实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
欧盟蜡样芽孢杆菌标准
欧盟蜡样芽孢杆菌标准
全文共四篇示例，供读者参考
第一篇示例：
欧盟蜡样芽孢杆菌标准是指欧洲联盟制定的关于蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）的质量要求和检测方法的标准。蜡样芽孢杆菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然界中的土壤、水源、植物等环境中。
它是一种潜在的食品污染源，能够在一定条件下产生产生毒素，引起
食物中毒。欧盟制定了一系列的标准，旨在控制和监测蜡样芽孢杆菌
在食品中的含量，保障食品安全。
欧盟蜡样芽孢杆菌标准主要包括以下几个方面：
1. 质量要求：欧盟规定了食品中蜡样芽孢杆菌的最大容许限量。
不同类型的食品具有不同的容许限量，其中以婴幼儿食品和食品中成
分含水量高的产品要求最为严格。这些限量的设定旨在保证人们在食
用食品时不会遭受蜡样芽孢杆菌毒素的危害。
2. 检测方法：欧盟规定了蜡样芽孢杆菌的检测方法，包括取样方法、预处理方法、培养方法、毒素检测方法等。这些方法一般由专业
实验室进行操作，确保检测结果的准确性和可靠性。
3. 风险评估：欧盟对食品中蜡样芽孢杆菌的风险进行评估，分析
潜在的风险因素和传播途径。通过风险评估，可以及时采取控制措施，降低食品中蜡样芽孢杆菌的污染风险。
4. 风险管理：欧盟制定了一系列的风险管理措施，包括食品加工中的卫生规范、食品贮存和运输中的控制措施等。这些措施旨在预防和控制蜡样芽孢杆菌在食品中的传播和繁殖。
欧盟蜡样芽孢杆菌标准的制定和执行，旨在保障食品安全，减少食品中蜡样芽孢杆菌的污染，降低人们因食用受污染食品而引发的食物中毒风险。对于食品生产企业和相关部门而言，严格执行欧盟蜡样芽孢杆菌标准是确保产品质量和消费者健康的重要措施。希望通过这些标准的制定和实施，可以有效地保障欧盟市场上食品的安全性，提高消费者对食品的信任度和满意度。
蜡样芽孢杆菌国标检测方法
蜡样芽孢杆菌国标检测方法
蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）是一种广泛存在于自然环境中的细菌，它可以生长在食品和环境中，因此对于食品和饮料行业来说，蜡样芽孢杆菌的检测非常重要。国际上已经制定了相关的标准，而国内也制定了具体的检测方法。本文将介绍蜡样芽孢杆菌国标检测方法并展开详细描述，以供相关行业参考。
1. 国标检测方法
蜡样芽孢杆菌国标检测方法主要采用了生物学检测和分子生物学检测方法。生物学检测主要使用平板计数法和过滤膜法，分子生物学检测主要使用聚合酶链式反应法（PCR法）和实时荧光定量PCR法（qPCR法）。
2. 样品选择
需要检测的样品包括：发酵食品、膳食补充剂、调味品、果蔬制品、肉制品和乳制品等。
3. 样品制备
样品制备前应先进行预处理。首先采样应在保持样品原有状态的基础上进行。对于固体样品，应采用加热处理或浸泡法进行分离；对于液体样品，应使用过滤方法或离心沉淀法进行分离。
4. 平板计数法
平板计数法是指直接将样品加入含有富含营养物质的寒天平板中，将平板培养在适宜的环境中，形成菌落后进行计数。整个操作过程需要消毒操作标本及工具，取样后用无菌吸管挤压或邀约样本，点样于寒天平板上，用无菌毛细管在菌液上滴蒸馏水，最后在恰当条件下培养。
5. 过滤膜法
过滤膜法将膜片放入模具上，加入样品后进行过滤，将膜片放入含营养物质的寒天平板中，使其形成菌落后，进行计数。操作过程中需要对膜片进行密封操作以避免空气污染。
6. PCR法
PCR法是指从样品中提取DNA，并使用特定引物进行扩增，在扩增过程中计量目的DNA 的含量。PCR方法的核心技术是产生大量DNA分子复制，以此来检测目标DNA。
