3.定量测量方法的线性评估
EP6-A定量测量方法的线性评价-中文全文
EP6-A
ISBN 1-56238-498-8
V olume 23 Number 16 ISSN 0273-3099
Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures:
A Statistical Approach;Approved Guideline
EP6-A：定量测量方法的线性评价： 一种统计学方法，批准指南
NCCLS…
通过自愿一致化的方式为世界医学科学团体服务
NCCLS是医疗领域一个非赢利性的，不同学科之间，自愿参与的促进标准化和建立指南的教育组织。
NCCLS创建于1968年并获得美国国家标准研究院的认可。NCCLS所依据的原则是，对病人高质量服务所需的临床实验室检测，自愿一致的标准是必不可少的。NCCLS通过各临床实验室、检验团体学会、工厂和政府机构的参与而代表临床检验界。
叙述了文件叙述了实验室的程序、常规和参考方法以及评估方案可应用于所有检验学科。文件审核的一致化过程由一些正式的步骤组成，叙述了NCCLS文件和规范的编制如何发展到被接受为临床实验室标准。
出版物
NCCLS文件以标准、指南、委员会报告出版。
标准：通过一致化过程形成的文件，并对材料、方法、或实践以不能修改方式明确规定其特定的基本要求。此外，标准也可以包含明确规定的选定要素。
指南：通过一致化过程形成的文件，叙述了用于临床检验界的一般实验操作、方法或材料的规范。使用者可以使用成文文件或修改指南以适应特定的需要。
报告： 没有经过一致化审定过程的文件，由理事会颁布。
CLSI系列文件---定量检测系统线性评价方法(EP6-A)
定量检测系统线性评价方法— EP6-A法
线性范围是分析方法的重要技术指标之一，线性范围越宽，说明该分析方法的性能越好，越适用于临床。目前评价分析方法线性范围的方法很多，如：目测法、EP6-P法、美国临床病理学家协会设备委员会（CAP-IRC）法、EP6-A法等。本文主要介绍了目前评价分析方法线性范围最好的方法即EP6-A法。
1. 仪器熟悉阶段
在线性评价实验之前，仪器应当在实验室安装并使用相当长的一段时间，以便实验者熟练掌握仪器的操作，并保证仪器经过正确的定标、实验样本经过适当的准备。如果仪器生产商为实验者提供了培训，这也可以作为本阶段的一个部分。
2. 线性评价实验
2.1 实验样本的数目
线性评价实验的样本数目依据实验目的而确定：①如果实验目的是验证某方法的线性范围，需要5～7个不同浓度水平的样本，这些样本的浓度必须覆盖厂家申明的线性范围，并且每个样本重复测量2次。②如果实验目的是建立新方法的线性范围，需要7～11个不同浓度水平的样本，这些样本的浓度必须覆盖预期的线性范围。一般情况下，新方法线性范围的建立者希望有更多浓度水平的实验样本，并且这些实验样本的浓度应该比预期的线性范围宽20%～30%，这样能确定最合适的线性范围。此外，再根据检测系统不精密度的大小，每个样本重复测量2～4次。③多元回归分析法评价线性范围时至少需要5个不同浓度水平的实验样本，并且实验样本越多，就越能准确地评价线性范围。
2.2 实验样本的配制
EP6-A文件推荐使用高值和低值浓度的样本按特定的比例精确配制成一系列不同浓度的样本，并且这些样本的浓度可以为等间距排列，也可以为不等间距排列，具体配制方法可以参考文件后的附录A。在配制过程中，实验者应优先选用移液管法配制实验样本，因为用移液管精确吸量高值、低值浓度样本配制实验样本所产生的误差比称量法、配制复溶溶液法要小。此外，实验者在吸取小体积溶液时要特别小心。
含量方法学验证模板-概述说明以及解释
含量方法学验证模板-范文模板及概述示例1:
标题：含量方法学验证模板：确保准确的定量分析
引言：
在科学研究和工业应用中，定量分析是一项关键任务，特别是在测量物质的含量时。为了保证准确性和可重复性，科学家们采用含量方法学验证模板来验证其定量分析方法。本文将介绍含量方法学验证模板的基本原理和步骤，以及其在不同领域的应用。
一、含量方法学验证模板的基本原理
1.1 概述
含量方法学验证模板是验证定量分析方法的一种工具，它以标准物质的含量为依据，评估待测物质测量结果的准确性和精确性。
1.2 标准物质的选择
选择合适的标准物质对于验证方法的准确性至关重要。标准物质应与待测物质具有相似的物理和化学特性，并且其纯度已经得到证实。
1.3 准确性评估
通过与标准物质进行比对，确定待测物质的测量结果与真实值之间的差异，并评估其准确性。常用的准确性评估参数包括相对偏差、回收率等。
1.4 精确性评估
