射器将样品溶液点在距薄层底边 约２ｍ处， ｃ 点样直径不超过５ ｍ， ｍ 点间距为１ ． ｍ －１ ｃ ５ 即可。在进行薄层定量时，原点直径的一致，点样 间距的精确，是保证定量精 确 度 的 关 键，为 此 Ｃ ＭＡＧ公司生产了系列点样设备，这些设备只适 Ａ
中等极性的溶剂稀释或溶解 成一定浓度的溶液点
样。对生物样品 （ 动植物组织、体液… 等）中某 … 些成份的分离定量时，首先要将样品中的被测成份 定量地提取出来，视含量高低稀释或浓缩成一定浓 度的样品溶液，因为薄层吸附剂不必反复使用，且 层析过程同时也有净化的作用，所以多数情况样品 溶液可以直接点样，不必预处理。如果样品中欲测 成份量太低、杂质量太多或供试液中的杂质使展开 后的色谱背景太深或影响分离时，对样品溶液用萃
薄层色谱法虽已有卅多年历史，操作、设备等 有很多改进，但至今整个操作过程仍是不连续的， 其步骤如下：
术。 十 六 年代后，Ｓａｌ等人 对薄层色谱法的标准 ｔ ｈ 化、规格化及扩大应用等方面进行了许多工作，使 该法日 趋成熟。薄层色谱法具有设备简单、操作方 便、分离快速、灵敏度及分辨率高、显色剂选择性 大，以及制备薄层载量较纸色谱大，而切割色带较 柱色谱方便等优点。因此，在分离分析及小量制备 工作中基本取代了纸色谱法及经典柱色谱法。 薄层色谱法在仪器自动化程度、分辨率及重现 性等方面不如后来发展起来的气相色谱法和高效液 相色谱法，被认为只是一种定性和半定量的方法而 未受到足够的重视。但是薄层色谱法有如下特点： 固定相使用一次弃去， 样品的预处理比较简单； 对被 分离物质的性质没有限制， 使用范围较广； 平面薄层 具有多路柱效应，可同时进行多个样品的分离；在 同一色谱上可根据被分离化合物的性能选择不同显
碳 ＜苯＜四 氯化碳＜二氯甲 烷＜乙 醚＜乙酸乙 酯＜
丙酮＜丙醇＜乙醇＜甲醇＜水。用单一溶剂不能分 离时，可用两种以上的混合展开剂，并不断改变混 合展开剂的组成和比例。每种溶剂在展开中都有其 一定作用，如： ｉ 展开剂中比例较大的溶剂起溶解物质和基 本分离的作用，极性相对较小； ｉ 展开剂中比例较小的溶剂，极性较大，对 ｉ 被分离物质有较强的洗脱力，帮助化合物在薄层上 移动，可以增大 Ｒ 值， 但不能提高分辨率； ｆ ｉ 展开剂中加入少量酸、碱可抑制某些化合 ｉ ｉ 物斑点的拖尾； ｉ 展开剂中加入丙酮等中等极性溶剂可使不 Ｖ 相混合的溶剂混溶，并可以降低展开剂粘度，加快
次数， 点样器 在薄层上的停留 时间，以及点样器接 触薄层的速 度，此外，还可以用于圆 芯展开及反圆
芯展开时薄层的点样。 （ ） 喷雾带状点样 当样品溶液体 积 较大 ２ （ ９ ） １ ９ 而要进行定量点样时，可以用Ｌｉｏ ａ 杂 ｎｍ ｔ 型点样设备进行样品的带状点样。样品溶液吸在 微量注射器中，点样器不接触薄层，而是用氮气将 注射器针尖的溶液吹落在薄层上，薄层板在针头下 定速移动点成０ ９ｍｍ的窄 －１９ 带状点样展开后 的斑点的分辨率高于点状点样。 （ ） 自动点样 Ａ ｔｍａｉ Ｔ ３ ｕｏ ｔ ＬＣ ａ ｐｅ ｃ Ｓｍ ｌ ｒ 型设备是全自动的点样装置，吸样、 点样、 清洗、 样品及标准品位置的安排以及点样速度等全部由程 序控制， 点样量为１０ｌ ０ 。这种点样器是注射 ０ｎ－２ 器式的，但不用喷雾技术，而是靠调节点样速度控 制原点大小的一致。这种点样器的特点是节省时间 及提高点样的精度，但是价格较贵。 被分离的样品为液体或固体混合物时 需 要 用
