生化实验讲义2010(10个)
生物化学实验讲义
生物化学实验报告姓名：专业：院系：学号：实验一蛋白质分子量测定------凝胶层析法一、实验原理凝胶层析法是利用凝胶把分子大小不同的物质分开的一种方法，又叫做分子筛层析法，排阻层析法。
凝胶本身是一种分子筛，它可以把分子按大小不同进行分离，如同过筛可以把大颗粒与小颗粒分开一样。
但这种“过筛”与普通的过筛不一样。
将凝胶颗粒放在适宜溶剂中浸泡，使其充分戏液膨胀，然后装入层析柱中，加入欲分离的混合物后，再以同一溶剂洗脱，在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而沿凝胶颗粒间的缝隙最先流出柱外，而小分子可以进入凝胶内部，流速缓慢，以致最后流出柱外，从而使样品中分子大小不同的物质得到分离。
凝胶是由胶体溶液凝结而成的固体物质，无论是天然凝胶还是人工凝胶，它们的内部都具有很微细的多孔网状结构。
凝胶层析法常用的天然凝胶是琼脂糖凝胶，人工合成的凝胶是聚丙烯酰胺凝胶和葡聚糖凝胶，后者的商品名为Sephadex型的各种交联葡聚糖凝胶，它具有不同孔隙度的立体网状结构的凝胶，不溶于水。
这种聚合物的立体网状结构，其孔隙大小与被分离物质分子的大小有相应的数量级。
在凝胶充分溶胀后，交联度高的，孔隙小，只有相应的小分子可以通过，适于分离小分子物质。
相反，交联度低得孔隙大，适于分离大分子物质。
利用这种性质可分离不同分子量的物质。
以下进一步来说明凝胶层析的原理。
将凝胶装载柱后，柱床总体积称为“总体积”，以Vt表示。
实质上Vt是由Vo，Vi与Vg三部分组成，即Vt=Vi+Vg+Vo。
Vo称为“孔隙体积”或“外体积”又称“外水体积”，即存在于柱床内凝胶颗粒外面孔隙之间的水相体积，相应于一般层析柱法中内流动相体积；Vi为内体积，即凝胶颗粒内部所含水相的体积，Vg为凝胶本身的体积，因此Vt-Vo等于Vi+Vg。
洗脱体积与Vo及Vi之间的关系可用下式表示：Ve=Vo+KdVi式中Ve为洗脱体积，自加入样品时算起，到组分最大浓度（峰）出现时所流出的体积；Kd为样品组分在二相间的分配系数，也可以说Kd是分子量不同的溶质在凝胶内部和外部的分配系数。
生化实验讲义：附录
附录一、722型分光光度计操作规程1. 将灵敏度旋钮调置“1”档，（放大倍率最小）。
2. 开启电源，指标灯亮，选择开关置于“T”。
3. 打开试样室盖（光门自动关闭），调节“0％T”旋钮，使数字显示为“000.0”。
4. 将装有溶液的比色皿放置比色架中。
5. 旋动仪器波长手轮，把测试所需的波长调节至刻度线处。
6. 盖上样品室盖，将参比溶液比色皿置于光路，调节透过率“100”旋钮，使数字显示为100％T（如果显示不到100％T，则可适当增加灵敏度的挡数。
同时应重复“3”，调整仪器的“000.0”）。
7. 将被测溶液置于光路中，数字表上直接读出被测溶液的透过率（T）值。
8. 吸光度A的测量，参照“3”“6”调整仪器的“000.0”和“100.0”将选择开关置于A旋动吸光度调零旋钮，使得数字显示为0.000，然后移入被测溶液，显示值即为试样的吸光度A值。
9. 浓度C的测量，选择开关由A旋至C，将已标定浓度的溶液移入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测溶液移入光路，即可读出相应的浓度值。
二、753型（53W）紫外/可见分光光度计操作规程1. 向右推开试样室盖，开显示箱电源开关，波段选择开关置于“T”，调节“0％T”旋钮，使显示器为“0.000”。
(53WB型如显示P1，即“T”未调0 )。
2. 光源电气箱电源开关向上，指示灯亮，钨灯开关向上，指示灯亮，溴钨灯亮。
氘灯开关向上，指示灯亮，点燃开关向下2～3秒后迅速拨向上，指示灯亮，氘灯点燃。
3. 用波长手轮选择波长，到位时的手轮旋转方向要固定，使用波长在200～350nm 范围内，将光源转换手柄置于“氘灯”处，在350nm～800nm范围内，将手柄置于“钨灯”处。
4. 检查T－A转换的精度：将波段选择开关置于“T”，池架第一孔置于光路，调节“100→0”旋钮，使显示为“1.000”；53WB型如显示P2即参比未调至100％。
开关置于“A”应显示“0.000”，若有偏差用小改锥调节侧面“0A”。
生物化学实验讲义
目录1.生物化学实验室规则2.实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法3.实验二蛋白质含量的测定4.实验三去污剂对红血球细胞膜稳定性的影响5.实验四盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白6.实验五动物组织核糖核酸的制备及测定7.实验六脲酶K m值的简易测定8.实验七粗脂肪提取9.实验八 ATP的生物合成10.实验九动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定11.实验十胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响生物化学实验室规则1 每个同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。
2 实验前必须认真预习，熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤，懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。
3 实验过程中要听从教员的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。
完成实验后经教员检查签字同意，方可离开实验实。
4实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。