通过重复测量同一样品多次，计算测量结果的变异程度，评估方法的精确性。常用的精确性评估参数包括标准偏差、相对标准偏差等。
二、含量方法学验证模板的步骤
2.1 样品制备和预处理
样品制备和预处理步骤应该尽可能地模拟实际分析条件，确保结果的可靠性。
2.2 测量方法的优化
选择合适的测量技术和仪器设备，并进行仪器参数的优化，以提高测量方法的灵敏度和选择性。
2.3 含量方法学验证
使用标准物质进行方法验证，执行一系列实验，计算准确性和精确性评估参数，并对结果进行统计学分析。
2.4 结果解释和报告
根据实验结果，解释测量方法的可靠性和适用性，并编写完整的验证报告。
NCCLS_EP6-A定量测量方法的线性评价与衡量_中文翻译
EP6-A
ISBN 1-56238-498-8
V olume 23 Number 16 ISSN 0273-3099
Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures:
A Statistical Approach;Approved Guideline
EP6-A：定量测量方法的线性评价：一种统计学方法，批准指南
NCCLS…
通过自愿一致化的方式为世界医学科学团体服务
NCCLS是医疗领域一个非赢利性的，不同学科之间，自愿参与的促进标准化和建立指南的教育组织。
NCCLS创建于1968年并获得美国国家标准研究院的认可。NCCLS所依据的原则是，对病人高质量服务所需的临床实验室检测，自愿一致的标准是必不可少的。NCCLS通过各临床实验室、检验团体学会、工厂和政府机构的参与而代表临床检验界。
叙述了文件叙述了实验室的程序、常规和参考方法以及评估方案可应用于所有检验学科。文件审核的一致化过程由一些正式的步骤组成，叙述了NCCLS文件和规的编制如何发展到被接受为临床实验室标准。
出版物
NCCLS文件以标准、指南、委员会报告出版。
标准：通过一致化过程形成的文件，并对材料、方法、或实践以不能修改方式明确规定其特定的基本要求。此外，标准也可以包含明确规定的选定要素。
指南：通过一致化过程形成的文件，叙述了用于临床检验界的一般实验操作、方法或材料的规。使用者可以使用成文文件或修改指南以适应特定的需要。
报告：没有经过一致化审定过程的文件，由理事会颁布。
EP6线性评价
是否有明显 非线性系数？
(5.3.2)
否 重复性与设 定目标比较
(5.4)
设定值内 方法呈线 性
是 超过设定值
A
A
选择Sy,x最小的最适 非线性模型(5.3.3)
计算非线性和线性模 型在每个浓度处的差 值(5.3.3)
找出问题并解 决
超过设定目 标
否 差值超过设定 线性误差？ (5.3.3)
是
检查重复 性(5.4)
26.4
44.1
22.0
-22.1
-50.2
138.5
140.3
151.3
11.0
7.8
271.0
236.5
258.6
22.1
9.3
340.0
332.7
343.7
11.0
3.3
406.5
428.8
406.7
-22.1
-5.2
从一次多项式和二次多项式模型的对比分析结果来看，在低和中 浓度处有较大的差别，而在高浓度水平处有较好的一致性。高中 低浓度水平处差值的百分数大小超过了实验室设定的误差范围， 因而认为本方法不具有线性。
回归标准 自由度
误Sy.x
0.667
10
0.313
9
0.197
8
回归分析显示二次多项式模型和三次多项式模型具有显著意义，三次多项式 模型还有较低的标准差，较二次多项式和一次多项式模型有较好的适合性。
CLSI-所有EP标准适用范围和简介
1.EP05-A3定量测量程序精密度评估：批准指南
发布日期：2014年10月
版本号A3
适用范围：本文件为临床实验室的研究提供指南，目的是为定量测定程序建立批内精密度性能特征，以及进行批间变异研究。本文阐述了多个实验方案，并考虑了如何选择和优化方案使其成为某特定测定程序的最佳方案，以及该方案的使用目的。
对于仅仅是验证厂家声明的精密度的用户，不适用于本文件，应参照CLSI文件EP15。EP05首要适用于制造商和开发商者，对终端用户验证重复性和和实验室内精密度的建议可参考EP15，EP15中的实验方案已改为和EP05中单一实验室研究设计的兼容性。
单一实验室方案与前版EP05方案类似，对给定样品和试剂批号等需要检测20天，每天测2批，每批重复测定2次。第3版仍使用该方案并以此作为制造商和开发者的规范实验，用于评估测量程序的重复性和实验室内的精密度。
新的EP05是第二个标准化实验：多中心方案至少要在3个地方重复测定5天，第4章提到了如何实施3（地）x5（天）x5（每天重复次数）和3（地）x5（天）x2（每天批次）x3（每批重复次数）。该辅助方案阐述了实验室间变异和再现性的估计。
