热原检查法
热原的检查方法
热原的检查方法
热原是一个广义名称，用于描述产生或传递热量的物体、物质或现象。在工业、能源和环境等领域中，检查热原的方法对于确保过程的正常运行和预防故障至关重要。以下是几种常见的热原检查方法：
1. 热传导检测法：这是一种测量热量传递速率的方法。热传导检测仪通常包括一个发热体和一个温度传感器。当电流通过发热体时，它会产生热量并传递到周围的物体。这样就可以测量热量的传递速率以及物体的热导率。
2. 热扫描电镜（SEM）：热SEM利用电子束来扫描样本，并通过观察样本的热反应来检查热原的性能。可以通过观察样品的温度分布图来确定样品的热特性。
3. 红外线热成像（IRT）：这是一种无接触的检测方法，可以用于观察对象的表面温度分布。热成像仪使用红外线相机（或传感器）来捕捉物体或物质的表面温度，并将其转换成彩色图像。这种方法可以用于检测特定区域的温度梯度以及区域的温度变化。
4. 热重量分析（TGA）：这是一种测量样品热性能的方法。TGA可以测量样品的质量随时间和温度的变化，从而确定样品的热稳定性和分解特性。
5. 示温器法：这种方法通常用于测量液体和气体的表面温度。温度的变化可以观察到指针的变化和液晶显示屏的变化。
总的来说，选择特定的热原检测方法取决于所需的精度、检测对象的类型、要求的速度和测量条件。在选择特定的热原检测方法之前，最好先了解不同方法的优缺点。最终的目标是针对特定的应用选择最适合的检测方法，以确保最准确、快速和可靠的结果。
注射剂热原检查法
注射剂热原检查法
一目的：制定热原检查法，规范注射剂的检验及验收。
二适用范围：适用于热原检查法的生产、检验、验收。
三责任者：品控部。
四正文
1. 本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否复合规定。
供试品家兔供试用的家兔应健康合格，体重1.7～3.0Kg，雌兔应无孕。预测体温前7日即应用同一饲料饲养，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。未经使用于热原检查的家兔；或供试品判定为符合规定，但组内升温达0.6℃的家兔；或3周内未曾使用的家兔，均应在检查供试品前3～7日内预测体温，进行挑选。挑选试验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30分钟测量体温一次，共测8次，8次体温均在38.0～39.6℃的范围内，且最高与最低体温的差数不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息2日方可供第2次检查用。
如供试品判定为不符合规定，则组内家兔不再使用。每一家兔的使用次数，用于一般药品的检查，不应超过10次。
试验前的准备在作热原检查前1～2日，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室和饲养室的温度相差不大于5℃，实验室的温度应在17～28℃，在试验全部过程中，应注意室温变化不得大于3℃，应避免噪音干扰。家兔在试验前至少1小时开始停止给食并置于适宜的装置中，直到试验完毕。家兔体温应使用精密度为±0.1℃的肛温计，或其他同样精确的测温装置，肛温计插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约为6cm，时间不得少于1分半钟，每隔30分钟测量体温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.2℃，以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。当日使用的家兔，正常体温应在38.0～39.6℃的范围内，且各兔间正常体温之差不得超过1℃。
热原和细菌内毒素的区别
热原和细菌内毒素
一、热原(progon)
医院临床在使用药品注射剂时，常有发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐、肤色灰白、休克、严重时导致死亡，这种症状称为热原反应。
为提高药品质量和用药安全，人们对热原进行了广泛的研究，直到1923年Seibert提出了用家兔检测热原的方法。在1942年美国药典首先将家兔热原检查项收入药典成为法定方法，中国药典1953年版开始收载该方法，随后的世界各国药典都以动物热原检查法作为药品质量监测的方法之一。
家兔热原检查法的优点，可在规定时间里观察到家兔的体温变化，相应反应了热原质引起哺乳类动物复杂的体温反应过程。所以，在半个多世纪以来热原检查法，为保障药品质量和用药安全发挥了重要作用。
但随着制药工业的发展和临床用药的要求，该方法的局限性越来越明显。这种热原检查法，只局限于某种药物进入体内（血循环）是否能引起体温变化或热原反应作为判断药品是否污染热原的方法，已不能满足医药工业发展的需要。其缺点：
