caspase-3
细胞凋亡实验
细胞凋亡Caspase3检测实验小结一．原理Caspase-3在细胞凋亡中起着不可替代的作用，正常细胞中，Caspase-3以32kD的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期，pro-Caspase-3被活化成为具有催化活性的Caspase-3，活化的Caspase-3蛋白，可以激活其他底物蛋白，从而导致凋亡过程。
活化的Caspase-3能够特异性地水解DEVE-X底物。
Ac-DEVE-pNA常用于Caspase-3的检测，细胞凋亡早期产生的Caspase-3可以特异性地水解Ac-DEVE-pNA的肽键，水解后的pNA能够激发发射荧光，根据荧光的强度可以测定Caspase-3，从而反应Caspase-3被活化的程度。
二．试剂配制1.1底物储存液将Ac-DEVE-pNA溶解于DMSO(10mM)1.2底物工作液(2×)50μL底物储存液100μL DTT (1M)400μLEDTA (100mM)10mL Tris Buffer (200mM)调整pH到7.4三．操作方法将经过药物处理的贴壁细胞，用PBS洗两遍，按照6孔板每孔加入100微升裂解液的比例加入Western及IP细胞裂解液裂解液(P0013)，若细胞密度较大可加大裂解液用量。
用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取20uL 上清用于BCA蛋白定量。
以相同的蛋白上样量，等比例加入Caspase-3底物工作液，室温孵育至少1h，检测混合液405nm波长下的吸光度。
四．STA和CoCl2诱导RGC5细胞凋亡浓度摸索五、流式细胞术检测空白组(不染色) 空白组(单染) 空白组(单染) 空白组(双染) CoCl2+0% FBS CoCl2+2% FBS 凋亡比例：0.65 % 0.29% 3.13 % 16.78% 16.86 % 32.43 %结论：2% FBS+1mM CoCl2处理24h 可以引起RGC5细胞出现较多的凋亡。
Caspase半胱氨酸蛋白酶家族蛋白介绍
抗体动物种属来源缩写：R-兔、M-小鼠、r-大鼠、Sh-山羊、H-人
Caspase-6(CT)半胱氨酸蛋白酶蛋白-6（C端）
抗体动物种属来源缩写：R-兔、M-小鼠、r-大鼠、Sh-山羊、H-人
Caspase-13半胱氨酸蛋白酶蛋白-13
S-0053R
◆兔抗人、大鼠、小鼠Caspase-13多克隆抗体
◆200ul/1000.00 1ml/2900.00 (100ug/200ul 500ug/1ml)亲和纯化抗体
◆WB=1:300-600 Elisa=1:500-1500 IP=1:50-150 IHC=1:300-600
◆WB=1:500-1000 IF=1:100-200 Elisa =1:5000-10000
抗体动物种属来源缩写：R-兔、M-小鼠、r-大鼠、Sh-山羊、H-人
CD10单抗
S-0551M
◆小鼠抗人CD10单克隆抗体
◆100ul/1200.00 200ml/2000.00 (100ug/200ul 500ug/1ml)亲和纯化抗体
◆Caspase-10含有497aa,分子量为55KDa,与其它成员有30%—50%的同源性，Caspase-10分子结构的显著特点是其N端也有两个FADD氨基端样结构域。Caspase-10分布广泛，基因定位于2p12，即因转染昆虫细胞系Sf9中可以引起细胞凋亡，其活性可以被DEVD-CHO所抑制。
抗体动物种属来源缩写：R-兔、M-小鼠、r-大鼠、Sh-山羊、H-人
人半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)试剂盒使用方法
人半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T3 pmol/L -80 pmol/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）水平。
用纯化的人半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3），再与HRP 标记的半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）浓度。
试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（160 pmol/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
Caspase 3 活性检测试剂盒(比色法)
Caspase 3 活性检测试剂盒(比色法)产品简介：Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)家族在介导细胞凋亡过程的起着极其重要的作用，其成员包括Caspase1~11等,均属于蛋白酶家族。
Caspase 3又称CPP32、Yama、apopain、Caspase-3，属于CED-3亚家族，是细胞凋亡过程中的一个关键酶。
Caspase 3 可以剪切procaspase 2、6、7和9，可直接特异性剪切许多Caspase底物（如PARP、ICAD等），并在细胞核凋亡过程中起到重要作用。
Jimei Caspase 3活性检测试剂盒（比色法）(Caspase 3 Colorimetric A ssay Kit)的检测原理是利用Caspase 3催化底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide(Ac-DEVD-pNA)产生黄色的游离硝基笨胺pNA (p-nitroaniline)，通过测定分光光度比色法测定pNA在400~410nm处吸光值，从而间接获得Caspase 3的活性。
自备材料：1、水浴锅或恒温箱2、96孔板3、酶标仪或分光光度操作步骤（仅供参考）：1、制备标准曲线：①按照Caspase Lysis buffer：Assay buffer=1：9的比例配制适量的标准品稀释液。
