冰冻切片注意事项
医院冰冻切片技术操作规程
冰冻切片技术操作规程
1.接通电源开关，打开箱内照明灯，设定或调整切片温度（-25℃左右）。
将切片刀装入持刀架上固定。
2.将待切样品以OCT包埋在持物托上置于切片机冷冻台冷冻，打开速冻开关。
待切片机箱内温度达到设定温度及样品冻硬后，将样品连同持物托一同置于持物架上，固定。
3.右手转动旋转轮，左手间断按动样品前进开关，使样品徐徐向前推进，直至组织平面完全修出平整。
4.调整好防卷板至刀刃平行，定好欲取切片的厚度标尺（6-10微米），放下防卷板，速度均匀的转动切片机旋转轮，切片。
5.打开防卷板，用玻片吸附切片，切片会自然附贴于玻片上。
以95%乙醇固定1-3分钟即可进行染色。
6.染色完毕后，将持物托上的剩余组织放入有编号的包埋盒内并固定。
将持物托用水洗涤干清、擦干备用。
7.将切片机中的碎组织彻底清理干净，用棉花蘸无水酒精轻轻擦拭防卷板及刀架。
8.关闭箱内照明灯，将切片机温度调至保持温度（-6℃）。
冷冻切片方法及注意事项
冷冻切片方法及注意事项一、实验前准备清理实验台及仪器。
开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度（- 15~-20 ℃*）。
准备好处理好的载玻片、刀片、胶水以及药品。
二、取材解剖之后迅速取出所需的新鲜组织，用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材（24×24×2mm*）,以防形成冰晶造成切片中形成形状不一的空泡,使细胞内结构移位。
（注：取材中目的标本既要明确也要确保其结构的完整性，应避免不必要的脂肪及坏死组织附着;要尽量剔除毛发、硬骨或钙化物;保乳手术切缘由于脂肪组织较多,取材厚度最好不要超过3mm，厚者冰冻费时，大者难以切完整。
甲状腺及淋巴结组织要带全组织被膜并除去多余的脂肪组织。
）三、冷冻切片1、取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片（1~3分种）。
2、将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。
3、调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10μm间。
4、调好防卷板。
制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。
切片时，以切出完整、平滑的切片为准。
切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向稍微用力轻轻一带,可避免组织摊片过程中皱折,保证组织结构的完整及切片的美观。
注：①包埋剂的选用：包埋剂是对冷冻切片质量一重要影响因素，包埋剂用量要适宜，过多或过少都会影响标本冷冻质量。
常用的有三种包埋剂OCT剂、B超藕合剂以及普通胶水。
B超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,普通胶水或OCT剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。
（OCT包埋剂骤冷时固化，其冷冻速度和软硬韧度与组织相近，其还具有水溶性，不影响染色等优点。
）②组织块过小：先将少量胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,约30秒钟左右待胶凝固时将小组织放上,组织周围再加一些胶,再次置于冷冻机中冷冻,这样组织被垫高,就能快速切出高质量的切片。
冷冻切片方法及注意事项
⑥伊红染色10－20秒。
⑦脱水，透明，中性树胶封固。
注：
固定液的选择
A中性xx溶液B95%乙醇
CAF(40%福尔马林10ml,95%乙醇90ml)
DCarnoy(纯乙醇60ml,氯仿30ml,冰醋酸10ml)
甲醛、乙醇、冰醋酸、苦味酸对组织均有固定作用。甲醛对组织的穿透力强,对组织无明显收缩和膨胀作用,但它不能抵消因冷冻所引起的细胞内液体的膨胀,所以甲醛固定的组织结构尚完好,核有肿胀、模糊。乙醇对组织有脱水收缩作用,并可沉淀白蛋白、球蛋白、核蛋白,但后者所产生沉淀可溶解于水,使核着色不良。冰醋酸对组织有明显的膨胀作用,加重了冷冻所引起的细胞内液体的膨胀,所以用含有冰醋酸的混合固定液(如D液、E液、F液)固定的组织,核肿胀明显。F液中虽然苦味酸对组织有明显的收缩作用,但有冰醋酸的存在仍然防止不了细胞的肿胀。本实验提示混合固定液对冷冻切片HE染色的效果优于单纯固定液,但最好使用不含有冰醋酸的混合液。因此,推荐冷冻切片做HE染色时首选AF固定液。
注：
①包埋剂的选用：