公用试剂用毕，应立即盖严放回原处。
勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。
实验完毕，仪器洗净放好，将实验台面抹拭干净，才能离开实验室。
5使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约。
洗涤和使用仪器时，应小心仔细，防止损坏仪器。
使用贵重精密仪器时，应严格遵守操作规程，发现故障须立即报告教员，不得擅自动手检修。
6 实验室内严禁吸烟！注意水电安全，离开实验室前，必须关好水龙头，拉下电闸，严防发生事故！7 废液倒入专门的废液桶，固体废物和带残渣的废物不得倒入水槽或到处乱扔。
8 仪器损坏时，应如实向教员报告，并填写损坏仪器登记表，然后补领。
9 实验室内一切物品，未经本室负责教员批准，严禁携出室外，借物必须办理登记手续。
10每次实验课由班长负责安排值日生。
值日生的职责是负责当天实验室的安全、卫生和一切服务性的工作。
实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法实验目的1了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理2学习求标准曲线方程—最小二乘法3掌握分光光度计的使用实验原理蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
生物化学与分子生物学实验课讲义
实验一SDS碱裂解法小量制备质粒一、实验目的1．掌握SDS碱裂解法小量制备质粒的原理和方法。
2．掌握高速离心机、微量移液器等常规仪器的正确使用。
二、实验原理对培养的含有大量质粒的菌液，离心收集菌体，用含一定浓度葡萄糖的缓冲液悬浮菌体，采用碱性SDS裂解细菌的细胞壁，使质粒缓和释放出来。
同时整个溶液的pH为12-12.5，使断裂成线性细菌染色体DNA变成单链、相互交联缠绕附着在细胞壁碎片上，当液体的pH 调至中性并有高浓度存在下，大部分蛋白质和细菌染色体形成沉淀，而共价闭环质粒DNA 仍为可溶状态，离心获得含有大量质粒上清液，用RNA酶A处理除去RNA，用苯酚氯仿除去残留蛋白质，再利用核酸不溶于有机溶剂的性质，从而使其在适当浓度的亲水性有机溶剂中（乙醇、异丙醇、PEG8000）沉淀析出。
三、材料、试剂和仪器1．试剂GT116（含psiRNA质粒）菌种LB液体培养基溶液 I、溶液 II、溶液 III、无水乙醇、氯仿、异戊醇、Tris饱和酚、RNA酶A、TE、STE、卡那霉素（配方见附录）2．仪器和材料超净台、高速离心机、微量移液器、灭菌eppendorf管和tips、37℃摇床、旋涡混匀器四、实验操作步骤1．在超净台内从平板上挑取单菌落或用以其它方式保存的菌种接种于3ml LB培养基，在37℃培养15-18个小时。
2．向1 个2ml的离心管里加约1.5ml的菌液。
不要把菌液溅出造成污染。
3．10000 rpm离心2分钟。
注意离心机上放置的管重力要平衡，保护离心机。
4．弃上清液于废液瓶中。
5．重复离心一次，尽量弃去上清。
6．加入100ul冰冷的溶液I，然后剧烈振荡混匀，置冰上。
7．加入200ul溶液II，轻柔混匀，置冰上4分钟。
8．加入150ul冰冷的溶液III，轻柔混匀，置冰上5分钟。
9．12000 rpm离心5分钟。
把上清液转移到另一1.5ml离心管中（约450ul）。
10．加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）混合液，剧烈振荡，12000 rpm离心2分钟，小心的收取上层溶液（约450ul）于另一1.5ml离心管中。
化学生物学专业实验讲义
化学生物学专业实验讲义课程内容与学时：一、药用植物学实验 24学时二、化生专业综合实验(1) 34学时三、化生专业综合实验(2) 84学时四、化生专业综合实验(3) 30学时中南民族大学药学院化学生物学与药学实验教学中心《药用植物学》实验讲义向梅先舒广文刘新桥编写适用专业：药学专业药物制剂化学生物学专业2012年3月目录实验室守则 (3)实验一显微镜的构造使用与植物细胞的基本结构 (4)实验二植物组织的观察 (6)实验三植物根外形、初生及次生结构的观察 (10)实验四植物根茎的外形、初生及次生结构的观察 (14)实验五叶的外形、内部构造及繁殖器官观察 (17)实验六植物标本的采集制作及植物检索表的编制与使用 (25)实验室守则1．实验课是培养学生独立思考和理论联系实际、灵活应用能力的重要手段，也是进行科研工作的基础，必须严肃认真。
2．准时上实验课，不得无故缺席，不得迟到早退，按指定座位就坐，使用相应的显微镜。
3.实验前必须通过预习，明确实验的目的要求、内容、方法和步骤。
实验时要认真观察，独立思考，做好记录，实验完毕后要按时交实验报告。
4.老师讲解实验时，要专心听讲，并作必要的记录。
实验中如有疑问请举手，不准大声喧哗。
5．爱护实验室一切仪器设备，按操作规程使用显微镜，尽量节约水、电及擦镜纸、试剂等一切消耗物质．损坏仪器须登记，按规定赔偿。
6．每次实验必须带教科书，绘图用具(HB、2H铅笔各一支，橡皮、尺子等)和实验记录本。
7．保持实验室清洁整齐，一切实验用具用完后要擦洗干净，放回原处。
每次实验完毕，要搞好室内清洁卫生．离开实验室时要关好水、电、门、窗。
实验一显微镜的构造与使用植物细胞的基本结构及后含物的观察实验学时：4学时实验类型：验证性实验教学方式：集中授课，分小组实验一、目的要求1. 熟悉光学显微镜的构造、使用2. 掌握植物细胞的基本结构3.识别植物细胞的各种后含物4.掌握水合氯醛制片法、表面片制法5.掌握草酸钙晶体的类型和形态6.学习绘制植物显微图二、仪器用品及实验材料1. 仪器用品显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、吸水纸、擦镜纸、稀碘液、酒精灯、培养皿、解剖针、水合氯醛液，蒸馏水等2. 实验材料新鲜洋葱鳞茎、马铃薯、浙贝、半夏、黄柏、大黄、甘草、地骨皮、射干粉末；红萝卜，辣椒，叶片等。