②用标准品稀释液稀释pNA(10mM)，使pNA分别达到200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM，另外设置一般不加pNA仅含标准品稀释液作为零管，把以上系列浓度物质作为标准品。
③取pNA浓度分别为200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、0的标准品各100μl加入至96孔板或取适量体积加入至容量不超过100μl的比色杯，测定405nm处吸光值即A405。
④用每一个标准品的A405 减去不含pNA的空白对照的A405，计算出实际的吸光值。
Caspase3裂解评估
Caspase3裂解评估
Caspase-3抗体（兔多抗）用人工合成的人Caspase-3本身的切割位点处一段多肽，经适当修饰后免疫兔子，然后用proteinA和抗原多肽亲和柱经过两步纯化得到的高纯度多克隆抗体。
Caspase-3抗体可以识别全长的Caspase-3（35kD），也可以识别Caspase-3被剪切后产生的17kD片段。
未发现和其它Caspase家族蛋白有交叉反应。
Caspase-3是细胞凋亡过程中最关键的执行分子（keyexecutioner）之一，可以剪切细胞凋亡过程中的许多关键蛋白。
Caspase-3的激活需要从没有活性的全长Caspase-3（35kD），在Asp28和Ser29之间及Asp175和Ser176之间进行剪切，产生有活性的17kD肽段。
Caspase-3的激活常被作为细胞凋亡的一个重要指标。
细胞凋亡（apoptosis）是细胞为维持内环境稳定，更好地适应生存环境而主动形成的一种自我死亡过程，它涉及一系列基因的激活、表达及调控等作用。
人胱天蛋白酶-3(caspase-3)说明书活性
人胱天蛋白酶-3（caspase-3）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中胱天蛋白酶-3（caspase-3）的活性。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胱天蛋白酶-3（caspase-3）水平。
用纯化的人胱天蛋白酶-3（caspase-3）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胱天蛋白酶-3（caspase-3），再与HRP标记的胱天蛋白酶-3（caspase-3）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胱天蛋白酶-3（caspase-3）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人胱天蛋白酶-3（caspase-3）活性浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：18U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
Caspase-3细胞定位信号的检测与分析的开题报告
Caspase-3细胞定位信号的检测与分析的开题报告一、研究背景与意义Caspase-3是一种重要的半胱氨酸特异性蛋白酶，是凋亡信号通路中的关键酶。
当细胞受到外部压力或内部损伤时，Caspase-3可以被活化，从而引起细胞自身凋亡。
Caspase-3的活化和细胞的凋亡过程密切相关，因此对其进行研究可以进一步理解细胞凋亡的机理和调控，对疾病的治疗也具有重要的参考意义。
Caspase-3的细胞定位信号可以反映其功能状态，常使用免疫荧光染色或免疫组织化学方法来检测。
通过对Caspase-3的定位信号进行检测和分析，可以深入研究其在细胞活动中的作用和调节机制，为研究凋亡相关疾病的发生机制提供重要的实验依据。
二、研究内容和方法本研究旨在检测和分析Caspase-3的细胞定位信号，在细胞层面上探究其功能和调控机制。
具体研究内容和方法如下：1. 选择适宜的细胞系：筛选并选择适宜的细胞系，保证实验的可操作性和准确性。
2. 免疫荧光染色：采用免疫荧光染色技术，制备Caspase-3的免疫标记抗体，并用荧光探针标记，检测Caspase-3在细胞中的分布情况和定位信号。
3. 免疫组织化学：采用免疫组织化学技术，制备Caspase-3的免疫标记抗体，并用酶标法或免疫荧光法检测Caspase-3在组织中的分布情况和定位信号。
4. 图像分析：通过免疫荧光显微镜或显微摄像机拍摄得到Caspase-3的免疫荧光或免疫组织化学图片，进行数字图像分析，计算Caspase-3的荧光强度和定位信号的分布情况。
三、研究预期结果通过本研究，预期可以验证Caspase-3的细胞定位信号，并对其功能和调控机制进行探究，为深入研究细胞凋亡、癌症、心脏病、糖尿病等疾病提供重要的实验基础和参考意义。
同时，本研究可推动细胞凋亡领域的研究进展，为探索更多高效的治疗方法提供重要的理论支持。
Caspase-3在缺血性脑损伤中的作用
Caspase-3在缺血性脑损伤中的作用摘要】脑血管疾病是当今人类三大死亡原因之一,目前仍然缺乏有效的治疗手段,因此需要进一步探讨发病过程中的分子机制,为预防及治疗提供新的理论依据。
近来许多研究发现由半胱氨酸蛋白酶家族介导的细胞凋亡在缺血性脑损伤中起到了重要的作用，而半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)被认为是细胞凋亡执行阶段的关键蛋白酶，且通过干预caspase-3 表达可减轻脑缺血的损伤程度[1]。
【关键词】缺血性脑损伤凋亡半胱氨酸蛋白酶-3前言：缺血性脑损伤是缺血性脑血管疾病中必经的病理过程，在此过程中细胞凋亡占有重要的比重。
在机体凋亡与抗凋亡过程，Caspase-3属于关键步骤；故在此对细胞凋亡、Caspase-3在缺血性脑损伤中的作用做简要综述。
1、细胞凋亡凋亡是一个基因调控的程序性细胞死亡过程，形态学特征是细胞核和细胞质发生浓缩，染色质发生断裂，不伴有炎症反应。
在这个过程中大量的基因被激活，蛋白质表达增加。
其在体内稳态平衡、神经发育、机体防疫、老化及许多疾病的发生过程中发挥重要作用，如帕金森病、老年性痴呆等神经退行性疾病与神经细胞过度凋亡有关。
依据细胞凋亡机制可将凋亡分为caspase依赖的、非caspase依赖的凋亡，其中以前者为主。