包埋剂是对冷冻切片质量一重要影响因素，包埋剂用量要适宜，过多或过少都会影响标本冷冻质量。常用的有三种包埋剂OCT剂、B超藕合剂以及普通胶水。B超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,普通胶水或OCT剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。（OCT包埋剂骤冷时固化，其冷冻速度和软硬韧度与组织相近，其还具有水溶性，不影响染色等优点。）
分色后的水洗为自来水快洗，目的是终止分色液（
0.5%盐酸乙醇）对组织细胞的分色作用。过度分色将致使染色强度减弱，影响苏木精与伊红颜色的匹配。
蓝化后的水洗为自来水冲洗，洗掉组织中多余的碱性成分（淡氨水），为伊红染色提供适宜的染色环境。
冰冻切片制作方法与注意事项_共5页
冰冻切片制作方法与注意事项一、固定：固定即借助化学试剂是组织和细胞中的有机和无机成分凝固或沉淀，停止发生死后组织变化，尽量保持其活体状态的过程。
固定的方法有浸泡固定法，注射、灌注固定法，蒸汽固定法，本实验用的是注射、关注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难流入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定，就可采用灌注或灌流固定法。
固定时将固定液直接注入动物的血管，经血管分支到达整个组织或全身，从二十只得到充分固定。
固定液分为单纯固定液和混合固定液。
单纯固定液有甲醛、乙醇、氯化汞、醋酸、苦味酸等，混合固定液包括Bouin液、Zenker液、Carnoy液、中性甲醛液等。
本实验用的固定液为4%甲醛（10%福尔马林）。
固定后的处理：用水配制的固定液固定后应用流水冲洗，可是组织中的固定液随时溢出和随时洗去。
对小动物和脑组织等，应以浸泡为主，即能达到冲洗的目的，又不损害组织。
【注意事项】1.固定要及时。
2.组织块的大小要合适。
3.应有足够的固定液，一般与组织块的比例为20:1，容器勿过小，组织勿过多。
4.固定时间要合适，甲醛固定液一般固定两天左右，第一天要更换一次固定液。
5.要进行促使固定，在固定期间轻轻地搅动组织或摇动容器使组织移动有利于固定液的渗透，适当提高温度也可缩短固定时间。
6.选择合适的固定液。
7.一次取材数量过多时，应对取材部位和顺序进行编号，并及时做好记录。
二、脱水脱水就是用某些溶剂逐步将组织块内的水分置换出来的过程，使用的试剂称为脱水剂。
脱水剂有非石蜡溶剂的脱水剂如乙醇、丙酮等，和脱水兼石蜡的脱水剂如正丁醇等。
本实验所用的是乙醇脱水。
乙醇是最常用的脱水剂，其优点是脱水能力强，即能与水相混合，又能与透明剂相混，并可使组织硬化，便于切片。
缺点是穿透组织的速度快，且容易使组织收缩、变脆。
为克服这一缺点，在一般脱水中，应采用循序渐进的方法，逐步升级，经一系列不同浓度的乙醇，使组织中的水分逐渐被乙醇代替。
划重点！冰冻切片流程和注意事项都在这了！快快get起来~
划重点！冰冻切片流程和注意事项都在这了！快快get起来~冰冻切片定义冰冻切片是指新鲜组织不经过任何固定、脱水、透明等处理，不需要石蜡包埋，直接在冰冻切片机上进行切片的一种方法。
冰冻切片特点：操作简单，耗时短，对组织抗原损伤小，对环境污染小。
冰冻切片流程（10-15min内即可完成）：取材→包埋（<30s）→冷冻（1-3min）→切片（2-5min）→固定（10-15s）→染色（4-5min）→封片（<1min）1、取材（1）新鲜组织取材不能遇水，如果组织自身带水较多，可用滤纸吸干（目的是为了防止冰晶空洞等现象在切片过程中产生）；（2）取材的工具也要保持干燥，取材时所取的范围应尽量避开出血坏死区域及脂肪区域；（3）取材组织大小要合适，厚度尽量在3mm，最多不要超过5mm（组织过大切片时阻力加大，易产生刀痕和褶皱）。
2、包埋（1）包埋机一般使用OTC或普通胶水，OTC包埋剂质感细腻，对刀片损伤小，有利于切片；（2）包埋时要将包埋剂涂抹均匀，确定好组织的包埋方向，例如管腔、皮肤、囊壁等要竖立包埋；（3）包埋体积较小的组织，可以先挤压少许的包埋剂形成一个平台，再放入小组织进行包埋。
3、冰冻温度与时间（1）冰冻温度与时间是冰冻切片的关键步骤，要根据组织的类型和大小来调节；（2）冰冻温度过低，会造成组织过硬，切片碎裂；温度过高会造成组织硬度不够，难以切片；（3）不同组织冰冻切片适宜温度：4、切片（1）在组织和包埋剂冷冻到发白后即可开始切片；（2）切片时右手摇动手轮要力道均匀、柔和、缓慢，切片厚度控制在5um左右，左手持毛笔在切片形成时轻按住组织边缘，使其不发生卷曲；（3）将切片展平粘贴在干净的载玻片上，应立即放入固定液中固定，如果固定不及时，会发生细胞退变，切片中细胞核模糊不清呈雾状。
5、染色流程：固定（95%乙醇）→苏木素→水洗→盐酸乙醇分化（0.5~1%）→水洗→温水返蓝→伊红→梯度酒精→二甲苯透明→封片6、注意事项（1）纤维及结缔丰富的组织，应顺着纤维纹理切片，否则容易崩裂；（2）较硬较脆的组织应尽量切的薄一些；（3）选择合适的固定液（95%乙醇、甲醛、甲醇、丙酮），且固定液要保持新鲜，及时更换固定液；（4）组织尽量快速冷冻，组织间隙的自由水易冷冻凝结形成冰晶，组织冷冻越缓慢，冰晶形成的数量越多，体积越大。