－２ ｍ。 ｍ
分离， 更常用来作为分配色谱的支持剂。
纤维素 用于薄层色谱的纤维素有普通纤维素 及微晶纤维素两种， 都是用作分配薄层时的支持剂。 离子交换纤维素 纤维素经过化学处理制成各 种改良纤维素。有具有阳离子交换基团的羧甲基纤 维素（ Ｍ） 具有阴离子交换基团的二乙 Ｃ ， 基氨基乙 基（ Ａ 、 ＤＥ Ｅ） 三乙胺基（Ｅ Ｓ） Ｔ Ａ 以及氨基乙基（Ｅ） Ａ 等纤维素，都可用作离子交换薄层。将硅胶或纤维 素薄层用液体离子交换剂三异苯胺等处理后也可得 同样效果，分离离子型化合物。 聚酰胺 聚酰胺分子内的酰胺基能与酚类、酸 类、醌类及硝基化合物等形成氢键，因而，对这些 化合物产生吸附作用，且因化合物中酚羟基数目及 位置的不同产生的吸附力也不同而使得到分离。 葡聚糖凝胶 利用分子筛的原理在凝胶过滤薄 层上分离蛋白质、多 肽、核酸、酶与多糖等亲水性
类， 有螫合剂的薄层用于分离 含 无机离子， 含有硝
酸银的薄层用以分离不饱和化合物等。 在进行分配薄层时要将惰性支持剂涂布的薄层 经过预处理，即在支持剂上涂渍与流动相不相混合 的固定相。用于正相分配薄层的有水、甲酰胺及丙 二醇等；用于反相分配薄层时用硅酮油、 液体石蜡、
Ｃ０ 的碳氢化合物处理薄层。分离效果和展开 －Ｃ４
类、胺类、脂溶性维生素及醛酮类；中性氧化铝适 用于酸性及对碱不稳定的化合物的分离；酸性化合 物可用酸性氧化铝分离。 硅藻土 本身不具吸附性，以一定量加入硅胶 等吸附剂中可以降低吸附力。适合于某些化合物的
涂布器。涂布后的薄层应水平放置，室 温 凉 干备 用。如需活化，则干燥温度及时间可根据活度要求 变化。这样制得的薄层厚度 约 为 ０ －０ ｍ 适 ． ． ｍ， ２ ３ 合定性或定量时使用。 制备薄层的厚度要求约 ０５ ．
速度与固定相的量有关， 因此， 必须通过实验找到最 佳分离时的固定相量。这样处理的反相板在展开过 程中固定相会逐渐溶于展开剂而影响分离，因此， 现在多改用化学键合固定相作反相分配薄层。
化学键合固定相 将非极性不同碳链长度的烷 基共价键合于微粒硅胶表面游离羟基上。常用的有 十八烷基（ １ 、辛基（ ８和乙基（２ 等化学键合 Ｃ８ ） Ｃ） Ｃ） 固定相，作反相分配薄层用， 性能稳定， 重现性好。 ２ 薄层的制备：将吸附剂或载体均匀涂布 ） 在玻璃板、 塑料片或铝箔上的预制板已有商品出售， 规格齐全， 使用方便， 但价格较贵， 因此， 一般实验室 多用自制薄层。薄层有不含粘合剂的软板及含有粘 合剂的硬板两种。前者系将吸附剂或载体直接于玻 璃板上用干法涂成均匀的薄层即可使用，但软板疏 松，使用不便，现很少用；后者系在吸附剂中加入 适量粘合剂后用湿法涂层，粘合剂的加入可以增加 薄层的强度。理想的粘合剂要求亲水性好，粘结力 强且具有化学惰性。手工涂层时常用的粘合剂为羧 甲基纤维素钠（ ＭＣ 或煅石膏（ ａ Ｏ １ Ｈ２ ） Ｃ ） Ｃ Ｓ ４／ Ｏ 。 ２ 预制板的粘合剂有聚乙烯醇、聚丙烯酸或聚丙烯酰