蜡样芽胞杆菌的检验
年份 爆发类型 有关食物
1972 V
泡饭
1973 V 小米饭
1977 V
米饭
1980 V 甜酒酿
1981 V 肉包子
1983 V 五仁月饼
1984 V 米饭饼
1984 V 米粉*
1985 V
米饭
蜡样芽胞杆菌含量／ｇml 3.2×107 1.5×108 2.2×108 8×104 8.6×106
106 ～4.8×107 1.4×107 ～6.2×107
阳性率(％)
44.8 41.7(29.5) 53.3 100.0 54.5(64.7) 50.0 27.0 31.1 38.4
流行病学
蜡样芽胞杆菌
病原菌
条件致病菌
食物中毒
人或动物 非肠道传染病 eg:结膜炎
肠 毒 素
耐 热
呕吐型 污染食品：米饭 我国多见
不 耐 热
腹泻型 污染食品：蛋白 型食品及果汁 欧美等国多见
2.卵磷脂酶：该菌具有卵磷脂酶，能水解卵 磷脂。
3.蛋白水解酶：具有水解酪蛋白的能力。多 数菌株还有明胶酶，能液化明胶。
（二）流行病学特点
1、季节性特点： 以夏、秋季，尤其是6～10月为多见。
2、食品种类 －剩饭，特别是大米饭。
－乳及乳制品、畜禽肉类制品、蔬菜、莱汤、马铃薯、 豆芽、甜点心、调味汁、色拉。
食品中蜡样芽孢杆菌的检验
一、生物学特性
4、在血平板上，菌落呈浅灰色，不透明，似白色毛玻璃状，有溶血环。 5、在甘露醇卵黄多粘菌素平板上，菌落呈粉红色（表示不发酵甘露醇）,周围有粉红
色的晕（表示产生卵磷脂酶）
（三）、生化反应
1、能分解GLU，麦芽糖，蔗糖，水杨苷，产酸不产气。 2、不分解乳糖，甘露醇，阿拉伯糖，山梨醇，木糖 3、H2S（-），尿素酶试验（-）卵磷脂酶（+），V—P试验（+），液化明胶，胨化
国内：与淀粉质食品相关多， 7、临床症状： （1）呕吐型 （2）腹泻型
（一）检验程序
三、微生物检验
检样
稀释处理
平板分离 证实试验
菌落计数
镜检
培养特性观察
报告结果
生化试验
三、微生物检验
（二）操作步骤： 1、菌数测定 以无菌操作将检样25g(ml),用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-1—10-5的稀释液。取 各稀释液0.1ml，接种在两个选择性培养基—甘露醇卵黄多孢菌素（MYP）琼脂培养基上， 用L形涂棒涂布于整个表面，置36±1℃恒温箱培养 12-20h后选取适当菌落数的平板进 行计数，蜡样芽胞杆菌在此培养基上的菌落为粉红色（表示不发酵甘露醇），周围有粉 红色的晕（表示产生卵磷脂酶）。计算后从中选取5个此种菌落做证实试验。
食品中蜡样芽孢杆菌的检验
一、生物学特性 （一）、形态与染色
蜡样芽孢杆菌检测国标
蜡样芽孢杆菌检测国标蜡样芽孢杆菌是一种常见的致病微生物，它会引起食物中毒的发生。针对蜡样芽孢杆菌的检测方法，我国制定了相关国家标准，本文将从以下三个方面进行介绍。
一、蜡样芽孢杆菌简介
蜡样芽孢杆菌又称为蜡样芽孢菌（Bacillus cereus），是一种革兰氏阳性菌。其孢子分布广泛，可以在空气、土壤、水、食品等各种环境中存活，甚至在高温加工食品中也可以存活。蜡样芽孢杆菌是一种致病微生物，能够引起急性食物中毒，这是因为它产生的毒素能够影响肠胃道，引起呕吐、腹泻等症状。
二、蜡样芽孢杆菌检测国标
为了保障人们的食品安全，我国对食品中的蜡样芽孢杆菌进行了规范化的检测方法，主要是通过标准的培养及鉴定步骤进行。
1.样品采集：首先需要确定样品的种类，其次选择适当的采集方法，例如在市场上购买的食品需要在废弃部位进行采集，以保障采样的准确性。
2.样品处理：将采集到的食品样品进行前处理，包括样品的清洁去除外部污染等步骤。