冰冻切片步骤很全面
冰冻切片步骤很全面文档编制序号：[KKIDT-LLE0828-LLETD298-POI08]冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片。
它实际上是以水为包埋剂，将组织进行冰冻至坚硬后切片的。
在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程，大大缩短了制片时间。
同时，由于此法不需要经过脱水、透明和浸蜡等步骤，因而较适合于脂肪、神经组织和一些组织化学的制片，并作为快速切片的方法应用在临床诊断。
1. 取材：应尽可能快地采取新鲜的材料，防止组织发生死后变化。
2. 速冻：为了较好地保存细胞内的酶活性或尽快制成切片标本的需要，一般在取材后就要立刻对组织块进行速冻，使组织温度骤降，缩短降温的时间，减少冰晶的形成。
液氮速冻切片法是实验室最常用的速冻切片方法。
具体做法是将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。
在制成冻块后，即可置入恒冷箱切片机冰冻切片。
若需要保存，应快速以铝箔或塑料薄膜封包，立即置入-80℃冰箱贮存备用。
3．固定：样品托上涂一层OCT包埋胶，将速冻组织置于其上，4℃冰箱预冷5-10min让OCT胶浸透组织。
取下组织置于锡箔或者玻片上，样品托速冻。
组织置于样品托上，其上再添一层OCT胶，以完全覆盖为宜，速冻架（PE）上30min。
4.切片：恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机，其基本结构是将切片机置于低温密闭室内，故切片时不受外界温度和环境影响，可连续切薄片至5-10μm。
切片时，低温室内温度以-15℃～-20℃为宜，温度过低组织易破碎，抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动。
切好室温放置30min后，入4℃丙酮固定5~10min，烘箱干燥20min。
PBS 洗5min×3。
肿瘤组织冷冻切片步骤
肿瘤组织冷冻切片步骤肿瘤组织冷冻切片是一种常用的组织学技术，用于研究和诊断肿瘤。
它可以快速制备组织切片，保留细胞和组织的形态特征，并可进行进一步的染色和分析。
本文将介绍肿瘤组织冷冻切片的步骤以及相关注意事项。
步骤一：取样首先，需要从患者体内获取肿瘤组织样本。
这可以通过手术或活检等方式进行。
在手术过程中，医生会尽可能地采集到代表性的肿瘤组织，并将其放入含有生理盐水的容器中。
步骤二：固定为了保持组织的形态结构和化学成分，需要对取得的样本进行固定处理。
最常用的固定剂是10%缓冲福尔马林溶液（10% formalin），它能够使蛋白质凝固并保持其形态。
将取得的样本浸泡在足够量的10%缓冲福尔马林溶液中，通常需要固定24小时。
固定时间的长短可以根据样本的大小和类型进行调整。
步骤三：包埋在固定完成后，需要将样本进行包埋以便后续处理。
包埋是将组织置于固化剂中，使其形成坚固的块状，方便切片。
首先，将固定好的组织样本转移到70%乙醇溶液中进行脱水处理。
随后，使用清洁的毛刷将组织表面上的血液和其他污物清洗干净。
接下来，将组织样本浸泡在甘油溶液中进行透明化处理。
透明化是为了去除乙醇并使组织更易于渗透冷冻剂。
最后，将透明化处理后的组织样本放入冷冻剂（如液氮）中进行冷冻。
冷冻过程应尽量快速以避免组织损伤。
步骤四：切片在完成冷冻过程后，可以开始制备切片。
这里使用的是冷刀法（cryostat method），即利用一台设备称为“冷刀”来制备切片。
首先，将经过冷冻处理的组织块放入冷刀中，并调整刀片的角度和厚度。
通常，切片的厚度为4-6微米。
然后，启动冷刀设备，使其开始制备组织切片。
冷刀会通过低温和微震动的方式将组织块切割成薄片，并将其收集在载玻片上。
步骤五：染色和分析制备好的组织切片可以进行进一步的染色和分析。
最常用的染色方法是荧光染色和免疫组化染色。
荧光染色可以通过使用荧光标记的抗体来检测特定蛋白质或核酸序列。
这种方法可以提供高度特异性和灵敏度，并可用于观察细胞内分子的定位和相互作用。
冰冻切片的保存方法
冰冻切片的保存方法
嘿，朋友们！今天咱们来聊聊超级重要的冰冻切片的保存方法哟！
你想想，要是辛辛苦苦做好的冰冻切片，因为保存不当出了问题，那得多抓狂啊！就好比你精心做了一道美味佳肴，结果没保存好，变质了，那得多可惜呀！
先说温度，这可是关键哦！一定要把冰冻切片放在超低温的环境里，比如说零下八十度的冰箱。
就像小企鹅生活在南极的冰天雪地中一样，那可是它们最舒适的家呀。
你可别把它放在温度不合适的地方，不然就像把小企鹅扔到热带，那还不得热坏啦！