色剂或检测方法进 行定性或定量， 并且可 以重复测 定。正 由于薄层 色谱有不 少优 点 ，因此在实际工作
１１吸附剂或载体的选择及薄层的制备 －
（ １ 吸附剂或载体的选择：除了颗粒较细、 粒度范围较窄外，柱色谱用的吸附剂或载体薄层色 谱都能用。但要使一组混合物得到很好分离必须要
根据被分 离化 合物的性质来选择 合适的 固定相 。分
座 薄 层 第一讲 色 谱 讲 座
薄层色谱法的基本技术 何
丽 一
（ 中国医学科学院 药物研 究所， 北京）
薄层色 谱法（ ｉ Ｌ ｙｒ ｒ ａｏｒ ｈ， Ｔｈ － ａｅ Ｃ ｏ ｔ ａ ｙ ｎ ｈ ｍ ｇｐ
简称Ｔ ） ｒｈ ｅ等人在五十年代从经典柱色 ＬＣ 是Ｋｉ ｎｒ ｃ
谱法及纸色谱法 的基础上发展起来 的一 种 色 谱 技
大分 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ物质 。
为了特殊需要可用各种方法制成具有特殊性能
的薄层， 如两种吸 附剂混合涂布的 薄层， 一块板 在同 上用不同吸附 剂涂成多区带的薄层， 在硅胶中 加入
硅酸锌或硫化镉等制成萤光薄层。加入碱或碱性缓 冲液的碱性薄层 （ 抑制某些碱性化合物在硅胶薄层 上的拖尾）。含有硫化物等沉淀剂的薄层用于分离 金属离子，含有硼酸盐等络合剂的薄层用于分离糖
ｔ ） ． ． 微量点样器（ ｃｏＡ ｐｉ ｔｒ， ｒ ｏ 及０ －２ ５ ３ Ｍｉ －ｐｌａｏ） ｒ ｃ 用于需要调节体积及没有毛细作用的键合相薄层的
点样。
硅胶是最常用的吸附剂， 市售硅胶Ｇ 即在硅胶 中已加入１－１％煅石膏，使用时只需将５硅胶Ｇ ２ ４ 加１－１ｍｌ 调成均匀的糊状，至石膏开始凝固 ５ ８ 水， 时，铺成 １ ２０ ０ ０ｃ的板四块，涂布薄层可用电动 涂布器 （ Ａ Ｇ涂布器）或自 如Ｃ ＭＡ 制有机玻璃手动
毛细管式的微量 点样器装在手动的 ｎｍ ｔ Ｎａｏ ａⅡ
型 样 置 磁性 样 上 点 头装 点 装 的 点 头 ， 样 在
簧 。 上
按下此点样头，毛细管借恒定的压力接 触 薄层表
面。点间距离由带准确的５ ｍｍ间隔的Ｖ字形缺刻装 置控制；注射器式的毫微点样器及微量点样器由测 微尺控制，也可与Ｎａｏ ａ 型点样装置配合，以 ｎｍ ｔ 使点样位置精确。 电动的Ｎａｏ ａ 型点样装置完全适用于上述 ｕｍ ｔ 各种点样器的配套使用，并且还可以自动控制点样
预饱和以克服边缘效 应。常规薄 层一般展距最多为 ２ｃ ，对难分离的物质不能靠增加展距来提高分离 ０ ｍ
度。 展距过长不仅延长展开时间， 更严重的是会引起 斑点扩散， 因此，在一般展距内分离不够满意时， 可 以调整展开剂组成或改变展开方式，如多次展开就 是不增加板长而改进分离的一种简单易行的方法。 ２ 展开剂的选择 展开剂即溶剂系统或流 ） 动相。点样后的薄层要用适当的展开剂使样品中的 各组分随展开剂的流动选择性地保留在薄层原点到 溶剂前沿之间， 理想的分离是得到一组Ｒｆ 值在０ － ． ２ ０ ． 间清晰的斑点。选择展开剂的理论推导及前 ８之 人的经验可以作为参考，更主要根据被分离物质的 性质及薄层分离机制的不同，通过试验，找到最佳 分离的展开剂。 在吸附薄层上往往先用单一的 低 极 性溶剂展 开，然后再更换极性较大的溶剂进行试验，常用的 单一溶剂的极性顺序为：己烷 （ 石油醚）＜二硫化