为了帮助理解基本概念，新版EP05中有针对非统计学研究人员的扩展教程（见1.5小节）。鉴于本指南中计算的复杂性，建议使用CLSI提供的StatisPro TM方法评估软件。
2. EP06-A：定量测量程序的线性评估：统计学方法
发布日期：2003年4月
版本号A
使用范围：本文件提供了一种方法用于建立、验证和证明定量测量程序的线性范围。他不能鉴别造成明显费线性的原因。样本数越多越能明确的检查线性。因此，若线性评估失败则需要重做，重做时可以增加重复次数，或减少浓度水平以覆盖较小的线性范围。
定量分析方法的方法学验证
定量分析方法的方法学验证
定量分析方法验证的目的是证明采用的含量测定方法适合于相应分析要求，在进行定量分析方法学研究或起草药品质量标准时，分析方法需经验证。
验证内容有：线性、范围、准确度、精密度(包括重复性和重现性)、检测限、定量限和耐用性等。
一，线性
线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物质浓度直接呈正比关系的程度。
应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，制备一系列供试品的方法进行测定，至少制备五份供试样品；以测得的响应信号对被测物浓度作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。回归方程的相关系数(r )越接近于1，表明线性关系越好。
用UV法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，吸光度 A 一般在0.3〜0.7，浓度点n = 5，用浓度C对A作线性回归，得一直线方程，方程的截距应接近于零，相关系数r应大于0.9999。
用HPLC法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，浓度点n = 5〜7，
用浓度C对峰高h或峰面积A或被测物与内标物的响应值之比进行线性回归或非线性拟合(如HPLC-ELSD )，建立方程，方程的截距应趋于零，相关系数r应大于0.999。
线性关系的数据包括相关系数、回归方程和线性图。
二，范围
范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。
范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果及要求确定。对于有毒的、具特殊功效或药理作用的成分，其范围应大于被限定含量的区间。
定量分析方法的方法学验证
定量分析方法的方法学验证
定量分析方法验证的目的是证明采用的含量测定方法适合于相应分析要求，在进行定量分析方法学研究或起草药品质量标准时，分析方法需经验证。
验证内容有：线性、范围、准确度、精密度（包括重复性和重现性）、检测限、定量限和耐用性等。
一，线性
线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物质浓度直接呈正比关系的程度。
应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，制备一系列供试品的方法进行测定，至少制备五份供试样品；以测得的响应信号对被测物浓度作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。回归方程的相关系数 ( r ) 越接近于 1 ，表明线性关系越好。
用 UV 法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，吸光度 A 一般在 0.3 ～ 0.7 ，浓度点 n ＝ 5 ，用浓度 C 对 A 作线性回归，得一直线方程，方程的截距应接近于零，相关系数 r 应大于 0.9999 。
用 HPLC 法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，浓度点 n ＝ 5 ～ 7 ，用浓度 C 对峰高 h 或峰面积 A 或被测物与内标物的响应值之比进行线性回归或非线性拟合（如 HPLC-ELSD ），建立方程，方程的截距应趋于零，相关系数 r 应大于 0.999 。
线性关系的数据包括相关系数、回归方程和线性图。
二，范围
范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。