然后呢，密封也超级重要！要把它好好地包起来，不能让外界的杂质呀、水分呀跑进去。
这就好比给它穿上了一层厚厚的铠甲，保护着它呢！你说要是没密封好，让一些坏东西钻进去了，那不就糟糕啦！
还有哦，标记可不能忘！给每一个冰冻切片都写上清楚的标记，就像给它们都起个名字一样，这样找起来才方便呢。
不然一堆切片放在那，你都不知道哪个是哪个，那不就抓瞎啦！
“哎呀，我之前的冰冻切片就是因为没保存好，结果全白费了！”这是我曾经听到过的一位实验小伙伴的惨痛经历。
所以呀，大家一定要重视这个问题，不能马虎哦！
我觉得呀，只要按照正确的方法来保存冰冻切片，就像是给它们打造了一个温暖又安全的家，它们就能好好地“住”下去，为我们的实验提供可靠的支持呢！大家可千万要记住这些方法呀，别不当回事儿哦！。
冰冻切片机使用说明
冰冻切片机使用说明一、前言二、产品组成配件包（切片刀、导向条、收纳盒等）三、使用方法1.准备工作-确认工作环境干燥、通风，并确保有充足的操作空间。
-检查电源电压是否符合器具要求，是否接地良好。
-将主机放置在稳定的平坦台面上，确保主机处于水平状态。
-打开器具箱，将配件包中的切片刀、导向条等取出。
2.安装-将主机的钢带插槽对准配件包中的导向条，轻轻将导向条插入主机中。
-确认导向条安装牢固，无松动。
3.切片准备-将待切片的食材洗净、去皮，并将其切割成适合器具进料口的大小。
-将切片刀放置在配件包中的收纳盒中，提前冷冻至-18℃。
-待切割食材入冷冻刀片之前，先将其放入冰箱冷冻室进行冷冻，待其表面结冰。
4.开始切割-先将主机连接电源，并将电源开关打开。
-将待切割的食材缓缓放入刀片之间，使用推料器帮助推送食材。
-如遇到切片时食材粘附在刀片上，可停止机器运行，清理刀片，然后继续操作。
-使用完毕后，及时停止机器运行，并将电源开关关闭。
5.清洁和维护-在清洁和维护之前，务必断开电源，并等待切片刀完全停止转动。
-用湿布擦拭机器外壳和刀片，不要使用有机溶剂或者腐蚀性清洁剂。
-定期检查导向条的稳定性和切片刀的锋利程度，如有问题及时更换或维修。
-将切片刀放回配件包中的收纳盒中，保证器具的整洁。
四、注意事项-请勿用手直接接触切片刀，以免造成伤害。
-在使用过程中，注意保持适当的距离，避免刀片和身体接触。
-请勿将机器放在不稳定的位置，以免发生意外。
-在清理和维护过程中，务必断开电源，避免发生电击。
-请勿将机器用于除食品外的其他物品切割，以免损坏机器和产生危险。
-请勿将机器用作其他目的，以免发生意外。
五、故障排除故障：刀片无法转动解决办法：断开电源，检查机器内是否有食材卡住，清理食材，并重新启动。
故障：刀片转速慢解决办法：断开电源，检查机器内是否有异物卡住切片刀，清理异物，并重新启动。
故障：切片后食材较粗解决办法：查看切片刀是否磨损，如磨损应及时更换。
冷冻切片机安全操作及保养规程
冷冻切片机安全操作及保养规程背景冷冻切片机是一种常用于生物学和医学研究的实验设备。
它的工作原理是将样本切成极薄的切片，以便于在显微镜下进行观察。
虽然冷冻切片机的作用和价值很大，但如果不正确使用它，就会出现安全事故，导致设备和人身受损。
因此，对于冷冻切片机的安全操作和保养规程显得非常重要。
安全操作出厂前检查在使用之前，必须进行出厂前检查，确保冷冻切片机的各项功能正常、操作无误。
具体检查项目如下：1.检查设备电源及插座是否正常。
2.检查冰箱温度计是否有损坏或失效。
3.检查开关是否灵活可靠。
4.检查切片机的架构是否牢固，特别是刀盘和取样盘。
5.检查样本取样的位置和方式是否正确。
6.检查刀片和取样盘之间的距离是否恰当。
7.检查废弃物收集器是否放置正确。
使用前准备在正式使用之前，必须进行使用前准备。
除了出厂前检查之外，还需要进行如下准备：1.操作者必须穿戴齐全，包括手套、护目镜、口罩、防护服等。
2.要保持操作现场整洁，尽量减少机器杂物阻碍操作。
3.准备切样材料，必须保证样本材料不含有毒、害或物质，对操作者或环境造成损害。
4.按照操作说明书规定进行操作。
操作流程在进行冷冻切片机的操作时，应按照如下流程进行操作：1.准备好需要切割的样本，并将其固定在取样盘上。
2.将刀片移动至离样本表面的距离，通常调整至0.5mm。
3.将样本放入刀片上并按下样本挡板锁紧。
4.打开冰箱门，打开样本取样盘，并将取样盘放在制冷剂上。
5.设置制冷剂的温度，一般要求在-20℃以下。
6.设置切片厚度，通常为5-50微米左右。
7.按下启动键，待设备运行平稳后，进行切片操作。
8.切片操作完成后，注意将取样盘清洗。
操作注意事项1.切片机械部件不能使用手扶，应使用工具进行操作。
2.切片机刀片调整后必须锁紧，防止在使用过程中意外松动。
3.长时间使用后，可适当停机，以便冻结环境平衡。
4.冷藏设备应定期进行除霜、清理。
保养规程冷冻切片机的保养规程非常重要，可以保证设备的正常使用和延长其使用寿命。
冰冻切片机使用规程
