最新 细胞培养注意事项
细胞培养的注意事项
细胞培养的注意事项细胞培养技术是现代生物技术的重要组成部分，它广泛应用于生物医学研究、药物筛选、病原体繁殖和疫苗生产等方面。
然而，在进行细胞培养时，需要注意一些细节问题，以确保细胞的生长繁殖和培养结果的稳定性。
下面，就对细胞培养中需要注意的事项进行介绍。
一、无菌操作细胞鲜活度非常敏感，细胞培养最重要的是保持无菌状态，避免细胞感染，而这需要在实验室中采取无菌操作。
在一些细胞培养实验操作中，需要消毒实验器材，瓶口、瓶盖和培养皿盖等操作工具。
要确保使用的培养基和培养液都是无菌的。
在培养细胞时候，尤其要注意勿触碰到其它无菌品或样品。
二、选择适当的细胞种类生物体内细胞种类繁多，每一种细胞都有其特定的培养条件。
因此，选择最适合自己研究的细胞类型，比如从同一物种的组织细胞、肿瘤细胞、细菌、病毒中选取。
在选择种类时，要注意是否具有比较稳定的特性，易于培养、扩增、观察，同时可用于大量研究和应用，如肝脏细胞、淋巴细胞、上皮细胞等。
三、培养条件和培养基培养细胞需要准备培养基和培养条件。
培养基中必须含有所需的营养成分，而不同类型细胞所需营养物也各不相同，所以要选择适宜的培养基，如黄草酸-蛋白酶消化培养基、麦芽糖琼脂-方解石培养基等。
同时，还应注意控制培养条件，如细胞的生长条件、生长周期、接种密度、污染、氧气浓度调节、CO2浓度，以及培养时温度、湿度、光线和气体供应控制。
四、防止细胞污染细胞培养容易受到细菌、真菌、病毒、和其他污染物的污染，这不仅对培养的细胞产生破坏，也会对实验研究造成很大的干扰。
在进行细胞培养实验之前，要先将操作工具、培养皿、试管等器具进行消毒，然后再通风室中进行操作。
同时，也应注意实验室的环境要保持干净，衣着要规范。
五、监测细胞状态细胞状态监测是细胞培养实验的重要环节，实验者需要不间歇地检查细胞的状态，如生长状况、细胞形态、生长周期、污染情况等，如果出现细胞损伤、变异、感染等，应及时将污染的细胞删除，更换培养基和器具，努力保证培养状态的良好.细胞培养是较为复杂的实验，它需要实验者细心谨慎，把握好每一个环节。
细胞培养注意事项大全
细胞培养注意事项大全一、细胞培养实验室的基本要求细胞培养实验室必须具备以下设施和基本条件，以确保实验的准确性和可靠性，同时为研究人员提供一个安全、舒适的工作环境。
1.实验室布局：实验室应合理布局，功能明确，便于清洁和消毒。
室内布局包括细胞培养区、仪器设备区、试剂储存区、清洗区、办公区等。
各区域应相对独立，避免交叉污染。
2.实验室温度和湿度：实验室应保持恒定的温度和湿度，通常温度为20-26℃，湿度为40%-60%。
3.空气洁净度：细胞培养对空气洁净度要求较高，建议配备高效空气过滤器（HEPA），确保室内空气洁净。
4.光照和空气流通：实验室应有良好的自然光照或人工照明，同时具备良好的空气流通性。
5.电源和插座：实验室应提供稳定的电源和充足的插座，以满足各种仪器设备的需要。
6.实验台和储存柜：实验台应具备防震、防腐、防火等功能，储存柜应具备防潮、防尘、防霉等功能。
7.清洁和消毒设施：实验室应配备适当的清洁和消毒设施，如紫外线灯、酒精灯、灭菌器等。
8.防护设备：实验员应佩戴防护设备，如实验服、一次性手套、口罩等，以防止细胞培养过程中的污染和交叉污染。
二、细胞培养的基本操作细胞培养是一项技术性很强的工作，需要掌握各种基本操作技能，以保证实验的准确性和可靠性。
以下是细胞培养的一些基本操作。
1.细胞复苏：将冷冻保存的细胞从液氮中取出，迅速放入37℃水浴中融化，然后离心洗涤、消化，最后加入新鲜的细胞培养基中。
2.细胞传代：当细胞密度达到一定程度时，将细胞从培养瓶中取出，消化成单个细胞，然后分种到新的培养瓶中继续培养。
3.细胞冻存：将处于对数生长期的细胞消化成单个细胞，然后与冷冻保护剂混合后放入低温冰箱中冷冻保存。
4.细胞观察：定期观察细胞的生长状况，包括生长速度、形态、颜色等方面。
5.细胞计数：通过显微镜或细胞计数仪对细胞数量进行计数，以评估细胞的生长速度和密度。
6.细胞分离：根据细胞的密度、大小、表面电荷等特性，通过离心、过滤等方法将不同细胞分离出来。
细胞培养中的注意事项
细胞培养中的注意事项
1.消毒操作
在进行细胞培养之前必须对工作台、培养器、培养物品、培养液等进行消毒处理，以避免细菌交叉污染。
必须使用丙酮或酒精将培养器表面彻底清洗干净。
2.注意温度
应选用温度恒定的培养箱或恒温槽进行培养，保持恒定的温度和湿度，避免细胞过冷或过热。
此外，还要注意避免温度突变，可能会影响细胞的生长和健康。
3.培养物的质量
该细胞的培养必须选用优质培养物，以保证细胞的品质和生长状态。
如果培养物质量不好，细胞的健康和增殖速率都会受到影响。
4.培养物的数量
在培养细胞时，必须确保培养物的数量和容积适当，以保证细胞的充分增长和合理分裂，以及抵御微生物和腐败的攻击。
5.注意操作技巧
在进行细胞培养之前一定要注意自己的操作技巧，保持双手、工具和培养器的干净，避免污染，同时避免因不当操作而对细胞造成损害。
6.培养时间的控制
在进行细胞培养时，必须严格控制培养时间，避免过度培养，以影响细胞的生长和健康。
同时也要注意密切观察生长状态，及时调整培养时间。
7.注意细胞的来源
在使用细胞进行培养的时候，必须注意细胞的来源，切勿使用受过辐射或有感染性的细胞。
同时避免使用已经失去生长能力的细胞进行培养。
8.垃圾清理
在进行细胞培养完成之后，必须将培养器和培养物进行垃圾清理处理，保持实验室的清洁卫生。
l02细胞培养的注意事项
l02细胞培养的注意事项进行细胞培养时，有几个注意事项需要注意：1. 无菌操作：细胞培养必须在无菌条件下进行，以防止细胞被外源性微生物污染。
操作时，需要使用无菌培养器具和无菌培养介质，并保持操作台面和实验室环境的洁净。
同时，注意佩戴手套和口罩，避免自身的微生物污染。
2. 维持温度：细胞培养需要在适宜的温度下进行，以保持细胞的正常生长。
一般来说，人类细胞培养通常在37摄氏度下进行，其他动物和植物细胞则可能有所不同。