范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果及要求确定。对于有毒的、具特殊功效或药理作用的成分，其范围应大于被限定含量的区间。
3.定量测量方法的线性评估
H
L
9/10:1/10 8/10:2/10 7/10:3/10 6/10:4/10 5/10:5/10 4/10:6/10 3/10:7/10 2/10:8/10 1/10:9/10
H
线性评价举例
例IgM： • 制备5个等距浓度的样本 • 每个样本重复2次 • 重复性默认标准为2% • 非线性标准为5%
✓进行数据核对：如因传输、打印 或其他原因造成
✓对误差较大者进行分析研究：如 原因已知或技术原因造成，可对 整个样本集重复来解决
数据评价
绘图：
可以点对点、也可以用平均值 （连线），目测是否有出现重大 线性偏差、位置互换或有明显抄 写以及故障造成的点
趋势检验：
可以通过趋势分析对每个样本序号 和结果进行趋势分析，如发现趋势 应纠正，不要使用多次重复试验结 果均值而忽略异常值的存在，可能 异常值是真实的
平均值 26.35 138.5 271.0 340.0 406.5
差值 0.3 1.0 4.0 6.0 5.0
和 16.3 均值 3.26 重复性
Diff2/2 .045
.5 8 18 12.5
39.0 7.8 2.8
% Diff 1.14 0.72 1.48 1.76 1.23
6.3 1.3
%Diff2/2 .648 .261 1.089 1.548 .756
体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则
附件：
《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则（征求意见稿）》
目录
1.体外诊断试剂分析性能评估指导原则――编制说明
2.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——检测限
3.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——线性范围
4.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——可报告范围
5.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——准确度（回收实验）
6.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——准确度（方法学比对）
7.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——精密度
8.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——干扰实验
9.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——稳定性
10.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——参考值（参考区间）
附件1：
体外诊断试剂分析性能评估指导原则
编制说明
《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》颁布后，体外诊断试剂产品的注册过程中要求提供申报产品的分析性能评估资料，产品性能评估是产品研发、制定产品标准等过程的重要技术支持研究过程，并可能对产品的质量造成一定的影响。
目前国际上对体外诊断试剂的性能评估通常是以美国临床实验室标准化组织（Clinical and Laboratory Standards Institude以下称为CLSI）的相关标准为依据，也是美国FDA 推荐采用的评价标准，但我国还没有相关的标准及指导原则的要求。
为进一步明确体外诊断试剂分析性能评估的技术要求，我中心组织有关专家起草产品分析性能评估指导原则，以明确体外诊断试剂产品性能评估的技术要求。体外诊断试剂产品性能评估包括检测限、线性范围、可报告范围、准确度（回收实验）、准确度（方法学比较）、精密度、干扰实验、稳定性、参考区间共九个项目。起草的主要依据CLSI发布的以下标准:
定量检测系统线性评价方法的临床应用比较
和 １Ｈ关 系配 制 ， 成 ｌ 个系 列梯 度 实 验样 本 。对 样 本 由低 值 ０ 形 １ 到高 值 ， 再高 值 到 低 值 的 顺 序 依 次 测 定 ， 重 复 一 次 ， 个 样 本 再 每