①标准化程度低，无法判断检查样品中存在的热原质到底是什么或是哪一种物质。
②由于试验动物家兔是处在被细菌污染的环境中，通过吸入或皮肤感染细菌内毒素而被免疫，导致动物的个体差异较大。
③试验动物受到药品的药理活性干扰，而影响体温变化（如放射性药品、抗生素、生物制品等），实验结果难以判断。
④设备及实验费用昂贵（如建设动物房、水电、动物饲料等耗费），做一种药品需要几百元/次，而鲎试剂仅几十元/次。
综上情况分析，鲎试验法可避免以上动物热原检查法的不足，该技术的成功和应用真可谓是药品质量监控一场大革命。
热原检查法
热原检查法
热原检查法是一种用于检测微生物的方法，它基于微生物在特定温度
下产生的热量来进行检测。该方法被广泛应用于食品、水质、医药等
领域，具有灵敏度高、快速、可靠等优点。下面将从原理、操作步骤、优缺点和应用等方面进行详细介绍。
一、原理
热原检查法是通过测量微生物在特定温度下产生的热量来进行检测的。该方法主要基于微生物代谢活动所产生的热量，利用热电偶或红外线
传感器对微生物所产生的热量进行实时监测。当微生物数量较多时，
其代谢活动所产生的热量也会相应增加，从而能够通过仪器显示出来。
二、操作步骤
1. 样品制备：将待测样品按规定方法处理后，制备成适宜的试样。
2. 检测设备准备：根据使用说明书正确安装设备，并连接好电源和计
算机。
3. 仪器调试：按说明书要求对仪器进行调试，并进行空白测试和标准
曲线建立。
4. 样品检测：将制备好的样品加入检测仪器中，按要求设定温度和时间，进行检测。
5. 结果分析：根据仪器显示结果进行分析判断，确定样品中微生物的
种类和数量。
三、优缺点
优点：
1. 灵敏度高：热原检查法对微生物的检测灵敏度高，可以检测到微生
物数量较少的样品。
2. 快速：该方法操作简便，可以在短时间内获得检测结果，适用于快
速筛查大批量样品。
3. 可靠性强：该方法结果准确可靠，并且不受环境影响。
4. 适用范围广：热原检查法适用于多种类型的样品，包括食品、水质、医药等领域。
缺点：
1. 无法区分微生物种类：热原检查法只能确定样品中是否存在微生物以及其数量，并不能区分不同种类的微生物。
2. 对温度要求高：该方法对温度要求较高，在操作过程中需要掌握好温度控制以及时间控制等参数。
药品的安全性检查-热原
热原
一、基本知识
（一）基本概念 热原(pyrogen)系指药品中含有的能引起体温升高的杂质，
主要为细菌性热原。 方法：家兔检查法，即将一定剂量的供试品，静脉注入家
兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供 试品中所含热原的限量是否符合规定。 （二）检查对象
供Fra Baidu bibliotek脉滴注用的注射剂以及容易感染热原的品种。
热原
二、家兔检查法
3只兔：0.5小时测1次，共6次， 最高-最低＝升高的温度 结果：均升高在0.6℃以下 且升高的总数在1.3℃以下 认为符合规定。
热原检查法
理盐水 30min/次，舍
（38.5℃）
去前Baidu Nhomakorabea次
间体温差≤1℃
注意事项
1. 抓取兔子的正确方法：一手抓持兔颈背部皮毛，一手托起兔臀部。 2. 在热原检查前1～2日，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室
和饲养室的温度相差不得大于3℃，在试验全部过程中，应注意室温变化不 得大于3℃。 3. 应避免噪音干扰。 4. 整个试验操作过程应尽量轻柔，避免激惹动物，造成体温大幅波动，影响结 果。 5. 家兔在试验前至少1小时停止给食并置于适宜的装置中,直至试验完毕。 6. 读取体温：一手拿住体温计尾部，使眼与体温计保持同一水平，然后慢慢地 转动体温计 ，从正面看到水银柱时就可读出相应的温度值 ，切记不可用手 碰触水银球端 7. 静脉给药前需将供试品温热至38℃（美国药典37±2℃，英国药典38.5℃）， 注射要缓慢。
合并初试、复试8只动物，体温升高 超过0.5℃的动物数≤3只，或者超过
3只，但体温升高总数≤3.3℃
合并初试、复试8只动物，体温升高 超过0.5℃的动物数＞3只，体温升
高总数＞3.3℃
英国药典
加试3只动物，最
多加试三组，合并 初试共12只动物
6只体温升高总和≤2.80℃ 9只体温升高总和≤4.45℃ 12只体温升高总和≤6.60℃
热原与细菌内毒素的区 别
热原检查法标准操作规程
热原检查法标准操作规程
目的：
建立热原检查的基本操作，为热原检查人员提供正确的操作规程。
2.依据：
《中华人民共和国药典》2000年版二部。
3.范围：
本标准适用于采用家兔法进行的热原检查的操作。
4.职责：
QC热原检查操作人员对本标准的实施负责。
5. 程序：
5.1.实验材料及用具：
5.1.1. 天平（精度50g，家兔称重用）。
5.1.2.电热干燥箱(50~300±1)℃
5.1.3.保温箱(室温+3~60)℃
5.1.4.智能热原检测仪。
5.1.5.家兔固定盒
5.1.