可以使用恒温培养箱或培养箱来维持恒温条件。
3. 适宜的培养基：不同类型的细胞需要不同的培养基来提供适宜的营养物质。
选择合适的培养基是维持细胞生长的关键。
同时，还需要根据细胞类型添加适当的生长因子和辅助物质。
4. 细胞密度的控制：在培养细胞时，细胞的密度需要适当控制。
如果细胞密度太高，可能导致细胞凋亡或增加细胞间竞争；如果细胞密度太低，则可能影响细胞的生存和生长。
需要根据细胞种类和特性来确定适当的初始细胞密度和传代倍数。
5. 传代时间的控制：细胞在培养中会不断增殖，但过长的培养时间可能导致细胞老化或突变。
因此，需要根据细胞的生长速率和特性来确定适当的传代时间，以保持细胞的健康和功能。
6. 避光保护：一些细胞对光照非常敏感，特别是UV光，可能会导致细胞受损甚至死亡。
在培养细胞时，需要避免将细胞曝露在直接阳光下，并在培养箱中设置遮光罩。
7. 操作技巧：在进行细胞培养时，需要注意操作技巧，尽量避免剧烈晃动或刺激细胞，以防止细胞损伤或死亡。
避免使用过大压力的吸管或移液器，以减少细胞的破坏。
综上所述，进行细胞培养时，需注意无菌操作、适宜温度和培养基、细胞密度和传代时间的控制、避光保护和操作技巧等方面。
这些注意事项有助于提高细胞培养的成功率并保持细胞的健康生长。
细胞培养操作规范
细胞传代方法： 传代指针： 观察培养基颜色：当培养基的颜色由红色渐渐褪成橙黄色，颜色清亮，无杂质，无浑浊 显微镜观察细胞生长状态：细胞生长状态良好，铺满培养瓶80%以上，细胞透亮，形态清晰，间隙无杂质，确认无细菌真菌污染
传代方法：
将新的培养皿、吸管、废液缸放入工作台开启细胞培养房及工作台紫外消毒20分钟， 开启恒温水浴箱，培养液、消化液预热 关毕紫外灯，开灯，通气，点燃酒精灯 吸弃培养基，PBS清洗两次 加入2ml消化液晃动培养瓶使消化液覆盖整个细胞界面后吸弃培养液 肉眼观察细胞培养瓶底部出现一层云雾状，轻轻敲打底部有块状物脱落，显微镜下观察看到细胞间隙变大，细胞回缩变圆少量漂浮后加入10ml含血清培养基终止消化，吹打管吹打数次 将细胞悬液吸至离心管，1000rpm离心5分钟 吸弃上清，加入PBS吹打混匀， 1000rpm再次离心5分钟 吸弃上清，加入新鲜培养基，吹打混匀，按比例接种到细胞培养瓶
细胞消化时间的控制：Leabharlann 细胞冻存：胰酶消化
细胞计数
贰
壹
叁
细胞计数
细胞计数板计数室构造 数红色边框标记的四个方格内的细胞总数（如有压线则计上不计下，计左不计右） 细胞数/ml=（4个大方格细胞总数/4）×104×稀释倍数
四、细胞培养注意事项
实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射20-30分钟灭菌，以75 %酒精 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以75 %酒精擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制一.常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO孵箱（孵育培养物）、2水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。
二.无菌操作无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。
2.CO孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者20.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
三.器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：(1)新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。
2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
【1】细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项细胞培养是生物学实验中常见的一项重要技术，它广泛应用于细胞生物学、分子生物学、药理学等领域。
通过细胞培养，科研人员能够研究细胞的生长、分化、凋亡等生物学过程，同时也可以进行药物筛选、生物学效应观察等实验。
然而，细胞培养是一项复杂的工作，需要严格遵循一系列步骤和要求，并且需谨慎对待各项注意事项。
在本文中，我将以从浅入深的方式，全面探讨细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项，帮助你更深入地理解这一技术。
【2】细胞培养的具体步骤和要求让我们来了解细胞培养的具体步骤。
通常情况下，细胞培养的主要步骤包括：细胞分离、细胞计数、细胞传代、培养基准备、细胞接种、培养条件控制等。
具体来说，细胞培养的步骤包括收获细胞、细胞解聚、细胞计数、调整细胞密度、接种细胞、培养细胞、处理细胞等。
在进行这些步骤时，需要保持实验操作台面清洁整洁，常备所需培养工具、培养耗材和培养试剂，并且要准确记录实验过程中的重要参数和数据。
细胞培养的要求也是至关重要的。
要选择合适的细胞系，确保来源纯净、鉴定正确、培养活力好。
培养基的选用也十分重要，要根据不同细胞类型的需求来选择适当的培养基，并添加必要的生长因子、氨基酸、维生素等。
培养条件的控制也十分重要，包括温度、湿度、二氧化碳浓度、通风情况等。
细胞培养的灭菌和无菌操作更是必不可少，细胞培养过程中的任何污染都可能对实验结果产生影响。
【3】细胞培养的注意事项在进行细胞培养时，需要特别注意一些细节和注意事项。
要保持室内整洁，操作台面、培养箱、生物安全柜等工作台要保持干净，并且要经常消毒。
要做好个人防护工作，戴口罩、手套、工作服等，避免人体细胞对培养的影响。
