植物细胞的活体染色与死活鉴定
区别细胞死活的方法
区别细胞死活的方法
1、活体染色剂—亚甲基蓝溶液以前的教材中，活体染色剂亚甲基蓝溶液可用来鉴别所有有新陈代谢的细胞，利用交换吸附的原理，只有活细胞才能完成交换吸附。
2、胚的染色—红墨水细胞膜在细胞存活时有选择透过性，所以有机染料一般不会吸收，所以用它可以鉴定种子的死活，如玉米细胞是活的，胚没被染红，胚乳被染红。
3、显微镜观察—质壁分离和复原活的成熟的植物细胞有明显的质壁分离和复原现象。
显微镜观察—胞质环流通过细胞质流动实验的观察可以知道，只有活细胞才有胞质环流现象。
4、染色剂—台盼蓝人教版教材中，用台盼蓝染色剂，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜，所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。
5、酵母细胞—由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。
鉴定细胞死活的方法
鉴定细胞死活的方法
鉴定细胞死活的常见方法如下：
1.显微观察：使用倒置显微镜或荧光显微镜观察细胞形态和结构，判断细胞是否出现明显的形态变化或结构改变。
2.染色方法：使用各种染色剂（如乙酰红胶、甲基蓝、孔雀石绿等）对细胞进行染色，观察染色结果来判断细胞的颜色和形态，从而判断细胞的死活。
3.细胞膜渗透性检测：使用荧光染色剂（如PI、DAPI等）通过细胞膜进入细胞内，观察细胞是否发生荧光变化，判断细胞膜的完整性和死亡程度。
4.细胞内酶活性检测：使用特定的酶底物和荧光染料（如细胞色素c、卡尔比蓝等）对细胞内酶活性进行检测，观察是否发生荧光变化，判断细胞内的酶活性和细胞状态。
5.流式细胞术：使用流式细胞术对细胞进行筛选、分离和分析，通过测量细胞形态、大小、颜色等参数，来判断细胞的死亡程度和数量。
6.细胞增殖检测：通过检测细胞的DNA合成、核分裂或细胞周期等指标，来判断细胞生长和增殖的状态，进而推断细胞的死亡或存活。
值得注意的是，不同的细胞类型和实验目的可能需要使用不同的死活检测方法。
鉴定植物细胞的死活
鉴定植物细胞的死活【试验目的】学习用质壁分别法和用活体染色法鉴定细胞死活【试验原理】活细胞与死细胞在性质上有很多差别，特殊是通透性的变化最为明显。
活细胞的原生质具有选择透过性；而死细胞则为全透性。
选择透过性是质壁分别的先决条件。
因此能发生质壁分别的细胞就表示是活的，不能发生质壁分别的细胞则说明是死的。
死活细胞间不仅通透性不同，而 pH 值等状况也不同，它们对某些染料的反应明显不同。
某些染料能在活细胞的细胞液中积累，但不能染活的原生质；另一方面，这些染料可使死细胞的原生质染色，但不积累于液泡。
所以可依据某些染料活体染色的状况来鉴定细胞死活。
【试验材料和用具】洋葱及其它植物材料、酒精灯、显微镜、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、 1M 蔗糖、 0.01% 中性红溶液等。
【试验步骤】1 、用质壁分别的方法鉴定细胞的死活。
撕洋葱表皮细胞滴加 IM 蔗糖中，在显微镜下观看。
细胞很快发生质壁分别，这就是细胞活着的证据。
另把制取的同样制片，用冷冻、加热、干燥、酒精浸泡等方法将它们的细胞杀死，然后取代上述活材料，做质壁分别试验，结果看到已死的细胞不能发生质壁分别现象。
用尿素、硝酸钾、氯化钙溶液等来代替蔗糖，能快速鉴定细胞的死活。
2 、用活体染色的方法的鉴定细胞的死活。
取洋葱或其它材料，用镊子撕下表皮（如表皮不易撕下，也可在水中用锐利的刀片轻轻刮去多余部分），或用刀片做成切片若干，将表皮或切片浸入中性红溶液中，放置 5-10 分钟最出用清水浸洗后置于载玻片上，加盖玻片，在显微镜下观看。
活细胞一般在液泡内染成红色至紫色，原生质不染色，死细胞常呈橙红色，原生质和细胞核被染色。
撕破的细胞，只剩细胞壁时，呈淡红色或淡紫色。
为进一步鉴别细胞的死活，可把玻片上的水溶液吸去，滴一滴 1M 蔗糖溶液，便可观看到活细胞能发生质壁分别，死细胞及空细胞都有没有这种现象。
可用加热、冷冻或其它方法杀死植物组织，然后用上面所述方法进行处理，比较与活组织有何不同。
死活细胞的鉴定方法
活细胞的鉴定在生物学与医学上具有很重要的意义。
细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况,需要经常测定细胞的存活率;在肿瘤细胞的研究中,为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力,也需要测定肿瘤细胞的存活率。
在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用,例如为了检测某一男子的生育能力,测定精子细胞的存活力就是比较常用的办法。
死活细胞的鉴定方法有很多种,常用的有染色法与仪器分析法。
染色法就是常用的细胞死活鉴定方法,简便,易于操作。
但就是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活,实验结果很容易受操作者的主观因素的影响,存在一定的误差,所以,在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。