生物化学实验讲义
的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
2. 材料与试剂
① 尿素。
-8-
② 10%氢氧化钠溶液。 ③ 1%硫酸铜溶液。 ④ 2%卵清蛋白溶液。 3. 操作方法 ① 取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。当熔化的 尿素开始硬化时，停止加热，这时尿素放出氨，形成双缩脲。将得到的物质放置 冷却后，加 10%氢氧化钠溶液约 1mL，振荡混匀，再加 1%硫酸铜溶液 1 滴，边振 荡边观察出现的粉红颜色。实验中避免添加过量硫酸铜，否则生成的蓝色氢氧化 铜溶液会掩盖粉红色的出现。 ② 向另一试管加卵清蛋白溶液约 1mL 和 10%氢氧化钠溶液约 2mL，摇匀后 加入 1%硫酸铜溶液 2 滴，边加边振荡并观察紫玫瑰色的出现。
1．使用方法
（1）将温度计插入插孔内（一般在箱顶放气调节器中部）。 （2）通电，打开电源开关，红色指示灯亮，开始加热。开启鼓风开关，促 使热空气对流。 （3）注意观察温度计。当温度计温度将要达到需要温度时，调节自动控温 旋钮，使绿色指示灯正好亮。10min 后再观察温度计和指示灯，如果温度计上所 指温度超过所需温度，而红色指示灯仍亮，则将自动控温旋钮略向反时针方向旋 转，直调到要需要的温度上，并且指示灯轮番显示红色和绿色为止。自动恒温器 旋钮在箱体正面左上方或右下方。它的刻度板不能作让温度标准指示，只能作为 调节的标记。
具体反应如下：
双缩脲反应不仅在含有两个以上肽键的物质出现，在含有一个肽键和一个 -CS-NH2，-CH2-NH2-，-CRH-NH2-，-CH2-NH2-CHNH2-CH2OH 或-CHOHCH2NH2 等基团及含
有乙二酰二氨（
）等物质也有此反应。另外，NH3 能干扰此反应，
因为 NH3 与 Cu2+可生成暗蓝色的络离子 Cu(NH3)42+，因此，一切蛋白质或二肽以上
(整理)生化实验讲义
食品生物化学实验指导书食品科学与工程学院实验一糖的颜色反应及还原性检验A. 莫氏试验①一、目的掌握莫氏（Molisch）试验鉴定糖的原理和方法。
二、原理糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚②生成紫红色缩合物。
利用这一性质可以鉴定糖。
三、实验器材棉花或滤纸；吸管1.0ml（×5）、2ml（×1）；试管1.5cm×15cm（×5）；容量瓶50ml （×5）；烧杯50ml（×5）；棕色瓶50ml（×5）；玻璃棒多根、电炉（配石棉网）多个。
四、实验试剂莫氏试剂：称取α-萘酚2.5g，溶于95％乙醇并稀释至50ml。
此试剂需新鲜配制，并贮于棕色试剂瓶中。
1％蔗糖溶液：称取蔗糖0.5g，溶于蒸馏水并定容至50ml。
1％葡萄糖溶液：称取葡萄糖0.5g，溶于蒸馏水并定容至50ml。
1％果糖溶液：称取果糖0.5g，溶于蒸馏水并定容至50ml。
1％淀粉溶液：将0.5g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混和成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅，最后以沸蒸馏水稀释至50ml。
五、操作于5支试管中，分别加入1％葡萄糖溶液、1％蔗糖溶液、1％果糖溶液与1％淀粉溶液1 mL和少许纤维素（棉花或滤纸少量浸在1ml水中），然后各加莫氏试剂2－3滴①，摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸 1.5ml（切勿振摇！！！），硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫红色环出现。
注意：①一些非糖物质（如糠醛、糖醛酸等）亦呈阳性反应。
此外，样液中如含高浓度有机化合物，将因浓硫酸的焦化作用，而出现红色，故试样浓度不宜过高。
②亦可用麝香草酚或其他苯酚化合物代替α-萘酚，麝香草酚的优点是溶液比较稳定，且灵敏度与萘酚一样。
B. 塞氏试验一、目的掌握塞氏（Seliwanoff）试验鉴定酮糖的原理和方法。
二、原理酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应；有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，成鲜红色溶液②。
生化实验
Re:生化实验讲义(理论部分)1表2—2 各种主要分离纯化方法的比较：方法原理优点缺点应用范围沉淀法蛋白质的沉淀作用操作简便、成本低廉、对蛋白质和酶有保护作用，重复性好分辨力差，纯化倍数低，蛋白质沉淀中混杂大量盐分蛋白质和酶的分级沉淀有机溶剂沉淀脱水作用和降低介电常数操作简便，分辨力较强对蛋白质或酶有变性作用，成本较高各种生物大分子的分级沉淀选择性沉淀等电点、热变性、酸碱变性等沉淀作用选择性较强，方法简便，种类较多应用范围较窄各种生物大分子的沉淀结晶法溶解度达到饱和，溶质形成规则晶体纯化效果较好，可除去微量杂质，方法简单样品的纯度、浓度都要很高，时间长蛋白质或酶等吸附层析化学、物理吸附操作简便易受离子干扰各种生物大分子的分离、脱色、和去热源离子交换层析离子基团的交换分辨力高，处理量较大需酸碱处理树脂平衡洗脱时间长能带电荷的生物大分子凝胶过滤层析分子筛的排阻效应分辨力高，不会引起变性各种凝胶介质昂贵，处理量有限制分子量有明显差别的可溶性生物大分子分配层析溶质在固定相和流动相中分配系数的差异分辨力高，重复性较好，能分离微量物质影响因子多，上样量太小用于各种生物大分子的分析鉴定亲和层析生物大分子与配体之间有特殊亲和力分辨力很高一种配体只能用于一种生物大分子，局限性大各种生物大分子聚焦层析等电点和离子交换作用分辨力高进口试制昂贵蛋白质和酶固相酶法待分离物与固相载体之间有特异亲和力分辨力高，用于连续生产有局限性抗体、抗原、酶和底物等电聚焦连续电泳等电点的差异分辨力很高，可连续制备仪器试剂昂贵蛋白质和酶高速与超速离心沉降系数或密度的差异操作方便，容量大离心机设备昂贵各种生物大分子超滤分子量大小的差异操作方便，可连续生产分辨力低，只能部分纯化各种生物大分子制备HPLC 凝胶过滤、离子交换、反向色谱等分辨力很高，直接制备出纯品制备柱和HPLC仪器昂贵各种生物大分子在分离纯化流程中，早期和晚期的分离纯化方法的选择有明显的不同：⑴ 早期分离纯化1) 特点：①粗提取液中物质成份十分复杂。