Ｖ Ｒ１－ＫＳ ｈｍｂｒ Ａ ０ Ｃ ａ ｅ 是为２ ２ｃ ０ ０ｍ薄层板 设计的水平展开槽， 其优点是展开剂用量少， 对同一 块薄层上的几条被隔开的样品带可以用不同展开剂 同时展开，便于选择展开剂，也可在展开时用适当 水蒸气或不同的溶剂蒸气对薄层板进行饱和。 为了使展开槽内能被展开剂蒸气饱和，使展开 剂组成不变， 得到理想的分离及重现的结果， 展开槽 必须密闭。 除用夹心槽外， 当使用极性相差较大的多 组分展开剂时，必须将点样后的薄层板置展开槽内
中仍是被广泛应 用 的一种方法。 薄层色谱法是开放型的色谱法。将要分离的混 合物点在用固定相均匀涂布的薄层上，用合适的展 开剂在密闭的层析槽中展开，被分离的成份不随展 开剂流出而选择性地保留在原点和溶剂前沿之间， 被分离化合物在薄层上的位置 用 Ｒ 值 （ ｆ 原点至样 品斑点中心的距离／ 原点至溶剂前沿的距离）来表
用于硬板。
１ 点状点样 借毛细作用吸样的定容管有 ） 两种，一是容积分别为０５１２３４ ． 、、 及５ 的定量毛 细管（ ｃｏａｓ， Ｍｉ ｅｐ）另一种是１０ ０ｎ的铂铱合金 ｒ ０及２０ｌ
定量毛细管（ａｏｉ ｔ ）注射器式的可变体积 Ｎ ｎｐ ｅｔ ； ｐ ｅ 的 点样器有５－２０ｌ ０ ３ 的毫微点样器 （ａｏＡｐ ｎ Ｎ ｎ－ ｌ － ａ ｃ ｉ
示， 当Ｒ 值为 ０ ，即样品 留在原点 ，在薄 层 上 ｆ 时
没被展开，Ｒ 值为１ 时，样品不 被保留，随溶剂 展开至前沿；合适的Ｒｆ 值应 在 ０ ０ 之间。按 ． ． ２ ８ 薄层色谱使用的固定相的性质及其 分离机制可 分 为吸附薄层、分配薄层、离子交换薄层及分子排阻
薄层等 。
离亲脂性化合物常选择氧化铝、硅胶、乙酰化纤维 素以及聚酰胺； 分离亲水性化合物常选择纤维素、 离 子交换纤维素、硅藻土及聚酰胺等；但也有例外， 如脂溶性叶绿素在氧化铝和纤维素上都能分离。常 用的吸附剂或载体有： 硅胶 硅胶表面带硅醇基，呈弱酸 性 （Ｈ＝ ｐ ４ ），活性硅胶适合分离酸性或中性化合物，如酚 ． ５ 类、醛类、生物碱类、尢体化合物以及氨基酸类， 是基于吸附作用；非活性硅胶含有一定的水， 在分 离色素时是基于分配作用。 氧化铝 有弱碱性（Ｈ＝９、酸性 （ ｐ ｐ Ｈ＝４及 中性（ ｐ Ｈ＝７ ． ５三种氧化铝。 弱碱性氧化铝用来分离 中性或碱性化合物，如多环碳氢化合物类、生物碱
胺 等高 聚物 。
１２点 样 －
点样方式、点样量及点样器的选择决定于分析 的目 的、样品溶液的浓度及被测物质 的 检 出灵敏 度。如果仅仅为了定性，用内径约０ ｍ ． ｍ管口平整 ５ 的毛细管或微量注射器将样品溶液点在距薄层底边 约２ｍ处， ｃ 点样直径不超过５ ｍ， ｍ 点间距为１ ． ｍ －１ ｃ ５ 即可。在进行薄层定量时，原点直径的一致，点样 间距的精确，是保证定量精 确 度 的 关 键，为 此 Ｃ ＭＡＧ公司生产了系列点样设备，这些设备只适 Ａ
中等极性的溶剂稀释或溶解 成一定浓度的溶液点