不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理,但无论采用何种办法,都就是利用了死活细胞在生理机能与性质上的差异。
常用的方法包括染色法与仪器分析法。
1 染色法染色法分化学染色法与荧光染色法,根据染色机理的不同,染料或使死细胞着色,或使活细胞着色。
死活细胞在生理机能与性质上的差异主要包括:死活细胞细胞膜通透性的差异:活细胞的细胞膜就是一种选择性膜,对细胞起保护与屏障作用,只允许物质选择性的通过;而细胞死亡之后,细胞膜受损,通透性增加。
常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就就是利用了这一性质。
台盼蓝,又称锥蓝,就是一种阴离子型染料,不能透过完整的细胞膜。
所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色,而活细胞不被着色。
甲基蓝有类似的染色机理。
植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。
死活细胞在代谢上的差异:就是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。
美蓝就是一种无毒染料,氧化型为蓝色,还原型为无色。
由于活细胞中新陈代谢的作用,使细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型,因此美蓝染色后活的酵母细胞无色;而死细胞或代谢缓慢的老细胞,则因它们的无还原能力或还原能力极弱,使美蓝处于氧化态,从而被染成蓝色或淡蓝色。
荧光素双醋酸酯(FDA)就是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体的生活力鉴定染料,其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异:FDA本身不产生荧光,也无极性,能自由渗透出入完整的细胞膜。
死活细胞鉴定
生物探究活动——鉴定植物细胞的死活【实验目的】学习用质壁分离法和用活体染色法鉴定细胞死活【实验原理】活细胞的原生质层具有选择透过性；而死细胞则为全透性。
选择透过性是质壁分离的先决条件。
因此能发生质壁分离的细胞就表示是活的，不能发生质壁分离的细胞则说明是死的。
死活细胞间不仅通透性不同，而pH值等情况也不同，它们对某些染料的反应明显不同。
某些染料能在活细胞的细胞液中积累，但不能染活的原生质；另一方面，这些染料可使死细胞的结构染色，但不积累于液泡。
所以可根据某些染料活体染色的情况来鉴定细胞死活。
【实验材料和用具】洋葱及其它植物材料、酒精灯、显微镜、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、1M蔗糖溶液、0.01%中性红溶液等。
【实验步骤】1、用质壁分离的方法鉴定细胞的死活。
撕洋葱表皮细胞滴加1M蔗糖溶液，在显微镜下观察。
细胞很快发生质壁分离，这就是细胞活着的证据。
另把制取的同样制片，用冷冻、加热、干燥、酒精浸泡等方法将它们的细胞杀死，然后取代上述活材料，做质壁分离实验，结果看到已死的细胞不能发生质壁分离现象。
用尿素、硝酸钾、氯化钙溶液等来代替蔗糖溶液，能快速鉴定细胞的死活。
2、用活体染色的方法的鉴定细胞的死活。
取洋葱或其它材料，用镊子撕下表皮（如表皮不易撕下，也可在水中用锋利的刀片轻轻刮去多余部分），或用刀片做成切片若干，将表皮或切片浸入中性红溶液中，放置5-10分钟最后用清水浸洗后置于载玻片上，加盖玻片，在显微镜下观察。
活细胞的液泡内染成红色至紫色，原生质不染色，死细胞常呈橙红色，原生质和细胞核被染色。
撕破的细胞，只剩细胞壁时，呈淡红色或淡紫色。
为进一步鉴别细胞的死活，可把玻片上的水溶液吸去，滴一滴1M蔗糖溶液，便可观察到活细胞能发生质壁分离，死细胞及只剩细胞壁的空细胞都有没有这种现象。
可用加热、冷冻或其它方法杀死植物组织，然后用上面所述方法进行处理，比较与活组织有何不同。
注：1台盼蓝，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。
死活细胞的鉴定方法
活细胞的鉴定在生物学和医学上具有很重要的意义。
细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况，需要经常测定细胞的存活率；在肿瘤细胞的研究中，为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力，也需要测定肿瘤细胞的存活率。
在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用，例如为了检测某一男子的生育能力，测定精子细胞的存活力是比较常用的办法。
死活细胞的鉴定方法有很多种，常用的有染色法和仪器分析法。
染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。
但是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活，实验结果很容易受操作者的主观因素的影响，存在一定的误差，所以, 在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。