内（ ． — ５ ｍ ｏ Ｌ － 断 为线 性 。 结论 ： Ｐ 一 Ａ 统计 学和 临床 要 求两 个方 面判 定 线性 ， 更 适 用 于Ｉ 床 项 目的 线性 评 价 方 法 。 Ｏ ４４． ｍ ｌ ）］ ６ ５ ／ ￣ Ｅ６ 从 是 ｝ 盏 关键 词 ： Ｐ 一 改 Ｅ ６－ Ａ； Ｄ ｕ ａ ； ｏ ｍ ｓ － 线性 评 价 ５ ￣ 中图分 类 号 ： ４ ６１ 文献 标识 码 ： 文 章编 号 ：０６ ０７ （００ １－ １３０ Ｒ４ ． Ｂ １０— ９９ ２ １ ）３０ ３ —２
共 测 定 ４次 。
ｌ 实 验方 法 ‘ ３
注 ｛Ｐ ００ ） １． ． １目测 判 断离 群 点 ： 所有 测 量 数据 作 散 点 图 ， ３ 对 目测 有 无 离 群 （ ： ＞ ．５ 回归 系 数 的 ｔ 验 表 明 ： 只有 第 ５组 （ ～ 检 １ ７样 本 ，． ～ ０６ ４
１ 材料 与 方 法 围。
１ 试剂 与 仪 器 ： 测 系 统 ： 国 贝 克曼 公 司 Ｃ ９型生 化 分 析 仪 ２ 结 果 ． Ｉ 检 美 Ｘ 及配 套校 准 品 （ 号为 ： ８ ５ １ ）广 州 标 佳 尿 素 检测 试 剂 ｆ 号 ２Ｉ 目测 散点 图可 见 所有 点 分 布 均 匀 ， 有 离 群 值 。 各组 测 量 批 Ｍ ０６８， 批 ． 没 为 ：１１２ Ａ ， 控 血 清购 自英 国 郎道 （ 号 为 ：０ Ｕ ） ９ １３ 一 ）质 批 ６１Ｎ。 数 据 的 不精 确 度 分 别 是 ：． ％、 ． ％、 ． ％ 、．７ １１％， ０７ ７ ０８ ３ ０９ ５ １ｒ ０ ％、． ９ 均 １ ． ２样本 及测 定 ：将 收 集 的低 值 混 合血 清 样 本 离 心后 分 成 两 份 ， 小 于 ５ 符合 作 线 性判 断 的 要求 。 ％，
如何确定方法的线性范围
如何确定方法的线性范围
1.测定范围
方法的测定范围通常应当满足以下条件：
a)方法的测定范围应当覆盖方法的最低浓度水平（定量限）和关注浓度水平；
b)至少需要确认方法测定范围的最低浓度水平（定量限）、关注浓度水平和最高浓度水平的准确度和精密度，必要时可增加确认浓度水平；
c)若方法的测定范围呈线性，还需满足线性范围的要求。
2.线性范围
线性范围通常可参照相关国际标准或国家标准，一般满足如下要求：
a)采用校准曲线法定量，并至少具有6个校准点（包括空白），浓度范围尽可能覆盖一个或多个数量级，每个校准点至少以随机顺序重复测量2次，最好是3次或更多；对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不低于0.98；对于准确定量方法，线性回归方程的相关系数不低于0.99；
b)校准用的标准点应尽可能均匀地分布在关注的浓度范围内并能覆盖该范围。在理想的情况下，不同浓度的校准溶液应当独立配制，低浓度的校准点不能通过稀释校准曲线中高浓度的校准点进行配制；
c)浓度范围一般应覆盖关注浓度的50%～150%，如需做空白时，则覆盖关注浓度的0～150%；
d)应充分考虑可能的基质效应，排除其对校准曲线的干扰。实验室应提供文献或实验数据，说明目标分析物在溶剂中、样品中和基质成分中的稳定性，并在方法中予以明确。通常各种分析物在保存条件下的稳定性都已有很好的研究，监测保存条件应作为常规实验室确认系统的一部分。对于缺少稳定性数据的目标分析物，应提供能分析其稳定性的测定方法。
定量测定方法的不精密度性能评估
定量测量方法的不精密度性能评估方案
1.适用范围
参照EP5A2（Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline—Second Edition ），本方案给出了本次临床验证对定量测量方法的精密度性能进行系统评估的方法。
2.实验操作
2.1.质控血清样品的制备
复溶两个浓度水平的质控血清，血清量足够实验评价用。分装于1ml Eppendorf 管里，-20℃贮存。每次实验前1小时取出，置于室温，待其融化。反复倒置Eppendorf 管后，将质控血清吸出，加入到样品杯中，进行测定。
2.2.测定系统
测定系统由中生试剂、试剂配套校准品和临床全自动生化分析仪HITACHI 机器，或中生试剂、试剂配套校准品和临床全自动生化分析仪OLYMPUS AU 机器组成。
2.3.系统的质量控制
在正式评价实验之前，使操作人员熟悉方案操作及试剂的操作，整个系统在质量控制内。2.4.操作
2.4.1.批内不精密度评价的操作
对两个浓度水平血清样品进行测定，连续测定21次。计算测定值的平均值（）和标准x 差（S 批内）。按以下公式计算变异系数(CV 批内)，应CV 批内≤10%。在CV 批内≤10%得到满足的条件下，再进行2.4.2的操作。