caspase依赖的途径主要有线粒体/细胞色素C通路、死亡受体通路和内质网通路[2]。
1）线粒体/细胞色素C通路：由理化因素导致的DNA损伤、生长因子缺乏、氧化应激、毒物药物等刺激信号激活。
细胞色素C作为一种促凋亡因子从线粒体膜释放入胞浆后，与胞浆中的凋亡激活因子-1（Apaf-1）的C末端及ATP结合，促使caspase-9蛋白酶家族呈“瀑布式”层层激活(caspase-9→caspase-3、6、7)，引起细胞形态学上的改变使细胞最终发生凋亡[3]；2）死亡受体(Fas-associated death domain，FADD)通路：由配体如TNF、Fas或TRAIL同其受体结合引起，配体受体结合后激活caspase-8,进一步激活caspase-3、caspase-6、capase-7；3）内质网通路：主要由Ca2+介导，胞内钙超载，影响内质网对钙的摄取和释放，造成内质网的应激，内质网应激诱导caspase-12表达，激活的caspase-12可进一步激活caspase-3而引发细胞凋亡。
caspase-3的检测方法
有两类caspase，一类是起始者（initiators）,另一类是执行者（executioners）,起始caspase在外来蛋白信号的作用下被切割激活，激活的起始caspase对执行者caspase进行切割并使之激活，被激活的执行者caspase通过对caspase靶蛋白的水解，导致程序性细胞死亡。
看到过有关caspase-3的检测方法：(1)免疫细胞化学检测caspase-3蛋白的表达，用悬浮的细胞；(2)western blot 理想结果：caspase-3有32ＫＤ的条带外，还出现了20ＫＤ和10ＫＤ大小的条带，表明caspase- 3被活化；(3)RT-PCR检测mRNA的表达，用凝胶成像分析e是一类蛋白酶家族，成员较多，在人类，已经鉴定了14种不同的caspase。
各种caspase都富含半胱氨酸，它们被激活后，能够在靶蛋白的特异天冬氨酸残基部位进行切割。在正常的细胞内，每一种caspase都是以非活性状态存在的，这种非活性的caspase称作酶原（zymogen），它是酶的非活性前体，其肽链比有活性时长一些，将多出的部分切除，就转变成有活性的caspase。
博凌科为生物科技-为你解答：种方法都有自己的优缺点，关键是根据实验目的选择适合的方法。检测mRNA水平的表达，RT－PCR是广泛应用的比较好的方法；检测蛋白水平的表达，可以选择免疫细胞化学，Westen－Blot等，前者可以在细胞内定位但定量效果不佳，后者操作比较复杂，如想在较高水平杂 志发表论文最好选择此方法。检测Caspase－3活性还可以选用流式细胞仪来做，且可同时测定Caspase－8等的活性(多通路)。
大鼠半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）免疫组化试剂盒
大鼠caspase caspase--3 免疫组化试剂盒免疫组化试剂盒该试剂盒以HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性caspase-3抗原。
该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。
在所用的caspase-3一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。
试剂盒所含试剂试剂盒所含试剂：：试剂A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用）试剂B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL试剂C （原装进口分装）已稀释的即用型caspase-3一抗（2.5ml）试剂D （原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG 1支（浓度1.5 mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml试剂E HRP-SA 复合物1支（浓度1 μM，稀释比1:50~1:200）100 μL 试剂F DAB 显色液 5ml用户自备试剂用户自备试剂：：1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH 值至7.2~7.4，最后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH 值至6.0，最后定容至1000mL或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0）EDTA·2H2O 186.1g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水700mL，用10mM NaOH 调pH 值至8.0，最后定容至1000Ml3. 缓冲甘油封固剂10 mL4. Tween 20 5 mL石蜡包埋组织切片免疫染色石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤实验步骤（（建议方案建议方案）：）：石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr；2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min；4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附1）* 注：有些抗原勿需修复，直接进入第5步封闭。
半胱天冬酶3的裂解
半胱天冬酶3的裂解摘要：1.半胱天冬酶3的基本概念2.半胱天冬酶3的裂解过程3.半胱天冬酶3裂解的重要性4.应用与前景正文：半胱天冬酶3（Caspase-3）是一种重要的蛋白质，它在细胞凋亡过程中发挥着至关重要的作用。
Caspase-3的裂解是细胞凋亡的关键步骤，这一过程受到严格的调控，以确保细胞凋亡的顺利进行。
本文将介绍半胱天冬酶3的基本概念、裂解过程及其在细胞凋亡中的重要作用，同时探讨其在生物医学研究中的应用与前景。