样。对生物样品 （ 动植物组织、体液… 等）中某 … 些成份的分离定量时，首先要将样品中的被测成份 定量地提取出来，视含量高低稀释或浓缩成一定浓 度的样品溶液，因为薄层吸附剂不必反复使用，且 层析过程同时也有净化的作用，所以多数情况样品 溶液可以直接点样，不必预处理。如果样品中欲测 成份量太低、杂质量太多或供试液中的杂质使展开 后的色谱背景太深或影响分离时，对样品溶液用萃
薄层色谱法虽已有卅多年历史，操作、设备等 有很多改进，但至今整个操作过程仍是不连续的， 其步骤如下：
术。 十 六 年代后，Ｓａｌ等人 对薄层色谱法的标准 ｔ ｈ 化、规格化及扩大应用等方面进行了许多工作，使 该法日 趋成熟。薄层色谱法具有设备简单、操作方 便、分离快速、灵敏度及分辨率高、显色剂选择性 大，以及制备薄层载量较纸色谱大，而切割色带较 柱色谱方便等优点。因此，在分离分析及小量制备 工作中基本取代了纸色谱法及经典柱色谱法。 薄层色谱法在仪器自动化程度、分辨率及重现 性等方面不如后来发展起来的气相色谱法和高效液 相色谱法，被认为只是一种定性和半定量的方法而 未受到足够的重视。但是薄层色谱法有如下特点： 固定相使用一次弃去， 样品的预处理比较简单； 对被 分离物质的性质没有限制， 使用范围较广； 平面薄层 具有多路柱效应，可同时进行多个样品的分离；在 同一色谱上可根据被分离化合物的性能选择不同显
碳 ＜苯＜四 氯化碳＜二氯甲 烷＜乙 醚＜乙酸乙 酯＜
丙酮＜丙醇＜乙醇＜甲醇＜水。用单一溶剂不能分 离时，可用两种以上的混合展开剂，并不断改变混 合展开剂的组成和比例。每种溶剂在展开中都有其 一定作用，如： ｉ 展开剂中比例较大的溶剂起溶解物质和基 本分离的作用，极性相对较小； ｉ 展开剂中比例较小的溶剂，极性较大，对 ｉ 被分离物质有较强的洗脱力，帮助化合物在薄层上 移动，可以增大 Ｒ 值， 但不能提高分辨率； ｆ ｉ 展开剂中加入少量酸、碱可抑制某些化合 ｉ ｉ 物斑点的拖尾； ｉ 展开剂中加入丙酮等中等极性溶剂可使不 Ｖ 相混合的溶剂混溶，并可以降低展开剂粘度，加快
次数， 点样器 在薄层上的停留 时间，以及点样器接 触薄层的速 度，此外，还可以用于圆 芯展开及反圆
芯展开时薄层的点样。 （ ） 喷雾带状点样 当样品溶液体 积 较大 ２ （ ９ ） １ ９ 而要进行定量点样时，可以用Ｌｉｏ ａ 杂 ｎｍ ｔ 型点样设备进行样品的带状点样。样品溶液吸在 微量注射器中，点样器不接触薄层，而是用氮气将 注射器针尖的溶液吹落在薄层上，薄层板在针头下 定速移动点成０ ９ｍｍ的窄 －１９ 带状点样展开后 的斑点的分辨率高于点状点样。 （ ） 自动点样 Ａ ｔｍａｉ Ｔ ３ ｕｏ ｔ ＬＣ ａ ｐｅ ｃ Ｓｍ ｌ ｒ 型设备是全自动的点样装置，吸样、 点样、 清洗、 样品及标准品位置的安排以及点样速度等全部由程 序控制， 点样量为１０ｌ ０ 。这种点样器是注射 ０ｎ－２ 器式的，但不用喷雾技术，而是靠调节点样速度控 制原点大小的一致。这种点样器的特点是节省时间 及提高点样的精度，但是价格较贵。 被分离的样品为液体或固体混合物时 需 要 用
－２ ｍ。 ｍ
分离， 更常用来作为分配色谱的支持剂。