冰冻切片机使用规程一、概述二、设备安装和检查1.在使用冰冻切片机之前，需先进行设备的安装和检查。
确保设备放置在平稳的地面上，并连接好相应的电源。
2.检查刀片是否安装正确，并确保刀片锋利。
如有损坏或锋利度不达标，请及时更换。
3.检查设备各部件是否固定可靠，是否存在松动或磨损等情况。
如有异常，请及时修理或更换。
三、操作前的准备工作1.操作人员需穿戴好防护用品，包括手套、口罩和工作服等。
2.食材应事先冻结至适当的硬度，以便切片。
3.打开冰刀切片机的电源开关，并等待设备预热，确保设备能够正常运转。
四、操作流程1.将食材稳固地放置在冰刀切片机的工作台上，确保食材与刀片垂直接触，以确保均匀切片。
2.手握切片器的手柄，将食材从上至下推动，使其与冰刀接触切割。
推动食材时要小心操作，避免手指接触刀片。
根据需要，可适当调整推动食材的速度。
3.操作完成后，及时关闭电源开关，并停止设备运行。
4.清理设备时，务必先断开电源，然后用湿布或刷子将残留在切片机上的食材残渣清除干净。
5.定期检查切片机的零部件，特别是刀片，确保其正常使用并保持锋利度。
五、安全注意事项1.在操作冰刀切片机时，操作人员应集中注意力，避免分心，以防发生意外。
2.操作人员在进行操作前，应确保手部干燥，避免因手掌潮湿而导致不慎滑倒或手指滑入刀片之间。
3.不得用手直接触摸正在工作的冰刀，以免发生伤害。
4.若设备发生故障或异常情况，请立即关闭电源，并通知相关人员进行检修或维护。
5.切片机在运转过程中，工作台上应保持清洁，确保切片的卫生和品质。
6.严禁将切片机用于除食品切片外的其他用途，以免发生意外事故。
六、日常维护和保养1.使用完毕后，应及时清洗切片机，并保持干燥。
注意不要让设备长时间暴露在潮湿环境中，以防生锈。
2.定期检查设备的电源线是否有损坏，如有问题应及时更换。
3.切片机的刀片需要定期更换，并及时磨刀，以保持切割的质量和效果。
4.每次使用完毕后，应进行设备的彻底清洁，包括涂抹润滑油等维护工作。
冷冻切片方法及注意事项
一、试验前准备清理试验台及仪器。
开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度（- 15~-20 ℃*）。
准备好处理好载玻片、刀片、胶水以及药品。
二、取材解剖以后快速取出所需新鲜组织, 用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材（24×24×2mm*）,以防形成冰晶造成切片中形成形状不一空泡,使细胞内结构移位。
（注: 取材中目标本既要明确也要确保其结构完整性, 应避免无须要脂肪及坏死组织附着;要尽可能剔除毛发、硬骨或钙化物;保乳手术切缘因为脂肪组织较多,取材厚度最好不要超出3mm, 厚者冰冻费时, 大者难以切完整。
甲状腺及淋巴结组织要带全组织被膜并除去多出脂肪组织。
）三、冷冻切片1、取出组织支承器, 放平摆好组织, 周围滴上包埋剂, 速放于冷冻台上冰冻, 用吸热器压住组织, 至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片（1~3分种）。
2、将冷冻好组织块, 夹紧于切片机持承器上, 开启粗进退键, 转动旋钮, 将组织修平。
3、调好欲切厚度, 依据不一样组织而定, 标准上是细胞密集薄切, 纤维多细胞稀可稍为厚切, 通常在5～10μm间。
4、调好防卷板。
制作冰冻切片, 关键在于防卷板调整上, 这就要求操作者要细心, 正确地将其调很好, 调校至合适位置。
切片时, 以切出完整、平滑切片为准。
切好组织在洁净玻片上黏附时顺着一个方向稍微用力轻轻一带,可避免组织摊片过程中皱折,确保组织结构完整及切片美观。
注: ①包埋剂选择: 包埋剂是对冷冻切片质量一关键影响原因, 包埋剂用量要适宜, 过多或过少都会影响标本冷冻质量。
常见有三种包埋剂OCT剂、B超藕合剂以及一般胶水。
B超藕合剂适适用于细胞丰富质地较嫩组织,一般胶水或OCT剂适适用于纤维丰富质地偏硬组织。
（OCT包埋剂骤冷时固化, 其冷冻速度和软硬韧度与组织相近, 其还含有水溶性, 不影响染色等优点。
）②组织块过小: 先将少许胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,约30秒钟左右待胶凝固时将小组织放上,组织周围再加部分胶,再次置于冷冻机中冷冻,这么组织被垫高,就能快速切出高质量切片。
冰冻切片的步骤要求和作用
冰冻切片的步骤要求和作用冰冻切片是一种常用于生物学研究的技术，用于制备组织切片以供光学显微镜观察。
冰冻切片的步骤要求和作用如下：一、步骤要求：1.标本固定：首先，需要选择适合的标本进行固定。
常见的标本包括动植物组织、器官、细胞等。
固定常采用的方法有乙醛定型法、福尔马林定型法等，目的是保持组织的形态和结构。
2.干燥：将固定好的标本进行干燥处理，常用的方法有空气干燥、醋酸解脂等。