一、半胱天冬酶3的基本概念半胱天冬酶3（Caspase-3）是一种属于半胱天冬酶家族的蛋白质，这个家族的成员在细胞凋亡过程中起到关键作用。
Caspase-3主要存在于细胞内，并在细胞凋亡信号传导途径中发挥作用。
当细胞受到内外因素的刺激时，Caspase-3会被激活，从而引发细胞凋亡。
二、半胱天冬酶3的裂解过程半胱天冬酶3的裂解是细胞凋亡的关键步骤。
在这一过程中，Caspase-3前体（Pro-Caspase-3）被激活，转变为具有活性的Caspase-3。
这个过程主要分为以下几个阶段：1.启动：细胞受到凋亡信号刺激后，激活一系列信号分子，如受体酪氨酸激酶、丝裂原活化蛋白激酶等。
这些信号分子进一步激活Caspase-3前体。
2.激活：活化的Caspase-3前体经过一系列的剪切，生成具有活性的Caspase-3。
这个过程中，半胱氨酸残基（Cys）被剪切，形成具有催化活性的Caspase-3。
3.执行：活化的Caspase-3进一步作用于细胞内的靶蛋白，如DNA损伤修复酶、线粒体复合物等，导致细胞功能丧失，最终导致细胞死亡。
三、半胱天冬酶3裂解的重要性半胱天冬酶3裂解在细胞凋亡过程中具有重要意义。
以下是几个方面的重要作用：1.调控细胞命运：Caspase-3的裂解可以决定细胞在凋亡信号作用下的存活或死亡，从而维持组织和器官的正常功能。
2.免疫调节：Caspase-3在免疫细胞凋亡过程中发挥作用，调控免疫应答，维持免疫平衡。
Caspase3_测定
Caspase3 测定caspase-3的检测方法：(1)免疫细胞化学检测caspase-3蛋白的表达，用悬浮的细胞；(2)western blot 理想结果：caspase-3有32ＫＤ的条带外，还出现了20ＫＤ和10ＫＤ大小的条带，表明caspase- 3被活化；(3)RT-PCR检测mRNA的表达，用凝胶成像分析系统处理，可以半定量。
Caspases可以在哺乳动物细胞内启动凋亡，caspase3比色蛋白酶试剂盒通过简单、方便的测定caspases活性的方法这种方法通过识别序列DEVD，这种方法基于用分光光度计测定从标记底物DEVD-pNA分开的发色团（pNA) 此时游离的pNA的发射光谱可用分光光度计或酶标仪或微量滴定板在400或405nm 检测,通过样本和背景的吸光度比较来测定caspase3活性的增加，进而推知Caspases的活性。
原理：在Caspase的底物多肽(如Caspase-3的底物为DEVD)上标记pNA (p-nitroanilide, 对硝基苯胺).当活化的Caspase剪切标记的底物多肽后, pNA被释放出来,此时游离的pNA的发射光谱可用分光光度计或酶标仪在400或405nm 检测,进而推知Caspases的活性.一．实验前准备：消毒的EP管、枪头、三蒸水、冰、水浴箱、实验组及对照组心肌组织、超速低温离心机、酶标仪、721分光光度计二．活性测定操作步骤（一）每组试剂组成Samples（lysis buffer）2×Reaction buffer DEVD-PNA 总Sample well （标本组）30ul 65ul 5ul 100ul Sample control（背景组）30ul（lysis buffer）70ul 0 100ulSample well（样本组）Sample control（背景组）3小时组N3 30ul样本30ul样本65ul Reaction buffer 70ul Reaction buffer5ul DEVD-PNAC3 30ul样本＋65ul Reaction buffer5ul IETD-PNA 30ul样本＋70ul Reaction buffer R3 30ul样＋65ul Reaction buffer5ul LEHD-PNA 30ul样本＋70ul Reaction buffer6小时组N6 30ul对照样本30ul样本65ul Reaction buffer 70ul Reaction buffer5ul DEVD-PNAC6 30ul样本＋65ul Reaction buffer5ul IETD-PNA 30ul样本＋70ul Reaction buffer R6 30ul样本＋65ul Reaction buffer5ul LEHD-PNA 30ul样本＋70ul Reaction buffer 共需2×Reaction buffer810 ul，配制2×830ul以防不够，用前加入8.3ul DTT活性表示为＝样本OD1－背景OD1（实验组）/样本OD2－背景OD2（对照组）（二）．操作步骤——酶标仪 1.取标记好的EP管（已消毒）2.取已冻好的冰块加点水，置插EP管的座于冰水中3. 放转子，打开高速离心机电源，时间、速度都在零位置先开机将至4摄氏度注意要配平套管A、B、C、D注意：1.速度、时间均为0时，才能开电源2.设置温度降温10min（夏天时间可以稍微长一些）3.开电源前先把转子放入4.定时－启动－慢慢调速10000转（显示为1000转）未配平－停机－重新配平－再开机5.停机灯亮，开盖（复位：速度、时间均为0)1．从低温冰箱中取出用锡铂纸包着的组织（已称重标记好的），取2-3块（30mg/块），放在EP管中，一直浸在冰水中2．锡铂纸剥去，组织直接置于EP管中，加裂解buffer（溶后4摄氏度保存）约700ul 冰上EP管中，用小弯剪将心脏组织剪碎，越碎越好组织、裂解buffer比例：1：10冰上操作3．开匀浆机取几块冰块于小烧杯中，接自来水成冰水液将EP管置于盛有冰水的小烧杯中，固定于匀浆机上先做对照组将转头插于组织液面下，打开电源，逐渐调大速度至max，上下搅动，直至浑浊，基本无小的组织块为止调小速度至零，关电源，取出转头，EP管放回冰水底座用蒸馏水冲洗转头，液冲至废烧杯中依次以同样方法将样本组进行匀浆注意：放空转，慢慢加速，别转别上下移动轴4．匀浆后置于离心机内先设时间10min “起动”；缓慢增大离心速度至1000×10r/min；缓慢减小离心速度，降至30×10r/min时，“停机”灯亮，即可取出注配平：套管A、B、C、D配平5．取Reaction buffer 6ml，用前加入60ul DTT（稀释100倍）吸取上清至小EP管依次加Reaction buffer、上清、底物至ELISA板，加底物时，每加一次换一个枪头（因为要混匀）注：底物每取完一次都要盖盖，避光；加完底物后，混匀。