不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理，但无论采用何种办法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。
常用的方法包括染色法和仪器分析法。
1染色法染色法分化学染色法和荧光染色法，根据染色机理的不同，染料或使死细胞着色，或使活细胞着色。
死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括：死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。
常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。
台盼蓝, 又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。
所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。
甲基蓝有类似的染色机理。
植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。
死活细胞在代谢上的差异：是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。
美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。
由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。
荧光素双醋酸酯（FDA是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体FDA本的生活力鉴定染料，其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异：身不产生荧光，也无极性，能自由渗透出入完整的细胞膜。
植物细胞的活体染色和死活的鉴定
植物细胞的活体染色和死活的鉴定一、目的练习以碱性染料中性红进行活体染色的方法。
通过活体染色及质壁分离，进行细胞死活的鉴定。
二、原理用某种对植物无害的染料稀溶液对活细胞进行染色称活体染色。
中性红是常用的活体染之一。
在中性或微碱性环境下，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡排泄，液泡一般呈酸性，进入液泡的中性红解离出大量阳离子而呈樱桃红色, 原生质及壁不染色。
死细胞的液泡消失因而不产生液泡着色现象，中性红阳离子却与带一定负电荷的原生质及细胞核结合而使生质及细胞核染色。
成熟植物的细胞是一个渗透系统，活的原生质具有选择透性，原生质内部包含着一个大液泡，具有一定的溶质势。
当细胞与外界低水势溶液接触时，细胞内的水分外渗，原生质随着液泡一起收缩而发生质壁分离；其后，当与清水（或高水势溶液）接触，细胞又因液泡的吸水膨胀而发生质壁分离复原。
死细胞因其原生质的选择透性已遭破坏，故与低水势溶液接触时不产生质壁分离。
三、材料、仪器设备及试剂1.材料：洋葱鳞茎；玉葱鳞茎。
2.仪器设备：刀片；镊子；吸水纸；酒精灯；载玻片；盖玻片；胶头滴管；显微镜。
3.试剂：0.8mol/L蔗糖液；0.03％中性红溶液。
四、实验步骤1.制片染色用尖头镊子撕取洋葱（玉葱）鳞片内表皮薄片，浸到0.03％中性红溶液中10～15min 进行染色。
2.观察2.1将染色后的植物材料放到载玻片上，盖好盖玻片，在盖玻片的一侧滴加无离子水（或pH略高于7.0的自来水），另一侧放吸水纸吸干，以洗净撕片外粘附的中性红溶液，然后在显微镜下观察，可以看出液泡染成樱桃红色；原生质层（细胞质和细胞）则无色透明紧贴细胞壁（在细胞的角隅上可以看见）。
2.2 在第1项观察后，接着从盖玻片的一边滴2滴0.8mol/L蔗糖液在盖玻片的另一边用吸水纸吸盖玻片下的水，将蔗糖液引入盖玻片下浸渍植物材料，并立即镜检，可以看到细胞很快发生质壁分离。
先是凹形质壁分离，而后变为凸形质壁分离。
2.3在第2项观察后，接着在盖玻片的一边加入2～3滴无离子水，在另一边用吸水纸吸去糖液，将无离子水引入盖玻片底，立即镜检可以看到带有液泡的原生质体重新吸水膨大，最后充满整个细胞腔，即质壁分离复原（复原缓慢进行时，细胞仍可正常存活；如果进行很快，则会因原生质机械破坏而死亡）。
死活细胞鉴别实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞培养的无菌操作技术。
2. 学习并掌握动物细胞原代培养和传代培养的实验方法。
3. 了解细胞生死状态鉴别的原理和方法。
4. 熟悉和掌握各种鉴别细胞生死状态方法的判定特征。
二、实验原理细胞培养是指在无菌条件下，将动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体内的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。
细胞生死状态的鉴别方法主要包括化学染色法和荧光染色法。