干燥的目的是使细胞固定在组织中，减小切片过程中的移位和变形。
3.冰冻：将固定好且干燥的标本进行冰冻处理，通常使用低温冷冻机或液氮进行冰冻。
冰冻的目的是使细胞和组织速冻，保持其原有的结构和形态。
4.切片：使用显微切片机或冰冻微浪切片机将冰冻标本切割成薄片。
切片的要求是薄且均匀，通常在10-50微米之间。
5.捕获：用切片夹将切片移入载玻片上，并注入缓冲液或显微镜密封液，以保持切片的湿润和结构稳定。
6.染色：根据需要可以对切片进行染色，常用的染色方法有苏木精-伊红染色、姜黄染色等，目的是突出组织结构和细胞器。
二、作用：1.结构观察：冰冻切片制备的组织切片可以提供高分辨率、立体感强的结构信息，可以观察细胞和组织的形态、结构和排列方式。
2.免疫组化：冰冻切片可以被用于免疫组织化学染色和免疫荧光染色等技术。
这些技术可以用来检测特定的蛋白质和其他分子在组织中的分布和表达程度。
3.分子定位：通过使用特定的探针或荧光标记物，冰冻切片可以用于分子定位实验，可实现对特定分子在组织中的定位和可视化。
4.病理学研究：冰冻切片可以提供病理学诊断的信息。
医学领域常用冰冻切片技术进行快速病理诊断，如冷冻切片法可以在手术中实时检测并确定肿瘤的范围和边界。
5.遗传学研究：冰冻切片被广泛用于研究组织和细胞的遗传变异、突变和表达差异等。
如原位杂交和原位PCR技术可以用于检测特定基因在组织中的分布和表达。
6.药物筛选：冰冻切片可以用于药物的筛选和效果评估。
通过给予切片不同的药物处理，可以观察药物在组织中的作用和效果。
冷冻切片方法及注意事项
一、试验前预备清理试验台及仪器。
开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度〔- 15~-20 ℃*〕。
预备好处理好的载玻片、刀片、胶水以及药品。
二、取材解剖之后快速取出所需的颖组织，用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材〔24×24×2mm*〕,以防形成冰晶造成切片中形成外形不一的空泡,使细胞内构造移位。
〔注：取材中目的标本既要明确也要确保其构造的完整性，应避开不必要的脂肪及坏死组织附着;要尽量剔除毛发、硬骨或钙化物;保乳手术切缘由于脂肪组织较多,取材厚度最好不要超过3mm，厚者冰冻费时，大者难以切完整。
甲状腺及淋巴结组织要带全组织被膜并除去多余的脂肪组织。
〕三、冷冻切片1、取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片〔1~3 分种〕。
2、将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。
3、调好欲切的厚度，依据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10μm 间。
4、调好防卷板。
制作冰冻切片，关键在于防卷板的调整上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。
切片时，以切出完整、平滑的切片为准。
切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向略微用力轻轻一带,可避开组织摊片过程中皱折,保证组织构造的完整及切片的美观。
注：①包埋剂的选用：包埋剂是对冷冻切片质量一重要影响因素，包埋剂用量要适宜，过多或过少都会影响标本冷冻质量。
常用的有三种包埋剂OCT 剂、B 超藕合剂以及一般胶水。
B 超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,一般胶水或OCT 剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。
〔OCT 包埋剂骤冷时固化，其冷冻速度和软硬韧度与组织相近，其还具有水溶性，不影响染色等优点。
〕②组织块过小：先将少量胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,约30 秒钟左右待胶凝固时将小组织放上, 组织四周再加一些胶,再次置于冷冻机中冷冻,这样组织被垫高,就能快速切出高质量的切片。
冰冻切片的原理、流程和注意事项
冰冻切片的原理、流程和注意事项1冰冻切片的原理冰冻切片是指新鲜组织不经过任何固定、脱水、透明等处理，不需要石蜡包埋，直接在低温恒冷切片机冷冻后马上进行切片的一种方法。
冰冻切片具有操作简单、对环境污染小和对组织抗原损伤小的特点。
又因制作时间和材料有限，保证高质量的冰冻切片非常重要，直接影响病理诊断的正确率。
2冰冻切片的操作流程整体流程：送检和取材要求：•送检标本及时新鲜，组织无需固定，不能遇水，防止冰晶空洞等现象在切片过程中产生•取材的器械要保持干燥，取材时所取的范围应尽量避开出血坏死区域及脂肪区域•所取组织块大小应合适。