生化检验讲课课件
生化检验讲课课件一、教学内容本节课选自《临床生物化学检验》教材第三章《血液生化指标的测定》，详细内容主要包括：血糖、血脂、肝功能、肾功能等指标的测定原理、方法及其临床意义。
二、教学目标1. 理解并掌握血糖、血脂、肝功能、肾功能等生化指标的基本概念和临床意义。
2. 学习并掌握相关生化检验方法的基本原理和操作步骤。
3. 能够运用所学知识，分析并解决实际临床检验中遇到的问题。
三、教学难点与重点教学难点：生化检验方法的原理和操作步骤，尤其是误差分析和质量控制。
教学重点：血糖、血脂、肝功能、肾功能等生化指标的临床意义及其测定方法。
四、教具与学具准备1. 教具：PPT课件、生化检验操作视频、案例讨论素材。
五、教学过程1. 导入：通过一个临床案例，引发学生对生化检验在实际诊断中作用的思考。
2. 理论讲解：a. 血糖、血脂、肝功能、肾功能等生化指标的基本概念。
b. 各项指标的临床意义和测定原理。
3. 实践操作：a. 演示生化检验操作流程，讲解注意事项。
b. 学生分组讨论，分析实验过程中可能出现的误差及其原因。
4. 例题讲解：通过典型例题，让学生更好地理解和运用所学知识。
5. 随堂练习：设计相关题目，检验学生对知识点的掌握程度。
六、板书设计1. 生化检验概述a. 定义b. 分类2. 常见生化指标a. 血糖b. 血脂c. 肝功能d. 肾功能3. 生化检验方法a. 原理b. 操作步骤c. 质量控制七、作业设计1. 作业题目：a. 解释血糖、血脂、肝功能、肾功能等生化指标的临床意义。
b. 列出生化检验操作流程，并分析可能出现的误差。
2. 答案：a. 血糖、血脂、肝功能、肾功能等生化指标的临床意义见教材。
b. 生化检验操作流程及误差分析见教材和课堂讲解。
八、课后反思及拓展延伸1. 反思：本节课的教学效果，学生的掌握程度，教学方法的适用性。
2. 拓展延伸：a. 了解生化检验新技术、新方法。
b. 探讨生化检验在临床诊断中的发展趋势。
生化实验技术讲座
引言
• 按支持介质种类的不同，区带电泳可分为：
①纸电泳：用滤纸作为支持介质，多用于核苷酸的定性定量分析。 ②醋酸纤维素薄膜电泳：医学上，常用于分析血清蛋白、胎盘球
蛋白，其优点是简便迅速，便于保存照相，比纸电泳分辨率 高。 ❖ 以上二种类型的电泳，由于介质的孔径度大，没有分子筛
效应，主要靠被分离物的电荷多少进行分离。
1）生物大分子物质的分离纯化 2）分子量的测定 3）分级分离 4）溶液浓缩 5）平衡常数的测定 6）细胞及颗粒的分离
第四节 离子交换层析法
原理:根据离子交换树脂对需要分离的各种离子
的亲和力不同而达到分离的目的。
▪ 将离子交换树脂装入层析柱。
▪ 离子交换树脂通常是不溶于水的高分子物质， 分子中含有可解离的基团.含有酸性可解离基团 的称为阳离子交换树脂，可解离出H+，含有 碱性可解离基团的称为阴离子交换树脂，可解 离出OH-。
1) Sephadex G
G 后的数字为凝胶吸水值的10倍。
G 反应凝胶的交联程度、膨胀程度和分部范围。
2） SephadeX LH—20，是Sephadex G—25的羧丙基衍 生物，溶于水和亲脂性溶剂，用于分离不溶于水的物质P37。
二 、琼脂糖凝胶（Sepharose ; pharmacia;Bio-Gel(Blo-Rad)
引言
③淀粉凝胶电泳：多用于同工酶分析，凝胶铺厚些，可一层一层 剥层分析（一板多测）。天然淀粉经加工处理即可使用，但孔 径度可调性差，并且由于其批号之间的质量相差很大，很难得 到重复的电泳结果，加之电泳时间长，操作麻烦，分辨率低， 实验室中已很少使用。
④琼脂糖凝胶电泳：一般用于核酸的分离分析。琼脂糖凝胶孔径 度较大，对大部分蛋白质只有很小的分子筛效应。
生物化学实验讲义(DOC)
生化实验讲义综合型实验生物科学与工程学院溶菌酶的提取和系列性质测定在研究酶的性质、作用、反应动力学等问题时都需要使用高度纯化的酶制剂以避免干扰。
酶的提纯工作往往要求多种方法交替应用，才能得到较为满意的效果。
常用的提纯方法有盐析、有机溶剂沉淀、选择性变性、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析等。
酶蛋白在分离提纯过程中易变性失活，为能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终注意保持酶的活性如在低温下操作等，这样才能收到较好的分离提纯效果。
溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶、球蛋白G，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。
主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。
溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。
溶菌酶相对分子质量约为1.44×104，是一种强碱性蛋白质，等电点在10.0以上，并对温度和酸不敏感。