3.菌液制备：将采样到的食品样品用合适的培养基进行培养，培养出的菌落进行鉴定，得到蜡样芽孢杆菌后进行菌液制备。
4.检测方法：采用PCR法、生物分子方法、蛋白质检测法等方式对菌液进行检测，以确认菌液中是否有蜡样芽孢杆菌存在。
5.结果判定：判定样品中是否存在蜡样芽孢杆菌，并进行定性和定量分析。
三、总结
蜡样芽孢杆菌检测国标对食品安全有着重要的意义，它通过科学、规范的检测方法保障了人们的食品安全。在实际操作中，应加强样品采集及前处理，保证样品的准确性。同时，为了提高检测的灵敏度和准确性，应选择合适的检测方法。最后，需要将检测结果进行有效记录，以便后续参考。
蜡样芽孢杆菌检测标准
蜡样芽孢杆菌检测标准
蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）是一种常见的细菌，广泛存在于土壤、水、空气和食品中。它是一种厌氧菌，在适宜的条件下能够迅速生长繁殖，因此对其检测标准十分重要。
蜡样芽孢杆菌的存在会对食品安全造成威胁，因为它可以产生多种毒素，其中包括引起食物中毒的致病毒素。因此，对食品中蜡样芽孢杆菌的检测标准必须严格执行，以保障食品安全。
首先，蜡样芽孢杆菌的检测应该基于科学的方法和标准。目前，国际上对蜡样芽孢杆菌的检测标准主要包括ISO标准和FDA标准。ISO标准主要适用于食品和饮用水等领域，而FDA标准则更多地用于医药和化妆品等领域。在执行检测时，应当严格按照相关标准进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。
其次，蜡样芽孢杆菌的检测应该注重样品的采集和保存。在采集样品时，应当避免外界污染，并选择适当的容器进行保存，以防止细菌的生长和繁殖。同时，在运输和保存过程中，应当注意避免温度和湿度的变化，以确保样品的完整性和稳定性。
另外，蜡样芽孢杆菌的检测还应该关注检测方法的选择和操作流程。目前常用的检测方法包括培养法、PCR法和免疫学方法等。在选择检测方法时，应当根据具体的检测对象和要求进行合理的选择，并严格按照操作流程进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。
除此之外，蜡样芽孢杆菌的检测还应该关注检测结果的解读和评估。在获得检测结果后，应当根据相关标准和法规进行结果的解读和评估，以确定是否符合安全标准。同时，还应当对检测过程中出现的异常情况进行分析和处理，以确保检测结果的真实性和可靠性。
蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程
蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程
一、引言
蜡样芽孢杆菌是一种常见的微生物，其活菌数含量的测定对于粮食、食品和医药行业具有重要意义。本文档旨在提供一份蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程，以确保测定结果准确可靠。
二、仪器与试剂
- 无菌培养基
- 自动培养箱
- 显微镜
- 十倍镜
- 干燥烘箱
- 无菌分注器
- 离心机
- 紫外灯
三、操作步骤
1. 准备工作
- 清洗并消毒所有使用过的实验器材。
- 配制无菌培养基，确保培养基的质量符合要求。
2. 样品处理
- 将待测样品加入适量的无菌水中，并通过搅拌均匀。
- 取适量的处理后的样品，通过无菌分注器加入无菌培养基中。
3. 培养
- 将含有待测样品的无菌培养基均匀涂布于一片无菌培养基平
板上。
- 将平板放入自动培养箱中，设置适当的温度和培养时间进行
培养。
4. 菌落计数
- 取出培养完毕的平板，使用显微镜和十倍镜对菌落进行观察
和计数。
- 记录菌落数，得到待测样品中蜡样芽孢杆菌的菌落形成单位（CFU）。