要定期检查培养箱、生物安全柜等设备的运行情况，确保培养环境的稳定性和安全性。
对细胞的培养时间、传代次数、细胞密度等也需要严格控制，不可随意增加培养时间或传代次数，以免细胞出现突变或异常。
【4】对细胞培养的个人观点和理解从事细胞培养工作多年，我深知细胞培养的重要性和复杂性。
细胞培养详细过程及注意事项
细胞培养详细过程及注意事项细胞培养是在体外培养和维持生物细胞生长和繁殖的一种技术，它是生物学、医学研究和药物研发等领域的重要实验手段。
细胞培养的过程需要遵循一定的步骤和注意事项，以确保细胞的正常生长和繁殖。
细胞培养的详细过程如下：2.细胞分离：将组织或细胞样品分离，去除多余的组织或细胞，获得单个细胞的悬浮液。
分离的方法包括酶消化、机械或化学分离等。
3.细胞培养基准备：准备培养基，培养基的配制根据细胞的要求而定，可以是无血清培养基、低血清培养基或含血清的培养基。
培养基提供了细胞所需要的营养物质和生长因子。
4.细胞接种：将细胞悬浮液接种到含有培养基的培养皿或培养瓶中，密度通常在1×105至1×106个细胞/mL之间。
接种后，培养皿或培养瓶需放入培养箱中，设定适当的温度、湿度和气体环境。
5.细胞培养条件控制：细胞的生长和繁殖需要适宜的培养条件。
常规的培养条件包括37℃、5%CO2和95%湿度。
通过调节培养基的pH值、温度和培养箱内的CO2和湿度等参数，来维持良好的培养环境。
6.细胞观察和培养基更换：培养过程中，需要定期观察细胞的生长状态和形态，通过显微镜观察细胞的形态变化和细胞层的覆盖率等指标。
根据需要，定期更换培养基，以确保提供足够的营养物质和维持适宜的细胞密度。
7.细胞传代：当细胞达到充分生长的状态时，需要进行传代，即将细胞从当前培养皿或培养瓶中移至新的培养皿或培养瓶中，以保证细胞的健康和生长。
用一句话总结上述细胞培养的过程就是从细胞分离到细胞培养，并按照一定条件进行观察和传代。
在进行细胞培养时，需要注意以下事项：1.无菌操作：细胞培养需要在无菌条件下进行，避免细胞被异物或外源性微生物污染。
操作前，材料和设备需要进行消毒。
2.培养基筛选：根据细胞的特性和需求选择合适的培养基，确保细胞能够获得必要的营养物质和生长因子。
3.冻存细胞库：定期将细胞进行冻存，以备后续使用，以避免病毒污染或细胞失活。
细胞培养的注意事项
相关疾病：每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢?早走早脱身，从此专注黑生物1. 严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。
2. 不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。
3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。
4. 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)。
5. 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。
6. 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。
非科班出身经验分享1. 别怕浪费。
枪头什么的只要有可能污染就换，如果用酒精灯就什么都稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。
2. 动作要既轻柔又有力。
动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来... 刚开始的时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。
后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的最头部尽量深的在液面以下。
3. 离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍，包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。
4. 实验结束后对实验台的消毒。
紫外什么的，用前用后都照个30 分钟。
5. 身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方。
比如实验台，又比如培养箱内部。
6. 细胞的密度根据细胞的性质、传代的时间以及自己的心情来定。
培养基的话最多最多不要超过2 天就要换一次。
细胞可以不传代，但是培养基是一定要换的。
大概就是，不该碰的地方不碰，有影响的地方少碰; 该使劲的时候绝对不含糊，不该使劲的地方一定忍住。
如果是比较简陋的操作台就一定要摆个酒精灯，所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。
如果是高级台子就多用酒精喷喷。
感觉生物的实验，心疼钱就还是不要做了。
最后一点点绝对非科班的经验。
癌细胞真是坚挺。
有一次实在是不想传了，放了 5 天吧，感觉都长了几层出来，培养基都黄了。
细胞培养注意事项
细胞培养注意事项细胞培养是一项非常复杂和关键的实验技术，需要仔细选材、操作，使用特殊的设备和培养物质来维护和生长细胞。
以下是细胞培养方面的一些注意事项。
2.清洁卫生：细胞培养需要在无菌环境下进行，所以在实验同时需要注意整个实验室的清洁和卫生。
摆放培养皿前要用70%酒精消毒，实验前需要穿着实验服、手套以及戴着口罩和帽子，以避免细菌、病毒和其他污染物的污染。
3.玻璃器皿消毒：细胞培养中使用的各种玻璃器皿比如培养皿、移液管和试管等都需要高温干烤，以达到无菌状态，避免细菌的污染。
4.培养基的制备：培养基是细胞培养的重要环节，制备时应该按照说明书和协议的要求来配制各种含量的物质，这个过程中要避免任何可能的污染，同时要保持连续性的搅拌，以达到适当的均匀度。