在自然界中，普遍存在于鸟类和家禽的蛋清中，哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿液、淋巴液等细胞中，植物卷心菜、萝卜、木瓜等，以蛋清含量最丰富，约为0.3%。
本实验用鸡蛋为原理，通过阳离子交换层析，硫酸铵沉淀，分子筛层析等步骤提取溶菌酶。
实验安排第一天实验理论第二天配试剂、离子交换剂的再生、平衡第三天蛋清样品上样、洗脱、硫酸铵沉淀第四天分子筛层析第五天酶活和蛋白浓度的测定第六天酶促动力学第七天 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳生化技术重要理论蛋白质提取分离技术以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。
蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。
一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的，如电泳，超速离心，超滤等。
生化实验讲义(10个)教学内容
生物化学实验讲义赵国芬2010年9月实验之前说明1.各班学习委员将成员分成10个大组,每个大组中2人一小组,大组采用循环实验的方法,同时开出不同的10个实验.2.共开出10个不同的实验实验一温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响实验二牛奶中蛋白质的提取与鉴定实验三血液葡萄糖的测定-福林（Folin）-吴宪氏法实验四双缩脲测定蛋白质的含量实验五血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验六植物组织中还原糖和总糖的含量测定实验七应用纸层析法鉴定动物组织中转氨基作用实验八植物组织中维生素C的定量测定实验九琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察实验十植物组织中DNA的提取和鉴定3.穿着要利索,做好实验记录4.注意实验室卫生和安全.一. 实验室规则:按照实验室的规则给学生讲解.二. 生物化学所用的实验技术1.样品: :血液、血浆、血清、组织植物样品：果实、花蕾、茎等无论用什么做材料，为了提取物质，需匀浆2．移液管的使用：移液管吸管移液管奥氏吸管读数时视线与凹面相平，取液时要用吸管嘴吸，放出液体时注意嘴部液体的残留问题。
3．离心机的使用：平衡（管平衡、机器平衡）缓起和慢停4．分光光度计机器原理和测定原理（比尔定律）5．水浴锅的使用三、实验报告的书写（用教务处统一印刷的报告纸写）目的、原理、仪器、药品、步骤、结果及结论、讨论实验一、温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响一、实验目的通过本实验了解酶催化的特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。
二、实验原理酶的化学本质是蛋白质。
凡是能够引起蛋白质变性的因素，都可以使酶丧失活性。
此外，温度、pH和抑制剂、激活剂对酶的活性都有显著的影响。
酶的活性通常是用测定酶作用底物在酶作用前后的变化来进行观察的。
本实验用唾液淀粉酶作用的底物—淀粉，被唾液淀粉酶分解成各种糊精、麦芽糖等水解产物的变化来观察该酶在各种环境条件下的活性。
生物化学实验讲义(最后修改版)
生物化学实验讲义(最后修改版)开课学期：5面向专业：生物工程专业考核办法：考查实验教材名称：生物化学实验讲义（自编）制定大纲的依据：专业方向及生物化学教学大纲实验课教学目标：验证及巩固课堂基本理论知识，培养学生动手能力和分析问题能力。
实验教学基本要求：了解实验目的、原理、方法、步骤、设备结构及仪器的使用方法；要求学生具备对新实验的基本设计能力，准确测定和读取数据，整理数据，最后得出正确的结论。
应开实验项目情况实验项目名称计划学时数实验目的、要求每组人数同开组数实验要求实验现状实验性质主要仪器设备双缩脲法测定蛋白质含量4掌握双缩脲法测定蛋白质含量原理和方法；学好使用722型分光光度计，了解仪器基本原理132必开已开验证722型分光光度计（8台）血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳4掌握醋酸纤维素薄膜电泳的实验原理及操作方法；学习电泳仪、电泳槽的使用方法132必开已开验证电泳仪、电泳槽（8套）酶的特异性2了解酶的特异性；掌握检查酶特异的方法和原理132必开已开验证恒温水浴槽（8）离心机（6）pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响2掌握测定酶性质的方法和原理132必开已开验证恒温水浴槽（8）离心机（6）核酸的水解及组成成分的鉴定4掌握核酸的一种水解方法和原理；学习测定核酸的组成成分132必开已开验证恒温水浴槽（8）可调节电炉（8）包埋法固定化酵母细胞4学习和掌握包埋法固定化酵母细胞216必开待开验证电泳仪、电泳槽（8套）维生素C的定量测定（磷钼酸法）4学习掌握维生素C测定方法216必开待开验证722型分光光度计（8台）燕麦水解蛋白的制备和理化性质测定香菇多糖的提取和理化性质测定（二选一）8学习水解蛋白的制备过程及水解蛋白理化性质测定方法学习多糖的提取方发及多糖理化性质的测定方法48必开待开综合GPC高效凝胶色谱分析仪（1台）水浴锅（8个）722型分光光度计（8台）恒温摇床（8台）离心机（4个）目录实验一双缩脲法测蛋白质含量…………………………………………………4实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳…………………………………………6实验三酶的特异性（专一性）…………………………………………………9实验四激活剂、抑制剂、pH、温度对酶活性的影响………………………11实验五酵母核糖核酸的水解及其组成成分的鉴定…………………………15实验六包埋法固定化酵母细胞…………………………………………17实验七维生素C的定量测定（磷钼酸法）…………………………………19实验八综合设计实验（二选一）……………………………………………21实验一：双缩脲法测蛋白质含量一、实验目的了解并掌握双缩脲法测蛋白质浓度的原理和方法二、实验原理具有两个或两个以上肽键（-CO-NH-）的化合物皆有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与形成紫色配合物，此反应和两个尿素分子缩合后生成的双脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。