%
100⨯=
X
S CV 批内批内2.4.2.室内不精密度评价的操作
选择两个浓度水平的质控血清，每天测定两批（run ），一批平行测定两次(replicate)，持续20天（day ），实验结束时，每个浓度水平，应收集80个数据。进行数据处理，进行以下计算步骤。
线性范围评估指南PPT学习教案
第23页/共27页
线性范围的评估及数据处理方法
对数据组进行精密度检验
用最优拟合方程的回归标准误（σ）与总平均浓度( ) 的百分比代表不精密度
跟据以下公式进行判断
第24页/共27页
线性范围的评估及数据处理方法
对数据组进行精密度检验
不精密度满足判断式时, 说明数据的精密度好可作线 性评价。
第15页/共27页
线性范围的评估及数据处理方法
对回归方程进行线性检验
在t值表中寻找t界值（双边检验，α=0.05），将计算 出的t值与界值比较
如p>0.05，表示非线性系数与零无显著性差异，数 据组被认为具线性，此时可对数据组进行精密度检 验，具体方法见后。当精密度符合线性判断要求时， 数据分析可结束。
线性范围的评估及数据处理方法
实验样本的制备方法
样本的特殊处理：在无法得到适用的人血清时，需对样本进行一些特殊 处理以满足实验要求。这些处理过程包括稀释、加入添加物或透析、热 处理等，无论进行何种处理均应以保持基质恒定为基本原则。在评价报 告中应对所使用的稀释液、添加物、溶剂等的材料来源加以注明。
观察数据点与直线间的偏差，如偏差过大，表明数 据组存在明显非线性，需要对测定过程进行检查， 排除因操作错误所至误差，并对样本进行重新测定。 如图形与直线接近，表明可对数据组继续进行统计 分析。
CLSI 所有EP标准的适用范围和简介
CLSI 所有EP标准的适用范围和简介
1. EP05-A3定量测量程序精密度评估：批准指南
发布日期：2014年10月
版本号A3
适用范围：本文件为临床实验室的研究提供指南，目的是为定量测定程序建立批内精密度性能特征，以及进行批间变异研究。本文阐述了多个实验方案，并考虑了如何选择和优化方案使其成为某特定测定程序的最佳方案，以及该方案的使用目的。
对于仅仅是验证厂家声明的精密度的用户，不适用于本文件，应参照CLSI 文件EP15。EP05首要适用于制造商和开发商者，对终端用户验证重复性和和实验室内精密度的建议可参考EP15，EP15中的实验方案已改为和EP05中单一实验室研究设计的兼容性。
单一实验室方案与前版EP05方案类似，对给定样品和试剂批号等需要检测20天，每天测2批，每批重复测定2次。第3版仍使用该方案并以此作为制造商和开发者的规范实验，用于评估测量程序的重复性和实验室内的精密度。
新的EP05是第二个标准化实验：多中心方案至少要在3个地方重复测定5天，第4章提到了如何实施3（地）x5（天）x5（每天重复次数）和3（地）x5（天）x2（每天批次）x3（每批重复次数）。该辅助方案阐述了实验室间变异和再现性的估计。
为了帮助理解基本概念，新版EP05中有针对非统计学研究人员的扩展教程（见1.5小节）。鉴于本指南中计算的复杂性，建议使用CLSI 提供的StatisPro 方法评估软件。
2. EP06-A：定量测量程序的线性评估：统计学方法
发布日期：2003年4月
版本号A
使用范围：本文件提供了一种方法用于建立、验证和证明定量测量程序的线性范围。他不能鉴别造成明显费线性的原因。样本数越多越能明确的检查线性。因此，若线性评估失败则需要重做，重做时可以增加重复次数，或减少浓度水平以覆盖较小的线性范围。
EP6线性评价
查是否有漂移或趋势性变化。 ?观察每个浓度水平的响应值之间的差异。 ?目视检查XY散点图对于后续的线性评估是非常重要的，它
确定线性范围：
多项式线性评价：对实验数据进行一次、二次、三次多项式 回归分析。具体的评价方法包括两部分：
第一部分： 检验非线性多项式是否较线性多项式与数据更 为相符。
0.1
0.005
5
15.40
0.2
0.02
6
16.20
0.2
0.02
重复测定差值的SD为0.12，范围从0.6%到2.6%，与
表：回归分析的结果
阶别
1 st 1st 2nd 2nd 2nd 3rd 3rd 3rd 3rd
系数
b0 b1 b0 b1 b2 b0 b1 b2 b3
体外诊断试剂产品性能评估过程
03 04 05
02
06
01
07
01 基本原则 02 样本要求 03 数据收集 04 数据检查 05 数据分析 06 数据修正 07 确定线性范围
线性范围评估的基本原则