5.细胞的处理：处理细胞的时候也需要注意无菌操作，用消毒工具取出细胞，避免使用手指抓取细胞，同时需要正确的切割和品种选择，否则会影响细胞分化和生长的快速性。
6.维护培养环境：在细胞培养过程中，需要保持适当的pH、温度、湿度和氧气含量，不同类型的细胞需要不同的培养条件，只有维持好了培养环境，细胞才能健康有效的生长。
7.对细胞进行质检：在细胞培养的过程中，每天需要对细胞进行质检，观察细胞的数量和形态、细胞的状态与否，在有必要时需要决定是否要加入新的元素来维护生长。
8.记录培养记录：每项实验操作完成后，都要详细记录实验的步骤、培养基的成分、培养条件和细胞的生长状况，以便可以及时分析可能出现的问题并作出相应的调整。
总之，细胞培养是一个耗时、复杂、困难的过程，它需要小心谨慎的选择，不断调整并做好记录。
坚持遵守这些注意事项和要求，才能保证细胞培养实验最好的效果和结果。
细胞培养的步骤以及注意事项
细胞培养的步骤以及注意事项
细胞培养是一种重要的实验技术，它有助于我们了解细胞生物学、生理学以及疾病的发生和发展机制。
以下是细胞培养的步骤以及注意事项：
步骤：
1. 细胞的收集：从组织样本中得到细胞，比如从动物、植物或
人类的器官中取得。
2. 细胞的处理：将细胞进行脱离、切割、分离等处理，从而得
到单个的细胞。
3. 细胞的培养基准备：选择适合细胞类型的培养基，加入营养
物质和生长因子以维持细胞的生长和分裂。
4. 细胞的接种：将处理好的单个细胞加入到培养基中，并放置
于培养箱中，控制其温度、湿度、氧气和二氧化碳浓度等环境因素。
5. 细胞的观察和维护：观察细胞的形态、生长速度、分裂情况等，同时需要定期更换培养基、检测细胞的纯度和健康状态。
注意事项：
1. 保持无菌环境：细胞培养需要在无菌环境下进行，防止培养
基和细胞被细菌、真菌等污染。
2. 确保细胞的纯度：细胞培养需要保证细胞的纯度，避免异质
性细胞或细胞株的混淆。
3. 控制培养环境：细胞培养需要控制培养环境，包括温度、湿度、氧气和二氧化碳等，以确保细胞的正常生长和分裂。
4. 定期更换培养基：培养基中的营养物质和生长因子会随着时间的推移而减少，因此需要定期更换培养基，以维持细胞的生长和分裂。
5. 避免过度培养：过度培养会影响细胞的健康和生长速度，因此需要在适当的时候停止培养，或将细胞进行冻存以备后续使用。
细胞操作注意事项
细胞操作注意事项
在进行任何细胞操作之前，请务必遵循以下注意事项：
1. 实验前的准备工作十分重要。
确保实验室环境符合要求，消毒并准备好所需的工具和试剂。
2. 穿戴个人防护装备。
包括实验服、手套、口罩和护目镜等。
这将保护您的安全，并减少对细胞的污染。
3. 细胞培养应在无菌条件下进行。
确认培养皿和培养液都是无菌的，并遵循正确的操作步骤。
4. 避免对细胞暴露在不合适的温度、湿度和光照条件下。
细胞应在恒定的温度和湿度下保存，并避免过度曝光于强光。
5. 注意细胞的传代次数。
过度传代可能导致细胞株的突变或退化，影响实验结果。
6. 使用正确的培养基和培养液。
不同类型的细胞可能需要特定的培养基和培养液，选择适合您研究的细胞类型的培养条件。
7. 严格控制实验过程中的污染。
避免细菌、真菌和其他细胞的污染，尽可能使用无菌技术操作。
8. 实验结束后，及时清理工作区。
彻底清洗和消毒使用过的实验器具，并正确处置实验废弃物。
请牢记以上注意事项，在细胞操作过程中保持专注和耐心，以确保实验的准确性和可靠性。
细胞培养注意事项
（3）一次将所有的所需要试剂、工具放入工作台。不要做到半路，又出工作间拿东西，这样增加了污染的机会。
（4）整个操作要快、动作要轻、而且不要干其他的事情。比如手机响了，最好不要接。我一般操作的时候将手机关了，手机声音响起，好烦躁。
细胞培养注意事项
1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心****，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。5. 定期检测下列项目：5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水
细胞培养注意事项及常见问题解答
细胞培养注意事项及常见问题解答一、无菌操作（来自网络）细胞培养最看重的就是无菌操作，无菌操作是细胞培养是否成功的关键点。
1、使用前用75%的乙醇擦拭细胞间的桌面、超净台、孵箱和离心机等；紫外照射细胞间和超净台30分钟以上才可以进入使用。
2、进入细胞间必须穿上隔离服或者细胞间专用的白大衣，戴上手套和口罩，换上拖鞋，严格意义上来说，帽子也是要带的。
除了隔离服，其他穿着物品最好一次性使用。
3、凡是放入超净台中的不是一次性使用的物品事先都需要经过高压灭菌；不能进行高压处理的物品也需要经过75%的乙醇消毒。
包括酒精灯、吸管、移液器、试管架、培养皿、废液缸等。
4、操作过程中尽量接近酒精灯；用镊子拿取枪头、离心管、吸管等物品时，避免碰到使用端；不要在开口器皿的上端进行操作。
5、细胞间的设计都是一层层的隔间，每一层隔间的拉门都必须关好；当有人在超净台工作时，其他人员不允许进入操作区域。
（外流式及垂直式超净台结构和原理示意图）二、培养基（来自网络）1、培养基的选择依细胞种类而定。
如果是从别的实验室借来的细胞，最初阶段一定要保持细胞原有的培养条件；特殊种类的细胞，比如内皮细胞，可以借鉴网上培养成功的条件，添加一些特定成分。
2、液体培养基的保存条件应是冰箱4度冷藏。
小六儿见过有的大实验室细胞量多，一次性购买的培养基瓶数也多，有些人可能觉得-20冰箱保存时间会更久一些。
但是经过冷冻后的培养基再溶化时，你会发现培养基的颜色发生变化，颜色变深，这就是培养基的PH值升高了。
3、培养基中都含有大量的谷氨酰胺，用来合成细胞生长所需要的核酸和蛋白质。
但是谷氨酰胺在溶液中不稳定，保存4周后的培养基需要重新加入谷氨酰胺。
所以尽量不要大批量购买培养，也不要一次配太多的培养基。