生化实验技术讲座共52页
谢谢！
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚侈 。——CocoCha nel 62、少而好学，如日出之阳；壮而好学 ，如日 中之光 ；志而 好学， 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里，与其说好 的教师 是幸福 ，不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战，就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿
生化实验技术讲座
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
生化讲义（理论）
〔Ⅰ〕理论部分1. 绪论欢迎同学们到生物化学实验室来！对于大多数学生来说，这不是第一次做化学实验，但是我们相信，生物化学实验一定是大家最感兴趣、最激动人心的实验，当然也是花费最大、最辛苦的实验。
同学们在过去几年中所学到的各种实验技术和操作技能，在这些实验中将会经常用到，当然更重要的是要学会一些新的、在生物化学的科学研究中最常用的实验方法。
同学们在生物化学实验方面要取得好成绩，在很大程度上，取决于你们对这些专门化实验技术的熟练掌握和对生物化学原理的深入了解。
当同学们进行实验时，无疑将会与以前做的各种实验进行比较。
在生物化学实验中，大家会发现，极少有像无机化学和有机化学实验那样进行化学反应和分离出“克”数量级的产物。
同学们将进行的是“毫克”和“微克”数量级的研究，并且在多数情况下，生物分子是溶解在溶液中的，而且往往看不到所研究的物质，但是将会看到动态的生物化学过程和由生物分子引起的生物化学变化。
实验中所用到的各种技术和方法，将起到“眼睛”的作用，用以对各种生物化学过程进行监测。
同学们通过生物化学实验应该做到：⑴学习设计一个实验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。
⑵训练实验的动手能力，学会熟练地使用各种生物化学实验仪器，包括各种天平、各种分光光度计、各种离心机、自动部分收集器、恒流泵、核酸蛋白检测仪、冰冻干燥机、酸度计、电导率仪、高速分散器、各种电泳装置和摇床等等。
⑶学会准确翔实地记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作能力，能够整齐清洁地进行所有的实验，培养严谨细致的科学作风。
⑷掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术，尤其是各种电泳技术和层析枝术，为今后参加科研工作打下坚实的基础。
生化讲课稿
蛋白质的三级结构
化学键：次级键（疏水作用、盐键、氢键、范德华力）
蛋白质的四级结构
由各个亚基借氢键、盐键缔合而成
6．蛋白质的理化性质（两性解离、沉淀、变性、凝固及呈色反应等）。
水化膜
++ + + + ++
6．蛋白质的理化性质（两性解离、沉淀、变性、凝固及呈色反应等）
变性的概念：在某些物理和化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，也即有序 的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。 变性的本质：破坏非共价键和二硫键，不破坏蛋白质的一级结构。 变性可以导致一级结构的变化（破坏二硫键），不破坏一级结构 变性的因素：如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等 。 变性后的特点：溶解度下降、粘度增加、结晶能力消失、生物活性丧失、易被蛋白 酶水解 变性与沉淀的关系：变性的蛋白质容易沉淀，沉淀的蛋白质容易变性。但二者没有 必然的联系。
R CH COOH NH2
R CH COO- +OH R CH COO-
R CH COOH +OH NH3+ +H+
NH3+
pH=pI
+H+
NH2
pH>pI
pH<pI
阳离子
氨基酸的兼性离子
阴离子
有一混合蛋白质溶液，各种蛋白质的pl为4.6；5.0； 5.3；6.7；7.3。电泳时欲使其中4种泳向正极，缓冲 液的pH应该是：
在多肽链中其主链是由a-碳和肽键构成的重复排列。 一级结构是空间结构和生物学功能的基础 主要化学键是肽键，其次是二硫键
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