碧波Caspase-3活性分光光度法检测试剂盒
For Research Use Only碧波Caspase-3活性分光光度法检测试剂盒Cat Number：Specification：Store at:4℃for one yearExpire date：MADE BY BIOBOX碧波Caspase-3活性分光光度法检测试剂盒一、产品简介Caspase 3 活性分光光度法检测试剂盒(Caspase 3 Activity Colorimetric Assay Kit)是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中Caspase 3酶活性或纯化的Caspase 3酶活性的试剂盒。
Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。
Caspase 3也称CPP32、Yama或apopain，有时被写作caspase-3或caspase3，属于caspase家族的CED-3亚家族(CED-3 subfamily)，是细胞凋亡过程中的一个关键酶。
Caspase 3是哺乳动物细胞中研究最多的一个caspase。
Caspase 3可以剪切procaspase 2、6、7和9，并可以直接特异性剪切许多caspase 底物，包括PARP (poly(ADP-ribose) polymerase) ，ICAD (Inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease)，gelsolin和fodrin等。
这些由caspase 3介导的蛋白剪切是细胞凋亡分子机制的重要组成部分。
另外，caspase 3在细胞核凋亡过程中也起到了关键作用，包括染色质固缩(chromatin condensention) ，DNA片段化(DNA fragmentation)等。
同时caspase 3对细胞起泡(Cell blebbing)也起到关键作用。
Caspase-3在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基和两个小亚基组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。
caspase-3
caspase-3Caspase家族Caspase属于半胱氨酸蛋白酶，相当于线虫中的ced-3，这些蛋白酶是引起细胞凋亡的关键酶，一旦被信号途径激活，能将细胞内的蛋白质降解，使细胞不可逆的走向死亡。
它们均有以下特点：①酶活性依赖于半胱氨酸残基的亲核性；②总是在天冬氨酸之后切断底物，所以命名为caspase（cysteine aspartate-specific protease），方便起见本文称之为凋亡酶；③都是由两大、两小亚基组成的异四聚体，大、小亚基由同一基因编码，前体被切割后产生两个活性亚基。
最早发现人类中与线虫ced-3同源的基因[1]是ICE，即：白介素-1 β转换酶（Interleukin-1 β-converting enzyme）基因，因该酶能将白介素前体切割为活性分子，故名。
通过cDNA杂交和查找基因组数据库，在人类细胞中已发现11个ICE同源物[2]，分为2个亚族（subgroup）：ICE亚族和CED-3家族（图15-6），前者参与炎症反应，后者参与细胞凋亡，又分为两类：一类为执行者（executioner 或effector），如caspase-3、6、7，它们可直接降解胞内的结构蛋白和功能蛋白，引起凋亡，但不能通过自催化（autocatalytic）或自剪接的方式激活；另一类为启动者（initiator），如caspase-8、9，受到信号后，能通过自剪接而激活，然后引起caspase级联反应，如caspase-8可依次激活caspase-3、6、7。
细胞中还具有caspase的抑制因子，称为IAPs（inhibitors of apoptosis proteins），属于一个庞大的蛋白家族。
它们能通过BIR结构域（baculovirus IAP repeats domain）[3]与caspase结合，抑制其活性，如XIAP。
非活性状态的pro-Caspase-3和活性状态的cleaved-caspase-3存在于细胞质中，当pro-caspase-3被剪切后剩下p17和p12 2个亚基，而产生活性。
Caspase-3活性荧光检测试剂盒
Caspase-3活性荧光检测试剂盒Caspase（天胱蛋白酶）家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中Caspase-3是凋亡信号通路中一个重要的蛋白酶，也是凋亡的关键执行分子。
Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，没有活性。
在凋亡的早期阶段，它被激活；活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆、胞核底物，最终导致细胞凋亡。
但处于晚期凋亡以及死亡的细胞中Caspase-3的活性明显下降，会影响Caspase3活性检测结果，建议选择早期和中期凋亡的细胞进行检测。
一.原理：在凋亡早期阶段，活化的Caspase-3能够特异地剪切D1E2V3D4-X底物，水解D4-X肽键。
根据这一特点，设计出荧光物质偶联的短肽Ac-DEVD-AMC。
在共价偶联时，发光基团AMC不能被激发荧光，短肽Ac-DEVD-AMC被水解后释放出发光基团AMC，游离的AMC才能被激发发射荧光。
根据释放的AMC荧光强度的大小，可以测定Caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度。
二.方法：（一）细胞总蛋白提取和定量:选用适当方法诱导细胞凋亡，同时设阴性对照组。
以下操作均在冰上或4°C 进行，所有液体需事先预冷：1..收获正常和凋亡细胞，用PBS洗细胞2次，将其转入EP管，离心并弃尽上清；2.将细胞重悬于加入Cocktail的细胞裂解液中，1X106细胞约加50l裂解液（视细胞多少而定加入裂解液的量），混匀后冰浴30分钟；（此步可加入细胞裂解液后超声裂解细胞）。