活细胞和死亡细胞在生理功能和性质上存在以下差异：1. 细胞膜通透性差异：活细胞的细胞膜具有选择性通透性，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，通透性增加。
2. 代谢差异：活细胞具有正常的代谢活动，而死亡细胞代谢活动停止。
基于以上差异，我们可以通过以下方法鉴别死活细胞：1. 台盼蓝染色法：活细胞不会被台盼蓝染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
2. 伊红染色法：活细胞不着色，而死细胞会被染成红色。
3. 荧光染色法：活细胞不发光，而死细胞会发出荧光。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：动物细胞培养液、培养皿、移液枪、吸管、显微镜、台盼蓝染液、伊红染液、荧光染液等。
2. 实验仪器：超净工作台、离心机、细胞培养箱、显微镜等。
四、实验步骤1. 取动物细胞培养液，加入适量的台盼蓝染液，混匀后静置5分钟。
2. 用吸管吸取染色的细胞悬液，滴加在载玻片上，盖上盖玻片。
3. 将载玻片置于显微镜下观察，活细胞不着色，而死细胞被染成蓝色。
4. 取动物细胞培养液，加入适量的伊红染液，混匀后静置5分钟。
5. 用吸管吸取染色的细胞悬液，滴加在载玻片上，盖上盖玻片。
6. 将载玻片置于显微镜下观察，活细胞不着色，而死细胞被染成红色。
7. 取动物细胞培养液，加入适量的荧光染液，混匀后静置5分钟。
8. 用吸管吸取染色的细胞悬液，滴加在载玻片上，盖上盖玻片。
9. 将载玻片置于荧光显微镜下观察，活细胞不发光，而死细胞发出荧光。
植物细胞的活体染色及死活鉴定注意事项
植物细胞的活体染色及死活鉴定注意事项以植物细胞的活体染色及死活鉴定注意事项为标题植物细胞是构成植物体的基本单位，了解植物细胞的活体染色及死活鉴定方法对于研究植物生理和组织学具有重要意义。
下面将介绍植物细胞的活体染色和死活鉴定的注意事项。
活体染色是指在细胞活体状态下，通过染色剂对细胞进行染色的方法。
活体染色可以帮助我们观察细胞的形态、结构和功能，了解细胞的生理活动。
常用的活体染色方法有鲜活染色、活体健壮染色和活体标记等。
鲜活染色是将鲜活的植物组织或细胞直接放入染色剂中进行染色。
在进行鲜活染色时，需要注意以下几点：1. 选择适当的染色剂：根据所需染色的细胞结构或功能，选择适合的染色剂。
常用的染色剂有甲苯胺蓝、伊红等。
2. 控制染色时间：染色时间过长或过短都会影响染色效果。
一般来说，染色时间应根据实验目的和细胞类型来确定，一般为几分钟至数小时。
3. 适当调整染色剂浓度：染色剂浓度过高会导致细胞过度染色，影响观察结果；染色剂浓度过低则会导致染色效果不明显。
4. 染色时避免光照：光照会使染色剂分解或褪色，因此在染色过程中需要避免光照。
活体健壮染色是将植物组织或细胞培养在含有染色剂的培养基中进行染色。
与鲜活染色相比，活体健壮染色可以更好地保持细胞的形态和生理状态，适用于长时间观察和研究细胞的生理过程。
活体标记是利用荧光标记物对细胞进行染色，可以直接观察标记物在细胞内的分布和运动情况。
常用的活体标记方法有荧光染料标记、基因工程标记等。
死活鉴定是判断细胞是否存活的方法，常用的死活鉴定方法有荧光染料鉴定、染色体形态鉴定等。
荧光染料鉴定是利用荧光染料对细胞进行染色，观察细胞内的荧光信号来判断细胞是否存活。
常用的荧光染料有荧光素苷酸酯（如细胞活力检测试剂盒中的FDA）和乙酰胆碱酯酶（AChE）染色等。
染色体形态鉴定是通过观察细胞核的形态和结构来判断细胞是否存活。
活的细胞的染色体呈现规则的形态和结构，而死亡的细胞的染色体则呈现不规则的形态和结构。
细胞死活的检测方法举隅
细胞死活的检测方法举隅作者：曹建平来源：《中学生理科应试》2021年第10期农业上，播种之前需要检测种子的活力;医学上，为了检测某一男子的生育能力，需要测定精子的活力;为了检验药物对肿瘤细胞的杀伤力，需要测定肿瘤细胞的存活率等等.由此可见，细胞死活的鉴定在生产生活和医学研究方面具有重要意义.本文简单介绍几种检测细胞死活的方法，并结合部分试题进行分析.一、检测方法举隅1.台盼蓝染色法台盼蓝是一种阴离子型染料，它只能透过受损细胞或死亡细胞的细胞膜（质膜），而正常的活细胞能加以排除，即死细胞着色，活细胞不着色.2.荧光染色法荧光素双醋酸酯（FDA）是一种常用的动植物细胞的生活力鉴定染料.FDA本身不产生荧光，也无极性，能自由出入细胞.当FDA进入活细胞，被细胞内的脂酶分解，产生有极性的、能发出荧光的荧光素，荧光素不能自由透过活细胞膜，积累在细胞内，使细胞产生绿色荧光.3.美蓝染色法美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色，主要用于检测酵母细胞死活.由于活细胞具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色;而死细胞或代谢缓慢的老细胞，被染成蓝色或淡蓝色.4.TTC染色法氯化三苯基四氮唑（TTC）常用于检测种子的生活力以及哺乳动物组织的缺血梗塞.TTC 溶于水中形成無色溶液，细胞中的脱氢酶可将TTC作为受氢体，使之还原成不溶于水的红色稳定的三苯基甲臢（TTF）. 如果脑组织细胞或胚种细胞死亡或生活力衰退，则不能染色或染色较浅.5.质壁分离法质壁分离法主要是检测成熟的植物细胞有无活性的方法.