生物化学实验讲义赵国芬2010年9月实验之前说明1.各班学习委员将成员分成10个大组,每个大组中2人一小组,大组采用循环实验的方法,同时开出不同的10个实验.2.共开出10个不同的实验实验一温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响实验二牛奶中蛋白质的提取与鉴定实验三血液葡萄糖的测定-福林（Folin）-吴宪氏法实验四双缩脲测定蛋白质的含量实验五血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验六植物组织中还原糖和总糖的含量测定实验七应用纸层析法鉴定动物组织中转氨基作用实验八植物组织中维生素C的定量测定实验九琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察实验十植物组织中DNA的提取和鉴定3.穿着要利索,做好实验记录4.注意实验室卫生和安全.一. 实验室规则:按照实验室的规则给学生讲解.二. 生物化学所用的实验技术1.样品: :血液、血浆、血清、组织植物样品：果实、花蕾、茎等无论用什么做材料，为了提取物质，需匀浆2．移液管的使用：移液管吸管移液管奥氏吸管读数时视线与凹面相平，取液时要用吸管嘴吸，放出液体时注意嘴部液体的残留问题。
3．离心机的使用：平衡（管平衡、机器平衡）缓起和慢停4．分光光度计机器原理和测定原理（比尔定律）5．水浴锅的使用三、实验报告的书写（用教务处统一印刷的报告纸写）目的、原理、仪器、药品、步骤、结果及结论、讨论实验一、温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响一、实验目的通过本实验了解酶催化的特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。
二、实验原理酶的化学本质是蛋白质。
凡是能够引起蛋白质变性的因素，都可以使酶丧失活性。
此外，温度、pH和抑制剂、激活剂对酶的活性都有显著的影响。
酶的活性通常是用测定酶作用底物在酶作用前后的变化来进行观察的。
本实验用唾液淀粉酶作用的底物—淀粉，被唾液淀粉酶分解成各种糊精、麦芽糖等水解产物的变化来观察该酶在各种环境条件下的活性。
淀粉被酶水解的变化，可以用遇碘呈不同颜色来观察。
淀粉遇碘呈蓝色;糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色;最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈现颜色反应。
三、试剂1.0.5%淀粉溶液2.碘化钾－碘溶液3.1%尿素溶液。
4.1%CuSO4溶液5.磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液pH5.0-8.0:6.0.5%NaCl溶液。
7.唾液淀粉酶制备每人用自来水漱口3次，然后取20m1蒸馏水含于口中，半分钟后吐入烧杯中，纱布过滤，取滤液lOml，稀释至2Oml为稀释唾液，供实验用。
四、操作步骤一、温度对酶活性的影响（一）淀粉酶的观察1、取3支大试管，编号后按表操作2、在白色比色板上，置碘液2滴于各孔中，每隔1分钟，从第二管中取出反应液1滴与碘混合，观察颜色变化。
3、待第二管中反应液遇碘不发生颜色变化（即只呈碘的颜色）时，向各管中加入碘液1滴，摇匀，观察并记录各管颜色，说明温度对酶活性的影响。
结果与分析：结果：各管颜色分析：为什么比如：结果与分析：1号中为兰色，2号为无色，3号为兰色说明37℃为淀粉酶的活性最高的温度，淀粉水解的速度最快，其它2个温度淀粉酶的活性低，淀粉几乎没有水解。
二、pH对酶活性的影响1、取试管1支，加入pH6.8的磷酸缓冲溶液3m1、0.5%淀粉溶液2ml，混匀。
放置于37℃水浴中保温3分钟。
再加入稀释唾液2ml，混匀，继续保温，每隔l 分钟取出1滴于白瓷板上，加碘液1滴，观察淀粉水解的程度，直至碘不变色，记下保温时间。
2、另取试管5支，编号，按编号顺序分别加入pH5.0、 6.2、6.8、7.4、8.0的磷酸盐—柠檬酸缓冲溶液3m1，每管加入0.2%淀粉溶液2m1。
置37℃水浴中保温3分钟后，以1分钟的间隔，依次向1-5号试管中加入稀释唾液2m1，摇匀，37℃水浴中保温。
参照上述第一步实验的保温时间，到时迅速取出，并立即加入碘液2滴，充分摇匀，观察各管呈现的颜色，判断在不同pH条件下淀粉的水解的程度。
可以看出pH对唾液淀粉酶活性的影响，并确定最适pH。
结果与分析：结果：各管颜色分析：为什么三、酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响1.取小试管3支，按表操作2.将3支试管放入37℃水浴中，并在白色比色板上用碘液检查第二管，待碘液不变色时，向各管中加碘液1滴，观察水解情况，记录并解释结果。
结果与分析：结果：各管颜色分析：为什么实验二牛奶中蛋白质的提取与鉴定一、实验目的学习从牛奶中制备酪蛋白的方法并进行鉴定试验二、实验原理牛乳和羊乳中含丰富的蛋白质，其中主要是酪蛋白。
酪蛋白在其等电点pH溶液中溶解度降低。
所以，将牛乳的pH调整至4.8，即酪蛋白的等电点时，酪蛋白即沉淀出来。
用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪，得到纯的酪蛋白。
所得酪蛋白供定性鉴定。
除去酪蛋白的滤液中，尚含有球蛋白、清蛋白等多种蛋白质。
三、试剂1.醋酸钠缓冲液 (0.2mol/LpH4.6)2.米伦(Millon)试剂3.95%乙醇。
4.乙醚。
5.1O%NaCl6.0.5%Na2C03。
7.0.lmol/LNaOH。
8.0.2%HCl9. 饱和氢氧化钙 (Ca(OH)2)。
10. 5%醋酸铅。
四、实验操作(一)酪蛋白的制备取新鲜牛乳2Oml，放人100ml烧杯中加热至40℃。
加入2Oml 加热至同样温度的醋酸缓冲液，一边加一边摇动，并用pH计检测，调整混合液的pH为4.8（实际中准确加入牛奶与醋酸缓冲液体积相同时，可以不用调节pH）。
冷却至室温，继续放置5分钟，然后将溶液转入离心管中离心3000r/min，时间5分钟（注意离心时要对角配平），离心后清液保留做鉴定实验。