3.离心12000rpm/10分钟，收集上清，即为细胞总蛋白；4.取少量上清（1－2μl），用Bradford或BCA法进行蛋白质定量，检测前将蛋白用细胞裂解液（含Cocktail）稀释为2g/l。
（二）体外Caspase-3的活性检测：1.实验设空白对照孔和待测样品孔，均加入含荧光底物Ac-DEVD-AMC的Caspase-3反应缓冲液（反应缓冲液使用前加入Reagent 1和2）45l/孔；2.空白孔加5l/孔正常细胞裂解液（含Cocktail），待测样品孔加10g/孔（5l）细胞总蛋白，总量50l/孔。
Caspase-3分光光度法试剂盒
凯基Caspase-3分光光度法检测试剂盒（Caspase-3 Colorimetric Assay Kit）Cat number：KGA For Research Use OnlyStore at-20℃ for one yearExpire date：一、 试剂盒说明Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，与DNA断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。
Caspase-3在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基和两个小亚基组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。
Caspase-3分光光度法检测试剂盒就是将caspase-3序列特异性的多肽偶联至发色基团。
当该底物被Caspase-3剪切后， 发色基团即游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，考察caspase-3的活化程度。
本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织caspase-3检测。
二、 试剂盒组份组 份 Cat: KGA202（20 assays） Cat: KGA203（50 assays）Cat: KGA204（100 assays）储存条件Lysis Buffer 5.0 mL 10.0 mL 15.0 mL 4℃2×Reaction Buffer 1.0 mL 2. 5 mL 5.0 mL 4℃Caspase-3 Substrate100μL 250μL 500μL -200C，避光DTT 50 μL 100 μL 150 μL -200C三、试剂盒以外自备仪器和试剂低温高速离心机、酶标仪或分光光度计（100μL的比色皿）（λ=405nm或400nm）、微量移液器、玻璃匀浆器（组织样本）1.5m L Microtube、PBS、蛋白定量试剂（可选购凯基Bradford法蛋白含量检测试剂盒或BCA蛋白浓度测定试剂盒）及仪器四、使用注意事项1. Caspase-3 Substrate避光保存及使用。
Survivin和Caspase--3在外阴鳞状细胞癌中的表达及意义的开题报告
Survivin和Caspase--3在外阴鳞状细胞癌中的表达及意义的开题报告引言：外阴鳞状细胞癌（vulvar squamous cell carcinoma，VSCC）是一种常见的女性生殖系统恶性肿瘤，占所有外阴恶性肿瘤的90%以上。
目前已经证实许多基因的异常表达与VSCC的发生、发展有关，其中包括survivin和Caspase-3。
本文旨在探讨survivin和Caspase-3在VSCC中的表达及意义。
一、survivin的概述survivin是一种抗凋亡蛋白，是凋亡抑制基因家族中最新发现的成员之一。
它在肿瘤细胞增殖和凋亡方面具有双重作用，特别是在抑制凋亡方面作用突出。
survivin是一种低分子量的核质分布蛋白，广泛分布于许多组织和细胞中。
在肿瘤细胞中它的表达显著增强，而在正常组织中只有非常低的表达。
survivin通过抑制凋亡同时参与肿瘤细胞的增殖、转移和侵袭，因此受到了广泛的关注。
二、Caspase-3的概述Caspase-3是一种胰蛋白酶家族成员，是重要的凋亡实行酶。
通过破坏多种细胞蛋白，导致细胞死亡。
Caspase-3和Caspase-9是紧密相关的，是调节细胞凋亡机制的关键因子。
在正常的组织中，Caspase-3的表达很弱，在细胞凋亡时会被激活并表现出高度的酶活性。
Caspase-3的失活与多种恶性肿瘤的发生和发展有关。
三、survivin和Caspase-3在VSCC中的表达及意义目前的研究显示，VSCC组织中survivin的表达呈现出升高的趋势，特别是在晚期的VSCC患者中表达量更高。
而Caspase-3的表达量则明显降低。
这表明survivin的表达与VSCC的预后相关，而Caspase-3的下调可能是VSCC发生的一个关键因素。
因此，survivin和Caspase-3在VSCC的诊断和治疗中有着重要的临床意义，激活Caspase-3和抑制survivin表达可能成为VSCC治疗的一个新策略。
caspase-3
(一)caspase家族Caspases是近年来发现的一组存在于胞质溶胶中的结构上相关的半胱氨酸蛋白酶，它们的一个重要共同点是特异地断开天冬氨酸残基后的肽键。
Caspase一词是从Cysteine aspartic acid specific protease 的字头缩写衍生而来，就反映了这个特征，而这种高度的特异性，在蛋白酶中是很少见的。
由于这种特异性，使caspase能够高度选择性地切割某些蛋白质，这种切割只发生在少数（通常只有1个）位点上，主要是在结构域间的位点上，切割的结果或是活化某种蛋白，或使某种蛋白失活，但从不完全降解一种蛋白质。
Caspase的研究源于线虫（C. elegans）细胞程序化死亡的研究。
线虫在发育过程中，有131个细胞将进入程序化死亡；研究发现有11个基因与PCD 有关，其中ced3和ced4基因是决定细胞凋亡所必需的，ced9基因抑制PCD。
线虫细胞程序化死亡的研究促进了其他动物特别是哺乳类动物中细胞凋亡的研究。
人们发现哺乳类细胞中存在着Ced3的同源物ICE（interleukin-1b converting enzyme），它催化白介素-1b的活化，即从其前体上将IL-1b 切割下来。
