百合胚的组织培养技术

百合胚的组织培养技术

摘要：百合杂交中胚败育现象严重，影响新品种培育，可采用胚的组织培养（即胚拯救）技术。以百合杂交胚作为外植体，通过初代、继代及成球培养，完成百合的育种和扩繁，经过炼苗及过渡移栽后，实现大田移栽，最终可有效的解决此问题。

关键词：百合；胚败育；组织培养

中图分类号：q949.71+8 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-10-0127-1

百合（lilium spp）属于百合科百合属，多年生鳞茎类球根花卉。我国百合种质资源丰富，许多百合具有相当优良的性状，如毛百合可以很好抗镰刀菌。但到目前为止，我国百合的育种业发展远远落后于国外，特别是具有优良性状的野生百合中用于杂交育种的品种相当有限。百合杂交育种中存在普遍的胚败育现象，通过组织培养技术进行胚拯救可以有效的解决此现象。

1 外植体选取与消毒

选取百合杂交授粉后种子的胚作为外植体。在百合杂交授粉后50～60天，取下膨大的子房，剥出子房中的种子，选取发育饱满的种子。并用稀释50倍的84消毒液将种子浸泡一夜进行初步消毒。初步清洗消毒后的种子需要再次灭菌处理。在无菌超净工作台上，将浸泡后的种子转移到实现准备好的无菌瓶中，用事先配置好的1%的生汞浸泡种子20分钟，进行进一步消毒。

浸泡后，回收用于消毒的生汞，取出种子并转移至新的无菌瓶中，

用事先准备好的无菌水清洗三遍后转移至无菌纸上待用。

2 胚培养阶段

将消毒好的种子放在无菌吸水纸上沥干水后，用无菌手术刀将种子切开，挑出中间细长的胚，放在胚培养基上。需注意的是胚要接种在培养基表面，不要没入培养基。

以每瓶培养基接种10个外植体为宜。初代培养进行的是萌发诱导，经过多次试验，初代培养基以ms+蔗糖30g+琼脂7g+1.5naa为最佳，ph 5.8-5.9之间，并将室内温度维持在25℃左右。

在12小时的日光照时间下，一周左右发生胚萌动，一个月前后抽叶成球并生根。这时候可以修剪根叶，并进入继代（增殖）的培养阶段了。

3 继代培养（增殖培养）阶段

百合的新球进行第一次继代培养时繁殖率一般较低，但2～3次之后，繁殖数可达到5倍左右。继代培养的培养基选用

ms+1.0ba+1.0naa，ph维持在5.8～5.9最佳，并继续予以每日12小时的光照时间。

试管苗经30天的培养后，便可以进行切割以扩大繁殖数量。当其数量达到一定值后，即可进行下一个成球培养阶段。

4 成球培养阶段

当继代苗扩繁到需要的数量之后，即可转移到养球培养基上培养。养球培养的培养基可直接在ms培养基的基础上加入蔗糖80g，7天左右可见白色根生成，经过20～30天后再转一次瓶，转瓶4～

5次后，即可进行炼苗驯化，并准备移栽。

5 炼苗及过渡移栽（驯化）

过渡移栽是整个组培中最为关键的一步，如果准备不充分，整个组培过程将前功尽弃，因此移栽前要准备充分。

用镊子将幼苗从培养基中取出，用流动的清水将根部洗净并晾干。由于幼苗植株脆弱，在操作过程中应当尽量避免对根系的损伤，以提高栽后成活率。将晾干后的种球和甲基托布津粉剂以及千分之五高锰酸钾消毒后的草炭充分混合搅拌均匀，用报纸包裹好后，放入4℃～5℃冷库内冷藏2个月。

冷藏后的百合幼苗最好能够先栽植在温室大棚内进行驯化，即将组培苗从无菌环境中移植入大田前，逐渐增强对外界抵抗力的一个适应过程。

未经消毒的苗床土壤很容易污染抵抗力较弱的组培苗，因此需要在炼苗前将土壤用甲醛进行醺闷消毒后，再用千分之5的多菌灵将苗床充分浇透灭菌，即可使用。

苗床宽1米左右，床底整平，上铺10公分的栽培基质，基质以珍珠岩：蛭石：泥炭=1：1：1为好。按行株距10cm×10cm规格进行种球栽植后，上覆10厘米栽培基质即可。

栽入苗床后，幼苗需要充足的水分浇灌，尤其是清洁的水源为佳。有条件的可以在苗床上方搭建小拱棚，以防止水分过度蒸发，减少幼苗的死亡率。

移栽当天可喷施1/2的ms营养液，2周后喷施叶面肥料进行营养

补充，促生新根。在驯化养护过程中，需每隔一周喷施一次1000倍液的多菌灵，连续喷施3～4次以防治病害。

2周后可喷施叶面肥，进行营养补充，以促进新根生长。移栽初期需特别注意保持苗床和空气湿度，采取间歇喷雾的方法，保持基质湿润，空气相对湿度70%以上，温度维持在15℃～25℃。百合苗栽下约半个月后长出新叶，30天左右便可进入大田移栽阶段。

6 大田移栽

大田移栽应选择温暖晴朗的天气，通常在小苗长至5cm以上时移栽成活率较高。移栽苗的后期管理工作与百合种球的大田种植一样操作即可。

参考文献

[1] 洪坡.百合花卉的综述研究[j].东北林业大学学报，2000，28（2）：68-70.

[2] 龙雅宜.几种主要切花的生产技术.第二讲百合[j].西南园艺，2001，29（3）：49-51.

[3] 宋建英，叶建仁.百合组培技术研究[j].南京林业大学学报（自然科学版），2006，30（4）：73-76.

作者简介：丁烨，本科，从事花卉生产教学与研究工作。