因为活细胞的原生质层具有选择透过性，所以活的成熟的植物细胞才可发生质壁分离.6.细胞质流动法细胞质流动需要消耗细胞代谢产生的能量，活细胞才进行细胞代谢，所以活细胞具有胞质环流现象.二、经典试题赏析例1 TTC法和红墨水染色法是检测种子活力常用方法，下列说法错误的是（）.A.在TTC法中，胚被染成红色的是具有活力的种子B.红墨水染色法中，胚不着色或着色很浅的是具有活力的种子C.这两种方法在原理上相似，均应用了活细胞的膜具有选择透透过性D.在TTC染色法中，被染成红色较深的种子细胞呼吸可能较强解析由于TTC能被细胞呼吸产生的＼[H＼]还原成红色不溶于水的物质，胚是种子的主要结构，故胚被染成红色的是具有活力的种子，A选项正确;红墨水中的色素不是活细胞需要的物质，如果胚被染色较深，说明胚细胞死亡;如果胚不着色或着色很浅，说明胚具有活力，B 选项正确;两种染色方法的原理不同，红墨水利用了细胞膜的选择透过性，根据“TTC染色法”可知，TTC染色的原理是TTC被细胞呼吸产生的＼[H＼]还原成不溶于水的红色，利用的是细胞的代谢产物，C选项错误;细胞呼吸越强，产生的＼[H＼]越多，TTC被还原产生的红色不溶于水的物质越多，D选项正确.参考答案：C例2 在进行植物体细胞杂交前，必须先获得有活力的原生质体.测定原生质体活力的常用方法之一是荧光素双醋酸酯（FDA）染色法，其基本原理是FDA本身无荧光，可自由通过细胞膜，经细胞内酯酶分解产生积累在细胞内并能发出绿色荧光的荧光素.相关叙述正确的是（）.A.FDA是一种大分子物质，通过胞吞进入细胞B.荧光素分子能以自由扩散的方式通过细胞膜C.实验中配制的FDA溶液是一种低渗溶液D.绿色荧光的强度与原生质体的活力呈正相关解析根据FDA可自由通过细胞膜，确定其不是大分子物质，A选项错误;根据荧光素积累在细胞内，确定其不能自由通过细胞膜，B选项错误;因为原生质体没有细胞壁，若为低渗溶液，则原生质体会吸水涨破，不能完成实验，C选项错误;原生质体的活力越强，酯酶活性越强，产生的荧光素越多，D选项正确.参考答案：D例3 下列有关不同实验中细胞死活的推测，正确的是（）.A.在高倍镜下观察黑藻细胞，发现细胞质缓慢流动，表明此时细胞是死细胞B.用台盼蓝染液处理酵母菌，细胞被染成蓝色，表明酵母细胞是活细胞C.健那绿染液染色后的口腔上皮细胞，线粒体为蓝绿色，表明细胞是活细胞D.将洋葱鳞片叶细胞置于质量分数为10%的蔗糖溶液中未发生质壁分离，则确定此细胞是死细胞解析活细胞的细胞质不停地流动，黑藻的细胞质流动，表明细胞是活细胞，流动缓慢可能是温度太低造成，A选项错误;活细胞的细胞膜能控制物质进出，使台盼蓝不能透过细胞膜，酵母细胞被染成蓝色，说明细胞死亡，B选项错误;健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料，可以将线粒体染成蓝绿色，C选项正确;将洋葱鳞片叶细胞置于质量分数为10%的蔗糖溶液中，细胞不能发生质壁分离，原因可能是该蔗糖溶液浓度低于细胞液浓度或细胞是死细胞，D选项错误.参考答案：C（收稿日期：2021-07-28）。
植物生理学实验指导
植物生理学实验指导目录植物材料的采集、处理与保存..................................... 实验一拟南芥种植和形态观察................................... 实验二植物细胞的活体染色和死活的鉴定......................... 实验三植物原生质体的分离和融合............................... 实验四植物叶面积测定原理、方法和步骤......................... 实验五植物细胞渗透势的测定（质壁分离法）..................... 实验六植物组织水势的测定（小液流法）......................... 实验七植物根系活力的测定（TTC法）............................ 实验八根系总吸收面积和活跃吸收面积的测定..................... 实验九离体叶绿体的制备以及完整度的测定....................... 实验十叶绿体色素的提取、分离和理化性质....................... 实验十一植物叶片光合速率的测定（改良半叶法）................. 实验十二氧电极法测定植物组织的光合与呼吸速率................. 实验十三小篮子法（广口瓶法）测定植物的呼吸速率. (37)实验十四谷物淀粉含量的测定（旋光法）......................... 实验十五类似生长素对种子萌发的影响........................... 实验十六赤霉素对α-淀粉酶的诱导形成........ 错误！未指定书签。
实验十七植物种子生活力快速测定............................... 实验十八植物光周期现象的观察................................. 实验十九植物抗逆性的测定（电导仪法）....... 错误！未指定书签。
死活染色实验报告
一、实验目的1. 了解死活细胞在生理技能和性质上的差异。
2. 掌握细胞生死状态的鉴别方法，包括化学染色法和荧光染色法。
3. 学习使用台盼蓝、伊红、苯胺黑、赤藓红、甲基蓝、碘化丙啶或溴化乙啶等染料鉴别细胞生死状态。