5. 活菌数计算
- 将菌落计数结果乘以相应的稀释倍数，得到待测样品中蜡样
芽孢杆菌的活菌数含量。
6. 结果确认
- 将结果与标准值进行比较，确保测定结果准确可靠。
四、风险提示
- 操作过程需保持无菌操作，避免污染。
- 使用紫外灯时需注意安全，避免直接照射眼睛和皮肤。
五、总结
蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程是确保测定结果准确
可靠的重要工作。按照本文档的要求进行操作，能够有效地保证测
定的准确性，并为粮食、食品和医药行业的安全生产提供科学依据。
实验三、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)的检验
－/＋．
过氧化氢酶 ＋ 动力 ＋/ － 硝酸盐还原 － 酪蛋白分解 ＋/－ 卵黄反应 － 葡萄糖利用（厌氧）－ 甘露醇 ＋ 木糖 ＋/－ 溶血 － 已知致病性
对昆虫致病的 假根 内毒素结晶 样生长
注：＋．90%~100%的菌株阳性 大多数菌株阴性
－．90%~100%菌株阴性 ＋/－.大多数菌株阳性
（2）培养特性 本菌在肉汤中生长混浊，常有菌膜或壁环， 振摇易乳化。琼脂平板上形成的菌落不透明， 表面粗糙，似毛玻璃状或融蜡状且边缘不齐。
（3）生化特性
本菌有动力；产生卵磷脂酶和酪蛋白酶；过氧 化氢酶试验阳性；溶血；不发酵甘露醇和木糖； 能液化明胶和还原硝酸盐；在厌氧条件下能发酵
葡萄糖。
A、 MYP平板实验
杆菌在此培养基上的菌落为粉红色（表示不发酵甘露醇）周围有粉红
色的晕（表示产生卵磷脂酶）。 计数后，从中挑取5个这样的菌落作证 实试验。根据试验证实为蜡样芽孢杆菌的菌落数，计算出该培养皿内
的蜡样芽孢杆菌数，然后乘其稀释倍数即得每克或每毫升样品所含的
蜡样芽孢杆菌数。
3．分离培养
将检样或其稀释液划线于上述选择性培 养基平板上，置37℃培养12～20h，挑取 可疑蜡样芽孢杆菌的菌落接种于肉汤和营 养琼脂培养基上做纯培养，然后做证实试 验。
4．证实试验
（1）形态观察
本菌应为G＋杆菌，宽度在1μm或1μm以上，芽孢呈卵圆形， 不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。
蜡样芽孢杆菌
食品卫生微生物学检验
蜡样芽胞杆菌检验
1范围
本标准规定了蜡样芽胞杆菌的检验方法。
本标准适用于各类食品和食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的检验。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB／T 4789.2食品卫生微生物学检验菌落总数测定
GB／T 4789.28—2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂
3设备和材料
3.1冰箱：0℃～4℃。
3.2恒温培养箱：36℃±l℃。
3.3恒温水浴锅：46℃±l℃。
3.4显微镜：l0×～l00×。
3.5均质器或灭菌乳钵。
3.6架盘药物天平：0g～500g，精确至0.5 9。
3.7灭菌锥形瓶：500 mL。
3.8灭菌试管：16 mm×160 mm。
3.9灭菌吸管：1 mL(具0.01 mL刻度)、10mL(具0.1 mL刻度)。
3.10灭菌平培养皿：直径90 mm。
3.11灭菌刀、剪、镊子等。
4培养基和试剂
4.1 肉浸液肉汤培养基：GB／T 4789.28 2003中4.1。
4.2 酪蛋白琼脂培养基：GB／T 4789.28—2003中4.65。
4.3 动力一硝酸盐培养基：GB／T 4789.28—2003中4.72。
