植物细胞的活体染色与死活鉴定

姓名班级齐鲁医学班学号

科目普通生物学实验题目植物细胞的活体染色与死活鉴定

植物细胞的活体染色与死活鉴定

实验目的：

1.了解活体染色的概念和原理

2.学会鉴别细胞的死活

实验原理：

●活体染色是利用某种对植物无害的染料溶液对活细胞进行染色的技术。

●中性红是常用的活体染料之一，它是一种弱碱性pH指示剂，变色范围在pH6.4~8.0之间（由红

变黄）。在酸性条件下中性红解离度很强，带色的阳离子呈樱桃红色，在pH7以上，它不解离而以分子态溶于水呈橙黄色的溶液。

●染色：即使是显微镜有足够的分辨率和合适的放大倍数，未经染色的组织切片或涂片常常不能直

接在光镜下观察，其原因主要是标本各部分结构对光的折射率没有显著的差别。染色则是通过改变标本各部分之间对光的折射率，使其可以在光镜下观察。

●在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌，由于液泡在一般情况

下呈酸性反应。因此，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色，在这种情况下，原生质和细胞壁一般不着色；死细胞由于原生质变性凝固，胞液不能维持在液泡内。因此，用中性红染色后，不产生液泡着色现象。相反，中性红的阳离子，却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核染色。

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仪器与用具：

显微镜；载玻片；盖玻片；单面刀片；尖头镊子；酒精灯；火柴；吸水纸适量。

试剂：

0.03%中性红溶液；1mol/L硝酸钾溶液

实验步骤：

1.切下一片较幼嫩的洋葱鳞片，用单面刀片在鳞片内侧割划成0.5cm2左右的小块，用尖头镊子将

内表皮小块轻轻撕下，将制好的洋葱鳞茎内表皮放置于滴加蒸馏水的载玻片上，小心地将制片平展到载玻片上，加盖玻片，多余液体用吸水纸吸干，在显微镜下观察（注意调节光线强度）

2.另取一小块表皮，滴加0.03%的中性红溶液，染色5~10min；在蒸馏水中稍加冲洗，在载玻片

上滴一滴蒸馏水，小心地将制片平展到载玻片上，加盖玻片，多余液体用吸水纸吸干，在显微镜下观察。

3.将步骤2中的活体染色制片取出几片放入pH略高于7.0的自来水中浸泡10~15min，再置于载

玻片上镜检（为了确证中性红染色部位，可将上述洋葱内表皮染片浸入1mol/L的硝酸钾溶液中浸泡10min左右，然后取出观察。）

4.将步骤3中的活体制片放在酒精灯火焰上微微加热，以杀死细胞，再在显微镜下观察

实验结果：

第一步的观察结果：细胞呈无色透明状态，液泡充盈整个细胞，细胞彼此排列紧密，可见细胞壁。

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第二步的观察结果：可以观察到细胞的液泡被染成淡红色。（因为细胞壁有大量的阴离子集中，而中性红与电离出阳离子则显示出粉红色。此时的液泡颜色相较于第三步比较浅。因为中性红的离子运输进入到细胞内比较慢）

第三步的观察结果：在加入硝酸钾以后，液泡失水皱缩，可观察到液泡的红色加深。

第四部的观察结果：细胞的液泡明显变小甚至不存在，在显微镜下可看到液泡膜碎片，颜色变浅。