（1）实验操作人员应熟悉方法原理与操作，能对样本进行正确处理， 确保仪器工作状态正常，采用适当的校准品对仪器进行校准。 （2）仪器的各项性能指标（如精密度）合格，不存在明显的携带污染 等。 （3）应使用同批号试剂及校准品。
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df = L • R - Rdf（n次方）
确定线性
回归中的RE： 考虑：
• 估计RE（A、R）：
• RE只能降低，不可避免
• 加大倍数，RE降低约40% • 不同水平重复性差别较大时， 可采用加权回归
存在SD恒定与否，CV恒定与否
线性的声称
图示法：
优势：
• 可明显的判别好的线性区域和非
线性区域
• 同时对非线性水平能做DL图，更
一般为”S”型
确定线性
系数：
非线性的度量：
• 回归系数指什么？
• 非线性系数指什么？ • 各个系数使用t检验进行显著性 检验，自由度的计算：
• Sy.x最小为最佳拟合
• 线性目标比较：
计算不同浓度点的DL，都在范围内，虽存 在统计上非线性，但仍声称符合线性 如有DL超标：1.发现并解决问题（样本、 干扰、仪器），2.剔除数据、缩小线性区 间
体外诊断产品性能评估-
定量测量方法的线性评估
2019年1月19日 杨 宗 兵
术语和定义
线性？
定义
• 给出与样品中被测量的值直接成 比例的测得量值的能力
LOQ、LLR、LMR
1 • LMR是规定所有特性条件下 的低值
线性
• 测量结果/示值，指定结果 • 符合直线的能力
2
• LLR是规定线性指标下的低值
稀释 1 2 3 4 5 1 26.5 139 269 337 409 2 26.2 138 273 343 404
目测，无明显偏离值 目测，重复测量差值存在趋势，计算无效 合理性，出现无效计算结果时比较
实验室误差，一般4倍标准差，不符合
平均值 26.35
138.5 271.0 340.0 406.5 和 均值 重复性
H
1/9:8/9
2/10:8/1 0
H
1/10:9/1 0
11
L
H
线性评价举例
例IgM： • 图示分析结果
• 制备5个等距浓度的样本
• 每个样本重复2次 • 重复性默认标准为2% • 非线性标准为5%
• 确定异常值（包括线性和重复）
• 重复性与标准比较 • 非线性比较
线性评价举例
重复性与标准比较：
样本 9-11 7-9 5-7
重复 2-4 2-3 2
限值 1.2-1.3 1 1
确定目标： 关系、非线性 重复性
数据检查/画图分析 传输、打印、录入 图示分析
总结
非线性 趋势分析 离群值检验 （Grubbs）
线性拟合、非线性
拟合（回归系数统 计意义）、Syx
斜率分析 两两检查
与目标比较 统计非线性与目标判定 不冲突
差值 0.3
1.0 4.0 6.0 5.0 16.3 3.26
Diff2/2 .045
.5 8 18 12.5 39.0 7.8 2.8
% Diff 1.14 0.72 1.48 1.76 1.23 6.3 1.3
%Diff2/2 .648 .261 1.089 1.548 .756 4.302 0.9 0.9
评估及数据评价
• 临床重要的评估浓度 • 数据评价
进行数据核对：如因传输、打印
或其他原因造成
最低分析浓度或线性下限
各种医学决定范围 最高分析浓度或线性上限
对误差较大者进行分析研究：如
原因已知或技术原因造成，可对
整个样本集重复来解决
数据评价
绘图：
趋势检验：
可以点对点、也可以用平均值
（连线），目测是否有出现重大 线性偏差、位置互换或有明显抄 写以及故障造成的点
8/10:2/1 0
3/6:3/6
4/7:3/7 5/8:3/8 6/9:3/9
7/10:3/1 0
2/6:4/6
3/7:4/7 4/8:4/8 5/9:4/9
6/10:4/1 0
H
1/7:6/7 2/8:6/8 3/9:6/9
4/10:6/1 0
H
1/8:7/8 2/9:7/9
3/10:7/1 0
非线性
• 测量偏倚 • 没有单一统计量代表
3
• LOQ规定U下的低值
测得量值是否考虑报告?目前做法不支持
区间和范围的区别
线性
评估线性程序
定量
给 出 线 性 区 间 的 方 法
•定量方法的线性
可以使用内插法 竞争性免疫测定
是否包括定性
方案设计
评估重点
• 评估线性的前提：重复性 • 随机测量方法
评估
• 可接受样本
• 可接受样本
添加样本：不含有干扰物时，不
要求添加物的纯度，如有干扰应
混合血清：理性条件是使用高值
和低值混合血清进行，量值可能
需要调整
稀释液稀释：使用厂家或证明的 实验室用稀释液稀释混合高值血 清，应有稀释液相关研究资料
说明；如使用浓缩液，应尽可能