4、细胞适合的培养基PH值是7.2-7.4，偏高或偏低都不好，但相对于碱性条件而言，细胞更耐酸。
原代细胞对PH值的变化很敏感，而永生性细胞相对来说忍受力更强一些。
5、造成皿或瓶内培养基PH值变化的原因有很多：细胞增殖速度的快慢、孵箱内二氧化碳的浓度不准确、培养瓶的盖子拧紧或者发生了污染。
h1299细胞培养注意事项
h1299细胞培养注意事项
在进行h1299细胞的培养时，需要注意以下几个事项：
1. 使用无菌技术：在进行细胞培养前，必须确保所有的培养器具和培养液都是无菌的，以防止细菌和真菌的污染。
2. 维持细胞的适宜生长环境：h1299细胞通常在无血清培养条件下生长，因此需要添加适量的培养因子、激素和营养物质以促进细胞的增殖和存活。
3. 控制细胞的密度：细胞的密度过高会导致营养物质不足和代谢产物积累，从而影响细胞的生长和健康。
因此，在培养过程中需要定期检查细胞密度，并根据需要进行稀释或传代。
4. 培养液的更换：用于h1299细胞培养的培养液需要定期更换，以去除细胞产生的代谢产物和降低细胞毒性。
5. 保持培养条件的稳定：细胞的生长需要一定的温度、湿度和二氧化碳浓度，因此，在h1299细胞培养过程中需要确保培养箱或培养笼的稳定性，以维持合适的培养条件。
6. 避免细胞的交叉污染：h1299细胞应该与其他细胞系进行分开培养，并使用专门的培养器具和培养液，以避免细胞的交叉污染。
7. 定期检测细胞的健康状态：定期观察细胞的形态和生长状态，如果发现细胞出现异常变化，如颜色变化、聚集或浮游性减弱等，应及时进行检测和处理。
细胞培养中的注意事项
细胞培养中的注意事项细胞培养是现代生命科学研究中非常重要的实验技术之一，它被广泛应用于细胞生物学、生物医学研究、药物筛选等领域。
在进行细胞培养实验时，研究者需要严格遵守一些注意事项，以确保实验的可靠性和结果的准确性。
本文将针对细胞培养中的注意事项进行详细的介绍。
首先，实验者需要使用无菌技术进行细胞培养。
细胞在体外培养时非常容易被外界的微生物污染，因此在进行细胞培养实验前，需要准备好无菌培养物料和无菌操作器具。
实验者应严格遵守无菌技术操作规范，包括实验装置、培养器皿、培养液和培养工具等必须经过高温高压灭菌处理，同时实验操作者必须佩戴无菌手套、口罩和无菌操作衣物，以防止外界微生物的污染。
其次，实验者需要定期检测和维护细胞的纯度。
细胞培养中，细胞的纯度是一个非常重要的因素。
实验者需要定期检测细胞的纯度，并确保细胞质量的稳定。
此外，实验者还需要定期检查细胞的形态和生长状态，以了解细胞是否受到了外界或内部因素的干扰。
对于有异质细胞的培养物，实验者需要定期进行亚克隆化处理，以确保研究结果的准确性。
另外，在细胞培养中，控制细胞的传代次数也是十分关键的。
细胞的传代次数过多会导致细胞分化甚至突变，影响研究结果的可靠性。
因此，实验者需要根据细胞类型的特性和生长速度，合理控制细胞的传代次数。
通常情况下，当细胞培养达到80% - 90% 的密度时，进行传代操作，以保证细胞的健康状态和繁殖能力。
此外，细胞培养液中的温度、湿度和气体条件也是需要注意的。
细胞的生长需要适宜的温度、湿度和气体成分。
通常情况下，细胞培养箱中的温度维持在37°C左右，湿度维持在95%，并通过调整培养箱中的CO2气体浓度来维持适宜的酸碱平衡。
实验者需要定期检测和调整这些条件，以保证细胞的正常生长和稳定性。
对于细胞培养中常见的问题，研究者需要及时解决。
细胞培养过程中，会遇到各种问题，比如细胞的不正常增殖、细胞的凋亡和细胞的染色体异常等。
当发现这些问题时，实验者需要尽快排除干扰因素，并及时采取措施来解决问题。
细胞培养注意事项
细胞培养注意事项（from Internet）1）无菌操作：a.实验进行前，无菌操作台一紫外灯照射30～60min灭菌，以70%酒精擦拭无菌操作台面，实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%酒精擦拭无菌操作台面。
b.实验用品以70%酒精擦拭后才带入无菌操作台内，实验操作应在台面中央无菌区域，勿在边缘非无菌区域操作。
各种操作动作要轻、准确，不能乱碰。
吸取两种以上的使用液时，要注意更换吸管。
c.小心去用无菌实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶身并握住瓶身，倾斜45O角取用，将瓶盖改口朝上放置桌面。
d.操作过程当中，应小心毒性物品，例如DMSO等，避免尖锐针头伤害等。
e.定期检测CO2钢瓶的压力，培养箱的CO2浓度、温度、水盘收否有污染（本实验室使用的为蓝盖瓶装无菌水，应每周更换。
f.定期打扫细胞房：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子，然后用3‰新洁尔灭or0.5%过氧乙酸擦拭g.CO2培养箱灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75%酒精擦拭or0.5%过氧乙酸，可以的话再用紫外灯照射2）实验用品（均为无菌）a.培养基&胰酶细胞培养基通常需添加10%血清，1%双抗（penicillin/streptomycin，P/S）。
血清中若出现凝絮物，普遍原因是血清中的脂蛋白变性及解冻后，血清中存在血纤维蛋白造成，这些凝絮沉淀物不会影响血清本身的品质。
一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。
因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
在溶解的一周内使用贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液。
胰蛋白酶在4℃就可能开始降解，如果在室温下放置超过30分钟，就会变得不稳定。
培养基使用前应从冰箱中取出预热。