4.4 缓冲葡萄糖蛋白胨水：GB／T 4789.28—2003中3.4。
4.5 血琼脂培养基：GB／T 4789.28--2003中4.6。
蜡样芽孢杆菌的检测
2 实验结果
1 MYP平板上：粉红色菌落，菌落周围产生粉红色浑浊 圈。 2 L-酪蛋白琼脂培养基：菌落周围形成透明圈。 3 触酶试验：加入过氧化氢后30秒产生气泡。 4 TSSB平板上：菌落周围产生的β溶血圈。（在菌落 周围出现一个大小不一的完全透明清楚的宽带）。
紫云金芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌呈现弱得溶血现象， 而炭疽芽胞杆菌通常不溶血。 5 动力-硝酸盐生化鉴定管：细菌沿穿刺线扩散生长 ，加硝酸盐试剂后培养基变红。
THE END！
蕈状芽孢杆菌常常呈绒毛状生长，蜡样和紫云金芽 孢杆菌通常运动极为活泼，而炭疽芽胞杆菌则不运动。
实验结果
3 计数（表面涂布法）
1克样品中含的蜡样芽孢杆菌数：
MYP平板上的菌落数× 证实阳性菌落数 × 稀释倍数× 10 挑取的菌落数
举例：将检样10-4稀释液0.1mL涂布于MYP琼脂平板 上，生成的可疑菌落数为25个，取5个进行鉴定， 证实为蜡样芽胞杆菌的是4个，则1g样品中含的蜡 样芽孢杆菌数为（25×4/5）×104×1/0.1
4 证实试验
预
菌落形态观察
实 验
革兰染色
镜检观察菌体
Байду номын сангаас
营
养
生
琼
化
脂
实
卵磷脂酶实验 L-酪氨酸分解实验
MYP琼脂平
板 L-酪氨酸琼脂培养基
食品中蜡样芽孢杆菌芽孢EMA-qPCR 检测
蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）是 1.2 仪器设备
一种常见的兼性需氧革兰氏阳性致病
ABI 7500FAST 实时荧光 PCR 仪、
菌，极易污染乳制品、米饭、水果制 生物安全柜、超声波细胞破碎仪、显 品等食品 [1]。目前，检测方法主要是传 微镜。
酶（100 mg/mL），37 ℃ 水 浴 2 h， 12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。
1.4.3 煮沸法 在菌体中加入 500 μL 无菌水，涡 旋 30 s，置 95 ℃水浴 5 min，12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。 1.4.4 超声波破碎法 向 离 心 管 中 加 入 500 μL 的 无 菌 水，涡旋 30 s，放入超声波细胞破碎 仪超声波振荡 20 min（40%，5 s，5 s）， 12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。 1.5 EMA 使用浓度优化 用 ddH2O 配 制 0.1 mg/mL 的 EMA 溶液，-20 ℃避光保存。取 Mn2+ 营 养 肉 汤 中 30 ℃ 培 养 48 h 的 蜡 样 芽孢杆菌菌液于 80 ℃水浴中处理 20 min，灭活营养体细胞。将 EMA（0.1 mg/mL）分别加入装有 1 mL 上述灭 活 菌 液 的 离 心 管 中， 使 EMA 终 质 量 浓 度 分 别 达 到 0.1、1.0、2.0、5.0、 10.0、20.0 μg/mL，不加 EMA 的菌液 作为对照。充分混匀后，将离心管黑 暗中室温放置约 5 min，让 EMA 与细 菌 DNA 充分结合。然后将离心管放置 冰上，强光下曝光 20 min，以此为模 板采用超声波破碎法提取 DNA。 1.6 EMA 光照时间优化 添加 EMA 到 1.5 中所述灭活菌液 1 mL 离心管中，使每管 EMA 终浓度 达到 2.0μg/mL。充分混匀后，将离心