4. 学习使用植物质壁分离的性质鉴定植物细胞的生死状态。
5. 学习使用荧光素二乙酸酯、荧光素二丙酸酯、荧光素二丁酸酯或荧光素二苯甲酰酯等酯化的荧光素鉴别细胞生死状态。
二、实验原理细胞生死状态的鉴别主要基于细胞膜通透性、代谢等方面的差异。
活细胞的细胞膜具有选择性透过性，对物质进行选择性吸收；而死亡细胞的细胞膜通透性增加，物质可以自由通过。
此外，活细胞内的酶具有较强的活性和还原能力，而死亡细胞的酶活性降低。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 活细胞：人口腔上皮细胞、酵母细胞、植物细胞等。
- 死细胞：经固定、处理后的细胞。
2. 试剂：- 台盼蓝、伊红、苯胺黑、赤藓红、甲基蓝、碘化丙啶或溴化乙啶等染料。
- 荧光素二乙酸酯、荧光素二丙酸酯、荧光素二丁酸酯或荧光素二苯甲酰酯等酯化的荧光素。
- 植物质壁分离剂。
- 美蓝染料。
3. 仪器：- 显微镜。
- 吸水纸。
- 恒温水浴锅。
- 离心机。
四、实验方法1. 死活细胞染色法：（1）取适量活细胞和死细胞，分别加入适量的染料，混匀。
（2）将混合液放入恒温水浴锅中，恒温染色10-15分钟。
（3）用吸水纸吸去多余染液，观察细胞染色情况。
2. 植物质壁分离法：（1）取植物细胞，用植物质壁分离剂处理。
（2）观察细胞质壁分离情况，判断细胞生死状态。
3. 美蓝染色法：（1）取适量酵母细胞，加入适量的美蓝染液。
（2）混匀，恒温染色10-15分钟。
（3）用吸水纸吸去多余染液，观察细胞染色情况。
五、实验结果与分析1. 死活细胞染色法：（1）台盼蓝染色：活细胞不被染色，死细胞被染色。
（2）伊红染色：活细胞不被染色，死细胞被染色。
（3）苯胺黑染色：活细胞不被染色，死细胞被染色。
（4）赤藓红染色：活细胞不被染色，死细胞被染色。
死活细胞的鉴定方法
死活细胞的鉴定方法鉴定死活细胞有多种方法，以下是几种常见的死活细胞鉴定方法：1.染色法染色法是一种常用的死活细胞鉴定方法。
它通过染色剂对细胞膜通透性的不同来区分活细胞和死细胞。
常用的染色剂有台盼蓝、中性红、碘化丙啶等。
台盼蓝可以透过死亡细胞的细胞膜，使死细胞着色，而活细胞则不能。
中性红和碘化丙啶则只能透过活细胞膜，使活细胞着色。
通过这种方法，可以清楚地看到细胞中的死活细胞分布情况。
2.荧光染色法荧光染色法是一种灵敏度更高的死活细胞鉴定方法。
它利用荧光染料对细胞进行染色，在荧光显微镜下观察细胞的荧光情况。
活细胞能够吸收荧光染料，发出荧光，而死细胞则不能。
这种方法可以更准确地检测出细胞中的死活细胞比例。
3.呼吸测试法呼吸测试法是一种直接检测细胞活性的方法。
它通过测量细胞在氧气消耗和二氧化碳释放方面的变化来评估细胞的活性。
活细胞在代谢过程中需要消耗氧气并释放二氧化碳，而死细胞则不具备这种代谢活性。
通过测量氧气和二氧化碳的浓度变化，可以判断细胞的死活情况。
4.膜电位法膜电位法是一种通过检测细胞膜电位变化来区分活细胞和死细胞的方法。
活细胞的细胞膜内外的电位差通常为负值，而死细胞的电位差则为正值。
利用这种电位差的变化，可以判断细胞的死活情况。
5.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）活性检测法G6PD活性检测法是一种通过检测G6PD酶的活性来区分活细胞和死细胞的方法。
G6PD是红细胞中的一种酶，当红细胞死亡时，该酶的活性会迅速下降。
通过检测G6PD的活性，可以判断细胞的死活情况。
6.线粒体膜电位检测法线粒体膜电位检测法是一种通过检测线粒体膜电位的变化来区分活细胞和死细胞的方法。
线粒体是细胞中负责能量代谢的重要细胞器，活细胞的线粒体膜电位通常为负值，而死细胞的线粒体膜电位则为正值。
通过检测线粒体膜电位的变化，可以判断细胞的死活情况。
植物细胞的活体染色与死活鉴定
植物细胞的活体染色及死活鉴定
一、实验原理
活体染色是利用某种对植物无害的染料溶液对活细胞进行染色的技术。
中性红是常用的活体染料之一，它是一种弱碱性pH指示剂，变色范围在pH6.4~8.0之间（由红变黄）。
在酸性条件下中性红解离度很强，带色的阳离子呈樱桃红色，在pH7以上，它不解离而以分子态溶于水呈橙黄色的溶液。
二、实验仪器与试剂
仪器与用具：显微镜；载玻片；盖玻片；单面刀片；尖头镊子；酒精灯；火柴；吸水纸适量。
试剂：0.03%中性红溶液；1mol/L硝酸钾溶液
三、实验方法
1.切下一片较幼嫩的洋葱鳞片，用单面刀片在鳞片内侧割划成0.5cm2左右的小块，用尖头镊子将内表皮小块轻轻撕下，将制好的洋葱鳞茎内表皮放置于滴加蒸馏水的载玻片上，小心地将制片平展到载玻片上，加盖玻片，多余液体用吸水纸吸干，在显微镜下观察（注意调节光线强度）
2.另取一小块表皮，滴加0.03%的中性红溶液，染色5~10min；在蒸馏水中稍加冲洗，在载玻片上滴一滴蒸馏水，小心地将制片平展到载玻片上，加盖玻片，多余液体用吸水纸吸干，
3.在显微镜下观察。
将步骤2中的活体染色制片取出几片放入pH略高于7.0的自来水中浸泡10~15min，再置于载玻片上镜检（为了确证中性红染色部位，可将上述洋葱内表皮染片浸入1mol/L的硝酸钾4.溶液中浸泡10min左右，然后取出观察。
）
将步骤3中的活体制片放在酒精灯火焰上微微加热，以杀死细胞，再在显微镜下观察
四、实验结果与分析