少的稀释血清(不超过10%，溶剂) 经处理的血清稀释：注意基质效 应
软件
EXCEL
• 评估样本基质问题
• 需要制定非线性误差目标 • 最佳拟合问题：证明 • 减少变量：如时间
评估
• 样本要求 • 基质效应
数量：5个以上（7-11）
每个水平：2-4次（重复性） 上限：高于预期值20% 是否等距：不要求
与临床常规样本基质类似
样本中应不出现干扰 标本处理：尽可能不处理，如 处理则应考虑基质或其干扰
4
1/4:3/4 2/5:3/5
5 H
1/5:4/5
6
7
8
9
10
11
H
1/6:5/6
2/7:5/7 3/8:5/8 4/9:5/9
5/10:5/1 0
7
8 9 10
L
L L L
5/6:1/6
6/7:1/7 7/8:1/8 8/9:1/9
9/10:1/1 0
4/6:2/6
5/7:2/7 6/8:2/8 7/9:2/9
可以通过趋势分析对每个样本序号
和结果进行趋势分析，如发现趋势
应纠正，不要使用多次重复试验结
果均值而忽略异常值的存在，可能 异常值是真实的
数据评价
斜率确认：
异常值个数：
查看临近两水平之间斜率是否近
似，如果某一值不能被剔除，而 图示目测异常，应确认后剔除
出现两个以上无法解释原因的异常
值时，应及时查找并解决
评估
• 可接受样本 • 可接受样本
盐水或其他稀释液稀释：应注意
不同基质对结果的影响，慎用
质控、校准或线性物：适当时
可混合使用，需确保分析物具 有正常生理形式（如蛋白结合 物、代谢物）
稀释不够或过度稀释的质控物：
应注意不同基质对结果的影响，
可能与浓度有关，慎用
评估
• 可接受样本 可以降低影响解释结果的交叉 • 可接受样本
线性 线性拟合通常使用OLS(权重)、但是当重复性差或要求每点的相对偏差最小时，可尝试WLS的方法 线性和非线性的区间指的是同一个区间，即使分段表述也应使用一条线，不应分段拟合
直观显示
线性声称值的验证
数量： DL声称值：
• 推荐7-9个，2次重复
• 常规做法：5个水平，3次重复 • DL声称值：推荐不同水平不同 • 相关系数
• 线性目标应该源自于偏差目标，
并且应该小于或等于这些目标 • 偏差目标应该小于或等于测量 误差目标
线性评价中的其它影响因素
可接受结果可能受： 主要原因分析：
• 程序上的错误
• 仪器、试剂或校准 • 环境因素 • 基质效应（含干扰）
• 出现干扰等技术方面的问题
• 样本的交叉污染和测量漂移 • 分析不精密度 • 偏倚
源自文库
线性评价中的假设
示
例
线性评价举例
推荐的不同稀释样本数量稀释方法
内容 5 6 1 L L 2
3/4:1/4 4/5:1/5
3
2/4:2/4 3/5:2/5
线性评价举例
拟合：
非线性判定
线性评价举例
非线性判定
线性评价举例
线性评价举例
非线性判定
5%的非线性目标设 定
线性评价举例
非线性：差值图示
线性评价举例
• 一次方程、二次方程非线性系数有统计学意义，Syx显示二次方
程回归误差小，但通过分析其差值得到均符合目标值，线性假设
成立
• 但三次方程非线性系数没有统计学意义。该情况下同上述举例，
水溶液：最好使用高纯度物质， 其他溶剂中的溶液：可能会产生
基质效应
干扰的可能性，但不是说不能
用低纯度物质，常规化学分析
中水溶液可以作为校准物，配
制浓度可以作为目标值使用
评估
• 分析顺序 • 分析物浓度
使用高于区间20%-30%的分析
物稀释7-11个浓度进行，最后可
应使用随机化原则，如出现交
叉污染或漂移，分析要受影响
按照统计分析结果，剔除非线性
浓度点
评估
• 样本准备及其分配值 • 数据收集（表格或电子）
不同用途的样本数：
建立线性：9-11稀释，2-4重复 验证线性：7-9稀释，2-3重复 确认线性：5-7稀释，2重复 次数应完全按照方法重复性来定
编码：每个样本编码，如是等
距样本，则可分配连续数字， 如不是等距，至少应知道各样 本之间的关系
计算非线性差值是否符合要求
线性偏差
• 线性偏差是什么
观测值和预期值之间的差值
• 线性偏差代表什么
点与点之间的距离，并不是点与线之间的距离 表示最佳拟合，回归标准误是其评价指标 因此，线性偏差并非线性评价指标
总结
测 研究目标 建立、验证、确认 量 样本准备、校准、 质控、测量、记录 数据
目标 建立 验证 确认
确定线性
非线性：
应使用一元一次、二次、三次方
程分别拟合，确定非线性指标是 否有统计学意义。从而确定使用 线性的适用性
确定线性
y = b0+ b1x
y = b 0+ b 1x + b2x2
y = b0+ b1x + b2x2+ b3x3
直线的拟合方式
是否具有线性
响应呈上升趋势
响应不断变化
响应呈下降趋势