蜡样芽孢杆菌 食品法规
蜡样芽孢杆菌食品法规
蜡样芽孢杆菌是一种在大自然中广泛分布的菌类，同时也是一种
重要的致病菌。随着人们对食品安全的关注度不断提高，越来越多的
国家和地区开始制定针对蜡样芽孢杆菌的食品法规。本文将详细介绍
蜡样芽孢杆菌食品法规的相关内容。
一、国内对蜡样芽孢杆菌的法规
1.《食品安全法》
《食品安全法》是中国制定的最重要的食品安全方面的法律法规
之一，在其中已明确规定了蜡样芽孢杆菌的检测标准。规定了蜡样芽
孢杆菌在茶叶类、肉制品、水产制品等领域中的检测限值及其相关标准。
2.《食品安全国家标准》
此标准规定了在食品加工、运输、储存以及销售过程中关于蜡样
芽孢杆菌的检测方法、检测标准及防范方法等。该标准还明确了食品
生产加工企业在处理蜡样芽孢杆菌时需要遵守的原则和方法。
3.地方性法规
各省市还分别出台了适应其本地情况下的食品安全法规，各个地
区都在根据其本地情况和实际情况制定适宜的推进措施，以保障当地
食品安全。这些东西包括当地的法规和企业自制的内部品质控制系统。
二、国际对蜡样芽孢杆菌的食品法规
1.欧盟食品法规
欧盟规定蜡样芽孢杆菌在3个统计批量中的平均值，应该小于每
克100 CFU。他们也规定了蜡样芽孢杆菌可以存在于肉制品、乳制品及某些植物制品中的最大限制值。
2.美国食品法规
美国FDA在对蜡样芽孢杆菌的标准中，规定蜡样芽孢杆菌在食品
中比其它类别的食品中更加重要。他们也在制定针对防范蜡样芽孢杆
菌的检测标准和预防措施。
综合来看，不同国家或地区蜡样芽孢杆菌食品法规存在差别，但都要求加强对食品中蜡样芽孢杆菌的监管。食品制造企业需要加强其产品的品质控制体系，不断完善并落实相关的法规标准，确保食品的安全卫生且经久耐用。
蜡样芽孢杆菌国标检测方法
蜡样芽孢杆菌国标检测方法
蜡样芽孢杆菌是一种常见的致病菌，可以引发许多疾病，比如肺炎、食物中毒等。因此，对于蜡样芽孢杆菌的检测方法非常重要。目前，我国规定的蜡样芽孢杆菌国标检测方法共包括以下几个步骤：首先，样品前处理。在此步骤中，需要将待检样品样品进行预处理，确保样品中的蜡样芽孢杆菌含量达到检测标准。一般而言，对于
不同类型的样品，处理方法也会有所不同。比如在食品及饲料中检测，可以添加适当数量的生长因子，利于蜡样芽孢杆菌的生长和繁殖；在
水及废水中检测，需要进行过滤、浓缩等步骤，以提高样品中菌落的
数量。
其次，培养。在此步骤中，待检样品需要在适当的培养基上进行
培养，并采用适宜的培养条件和温度，使蜡样芽孢杆菌营养生长，并
清晰地表现出其形态特征。比如在肉汤杨氏平板上进行培养，在37℃
下进行孵育，并对培养基的pH值和氧气浓度进行控制，以确保蜡样芽
孢杆菌可以正常生长。
第三，菌落特征的观察。在此步骤中，需要对培养出的蜡样芽孢
杆菌菌落的特征进行观察。一般而言，蜡样芽孢杆菌的菌落呈灰白色，中心较高，表面光滑细腻，菌体呈杆状，染色后呈青紫色，有时并可
呈蓝绿色。
最后，进行鉴定和计数。在此步骤中，需要对菌落进行进一步的鉴定和计数。一般而言，可以采用荧光抗体技术、PCR扩增等方法进行检测，以确保检测结果的准确性和可靠性。
以上就是针对蜡样芽孢杆菌国标检测方法的详细介绍。对于我们日常生活中经常遇到的食品、水源等，如果能够采用这些方法进行检测，那么对于保障我们的健康会起到非常重要的作用。同时，也提醒大家在生活中注意卫生，遵守食品安全规定，以免受到蜡样芽孢杆菌等致病菌的侵害。
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中华人民共和国国家 标准食品卫生微生物 学检验蜡样芽孢杆菌 检验GB/T 4789.282003
选择性培养基（菌数测定） MYP
36 ℃ ±1℃ 12h~20h
选择性培养基（分离培养） MYP
36 ℃ ±1℃ 12h~20h