在大鼠成纤维细胞中过量表达ICE和Ced3都会引起细胞凋亡，表明了ICE和Ced3在结构和功能上的相似性；然而敲除ICE基因的小鼠其表现型正常，并未发现细胞凋亡发生明显改变。
进一步的研究发现，另一个ICE成员，后来被称为apopain，CPP32或Yama的半胱氨酸蛋白酶，催化poly（ADP-ribose）Polymerase（PARP），即聚（ADP-核糖）聚合酶的裂解，结果导致细胞的凋亡，因而认为apopain执行着与线虫中的ced3相同的功能。
Apopain被称为是“死亡酶”，而PARP被认为是“死亡底物”。
Apopain/CPP32/Yama是在1995年由两个实验室分别同时报导，时间上只有两周之差。
Western blot检测caspase3 的步骤及原理
蛋白免疫印迹检测caspase-3的活化原理及步骤
【原理】
蛋白免疫印迹技术是以某种抗体作为探针，使之附着于固相支持物上的靶蛋白所呈现的抗原部位发生特异性反应，从而对复杂的混合物中的某些特定蛋白进行鉴别和定量。
基本过程：蛋白质样品先经SDS-PAGE分离，后通过电转移将凝胶上的蛋白条带转移至硝酸纤维素膜上，经封闭后再用抗待检蛋白的特异性抗体作为探针与之结合，经洗涤后，将滤膜与辣根过氧化物酶偶联的抗IgG二抗结合。
辣根过氧化物酶可催化鲁米诺氧化并发光，试剂中的增强剂能使发光增强1000倍。
当加入免疫印迹化学发光剂后，鲁米诺发生氧化发光，并发射波长为428nm的光，此光可经X光胶片感光记录下来。
以此确定抗原-抗体-抗抗体复合物在滤膜上的位置及丰度。
【步骤】。
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(一)caspase家族Caspases是近年来发现的一组存在于胞质溶胶中的结构上相关的半胱氨酸蛋白酶，它们的一个重要共同点是特异地断开天冬氨酸残基后的肽键。
Caspase一词是从Cysteine aspartic acid specific protease 的字头缩写衍生而来，就反映了这个特征，而这种高度的特异性，在蛋白酶中是很少见的。
由于这种特异性，使caspase能够高度选择性地切割某些蛋白质，这种切割只发生在少数（通常只有1个）位点上，主要是在结构域间的位点上，切割的结果或是活化某种蛋白，或使某种蛋白失活，但从不完全降解一种蛋白质。
Caspase的研究源于线虫（C. elegans）细胞程序化死亡的研究。
线虫在发育过程中，有131个细胞将进入程序化死亡；研究发现有11个基因与PCD 有关，其中ced3和ced4基因是决定细胞凋亡所必需的，ced9基因抑制PCD。
线虫细胞程序化死亡的研究促进了其他动物特别是哺乳类动物中细胞凋亡的研究。
人们发现哺乳类细胞中存在着Ced3的同源物ICE（interleukin-1b converting enzyme），它催化白介素-1b的活化，即从其前体上将IL-1b 切割下来。
在大鼠成纤维细胞中过量表达ICE和Ced3都会引起细胞凋亡，表明了ICE和Ced3在结构和功能上的相似性；然而敲除ICE基因的小鼠其表现型正常，并未发现细胞凋亡发生明显改变。
进一步的研究发现，另一个ICE成员，后来被称为apopain，CPP32或Yama的半胱氨酸蛋白酶，催化poly（ADP-ribose）Polymerase（PARP），即聚（ADP-核糖）聚合酶的裂解，结果导致细胞的凋亡，因而认为apopain执行着与线虫中的ced3相同的功能。
Apopain被称为是“死亡酶”，而PARP被认为是“死亡底物”。
Apopain/CPP32/Yama是在1995年由两个实验室分别同时报导，时间上只有两周之差。
Ced4的哺乳类同源物则迟迟未能发现，直到1997年，才被证明是Apaf-1（即一种细胞凋亡蛋白酶活化因子apoptosis protease activating factor）。
而Ced 9的哺乳类对应物则较早地被证明是BCL-2，这一问题将在以后的部分述及。
现已确定至少存在11种caspase：这些caspases中，caspase 1和caspase 11，以及可能还有caspase 4被认为不直接参与凋亡信号的转导，它们主要参与白介素前体的活化；而caspase 2，caspase 8，caspase 9和caspase 10参与细胞凋亡的起始；参与细胞凋亡执行的则是caspase 3，caspase 6和caspase 7，其中caspase 3和7具有相近的底物和抑制剂特异性，它们降解PARP，DFF-45（DNA fragmentation factor-45），导致DNA修复的抑制并启动DNA的降解。
而caspase-6的底物是lamin A和keratin 18，它们的降解导致核纤层和细胞骨架的崩解。
(二)caspase-31994年Fernandez-Alnemri等在BenBank表达序列标记(expression sequence tag, EST)数据库中找到一段ICE/CED-3活性中心同源的序列，用它合成探针后，筛选人Jurkat T淋巴细胞cDNA文库，从中克隆到一种新基因，因其编码分子量为32kD的半胱氨酸蛋白酶而称之为CPP32(cysteine protease protein, 32kD)。
随后，其它学者独立地将这一蛋白基因克隆出来，并分别命名为prICE、apopain(凋亡素)和Yama(印度传说中的死亡之神)。
1996年这种蛋白酶被命名为caspase-3。
现在一般认为c aspase-3是细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶，也也是CTL细胞杀伤机制的重要组成部分。
1. caspase-3的结构pro-caspase-3含有277个氨基酸残基，分子量约32kD，与ICE有30%同源性，与CED-3有35%同源，是caspase家族中与CED-3同源性最高的，不论从结构同源性还是从底物特异性来看都与CED-3很相似，所以有人认为它是CED-3在哺乳动物中的同源蛋白。
caspase-3的原结构域明显短于ICE只有28个氨基酸残基，但蛋白酶活性中心和与结合底物有关的保守的氨基酸均与ICE一致。