6.实验用具：注射器、针头、刻度吸管、锥形瓶、硫酸纸、砂轮、洗耳球、金
属直镊、注射器盒、时钟、75%酒精棉球、手术镊。
5.1.7. 稀释剂：灭菌注射用水、氯化钠注射液。
5.2. 供试品溶液的配制：
5.2.1.打开洁净台的风机及照明开关，并用75%酒精棉球擦拭台面消毒。
5.2.2. 用75%酒精棉球擦手消毒。
5.2.3. 取供试品适量，置锥形瓶中，并标明批号。
5.2.4. 加入规定的稀释剂，制成符合规定浓度的供试品溶液，锥形瓶瓶口用经过灭菌的硫酸纸封好，放入保温箱中，温热至约38℃。
5.2.5. 供试品配制完毕后，应在30分钟内注射于家兔体内。
5.3. 实验动物：应符合规定。见家兔预选操作规程（SOP ZL5001）。
5.4. 实验前的准备：
5.4.1. 智能热原检测仪探头应每月校验一次，见智能热原检测仪使用规程（SOP
ZL0058）。
5.4.2. 用具的除热原：所有与药液接触的器具，都必须清洗干净后，置电热干燥箱
中经250℃、30分钟加热除热原。注射器、针头、手术镊清洗干净后，放入注射器盒内，密闭，放入电热干燥箱中经250℃，30分钟加热除热原。
热原的检查方法
热原的检查方法
热原检查方法是在工业生产过程中常用的一种方法，用于确定设备或系统中存在的热源。热源是指能够产生热量的物体或系统，常见的热源包括燃烧炉、锅炉、发动机等。热源检查的目的是为了确保设备或系统的正常运行，以及预防潜在的安全隐患。
一、热源检查的步骤
热源检查通常需要遵循以下几个步骤：
1. 确定热源：首先需要确定热源的位置和类型。可以通过查看设备的技术参数或者进行实地勘察来确定热源的具体情况。
2. 检查外观：对于可见的热源，可以通过外观检查来判断其是否存在异常。例如，观察燃烧炉的火焰是否正常，是否存在漏气的情况。
3. 检测温度：使用温度计等工具对热源进行温度检测。温度过高或过低都可能是热源存在问题的表现。
4. 检查燃料供应：对于燃烧炉等需要燃料的热源，需要检查燃料供应是否正常，例如燃料是否充足、燃料是否完全燃烧等。
5. 检测排放物：对于烟囱、尾气等排放物进行检测，判断是否存在超标排放的情况。
6. 检查设备运行状态：观察设备的运行状态，包括噪音、振动、漏
水等方面，判断设备是否正常工作。
7. 检查安全设施：检查热源周围的安全设施是否完善，例如防护罩、防火墙等。
二、热源检查方法的应用
热源检查方法广泛应用于各个行业和领域。以下是一些常见的应用场景：
1. 工业生产：在工业生产过程中，热源是不可或缺的一部分。通过对热源进行定期检查，可以保证设备的正常运行，提高生产效率。
2. 建筑工程：在建筑工程中，热源检查可以用于检测供暖设备的工作状态，确保居民的生活质量。
3. 能源行业：对于能源行业来说，热源是一种重要的能源形式。通过对热源进行检查，可以确保能源的有效利用，降低能源浪费。
热原检查法
热原检查法
标准操作规程
家兔法
1.实验材料及用具
1.1天平精度0.01mg或0.1 mg供试验称量用
精度0.1 mg或1 mg试剂称量用
精度10g家兔称量用
1.2电热干燥箱，250℃以上，受热均匀。
1.3恒温水浴
1.4热原测温仪或肛门体温计，精度0.1℃。
1.5家兔固定盒，盒两侧有通气孔。
1.6实验用具注射器、烧杯、三角瓶、大称量瓶、吸管、移液管、表面皿、玻璃棒、广口试剂瓶、直镊、金属制密封器（均需除热原）、时钟、脱脂棉。
1.7试剂75%乙醇、凡士林或50%甘油、生理盐水、灭菌注射用水（经细菌内毒素检，含细菌毒素低于0.25EU/mI）无热原氯化钠（经250℃30分钟或200℃1小时或180℃2小时加热原）。
2.供试品溶液的制备
2.1原料药
2.1.1精密称定适量，置烧杯、三角瓶或称量瓶中。
2.1.2按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水或无热原生理盐水，搅拌使溶解。
2.2注射液
2.2.1用75%乙醇棉球消毒安瓶颈部。
2.2.2精密量取一定量药液。
2.2.3按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水或无热原生理盐水，混匀。
3实验动物
3.1健康无伤害、体重1.7kg以上至
4.0kg左右同一来源、同一品系、合格的实验用兔，雌兔应孕，1兔1笼，标兔号。
3.2新兔预选
3.2.1新兔经同一饲料饲养7日后，进行预测体温，测温的条件与热原检查要求相同。