1.可以看清细胞的轮廓。
2.细胞结构清晰，可以看清细胞核。
3.细胞呈橙色，细胞质与细胞壁分离，细胞结构清晰。
4.细胞破裂，细胞边界不存在，细胞呈橙色。
死、活细胞鉴别实验原理及步骤
实验十四死、活细胞鉴别实验目的：掌握鉴定死、活细胞的常用方法及原理。
观察死、活细胞在形态及染色方面的主要差异。
下面介绍两种比较常用的方法方法（一）染色排除法实验原理和方法：组织培养中检查细胞死活最常用的方法是染色排除法，即以死活细胞对色素的不同吸附能力来鉴别，这种方法简单，适用。
但严格地说，它只能判断细胞的代谢死亡，不反应细胞能否增殖。
由于未经固定、染色，所以不能看到死、活细胞的形态差别，样品也不能保留。
本实验介绍动物细胞染色排除法常用的染料及染色方法：第一类死细胞着色：使死细胞着色的大多是酸性染料，它们不容易穿透活细胞的质膜进入细胞内，却能渗进死亡的细胞，使之着色。
台盼兰（Trypan Blue）：将台盼兰溶于被检测细胞所需的生理盐水中，配成0。
5—1。
0%溶液，调PH7。
0—7。
2，每毫升细胞悬液约加0。
1毫升染液，混合后约2分钟即可镜检。
死细胞被染成兰色。
因台盼兰有轻度的毒性，染色时间不宜太长。
染色时间15分钟以上，活细胞也会因为受损而着色。
台盼兰染液不宜久存，陈旧者有毒性。
苯胺黑（Aniline black）：0。
05%苯胺黑Hanks溶液以1：10量与细胞悬液混合1-2分钟后，镜检，死细胞着黑色。
此染料毒性很小。
赤显红B（Erythrosin B）：细胞先用Hanks液或PBS溶液洗，以除尽培养基中的或细胞周围的血清，取适量细胞与0。
02%的赤显红B混合，两小时之内镜检，死细胞着红色。
第二类：活细胞着色法0。
1%的结晶紫生理盐水溶液与细胞悬液1：2混合，立即镜检，活细胞染成兰色。
此外使活细胞着色的染料还有亚甲基兰（Methylene blue）、甲苯胺兰（Toluidine blue）。
方法（二）吖啶橙法[一]实验原理：细胞经甲醇-乙醚固定后，用吖啶橙染色，能鉴别出固定之前细胞的死、活状态。
吖啶橙（Acridine Orange，AO）是一种与DNA和RNA都能结合的荧光染料，在兰光或紫外光激发下，原来的活细胞经固定，染色后细胞呈绿色，核仁和散布在细胞质中的RNA呈桔红色，细胞质其余部分为淡红褐色。
死菌、活菌如何鉴定
死菌、活菌如何鉴定若要区分细菌的死活，可采用活体染色法。
所谓的活体染色就是用对微生物无毒性的染料，如美蓝、刚果红、中性红等，配成一定浓度，再与一定量的菌液混合，经一段时间后，死菌和活菌会呈现出不同的颜色，这样便可在显微镜下区分开来。
美蓝是常用的活体染色染料，当它处于氧化状态是呈现出蓝色，而还原态时为无色。
用它进行活体染色时，由于活细胞代谢过程中的脱氢作用，美蓝接受H后就由氧化转变为还原态，故表现出无色；而衰老的细胞由于代谢缓慢或停止，不能使美蓝还原，所以呈蓝色或者淡蓝色。
美蓝染色液的配方：美蓝0.025g,NaCl0.9g,KCl 0.042g,CaCl2·6H2O 0.048g,NaHCO3 0. 02g,葡萄糖1g，蒸馏水100ml----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------通常情况下活菌染色深，死菌染色浅--------------------------------------------------------------------------------dead/live stain kit 荧光染料蓝光激发的绿光表示活菌，绿光激发红色为死菌--------------------------------------------------------------------------------一般用美蓝与碱性品红的复合染料进行死菌的区分。
染色后，活菌染为蓝色，死菌和培养基偏红，在显微镜下很好区分。
碱性品红用乙醇加热溶解，过滤，按1：10左右加入，可以根据情况适当调整到可以区分活菌和培养基即可。
这是抗菌素发酵中检查是否染菌的常用方法。
死活细胞的鉴定方法
死活细胞的鉴定方法活细胞的鉴定在生物学和医学上具有很重要的意义。
细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况，需要经常测定细胞的存活率；在肿瘤细胞的研究中，为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力，也需要测定肿瘤细胞的存活率。
在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用，例如为了检测某一男子的生育能力，测定精子细胞的存活力是比较常用的办法。
死活细胞的鉴定方法有很多种，常用的有染色法和仪器分析法。
染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。
但是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活，实验结果很容易受操作者的主观因素的影响，存在一定的误差，所以, 在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。