所得沉淀物悬浮在约30ml等量的醇醚混合液中，搅匀，离心3000r/min，时间5分钟，弃清液，所得沉淀摊在表面皿上，使醇醚混合液挥发。
（二）酪蛋白的性质鉴定1.溶解度取试管6支，分别加入水、10%氯化钠、0.5%碳酸钠、0.1mol/L 氢氧化钠、0.2%盐酸及饱和氢氧化钙溶液各2m1。
于每管中加入少量酪蛋白。
不断摇荡，观察记录各管中的酪蛋白溶解度。
2.米伦反应取酪蛋白少许，放置于试管中。
加入lml蒸馏水，再加入米伦试剂10滴，振摇，并徐徐加热。
观察其颜色变化。
3.含硫 (胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸)测定:取少量酪蛋白溶于lmlO.1 mol/L 氢氧化钠溶液中，再加入1-3滴5%醋酸铅，加热煮沸，溶液变为黑色。
(三)乳清中可凝固性蛋白质的鉴定将制备酪蛋白时所得的清液移入烧杯中，徐徐加热。
即出现蛋白质沉淀。
此为乳清中的球蛋白和清蛋白。
实验三、血液葡萄糖的测定-福林（Folin）-吴宪氏法一、实验目的学习并掌握福林-吴宪氏法测定血液中葡萄糖的方法二、实验原理葡萄糖(C6H126)是一种多羟基的醛类化合物。
其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，而铜试剂中的二价铜(Cu2+')被还原成砖红色的氧化亚铜（Cu2O）而沉淀。
氧化亚铜可使磷(砷)钼酸还原生成钼蓝，使溶液呈蓝色。
其生成蓝色的深度与血滤液中葡萄糖浓度成正比。
选用颜色深浅较接近于测定管一同在420nm比色，即可求出测定管中葡萄糖的含量。
三、试剂 "1.1/24mol/L硫酸溶液2.10%钨酸钠溶液3.碱性硫酸铜试剂4.磷钼酸试剂5.0.25%苯甲酸溶液6.葡萄糖贮存标准液 (lOmg/ml)7.葡萄糖应用标准液(0.lmg/ml)8. 1：4磷钼酸稀释液四、实验步骤：1. 用钨酸法制备1：10全血无蛋白滤液(相当于将原血稀释了10倍)。
2．4支血糖管按表操作用1：4磷钼酸溶液加至25刻度处后，用橡皮塞塞紧管口颠倒摇匀，用空白管调零，在420nm波长处进行比色，读取各管的密度值（光吸收值）。
3. 计算高标准管：低标准管：实验四双缩脲测定蛋白质的含量一、实验目的掌握双缩脲测定蛋白质的方法和原理二、实验原理双缩脲在碱性溶液中与Cu2+产生紫色的络合物,这一反应称“双缩脲反应”。
蛋白质分子中肽键，也能与Cu2+ 发生双缩脲反应，溶液紫色的深浅与蛋白质含量在一定范围内成正比，而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关。
该紫色的络合物在580nm处有最大吸收值，通过测定580nm处的吸光值用于谷物蛋白质含量的测定。
三、器材分光光度计分析天平移液管具塞三角瓶漏斗三角瓶四、试剂10%KOH溶液、无水乙醇、碳酸铜、酪蛋白、豆粉五、实验步骤：(一)标准曲线的绘制按下表加入各试剂，振荡10min，静置片刻，将上清过滤后580nm测定吸光值。
以吸光值为横坐标,酪蛋白含量为纵坐标,绘制标准曲线。
六、结果计算标准曲线上查得蛋白质含量（g）样品蛋白质含量（%）= ×100豆粉（g）实验五血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳一、实验目的学习醋酸纤维薄膜电泳的操作技术，了解电泳技术的基本原理，测定人血清中各种蛋白质的相对含量。
二、实验原理醋酸纤维薄膜电泳(CAME)是以醋酸纤维薄膜(CAM)作支持物的一种区带电泳技术。
本实验以醋酸纤维素薄膜为电泳支持物，分离人血清蛋白。
血清蛋白中含有清蛋白、 α－球蛋白、β－球蛋白、γ－球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、分子量、等电点及行状不同（见下表），在电场中的迁移速度不同。
分子量小、等电点低的，在相同碱性PH 缓冲体系中，带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快。
例如人血清蛋白在PH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条区带。
清蛋白泳动最快，其余依次是12,,,ααβγ----球蛋白（如图）。
三、材料、仪器与试剂 （一）、材料：人血清 （二）、仪器醋酸纤维薄膜(8×2mm)；点样器；染色皿，漂洗器，镊子；玻璃板；常压电泳仪；直流电源整流器；水平电泳槽；粗滤纸；直尺和铅笔（三）、药品巴比妥缓冲液(pH8.6)；氨基黑10B 染色液；漂洗液，洗脱液 四、实验步骤：1.浸泡:用镊子取醋酸纤维薄膜放在缓冲液中浸泡20分钟。
2、点样:把膜条从缓冲液中取出，夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体，然后铺在玻璃板上(无光泽面朝上)，将点样器在血清中沾一下（量薄薄一层为好），再在膜条一端2-3厘米处轻轻水平地落下并随时提起，这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。
3、电泳：在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等高，将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上。
膜条点样的一端放在负极上。
通电，电流强度每条膜2－2.5mA(注意强度),电泳时间约为90分钟。
4、染色:电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡5分钟。
5、漂洗:将膜条从染色液中取出后移置到漂洗液中漂洗数次至无蛋白区底色脱净为止，可得到色带清晰的电泳图谱。
结果:实验六植物组织中还原糖和总糖的含量测定（3，5－二硝基水杨酸法）一、实验目的掌握还原糖总糖测定的基本原理，学习比色定糖的基本操作。