3.2.2测量体温时，测温仪探头或肛门温度计插入肛门的深度各兔应相同约6cm，测温时间不得少于1.5分钟。
3.2.3每隔30分钟测温1次，共8次。3.2.48次体温均在38.0℃～39.6℃（一般多选用38.4～39.4℃）的范围内，且最高最低体温差数不超过0.4℃的家兔，可供3周内实验用。
内毒素的检测方法及去除方法。
注：这部分内容为内毒素的检测方法及去除方法。热原(pyrogen)是微生物产生的内毒素，是由磷脂、脂多糖和蛋白质组成的复合物，微量即可引起恒温动物体温异常升高。其中脂多糖具有很强的热原活性。由革兰氏阴性杆菌产生的热原致热能力最强，真菌、病毒也可以产生热原。 【相关链接】热原的危害 一、热原的性质及除去热原的方法 1．高温法 热原的耐热性能良好，60℃加热1h不被分解破坏，100℃不降解，但180℃3～4h、200℃60min或250℃30～45min可使热原彻底破坏。因此耐热物品如玻璃制品、金属制品、生产过程中所用的容器和其它用具以及注射时使用的注射器等，均可采用此法破坏热原。但在通常使用的注射剂热压灭菌条件下不足以破坏热原。 2．吸附法 热原在水溶液中可被活性炭、石棉、白陶土等吸附而除去。由于活性炭性质稳定、吸附性强兼具助滤和脱色作用，故广泛用于注射剂生产，但应注意吸附药液所造成的主药的损失。 3．超滤法 热原分子量为1×106左右，体积较小，约1～5nm，可以通过一般滤器和微孔滤膜，但采用超滤法如用3.0～15nm超滤膜可将其除去。 4．蒸馏法 热原能溶于水但不挥发，但可随水蒸气的雾滴进入注射用水中，因此制备注射用水时，原水中的热原可经蒸馏除去，但需多次蒸馏，，并加有隔沫装置，单次蒸馏往往效果不理想。 5．酸碱法 热原能被强酸、强碱、强氧化剂破坏。玻璃容器及用具如配液用玻璃器皿、输液瓶等可用重铬酸钾硫酸清洁液或稀氢氧化钠处理，破坏热原。 6．其它 包括离子交换法、凝胶滤过法、反渗透法等。 二、热原的检查方法 《中国药典》2005年版规定热原检查采用家兔法，细菌内毒素检查采用鲎试剂法。 1．热原检查法 由于家兔对热原的反应与人基本相似，目前家兔法仍为各国药典规定的检查热原的法定方法。 《中国药典》2005年版规定的热原检查法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。检查结果的准确性和一致性取决于试验动物的状况、试验室条件和操作的规范性。家兔法检测内毒素的灵敏度为0.001μg/ml,试验结果接近人体真实情况，但操作繁琐费时，不能用于注射剂生产过程中的质量监控，且不适用于放射性药物、肿瘤抑制剂等细胞毒性药物制剂。 2．细菌内毒素检查法 细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来
热原检查法
第3讲
热原物质及发热机理
第3讲
热原检查法简介-4
20世纪20年代Seibert采用家兔 动物模型，通过系列实验证明了 引起注射发热的物质来源于细菌 ，其对热稳定，并可通过滤器。 之后， Seibert和其同事共同建 立了用于检测药品终产品质量的 热原试验
第3讲
热原检查法简介-5
? 1941年《美国药典》修订委员会首次组织了对 热原的协作研究，有 FDA、NIH和14个药厂参加 ，使用253只家兔进行了 3300次实验，研究结 果于1943年发表，并促使 1942年USP第12版首 次正式收载家兔热原实验方法，为注射用药提 供了一个有效和可靠的热原检测手段
13、高于0.6 ℃，低于 3.5 ℃
3只家兔体温升高总和 低于1.4℃
0.6 ℃以上， 3.5 ℃以 下
第3讲
修订背景
? １、热原实验是一个整体的动物实验，易受许多因素 的影响。动物自身的行为、生理、外部环境以及一些 实验过程等都可影响结果的准确性。
? ２、对家兔体重取消了上限3.0kg，同时取消家兔使用 次数不超过１０次的规定。（与国外药典一致、提高 家兔利用率、灵敏度不受影响）
第3讲
实验用兔灵敏度测试
? 每年不定期随机抽取体重和使用次数不同的实 验用兔，按热原检查法要求注射５ EU/kg 或 10EU/kg 内毒素标准品，应得到不符合规定的 结果。
注射剂热原和细菌内毒素检查
❖ 4．细菌内毒素检查品种约200品种以上主 要为静脉注射，约60余品种仍保留热原检 查（不包括局标准、注册标准品种、生物 制品）
❖ 5. 仍有数百种注射剂无相关检查项，2006 年又对近百个静脉注射用品种进行研究， 多数可用BET法检查,少数品种尚待继续研 究
三.标准操作规范(SOP)