组织过大切片时阻力加大，难免产生刀痕及褶皱，加大了制片的难度包埋：•包埋剂一般使用OCT或普通胶水•包埋时将包埋剂涂抹均匀，并根据组织情况和医生的要求确定包埋方向，如管腔、皮肤、囊壁等要立埋•组织体积较小，可先挤入少许胶在包埋托上形成一个”平台“，再放入小组织进行包埋冰冻温度与时间：冰冻的温度与时间时制作冰冻切片的关键因素，需要根据组织的种类、厚度和大小来调节。
如果温度过低，会造成组织过硬、切片破碎；温度过高会造成组织硬度不够，难以切片切片和染色：•在组织和包埋机冻到发白后可以开始切片•是否使用防卷板可根据操作者的习惯，如使用防卷板，一般将其调整到与切片呈5度夹角•切片时右手摇轮转要力道均匀、柔和、缓慢，切片厚度掌握在5微米，左手持毛笔在切片形成时按住组织边缘，使其不发生卷曲•将切片展平粘贴在结晶载玻片上后，应当立即放入固定液中加以固定，如固定不及时，会发生细胞蜕变，切片中细胞核显示不清，呈”云雾状“表现冰冻切片HE染色流程：3冰冻切片的注意事项1. 组织取材要规范冰冻切片的组织要尽可能新鲜，不触碰谁，取材要及时，动作要迅速。
2.取材大小要厚薄适中在确保渠道主要病变的前提下，尽量避开钙化、坏死、脂肪等。
3. 保持取材台面和器材的干净，防止污染4. 组织表示及编号要明确5. 切片固定要及时制片过程要求快速冷冻、快速切片、快速固定。
冰冻切片实验步骤
冰冻切片实验步骤冰冻切片是一种常用的实验技术，用于研究生物样品的结构和功能。
在冰冻切片实验中，样品必须被快速冻结并制成非常薄的切片，以保持样品的原始结构和形态。
以下是一个冰冻切片实验的一般步骤，供参考。
1.准备工作：-准备所需的实验材料和设备，包括动物或细胞样品、细胞培养基、PBS缓冲液、冷冻剂（如液氮或干冰）、冷冻切片机、切片刀片、切片贴片和载玻片等。
-充分冷却冷冻切片机，并确保切片刀片处于锋利和清洁状态。
-确保实验环境卫生干净，并且操作台面上没有其他杂物和细菌。
2.过度冷冻：-在离心管或培养皿中收集样品，如组织块或细胞团。
-将样品迅速置于冷冻剂中，以快速冷冻样品。
在制备过程中，样品冷冻的速度非常重要，可以使用冰浴或液氮使样品迅速冷冻。
3.制备冷冻样品：-将冷冻固态样品放入冷冻切片机的样品夹内，确保样品与夹具接触良好。
-调整切片刀片的角度和位置，以确保薄片的切割。
-使用冷冻切片机制备冷冻样品，比如用于大脑切片的考尔密斯键切片机。
4.切片过程：-打开冷冻切片机的刀片和样品夹，以容纳载玻片。
-将切片刀片横跨切片机的切片口，并确保刀刃与样品夹接触。
-使用微调装置，轻轻地将切片刀片向下移动，以制备样品切片。
可以根据需要调整切片的厚度。
5.取样和处理：-将切制好的样品轻轻地使用毛刷或细针取下，并将其浸泡在PBS缓冲液或其他处理液中进行进一步处理。
-根据实验需求，可以进行染色、免疫标记和显微镜检查等处理。
6.制备切片贴片和载玻片：-取出切片贴片并将其浸泡在PBS缓冲液中，让其变湿。
-使用镊子或其他工具将处理好的样品放在切片贴片上，然后轻轻地将切片贴片放在载玻片上。
确保样品均匀分布在切片贴片上，并避免形成气泡。
7.干燥和封装：-将切片贴片从PBS缓冲液中取出，用纸巾或吸水纸轻轻地吸去多余的液体。
-将载玻片置于干燥盒中，确保切片在常温下彻底干燥。
-使用合适的密封胶将载玻片封装，以防止切片的氧化和损坏。
总结：冰冻切片实验是一种常用的技术，用于研究生物样品的结构和功能。
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肝 脾 肠 卵巢 肾脏 甲状腺 乳腺 带脂肪的皮肤 脂肪 脑
样品头温度
-15℃ -10℃ -20℃ -15℃/-20℃ -15℃ -15℃ -20℃ -40℃ -50℃ -10℃
冷冻箱温度
-20℃ -20℃ -20℃ -20℃ -20℃ -20℃ -20℃ -30℃ -30℃ -20℃
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⑥用于附贴切片的载玻片，不能存放于冷冻 处，于室温存放即可。因为当附贴切片时， 从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有 一种温度差，当温度较高的载玻片附贴上温 度较低的切片时，由于两种物质间温度的差 别，当它们碰撞在一起时，分子彼此间发生 转移而产生了一种吸附力，使切片与载玻片 牢固地附贴在一起。如果使用冷藏的载玻片 来附贴切片，由于温度相同，没有发生上述 的现象。
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• 切片卷缩：常见原因 1:放卷板位置不正确/放卷板较脏/放卷板有缺 口 2:切片刀温度不够低 3:切片刀钝/粘附有组织残屑 4:组织硬度不够