pro-caspase-3在活化过程中从Asp28~Ser29和Asp175~Ser176两处被剪切，形成P17(29~175)和P10(182~277)两个片段，相当于ICE的P20和P10，两种亚基再组成活性形式的caspase-3。
pro-caspase-3本身并没有催化活性，在活化时首先由颗粒酶B(GrzB)或caspase-10在D175剪切下小片段后它才被部分活化，随后则可进行下一步的自我催化。
在剪切原结构域时可能还有其它caspase如ICE 的参与。
2. caspase-3的活化和参与细胞凋亡caspase-3在细胞凋亡中起着不可替代的作用，caspase-3基因转染昆虫Sf9细胞后引起细胞凋亡，这个过程可以被BCL-2阻断；在发生凋亡的细胞提取液中去除caspase-3后，这些提取液就失去了诱导细胞凋亡的能力；再加入纯化的caspase-3它就又恢复了致凋亡的功能。
caspase-3可以被多种因素活化，在CTL 细胞的杀伤作用中，它既可被Fas/FasL途径活化，也可以通过颗粒酶B途径活化。
颗粒酶B是CTL细胞颗粒中的一种丝氨酸酯酶，是哺乳动物中caspase蛋白酶外唯一的在Asp后剪切的蛋白酶，它可以特异性剪切ICE家族蛋白酶催化亚单位C端的IxxD序列，并活化caspase 2、3、6、7、8、9、10。
ICE也可以被颗粒酶剪切，但剪切后并不被活化。
3. caspase-3引起细胞凋亡的机制caspase-3最主要的底物是多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP(poly(ADP-ribose) polymerase)，该酶与DNA修复、基因完整性监护有关。
在细胞凋亡启动时，116kD 的PARP在Asp216-Gly217之间被caspase-3剪切成31kD和85kD两个片段，使PARP 中与DNA结合的两个锌指结构与羧基端的催化区域分离，不能发挥正常功能。
结果使受PARP负调控影响的Ca2+/Mg2+依赖性核酸内切酶的活性增高，裂解核小体间的DNA，引起细胞凋亡。
这种裂解过程可被caspase-3的特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO所抑制，但不能被CrmA抑制。
caspase 3还可以剪切U1-70K、DNA-PK、PKC和PKC。
PKC和PKC都属于新型PKC(novel PKC, nPKC)，当被caspase 3剪切后，可以切除调节区域，而成为活性形式的PKC，另外实验还证明，过量表达PKC和PKC均可以引起细胞凋亡，说明它们都参与了细胞凋亡的诱导是CTL细胞杀伤机制的重要组成部分。
(三)caspase家族蛋白酶在细胞凋亡中的活化顺序表 caspase家族蛋白酶的识别序列及作用底物caspase 8MACH, FLICE, Mch5DEVD pro-caspase3,4,7,9,10 caspase 10Mch4YVADcaspase 11ICH3, FLICE2caspase蛋白酶在死亡受体介导的细胞凋亡中起着中心的作用。
Fas与配体结合而活化后，首先引起YVAD和zVAD敏感的ICE家族蛋白酶活化，然后再活化DEVD敏感的蛋白酶。
其中caspase-8是这一凋亡过程中首先被活化的ICE家族蛋白酶。
Caspase-8活化后，一方面它可以剪切活化caspase-3、caspase-7、caspase-4、caspase-9和caspase-10，通过这些蛋白酶剪切底物使凋亡得以进行；另一方面，它的活性可以被CrmA所抑制，籍此可作为细胞凋亡负调控因素作用的环节。
caspase-8的活化可以是Fas与其配体结合引起的FADD蛋白与caspase-8结合的结果，也可能是颗粒酶B、ICE等作用的结果。
所以其它能够引起细胞凋亡的因素也可以通过激活颗粒酶B或ICE来激活凋亡信号转导途径。
caspase-8活化后引起caspase-3和caspase-7活化，这两种酶都可以剪切PARP，引起DNA的降解。
另外caspase-3还可以活化caspase-6，后者可以降解层蛋白B。
此外，U1核糖体蛋白的70kD亚基(U1-70K)、DNA依赖的蛋白(DNA-PK)的催化亚基、微丝相关蛋白Gas-2、 -actin、PKC、视网膜母细胞瘤蛋白、DNA拓扑异构酶I和II等也都可能作为caspase-3和caspase-6的作用底物。
在哺乳动物细胞的凋亡过程中caspase 3、6、7是与CED-3最相似的蛋白酶，它们完成了大部分剪切底物的作用，发挥了CED-3在美丽线虫中发挥的作用。
目前认为，能够将细胞膜事件与细胞浆事件联系起来的蛋白质除了FADD/caspse-8通路外还有其它形式，新发现的胞浆蛋白CRADD可以将RIP与caspase-2联系起来。
另外，caspase-10和caspase-9都已被证明可以在凋亡信号传导过程中先于其它蛋白酶活化，并通过其酶活性将信号传给其它caspase蛋白酶。
其它ICE家族蛋白酶虽然也在不同程度上参与凋亡过程，但具体细节还不十分清楚，它们可能是在不同细胞和组织起作用，也有可能是作为后备机制辅助上述途径的进行。
1细胞凋亡1.1凋亡的概念与特点细胞凋亡是由基因控制的细胞主动死亡过程，所以又被称为程序性细胞死亡(programmed cell death，PCD)，其形态特征为染色质固缩边集、DNA片段化、胞质浓缩、胞膜皱缩并发泡形成凋亡小体，生化上表现为DNA梯形条带[1]。
1.2 凋亡的通路凋亡主要由两条死亡通路介导[2]：一条是死亡受体通路(外部通路)；另一条是线粒体通路，即内部通路，包括线粒体和内质网(ER)。
1.2.1 外部通路在外部通路[3]中，死亡配体如Fas-L和受体结合后，与Fas相关的死亡区域蛋白(FADD)相互反应，然后再与促凋亡蛋白酶8(procaspase-8)结合形成死亡诱导病生理学心力衰竭PBL综述细胞凋亡与心力衰竭2信号复合体(DISC)，此复合体的procaspase-8 形成二聚体而激活，随后分开并激活procaspase-3而启动凋亡发生。
1.2.2 内部通路内部通路[4]是由大量细胞外和细胞内刺激所转导，包括细胞因子、毒素、辐射、缺氧、氧化应急、缺血再灌注以及DNA损伤等。