❖ 1.热原检查法SOP:复试兔2.0~2.9kg， 38.8~39.2℃,3次以下者。除热原，（剂量 3~10倍？)，降温
革兰阴性细菌外膜的结构
S-LPS 的结构
Lipid A 的结构
2.理化性质 ❖ 分子量 5000～25000。形成微胶粒影响
水溶性和生物活性
❖ 水溶性：核心多糖中KDO及单糖数量，磷 酸和羧酸数，二价阳离子，三乙胺盐
❖ 吸附性：石棉，活性碳，容器，滤膜
❖ 热稳定性：250℃，30分钟以上 ❖ 酸碱，辐照，氧化剂的破坏
❖ 2.细菌内毒素检查法SOP：灵敏度复核，干 扰试验（预试验必要），定量试剂灵敏度、 斜率、回收率
❖ 3.天大天发ZRY-2 型智能热原仪SOP：校正 探头、探头脱落、曲线分析
❖ 4.天大天发BET系列细菌内毒素测定仪SOP： 加样时间、结果观察、曲线分析
四.细菌内毒素检查方法研究
❖ 1.检查方法的比较，热原（复方、杂质不定、凝 胶法干扰），凝胶法（经典，简易），定量法 （灵敏，定量，适于生产中质量控制）。灵敏度， 干扰，与临床的一致性，操作。
中国药典2015版 1142热原检测
中国药典2015版
1142热原检查法（153页）
本法系将一定剂量的供试品，静脉注人家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升髙的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。
供试用家兔供试用的家兔应健康合格，体重1.7 k g以上（用于生物制品检査用的家兔体重为1 .7〜3. 0kg)，雌兔应无孕。预测体温前7日即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。未曾用于热原检査的家兔；或供试品判定为符合规定，但组内升温达0. 6°C的家兔；或3 周内未曾使用的家兔，均应在检查供试品前7 日内预测体温，进行挑选。挑选试验的条件与检査供试品时相同，仅不注射药液，每隔30分钟测量体温1 次，共测8次，8次体温均在38.0〜39.6°C的范围内，且最高与最低体温相差不超过0.4°C的家兔，方可供热原检査用。用于热原检査后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可再供热原检査用，其中升温达0. 6°C的家兔应休息2 周以上。对用于血液制品、抗毒素和其他同一抗原性供试品检测的家兔可在5 天内重复使用1次。如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用。
试验前的准备
热原检査前1〜2 日，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室和饲养室的温度相差不得大于3℃，且应控制在17〜25°C ，在试验全部过程中，实验室温度变化不得大于3°C，应防止动物骚动并避免噪声干扰。家兔在试验前至少1 小时开始停止给食并置于宽松适宜的装置中，直至试验完毕。测量家兔体温应使用精密度为±0 . 1C的测温装置。测温探头或肛温计插人肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约6cm, 时间不得少于1 .5分钟，每隔3 0分钟测量体温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.21 , 以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。当日使用的家兔，正常体温应在38.0〜39.6℃；的范围内，且同组各兔间正常体温之差不得超过1.0℃。
中药学《15.12热原的检查方法》
+
鲎试剂 （凝固蛋白原）
凝固蛋白
凝胶
第二页，共四页。
特点：简单、迅速、灵敏
可靠性差假阳性、仅对革兰阴性菌热原敏感
仅为生产过程的控制，不能代替家兔法
3
第三页，共四页。
内容总结
1。2、CP细菌内毒素检查法：判断内毒素限量法。鲎试剂：鲎血的变形细胞溶解物。特点：简单、 迅速、灵敏。仅为生产过程的控制，不能代替家兔法
热原的检查方法 1家兔发热试验法CP：热原检查法
动物：家免三只、体重：17～/只 给药及判断：耳静脉给药； 按CP检查法判定
1
第一页，共四页。
2、CP细菌内毒素检查法：判断内毒素限量法 鲎试剂：鲎血的变形细胞溶解物 检查原理：1热原＋鲎试剂→胶凝反响
.