纤维素 用于薄层色谱的纤维素有普通纤维素 及微晶纤维素两种， 都是用作分配薄层时的支持剂。 离子交换纤维素 纤维素经过化学处理制成各 种改良纤维素。有具有阳离子交换基团的羧甲基纤 维素（ Ｍ） 具有阴离子交换基团的二乙 Ｃ ， 基氨基乙 基（ Ａ 、 ＤＥ Ｅ） 三乙胺基（Ｅ Ｓ） Ｔ Ａ 以及氨基乙基（Ｅ） Ａ 等纤维素，都可用作离子交换薄层。将硅胶或纤维 素薄层用液体离子交换剂三异苯胺等处理后也可得 同样效果，分离离子型化合物。 聚酰胺 聚酰胺分子内的酰胺基能与酚类、酸 类、醌类及硝基化合物等形成氢键，因而，对这些 化合物产生吸附作用，且因化合物中酚羟基数目及 位置的不同产生的吸附力也不同而使得到分离。 葡聚糖凝胶 利用分子筛的原理在凝胶过滤薄 层上分离蛋白质、多 肽、核酸、酶与多糖等亲水性
类， 有螫合剂的薄层用于分离 含 无机离子， 含有硝
酸银的薄层用以分离不饱和化合物等。 在进行分配薄层时要将惰性支持剂涂布的薄层 经过预处理，即在支持剂上涂渍与流动相不相混合 的固定相。用于正相分配薄层的有水、甲酰胺及丙 二醇等；用于反相分配薄层时用硅酮油、 液体石蜡、
Ｃ０ 的碳氢化合物处理薄层。分离效果和展开 －Ｃ４
类、胺类、脂溶性维生素及醛酮类；中性氧化铝适 用于酸性及对碱不稳定的化合物的分离；酸性化合 物可用酸性氧化铝分离。 硅藻土 本身不具吸附性，以一定量加入硅胶 等吸附剂中可以降低吸附力。适合于某些化合物的
涂布器。涂布后的薄层应水平放置，室 温 凉 干备 用。如需活化，则干燥温度及时间可根据活度要求 变化。这样制得的薄层厚度 约 为 ０ －０ ｍ 适 ． ． ｍ， ２ ３ 合定性或定量时使用。 制备薄层的厚度要求约 ０５ ．
速度与固定相的量有关， 因此， 必须通过实验找到最 佳分离时的固定相量。这样处理的反相板在展开过 程中固定相会逐渐溶于展开剂而影响分离，因此， 现在多改用化学键合固定相作反相分配薄层。
化学键合固定相 将非极性不同碳链长度的烷 基共价键合于微粒硅胶表面游离羟基上。常用的有 十八烷基（ １ 、辛基（ ８和乙基（２ 等化学键合 Ｃ８ ） Ｃ） Ｃ） 固定相，作反相分配薄层用， 性能稳定， 重现性好。 ２ 薄层的制备：将吸附剂或载体均匀涂布 ） 在玻璃板、 塑料片或铝箔上的预制板已有商品出售， 规格齐全， 使用方便， 但价格较贵， 因此， 一般实验室 多用自制薄层。薄层有不含粘合剂的软板及含有粘 合剂的硬板两种。前者系将吸附剂或载体直接于玻 璃板上用干法涂成均匀的薄层即可使用，但软板疏 松，使用不便，现很少用；后者系在吸附剂中加入 适量粘合剂后用湿法涂层，粘合剂的加入可以增加 薄层的强度。理想的粘合剂要求亲水性好，粘结力 强且具有化学惰性。手工涂层时常用的粘合剂为羧 甲基纤维素钠（ ＭＣ 或煅石膏（ ａ Ｏ １ Ｈ２ ） Ｃ ） Ｃ Ｓ ４／ Ｏ 。 ２ 预制板的粘合剂有聚乙烯醇、聚丙烯酸或聚丙烯酰
色剂或检测方法进 行定性或定量， 并且可 以重复测 定。正 由于薄层 色谱有不 少优 点 ，因此在实际工作
１１吸附剂或载体的选择及薄层的制备 －
（ １ 吸附剂或载体的选择：除了颗粒较细、 粒度范围较窄外，柱色谱用的吸附剂或载体薄层色 谱都能用。但要使一组混合物得到很好分离必须要
根据被分 离化 合物的性质来选择 合适的 固定相 。分