b.（使用过的玻璃器皿要先泡入来苏尔/洗涤剂溶液中，刷洗干净，用清水洗净，水分稍凉干后再泡酸液）玻璃瓶用酸液浸泡12h后，用自来水冲洗15+次，最后用双蒸水过3+次，先烘干，再用，铝箔纸包覆瓶盖，高温高压蒸汽灭菌，放在烘箱中烘干，使用之前，在超净台上用紫外照射30min后，可使用。
细胞培养流程及注意事项
细胞培养流程及注意事项COOKCELL一、细胞培养概念细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。
细胞培养可分为原代培养和传代培养；直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器（同样底面积的容器）中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。
二、细胞复苏1、细胞复苏遵循“慢冻快融”的原则，所以细胞冻存管从液氮中取出后，稍等待液氮挥发后，将冻存管放入37℃水浴中轻轻摇动融化（约1min）2、吸取细胞混悬液加入离心管，800rpm离心3min，弃去上清3、加入对应细胞的完全培养基，重悬细胞，再以5x105个/ml细胞接种至培养瓶/培养皿中4、放入37℃培养箱中，CO2 5%培养，定时观察细胞培养情况三、细胞冻存1、悬浮细胞：吸取细胞悬液，800rpm离心3min，弃掉上清2、贴壁细胞：用移液管或者巴氏吸管吸取培养液，加入PBS轻轻摇晃培养瓶/培养皿数次，冲洗细胞，然后吸取丢弃PBS，加入胰酶消化，轻轻摇晃培养瓶/培养皿数次，使胰酶与细胞表面充分接触，放到37℃孵育2-3min（对于新培养的细胞，建议消化时每隔30s镜下观察消化情况，以确定合适的消化时间），加入含血清完全培养基终止消化，用移液器吸取瓶内液体轻轻冲洗容器表面，使细胞流入容器底部，重复2-3次，将细胞悬液移到离心管中，800rpm离心3min，弃去上清3、加入冻存液：加入细胞冻存液（最好是用10% DMSO 完全培养基冻存细胞）重悬细胞，使细胞浓度在（5～10)×105个/ml，然后分装到冻存管中4、程序降温盒：4℃放30min → -80℃ 过夜（至少4-8h）→ 液氮（长期保存）5、温馨提醒：4℃ 30min这个步骤一定不能省略，否则冻存液无法渗透到细胞，易产生冰晶导致细胞受损；细胞-80℃保存不要超过一个月，长期保存要放在液氮中，保持细胞活性赛库生物的细胞每一个批次都会进行一次支原体和STR检测四、细胞传代1、悬浮细胞：吸取细胞悬液，800rpm离心3min，弃掉上清，加入新鲜的含血清的完全培养基，用吸头小心重悬细胞，按细胞生长密度将细胞悬液均匀分配到培养容器中进行传代培养2、贴壁细胞：用移液管或者巴氏吸管吸取培养液，加入PBS轻轻摇晃培养瓶/培养皿数次，冲洗细胞，然后吸取丢弃PBS，加入胰酶消化，轻轻摇晃培养瓶/培养皿数次，使胰酶与细胞表面充分接触，放到37℃孵育2-3min，加入含血清完全培养基终止消化，用移液器吸取瓶内液体轻轻冲洗容器表面，使细胞流入容器底部，重复2-3次，将细胞悬液移到离心管中，800rpm离心3min，弃去上清，加入新的含血清完全培养液重悬成单细胞悬液，按细胞生长密度将细胞悬液均匀分配到培养容器中进行传代培养3、将培养容器放到37℃孵育，第二天显微镜下观察细胞生长情况4、温馨提示：细胞传代需等面积按比例传代，如T25培养瓶培养，需1:2传代，应是将细胞悬液分为两份各加入T25培养瓶中进行培养五、注意事项1、细胞的冻存和复苏一定要遵循“慢冻快融”的原则，最大限度的保证细胞活性2、培养皿/培养瓶/培养板选择：贴壁细胞培养选用TC处理的3、使用L-15培养基时，培养瓶要用非透气盖的培养瓶，因为L-15培养基的成分会与CO2反应4、细胞培养换液：一般2-3天换液，有的细胞生长速度慢，可适当延长，但是也不要超过7天换液，如果换液后培养基快速变黄，则大概率是细胞被污染5、培养细胞最适PH为7.2-7.4，过酸、过碱会导致细胞形态发生异常，甚至死亡6、细胞密度达到70%-80%汇合度，此时处于对数生长期，最适合传代7、当细胞出现污染时，细菌污染可视污染程度决定是否加抗生素挽救，真菌污染和支原体污染建议不要（除非细胞很珍贵，难获得），当出现污染需要加抗生素处理时，在开瓶前需要把所有东西都准备好，并将操作台上无关的用品移走，避免造成二次污染8、移液废液缸建议外置，内置废液缸易引入污染9、在超净台/生物安全柜操作时左右手不能交叉，放置实验用品时需75%乙醇消毒再放入，严格按照操作规范进行。
细胞培养注意事项(入门级)
细胞培养注意事项（入门级）总的原则：无菌操作、保证细胞培养环境的稳定性按时间顺序整理1、细胞房和生物安全柜（或超净工作台）先开紫外照射30min。
作用：对环境灭菌（空气）。
（备注：如果着急，至少也要开15分钟）在做实验之前考虑好需要哪些物品。
开始照射之前，将所需要用到的物品都放到生物安全柜（或超净工作台）里面。
常用移液枪或电动移液器等，需要在工作台上放置一套专用设备。
细胞培养箱一般都已经调整好。
定期留意一下二氧化碳是否足够。
不够及时更换。
2、显微镜需要定期消毒酒精擦拭。
注意：显微镜一般都放在细胞房。
3、进入实验之前，首先给自己带上拖鞋、头套，口罩，实验服，手套（手套带双层）。
注意：手套要将袖口套进去。
实验服、拖鞋最好是细胞房专用。
4、开始操作之前先观察细胞。
首先观察细胞培养液的颜色。
现在的细胞培养液通常都放有酸碱指示剂（绝大部分是酚红）。
细胞在培养生长过程中，不断在培养液上清中累积酸性物质，时间长了，培养液变为黄色（同时培养液中营养物质耗尽）。
其次镜下观察细胞的生长状态是否良好，是否需要传代。
如果生长状态不好，需要对培养液进行调整（一般是加大血清浓度）。
过于密集出现大片融合或太密集而导致细胞脱落，则进行传代。
如果长势良好，且细胞培养液颜色未发生变化，可以酌情进行1/2、1/3、1/4换液，也可以全换液。
总之，视细胞生长情况而定。
5、细胞培养预准备：首先是准备各种溶液。
第一是配制溶液过程中要用到的水。
水用纯水，高压灭菌之后，再去内毒素。
去内毒素方法很多，最简单可以放在烘箱180度3小时。
或者过去内毒素的柱子后，高压灭菌。