鲎
试
验 法
鲎试剂 （凝固酶原）
激活
细菌内毒素
Leabharlann Baidu
凝固酶
热原检查法
※热原检查法
药检文摘日期:2004-8-11 热原检查法
1绪言
热原也称为发热性物质（日本药局方）''英文叫做Pyrogen，即能够引起恒温动物体温异常升高的物质总称。与注射剂有关的发热性物质研究可追溯到16世纪。直到18世纪丹麦生理学家panum的研究中断定，“发热物质是一种对热稳定，溶于水，不溶于乙醇，由活的细菌中来的一类物质，而且微量静注后就能引起高热反应”。
1923年，Seibert肯定地证实了所有注射剂的发热原因是通过革兰氏阴性菌所产生的一种可滤过的高热稳定的热原污染结果。随后Rademaker进一步证实了Seibert的发现，并进一步强调避免细菌污染的重要性。之后的共同研究确立了使用家兔检测注射剂及水中致热物质的方法。
这个结果导致了官方的重视，20年后，美国药典于1942年USP12）进行了收载''其后，各国药典相继收载，CHP→1953年''BP→1953年''JP→1951年第6版药局方''半个多世纪来，热原检查法在保证注射剂的安全用药方面发挥了重要作用。
2热原与热原反应
热原即发热性物质，目前普遍认为是由革兰氏阴性菌所产生的内毒素（脂多糖），广义说，是所有引起恒温动物体温异常升高物质的总称。
除内毒素引起发热外，还包括病毒，干扰素以及其它种种发热物质。
热原反应是指临床输液反应，如果将携带超量热原物质的注射液静脉输入人体，通常在05-2h内引起机体严重的临床反应。表现为：机体外周皮肤血管收缩，停止排汗，散热减少，发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐，严重时可出现昏迷、休克、死亡等一系列临床症状，体温通常可上升至40℃左右。
去内毒素的方法及检查方法
去内毒素的方法及检查方法
注：这部分内容为内毒素的检测方法及去除方法。
热原(pyrogen)是微生物产生的内毒素，是由磷脂、脂多糖和蛋白质组成的复合物，微量即可引起恒温动物体温异常升高。其中脂多糖具有很强的热原活性。由革兰氏阴性杆菌产生的热原致热能力最强，真菌、病毒也可以产生热原。
【相关链接】热原的危害
一、热原的性质及除去热原的方法
1．高温法
热原的耐热性能良好，60℃加热1h不被分解破坏，100℃不降解，但180℃3～4h、200℃60min或250℃30～45min可使热原彻底破坏。因此耐热物品如玻璃制品、金属制品、生产过程中所用的容器和其它用具以及注射时使用的注射器等，均可采用此法破坏热原。但在通常使用的注射剂热压灭菌条件下不足以破坏热原。
2．吸附法
热原在水溶液中可被活性炭、石棉、白陶土等吸附而除去。由于活性炭性质稳定、吸附性强兼具助滤和脱色作用，故广泛用于注射剂生产，但应注意吸附药液所造成的主药的损失。
3．超滤法
热原分子量为1×106左右，体积较小，约1～5nm，可以通过一般滤器和微孔滤膜，但采用超滤法如用 3.0～15nm超滤膜可将其除
去。
4．蒸馏法
热原能溶于水但不挥发，但可随水蒸气的雾滴进入注射用水中，因此制备注射用水时，原水中的热原可经蒸馏除去，但需多次蒸馏，，并加有隔沫装置，单次蒸馏往往效果不理想。
5．酸碱法
热原能被强酸、强碱、强氧化剂破坏。玻璃容器及用具如配液用玻璃器皿、输液瓶等可用重铬酸钾硫酸清洁液或稀氢氧化钠处理，破坏热原。
6．其它
包括离子交换法、凝胶滤过法、反渗透法等。
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热原检查法的定义
本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体 内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况， 以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定
实验耗材去热原
试验用的注射器、针头及 一切和供试品溶液接触的耐高 温器皿,应置烘箱中用250℃加 热30分钟（英国药典200℃1h）
不耐高温器皿可置于30％ 双氧水中浸泡4h，再用细菌内 毒素检查用水充分冲洗，60℃ 烘干备用
6只体温升高总和＞ 4.30℃ 9只体温升高总和＞ 5.95℃ 12只体温升高总和＞ 6.60℃
传统热原检测方法的不足
家兔法：
费用高 结果重复性差 使用活体动物实 验
