《植物组织培养》实验教案

《植物组织培养》实验教案

目录

实验一培养基母液及其它药品的制备（3学时） (2)

实验二MS培养基的制备及高压灭菌（3学时） (3)

实验三外植体的灭菌与接种（3学时） (4)

实验四植物愈伤组织诱导培养（2学时） (5)

实验五芽的诱导培养技术（3学时） (6)

实验六根的诱导培养技术 (7)

实验一培养基母液及其它药品的制备（3学时）

一、目的要求

1、通过MS培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能；

2、掌握培养基各种母液的保存方法。

二、仪器与用具

1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱；

2、用具：烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签、玻璃棒、药匙、称量纸、记号笔；

3、试剂：95%酒精，0.5-1mol/LNaOH，0.5-1mol/LHCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。

三、方法步骤

（一）母液的配制

母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。

优点：（1）保证各物质成分的准确性；

（2）便于配制时快速移取；

（3）便于低温保藏。

注意配制时，两种成分分别溶解在少量蒸馏水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适

当加热。混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。

4、MS有机物母液（100X）

5、生长调节剂

单独配制，浓度为0.1～2 mg/ml。

配制培养基母液时注意事项：

①一些离子易发生沉淀，可先少量水溶解，再按配方顺序依次混合；

②配制母液时用蒸馏水或重蒸馏水；

③药品应用化学纯或分析纯；

④溶解生长素时，可用少量0．5 –1mol/L的NaOH 或95%酒精溶解，溶解分裂素类用0．5 –1mol/L的HCl加热溶解。如再加蒸馏水，易产生白色沉淀，此时可加入热水。（二）母液的保存

1、装瓶：将配制好的母液分别装入试剂瓶中，贴好标签，注明各培养基母液的名称、浓缩倍数、日期。（注意将易分解、氧化者，放入棕色瓶中）

2、贮藏：4℃冰箱。

四、作业

1、写出实验报告。

2、配制培养基母液时应注意哪些事项？

实验二MS培养基的制备及高压灭菌（3学时）

一、目的要求

掌握MS诱导培养基的配制方法及高压灭菌操作规程。

二、实验原理

植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。早在1957年Skoog即发现培养基中植物激素的类型和它们的比例，对再分化过程起着重要作用。

三、仪器与用具

1. 实验仪器培养室，接种箱或超净工作台，高压灭菌锅，分析天平，水浴锅，长镊子，解剖刀，剪刀，三角烧瓶（100 ml），容量瓶，烧杯，移液管，量筒，牛皮纸，培养皿，称量纸，棉线，封口膜

2. 实验试剂 HgCl2(或次氯酸钠)，乙醇，6-BA（6-苄基氨基腺嘌呤），IAA，MS培养基母液

四、方法步骤

1. 配制培养基

(1) 预培养基：MS基本培养基（不含激素）。共配制300ml,分装10瓶，30 ml/瓶。

大量元素：

微量元素：

铁盐：

有机物质（不含肌醇）：

肌醇：

蔗糖：

琼脂：

PH值：

(2) 诱导培养基：表中每个激素组合配制150 ml，分装5瓶，30 ml/瓶。

表1加到MS培养基中激素的比例

序号IAA（mg/L）6-BA (mg/L)

（1）（2）（3）（4）（5）

1.0

0.5

1.0

0.1

0.5

0.5

1.0

1.0

2. 培养基灭菌

将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8，趁热分装于100 ml三角烧瓶中，每瓶约30 ml。待培养基冷却凝固后，用一层称量纸和一层牛皮纸包扎瓶（管）口，并用棉线扎牢，然后在高压灭菌锅中121℃（1 kg/cm2）下灭菌20 min。取出三角烧瓶放在台子上，冷却后备用。

五、实验结果

计算出配制两种培养基所需各成分的量，写出配制过程中需要注意事项。

实验三外植体的灭菌与接种（3学时）

一、目的要求

掌握外植体的灭菌消毒及接种等组培无菌操作技术。

二、实验原理

植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。早在1957年Skoog即发现培养基中植物激素的类型和它们的比例，对再分化过程起着重要作用。

三、仪器与用具

1. 实验仪器光照培养箱，超净工作台，长镊子，解剖刀，剪刀，培养皿。

2. 实验试剂 0.1%HgCl2，70%乙醇，无菌双蒸水。

四、方法步骤

1. 外植体的灭菌、接种

(1)打开超净工作台紫外灯，灭菌消毒30分钟。

(2)打开超净台风机，关掉紫外灯，用70%乙醇浸泡的脱脂棉擦拭超净台台面，进行表面消毒。

（3）点燃酒精灯，用70%乙醇擦拭双手表面消毒，将灭菌的培养皿打开置酒精灯近前方。

（4）将剥去种皮的甜瓜种子置培养皿内，加入0.1%HgCl2浸泡种子5分钟，期间不时轻轻摇动培养皿，随后将HgCl2溶液倒入回收烧杯中，再用无菌水润洗种子三次，把长镊子蘸70%的乙醇于酒精灯外焰灼烧灭菌，冷却后用长镊子将种子转入无激素的预培养基。

2. 外植体的培养

将接种好外植体的三角瓶置光照培养箱中培养，温度25+1℃，光照16/8小时光/暗周期。

五、实验结果

列出外植体灭菌、接种等组培无菌操作关键技术及注意事项。

实验四植物愈伤组织诱导培养（2学时）

一、目的要求

掌握外植体的切割方法及接种技巧，弄清愈伤组织诱导原理。

二、实验原理

植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。早在1957年Skoog即发现培养基中植物激素的类型和它们的比例，对再分化过程起着重要作用。

三、仪器与用具

1. 实验仪器光照培养箱，超净工作台，长镊子，解剖刀，剪刀，培养皿。

2. 实验试剂 0.1%HgCl2，70%乙醇，无菌双蒸水。