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• 解决对策： 1:调整放卷板位置，使其切片可以顺畅通过 2:盖上冷冻室盖，让刀片温度降低 3:及时清洁刀片，更换刀口 4:降低组织块温度，使其硬度适当 5:用OCT/胶水包埋组织，有利于防止切片卷 缩
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• 切片脱落：常见原因 1:组织内坏死组织多 2:固定液温度低 3:载玻片不干净/温度低 4:切片太厚
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• 解决对策： 1:取材时：尽量避免坏死组织，如必需取材， 则可用酒精灯/电吹风将切片吹干防脱 2:定期更换固定液，将固定液瓶盖盖好，防止 固定液挥发而使其浓度降低 3:保持载玻片干净，置于室温 4:切片不应太厚（5um），脂肪可厚些
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如果使用未完全固定的组织做冰冻切片，就 会出现冰晶。这是因为含水的固定液在组织 未经固定前，其中的水份也可渗入到组织中 去，当冰冻发生时，这些水份就存留于组织 中，形成了冰晶。 ⑤当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰 冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片 刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大 拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切 片。另者，调高冰冻点。
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③放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势 来放置，所谓“砍柴看柴势”，切片也是如 此，如果胡乱放置，就不能收到很好的效果 。 ④组织块不须经各种固定液固定，尤其是含 水的固定液，在未达到固定前，更不能使用 。临床快速冰冻切片，不须要预先固定，一 是为了争取时间，二是固定了的组织，反而 增加了切片的难度。
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冰冻切片的注意事项 2015年11月
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温度：冷冻组织中水分起填充作用，使组 织迅速变硬，由于各种组织所含水分多少 不同，因此所要求的适宜温度不同。含水 分较多的疏松组织易冻结，而含脂肪较多 的组织难冻结。
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• 切片过程中的注意事项： ①防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干 净，需经常用毛笔挑除切片残余和用柔软的纸 张擦。有时需要每切完一张切片后就用纸擦一 次。因为这个地方是切片通过和附贴的地方， 如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏 甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。 ②多例多块组织同时需做冰冻切片时，可各自 放于不同的支承器上，于冷冻台上冻起来，然 后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费 时也不会乱。
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• 脂肪组织：因脂肪不会结冰，因此脂肪组 织在制作冰冻切片时尤为困难。
• 解决办法：只有将温度降低，让脂肪变硬 。如果是脂肪组织与非脂肪组织混合存在 ，温度可降至-25℃；如果是纯脂肪组织， 则降至-50℃.
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• 切片上有条纹：垂直于刀片上的细条纹， 考虑是刀片缺口所致，可能是由于钙化组 织、缝线引起；如出现宽条纹或组织缺损 ，则可能是由于刀片下粘附有组织残渣。
• 波浪线样的皱褶：可能是由于切片机内某 个零件松动所致。检查支撑刀片的刀架， 冷冻头等有无松动。
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• 如组织块温度太低，组织片容易卷曲和碎 裂，此时可把大拇指置于组织块上几秒钟 ，升高组织块温度。
• 如组织块温度太高，组织片易皱褶，可将 速冻台置于组织面上几秒钟以快速降温。