内毒素法：
只能检测细菌内毒素 鲎（hòu）资源日益 匮乏
蓝血的活化石--鲎
鲎（hòu）亦称马蹄蟹。肢口纲
（Merostomata）剑尾目（Xiphosura）海 生节肢动物，共4种，见于亚洲和北美东海 岸。虽又称马蹄蟹，但不是蟹，而与蝎、 蜘蛛以及已绝灭的三叶虫有亲缘关系。 鲎 (horseshoe crab)是一类与三叶虫 （现在只 有化石）一样古老的动物。鲎的祖先出现 在地质历史时期古生代的泥盆纪，当时恐 龙尚未崛起，原始鱼类刚刚问世，随着时 间的推移，与它同时代的动物或者进化、 或者灭绝，而惟独只有鲎从4 亿多年前问 世至今仍保留其原始而古老的相貌,所以鲎 有“活化石”之称。
三只动物出现体温升高数 高于0.5℃
不合格
体温升高≥0.6℃的 动物数量超过1只
—
英国药 3只体温升高总
典
和≤1.15℃
1.15℃ ＜3只体温升高总和 ≤2.65℃
2.80℃ ＜ 6只体温升高总和 ≤4.30℃
4.45℃ ＜ 9只体温升高总和 ≤5.95℃
3只体温升高总和＞ 2.65℃
复试及结果判 断:
英国药 典
1-3天 10ml/kg 10次 体温在38.0-39.8℃之间，
生理盐水 30min/次， （38.5℃） 舍去前2次
个体间体温差≤1℃
注意事项
1. 抓取兔子的正确方法：一手抓持兔颈背部皮毛，一手托起兔臀部。 2. 在热原检查前1～2日，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，
实验室和饲养室的温度相差不得大于3℃，在试验全部过程中，应注 意室温变化不得大于3℃。 3. 应避免噪音干扰。 4. 整个试验操作过程应尽量轻柔，避免激惹动物，造成体温大幅波动， 影响结果。 5. 家兔在试验前至少1小时停止给食并置于适宜的装置中,直至试验完毕。 6. 读取体温：一手拿住体温计尾部，使眼与体温计保持同一水平，然后 慢慢地转动体温计 ，从正面看到水银柱时就可读出相应的温度值 ， 切记不可用手碰触水银球端 7. 静脉给药前需将供试品温热至38℃（美国药典37±2℃，英国药典 38.5℃），注射要缓慢。
实验动物的选 择
—
体重
性别
条件
饲养温 试验温
度
度
中国药 ＞1.7kg 不限，雌 使用7天预养期未见异常 17-25℃
典
兔应无孕 的未试动物，或已试的
符合热原规定的动物。
变化 ≤3℃
美国药 典
≥2.0kg
不限，雌 不使用3天内已试动物， 兔应无孕 不使用热原试验不合格
的动物。
20-wenku.baidu.com3℃ 选定温 度
鲎具有很高的药用价值,，它
的血液中含有铜离子，它的血 液是蓝色的。这种蓝色血液的 提取物——“鲎试剂”，可以 准确、快速地检测人体内部组 织是否因细菌感染而致病；在 制药和食品工业中，可用它对 毒素污染进行监测。科学家也 使用鲎血研究癌症。但是，对 鲎抽血后，它们就被放生
随着各种新技术产品的出现及现 有方法存在的问题，传统热原检测 方法日趋落后，不适应于产品的热 原检测。
新方法原理
外热原
人体（分泌内热原） 体温调节中枢
发热
细胞（分泌内 热原）
新方法主要以应用动物来源或人源细胞模拟人体，通过检测内源性热原（主要为细胞 因子，如IL-6、IL-1、TNF-α）在体外进行热原检测。
新方法国外研究现状
国外对新方法的研究始于20世纪80年代，国 际发达国家实验室，包括英国国家生物制品 检定所NIBSC、德国国家疫苗及血清研究所 PEI等，均对新的体外热原检测替代方法开展
新方法国内研究现状
国内对新方法的研究与国际相比有一定 差距，2010版中国药典未收录新热原检测 方法。 国家药典委员会已经启动了体外热原检 查法的课题.
已开展的研究方法
兔新鲜全血法 鼠新鲜全血法 人新鲜全血法 人冻存全血法 PBMC细胞法
感谢聆听！
第三组：王雅静、吴显婷、郭帅、祁 宇
时间：2017年4月
初 试
1.试验前至少1小时停止给食并置于适宜的装置中，使其适应试验环 境，饲养温度与环境温度相差≤±3℃。
2.每隔30分钟测量体温1次，一般测量2次（英国药典测4次，但前2 次舍去），两次体温之差不得超过0.2℃,以此两次体温的平均值作 为该兔的正常体温。当日使用的家兔，正常体温应在38.0～39.6℃ 的范围内，且各兔间正常体温之差不得超过1℃。两次体温的平均 值作为兔的正常体温。 2、测定其正常体温后15分钟以内，自耳静 脉缓缓注入规定剂量（10ml/kg）并温热至约38℃的供试品溶液.