菌数计算
营养琼脂培养基
生长及菌落观察 染色镜检 生化试验 菌株保存
报告
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
计数后，从中挑取5个此种菌落做证实试验，根据证实的 蜡样芽孢杆菌的菌落数，计算出该平板上的菌落数，然后 乘其稀释倍数，即得每克（毫升）样品中所含蜡样芽胞杆 菌数。
例如将0.1mL 10-4样品稀释液涂布于MYP平板上，其可 疑菌落为25个，取5个鉴定，证实四个菌落为蜡样芽孢杆菌， 则1g（mL）检样中所含蜡样芽孢杆菌数为：
10-1~10-5的 稀释液的制备
每个稀释度 36±1℃
0.1mL接种于2个
菌落计数
MYP培养基 12~20h
36±1℃ 12~20h
挑取菌落接种肉汤和营养琼脂培养基（分离培养）
形态观察
证实试验
染色镜检 培养特性 生化特性
报告
生化分型
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
2．菌数测定 • 以无菌操作将检样25g或25 ml按菌落总数测定方式，
卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。 （2）培养特性 • 本菌在肉汤中生长混浊，常有菌膜或壁环，振摇易乳化
。琼脂平板上形成的菌落不透明，表面粗糙，似毛玻璃 状或融蜡状且边缘不齐。
（5）溶菌酶试验：用直径2mm接种环取纯菌悬液 一环,接种于溶菌酶肉汤中，35℃培养24h。 该菌在本培养基（含0.001％的溶菌酶）中能 生长。如出现阴性反应,应继续培养24 h。
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
4、致病性
蜡样芽胞杆菌引起食物中毒，除必须具有大量的细菌外， 肠毒素也是重要的致病因素。
耐热性肠毒素：100℃30分钟不能被破坏，为引起呕 吐
用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-1～10-5的稀释 液。取各稀释液0.1ml，接种在选择培养基（甘露醇卵 黄多黏菌素琼脂）平板上，用L形棒涂布于整个表面， 置37℃培养12～20h后，选取菌落数在30个左右者进 行计数。蜡样芽孢杆菌在此培养基上生成的菌落为红色 （表示不发酵甘露醇）,环绕有白色至淡粉红色的晕（表 示产生卵磷脂酶）。
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
• 计数后，从中挑取5个这样的菌落作证实试验。根 据试验证实为蜡样芽孢杆菌的菌落数，计算出该 培养皿内的蜡样芽孢杆菌数，然后乘其稀释倍数 即得每克或每毫升样品所含的蜡样芽孢杆菌数。
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
选取具有15-150个典型或可疑蜡样芽孢杆菌菌落的平板, 进行计数。计算同一稀释度两个平板的平均菌落数。
（2）硝酸盐还原试验：阳性（红色）。
（3） V-P试验：接种于改良V-P培养基中，35℃ 培养48 h。加V-P试剂及肌酸数粒，静止 1h，应为阳性反应（伊红色）。
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
（4）L-酪氨酸分解试验：接种于L-酪氨酸琼脂培 养基上，35℃培养48 h,阳性反应菌落周围培 养基应出现澄清透明区（表示产生酪蛋白 酶）。阴性时应继续培养72 h再观察。
蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)的检验
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