不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理，但无论采用何种办法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。
常用的方法包括染色法和仪器分析法。
1染色法染色法分化学染色法和荧光染色法，根据染色机理的不同，染料或使死细胞着色，或使活细胞着色。
死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括：死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。
常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。
台盼蓝, 又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。
所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。
甲基蓝有类似的染色机理。
植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。
死活细胞在代谢上的差异：是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。
美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。
由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。
荧光素双醋酸酯（FDA是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体FDA本的生活力鉴定染料，其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异：身不产生荧光，也无极性，能自由渗透出入完整的细胞膜。
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姓名班级齐鲁医学班学号
科目普通生物学实验题目植物细胞的活体染色与死活鉴定
植物细胞的活体染色与死活鉴定
实验目的：
1.了解活体染色的概念和原理
2.学会鉴别细胞的死活
实验原理：
●活体染色是利用某种对植物无害的染料溶液对活细胞进行染色的技术。
●中性红是常用的活体染料之一，它是一种弱碱性pH指示剂，变色范围在pH6.4~8.0之间（由红
变黄）。
在酸性条件下中性红解离度很强，带色的阳离子呈樱桃红色，在pH7以上，它不解离而以分子态溶于水呈橙黄色的溶液。
●染色：即使是显微镜有足够的分辨率和合适的放大倍数，未经染色的组织切片或涂片常常不能直
接在光镜下观察，其原因主要是标本各部分结构对光的折射率没有显著的差别。
染色则是通过改变标本各部分之间对光的折射率，使其可以在光镜下观察。
●在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌，由于液泡在一般情况
下呈酸性反应。
因此，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色，在这种情况下，原生质和细胞壁一般不着色；死细胞由于原生质变性凝固，胞液不能维持在液泡内。
因此，用中性红染色后，不产生液泡着色现象。
相反，中性红的阳离子，却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核染色。
姓名班级齐鲁医学班学号
科目普通生物学实验题目植物细胞的活体染色与死活鉴定
仪器与用具：
显微镜；载玻片；盖玻片；单面刀片；尖头镊子；酒精灯；火柴；吸水纸适量。
试剂：
0.03%中性红溶液；1mol/L硝酸钾溶液
实验步骤：
1.切下一片较幼嫩的洋葱鳞片，用单面刀片在鳞片内侧割划成0.5cm2左右的小块，用尖头镊子将
内表皮小块轻轻撕下，将制好的洋葱鳞茎内表皮放置于滴加蒸馏水的载玻片上，小心地将制片平展到载玻片上，加盖玻片，多余液体用吸水纸吸干，在显微镜下观察（注意调节光线强度）
2.另取一小块表皮，滴加0.03%的中性红溶液，染色5~10min；在蒸馏水中稍加冲洗，在载玻片
上滴一滴蒸馏水，小心地将制片平展到载玻片上，加盖玻片，多余液体用吸水纸吸干，在显微镜下观察。
3.将步骤2中的活体染色制片取出几片放入pH略高于7.0的自来水中浸泡10~15min，再置于载
玻片上镜检（为了确证中性红染色部位，可将上述洋葱内表皮染片浸入1mol/L的硝酸钾溶液中浸泡10min左右，然后取出观察。
）
4.将步骤3中的活体制片放在酒精灯火焰上微微加热，以杀死细胞，再在显微镜下观察
实验结果：
第一步的观察结果：细胞呈无色透明状态，液泡充盈整个细胞，细胞彼此排列紧密，可见细胞壁。
姓名班级齐鲁医学班学号
科目普通生物学实验题目植物细胞的活体染色与死活鉴定
第二步的观察结果：可以观察到细胞的液泡被染成淡红色。
（因为细胞壁有大量的阴离子集中，而中性红与电离出阳离子则显示出粉红色。
此时的液泡颜色相较于第三步比较浅。
因为中性红的离子运输进入到细胞内比较慢）
第三步的观察结果：在加入硝酸钾以后，液泡失水皱缩，可观察到液泡的红色加深。
第四部的观察结果：细胞的液泡明显变小甚至不存在，在显微镜下可看到液泡膜碎片，颜色变浅。