不合格
复试5只动物中体温升高＞ 0.6℃的动物超过1只；或合 并初始、复试8只动物体温
升高总和＞3.5℃
合并初试、复试8只动物， 体温升高超过0.5℃的动物 数＞3只，体温升高总数＞
3.3℃
英国药 加试3只动物， 典 最多加试三组， 合并初试共12 只动物
6只体温升高总和≤2.80℃ 9只体温升高总和≤4.45℃ 12只体温升高总和≤6.60℃
热源的性质
热原除具有很强的致热性外，还具有下列性质： 耐热性：180℃2小时以上或250℃30min以上才能彻底破坏热 原。因此，玻璃制品如生产过程中所用的容器和注射时使用的 注射器等，均可用高温破坏热原。 水溶性：热原能溶于水，可用大量无热原注射用水冲洗以除 去热原。 不挥发性：热原本身不挥发，但可随水蒸汽雾滴带入蒸馏水 中，故用蒸馏法制备注射用水时，蒸馏水器应有隔离装置。 滤过性：热原体积极小,直径1~50nm,可通过普通滤器进入滤 液中。 不耐强酸、强碱、强氧化剂：热原能被盐酸、硫酸、氢氧化 钠、高锰酸钾、重铬酸钾等所破坏。
热原与细菌内毒素的 区别
热原物质包括了细菌内毒素，细菌内毒素是众多 热原物质中的一种，也是最主要的一种。
一般来说内毒素是热原,但热原不仅仅包括内毒素。 不是每一种热原都具有脂多糖的结构，但所有已知 的细菌内毒素脂多糖都有热原活性。在药品生产质 量管理规范（GMP）条件下，药品生产的质量控制 一般可以接受的观点是：不存在细菌内毒素意味着 不存在热原。
3.每隔30min按前法测量其体温1次,共测6次。
4.以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高度数， 当动物升温为负值时，以0℃计算。
初试结果判 断:
合格
复试
中国药 典
美国药 典
三只动物体温升高 均低于0.6℃，且 三只动物体温升高 总和低于1.3℃
三只动物体温升 高均低于0.5℃
三只动物出现体温升高高 于0.6 ℃ ，或者三只动物 体温升高总和高于1.3℃
±3℃
英国药 ≥1.5kg 不限，雌
典
兔应无孕
20-23℃ 变化 ≤3℃
— 时间 给药 测量次数 选择条件
中国药 3-7天
N
典
美国药 7天内 N 典
8次 30min/次
8次 30min/次
8次体温均在38.0-39.6℃ 之间，且最高与最低体 温相差≤0.4℃，个体间
体温差≤1℃
体温不超过39.8℃，个 体间体温差≤1℃
•
中国药 典
美国药 典
实验步骤
另取5只动物 进行复试，试 验方法同初试
另取5只动物 进行复试，试 验方法初试
合格
复试5只动物中体温升高 ≥0.6℃的动物数不超过1只， 合并初试三只动物，体温升
高总和≤3.5℃
合并初试、复试8只动物， 体温升高超过0.5℃的动物数 ≤3只，或者超过3只，但体
温升高总数≤3.3℃
第三节 热原检查法
热原的定 义
热原（pyrogen）系指能引起恒温动物体温异常升高的致 热物质。
它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热 原及化学热原等。
这里所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌 的尸体及其代谢产物。大多数微生物都能产生热原，致热 能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆 菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也 能产生热原。它的化学结构是脂多糖和微量蛋白的复合物
了研究。
2010版欧洲药典已收录了5种新体外热原检测方法： ① 人新鲜全血—IL-1β法 ② 人新鲜全血—IL-6法 ③ 人冻存全血—IL-1β法 ④ MM6细胞—IL-6法 ⑤ PBMC细胞—IL-6法
新方法优点
① 不使用动物进行体内实验 ② 能真实地模拟人体对热原的反应 ③ 能检测非内毒素热原 ④ 能定量或半定量 ⑤ 能被广泛地应用 ⑥ 操作简单可行
热原的危 害
热原反应：热原进入机体后的数分钟至1小时内,突然 发冷、寒战、面色苍白、四肢冰冷、烦躁不安等症 状。持续时间约0.5~1小时。寒战消失后,随即高热,但 也有无寒战期而突然高热者。病人体温迅速上升,在 2~4小时体温上升至高峰,一般在39~40℃,严重者高达 41℃以上,病人面色潮红、头痛、恶心、呕吐。严重 者瞻妄、昏迷,甚至死亡。