第二，各种溶液灭菌：抗生素用去内毒素水配制后，直接过滤除菌（过0.22u滤头）。
可以用一次性无菌注射器过一次性0.22u滤头。
现在用的培养液，如果是商业化液体培养基，不用处理。
如果是粉末，需要用去内毒素水在生物安全柜（或超净工作台）进行配制，再过滤除菌。
可以先配浓缩液（如10×），过滤除菌后。
neuro2a细胞培养注意事项
neuro2a细胞培养注意事项细胞培养是一项非常重要的实验技术，在神经科学研究领域中，使用neuro2a（N2a）细胞是常见的模型。
为了成功进行N2a细胞培养，以下是一些需要注意的事项：1.无菌操作：在进行细胞培养之前，必须保证实验室环境是无菌的。
使用无菌培养器具和材料，并在实验过程中遵守无菌操作规范，以防止细胞受到细菌、霉菌等污染。
2. 培养基准备：使用适当的培养基来支持N2a细胞的生长和增殖。
常见的N2a培养基是DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）或MEM （Minimum Essential Medium），其中加入适当的补充物，如胎牛血清（FBS）或小牛血清（CS）等。
3.细胞接种密度：在接种N2a细胞时，需要控制适当的接种密度。
一般来说，细胞数目应该适中，既不过于稀疏又不过于密集。
过于稀疏的细胞密度会导致细胞生长缓慢，而过于密集的细胞密度会导致细胞互相竞争营养，影响细胞健康。
4.培养器具选择：选择适当的培养器具来培养N2a细胞。
常见的培养器具包括培养皿、培养瓶和多孔板等。
选择合适的培养器具要考虑细胞接触面积和透气性等因素。
5.培养条件：提供适当的培养条件可以促进N2a细胞的生长和分化。
维持恒定的温度（一般为37°C）和CO2浓度（一般为5%）是必要的。
此外，定期更换培养基也是必要的，以保持细胞处于良好的生长状态。
6.营养物质供给：为了支持细胞的生长和代谢，培养基中要提供足够的营养物质，如氨基酸、维生素、葡萄糖等。
培养基中还可以添加其他成分，如神经生长因子（NGF）或文库溶菌酶等，以促进细胞分化和生长。
7.细胞分离：当N2a细胞达到一定的密度时，需要进行细胞分离或传代，以维持细胞的健康和增殖。
细胞分离可以使用胰酶等消化酶来将细胞从培养器具中剥离出来，并通过离心等方法收集细胞。
8.聚集物处理：N2a细胞有时候会形成聚集物，影响细胞的生长和扩散。
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注意事项
1、实验进行前，无菌室及无菌操作台（laminarflow）
以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%乙醇擦拭无菌操 作台面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开 始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培 养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间 污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以 70%ethanol擦拭无菌操作台面。操作间隔应让无菌操 作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株的操作。
细胞培养
细胞培养也叫细胞克隆技术。细胞培养技术可以由一
个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的 多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培 养本身就是细胞的克隆。
意义：通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。
因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养 技术是生物技术中最核心、最基础的技术。
遇到的问题
冷冻保存细胞之方法？ 冷冻保存方法一：冷冻管置于4 C 30~60分钟 → (-20 C
30分钟) → -80 C 16~18小时(或隔夜)→液氮槽vapor phase长期储存。 冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温 机中每分钟降1-3 C 至–80 C 以下，再放入液氮槽 vaporphase长期储存。*-20 C 不可超过1小时，以防止 冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接 放入-80C冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
注意事项
2、无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，
例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置， 其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实 验用品以70%ethanol擦拭后才带入无菌操作台内。实 验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌 区域操作。
避免造成污染。勿碰触
遇到的问题
可否使用与原先培养条件不同之培养基？ 不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培
养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养 基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