（一）蜡样芽胞杆菌生物学性状
1、形态和染色特性 该菌为革兰氏阳性的大杆菌，菌体两端较平整，芽胞 呈椭圆形，位于菌体中央稍偏一端,多呈链状排列,无荚 膜，有周鞭毛。
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2、培养特性
（1）需氧菌，生长温度范围在10-45℃之间。最 适
生长温度为28-35℃。
（2）在普通培养基上生长良好。 本菌在普通琼脂平板上，生长 的菌落呈乳白色，不透明，直 径4-6mm,边缘不整齐，表面 粗糙，呈毛玻璃状或白蜡状。
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
（3）在血液琼脂平板上形成 浅灰色、不透明、似毛玻璃 状的菌落。菌落周围初呈草 绿色溶血,时间稍长即完全透 明。
型中毒的致病因素,常在米饭中形成。
不耐热肠毒素：是引起腹泻型胃肠炎的病因，能在各种 食物中形成。
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
5、抵抗力Leabharlann Baidu
蜡样芽胞杆菌100 ℃ 20分钟即可被杀死；对酸 碱不敏感，pH6-11对本菌基本上不受影响， pH5以下，生长可受到抑制。
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
（二）流行病学特点
1、季节性特点： 以夏、秋季，尤其是6～10月为多见。
2、食品种类 －剩饭，特别是大米饭。
－乳及乳制品、畜禽肉类制品、蔬菜、莱汤、马铃薯、 豆芽、甜点心、调味汁、色拉。
国内：与淀粉质食品相关多。
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
3、临床症状
呕吐型中毒：多见于过剩米饭和油炒饭，由耐热性肠 毒素为致病因素；潜伏期短，一般为2～3小时，最短为 30分钟，最长5～6小时；症状以呕吐，腹痉挛为主，腹 泻则少见，一般经过8～10小时而治愈。
（4）蜡状芽胞杆菌在甘露醇 卵黄多粘菌素琼脂(MYP) 上的菌落为粉红色(表示不发 酵甘露醇)，周围有粉红色的 晕（表示产生卵磷脂实酶验食）品中。蜡样芽孢杆菌检验
（5）在普通肉汤内生长迅速，肉汤混浊，常 常有菌膜或壁环，振摇易乳化。
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
3、生化性状：
（1）葡萄糖发酵试验：接种于酚红葡萄糖肉汤中， 厌氧条件下35℃培养24h。培养基应由红色变 为黄色。 （表明本菌在厌氧条件下分解葡萄糖产酸）
25×4/5×104×10＝ 2×106实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
3．分离培养 • 将检样或其稀释液划线于上述选择性培养基平板上
，置37℃培养12～20h，挑取可疑蜡样芽孢杆菌的 菌落接种于肉汤和营养琼脂培养基上做纯培养，然 后做证实试验。
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
4．证实试验 （1）形态观察 • 本菌应为G＋杆菌，宽度在1μm或1μm以上，芽孢呈
腹泻型中毒：由各种食品中不耐热肠毒素引起，潜伏 期在6小时以上，一般为6～14小时；症状以腹泻，腹痉 挛，而呕吐却不常见；病程24～36小时。
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
（三）检测方法
检样
25g(ml)+225ml生理盐水
1.蜡样芽孢杆菌检验程序：
做成10-1-10-5的稀释液 37℃，18h-24h