可否使用与原先培养条件不同之血清种类？ 不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，
所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的 影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量 或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞 无法存活。
遇到的问题
附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA浓度？应如
何处理？ 一般使用胰蛋白酶-EDTA 。浓度为0.05% 胰蛋白酶0.53mMEDTA.4Na。第一次开瓶后应立即少量分装于 无菌试管中，保存于–20C，避免反复冷冻解冻造成 trypsin之活性降低，并可减少污染之机会。
遇到的问题
细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？ 除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细
胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入 含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换 新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解 冻后细胞无法生长或贴附之问题。
吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开的容器正上 方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身， 倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
注意事项
4、工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套
后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株 应特别小心操作。操作过程中，小心毒性药品，例如 DMSO及TPA等，并避免尖锐针头之伤害等。
遇到的问题
DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？ 冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture
grade之DMSO(如SigmaD2650)，其本身即为无菌状 况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保 存于4C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出 有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO， 则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜。 注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将 DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。
细胞培养的设施
超净台（超净工作台内力求简洁，凡与本室工作无直接关
系的物品一律不能放入，以保持无菌状 。） 恒温培养箱（产品出厂前已经过严格调试，控温仪菜单设 定数据，请勿随意修改；勿放置易燃易爆物品进行加温， 严防发生危险；请勿放置高酸高碱物品，防止箱体腐损； 要经常保持箱内外清洁和水箱内水的清洁。） 倒置显微镜（在任何情况下操作人员不能用棉团、干布块 或干镜头纸擦试镜头表面，否则会刮伤镜头表面，严重损 坏镜头，也不要用水擦试镜头，这样会在镜头表面残留一 些 水迹，因而可能滋生霉菌，严重损坏显微镜。） 液氮储存罐、电热鼓风干燥箱、冰柜、电子天平、恒温水 浴槽、离心机、压力蒸汽消毒器。
量不要超过1个月，如在-20度存放时间可长一些，但 最好也不要超过3-4个月，可能对于永生化细胞株来说 要求不是太高，细胞娇弱，放置时间不宜过长。
注意事项
7、开紫外线照射台的时候，就将培养基、酶、
DHANKS液那到室外让它自然升温。这样40分钟后， 温度也升上来了。有很多人将其放到37度水浴锅里加 热。一定要注意水浴锅的卫生，有的常年不清洗，里 面很脏，容易在外面瓶身上吸附大量细菌。因此用时 也一定要勤换水。从水浴锅拿出后，最好找个毛巾擦 干上面的水。
注意事项
5、定期检测下列项目：5.1CO2钢瓶之CO2压力5.2CO2
培养箱之CO2浓度、温度、及水盘是否有污染（水盘 的水用无菌水，每周更换）。5.3.无菌操作台内之 airflow压力，定期更换紫外线灯管及HEPA过滤膜， 预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。
注意事项
6、粉末培养基配制好后（加了血清），一般在4度尽
遇到的问题
应如何避免细胞污染？ 细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和
霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作 室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格无菌 操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培 养基配制是减低污染之最好方法。