用吐温20改进骨髓细胞染色体制备方法

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小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法的改进

小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法的改进刘庆军;孙永君【摘要】我们在细胞生物学实验教学中对小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法实验操作做了一些改进:由传统的取小鼠后腿骨改为取四肢骨,提高了实验材料的利用率；由注射器法收集骨髓细胞改为震荡器法收集骨髓细胞,使收集细胞的实验操作更加简便、安全,而且大大提高了骨髓细胞的收得率,同时明显增加染色体中期分裂相的细胞数,由对照组中的每视野中的中期分裂相细胞2～4个提高到5～9个,极大提高了实验教学的效果.【期刊名称】《山东轻工业学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(026)004【总页数】2页(P64-65)【关键词】小鼠;骨髓细胞染色体;标本;改进【作者】刘庆军;孙永君【作者单位】山东轻工业学院食品与生物工程学院,山东济南250353;山东轻工业学院食品与生物工程学院,山东济南250353【正文语种】中文【中图分类】Q2-06小鼠骨髓细胞染色体标本制备是细胞生物学实验教学中一个经典而常规的实验教学项目，染色体是细胞分裂时期(体细胞的有丝分裂和生殖细胞的减数分裂)遗传物质存在的特定形式，是染色质紧密包装的结果。

染色体是有机体遗传信息的载体，对染色体的研究在生物进化、发育、遗传传和变异中有十分重要的作用。

处于分裂期的细胞经秋水仙素或秋水仙胺处理，由于阻断了纺锤丝微管的组装，使细胞分裂停止于中期，此时染色体达到最大收缩，具有典型的形态［1］。

本实验所用的小鼠骨髓细胞有高度的分裂活性并且数量非常多，经秋水仙素处理后，可使分裂的细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗、固定、浸片染色等处理，便可制作较好的小鼠骨髓细胞染色体标本。

1 实验用品1.1 器材解剖板、解剖剪、大小镊子、吸管、离心管、培养皿、量筒、预冷载玻片、酒精灯、普通天平、擦镜纸、HZS－H型恒温水浴箱、TDL－5型离心机、SK－1型振荡混匀器。

1.2 试剂秋水仙素200 μg/mL、0.075 mol/L KCl低渗液、甲醇乙酸(3∶1)固定液、Giemsa 染液、0.85% 生理盐水、香柏油、香柏油清洗剂(无水乙醇:无水乙醚=1∶1)1.3 材料小白鼠(KM洁净级，约25 g)2 实验方法［2，3］2.1 秋水仙素处理取骨髓前3 h先给小鼠腹腔注入秋水仙素，每只小鼠注射200 μg/mL浓度的秋水仙素0.4 mL。

pbst中吐温20的作用

pbst中吐温20的作用PBST（磷酸盐缓冲生理盐水）是一种常用的缓冲液，经常在生物学、分子生物学、免疫学等领域中用作实验中的溶液或试剂。

吐温20（Tween 20）则是一种非离子表面活性剂，具有良好的增溶、分散和乳化性能。

PBST中加入吐温20的目的是为了改善其溶解能力和稳定性，并增强与生物样品的相容性，提高试剂与目标分子的结合效率和检测灵敏度。

以下是PBST中吐温20的主要作用：1.增强稀溶液的稳定性：PBST中加入吐温20后，可以增加试剂或溶液的稳定性，防止试剂的沉淀和结晶。

2.增强试剂与生物样品的相容性：在生物学实验中，涉及到对蛋白质、细胞和细胞器等生物样品的处理。

敏感的生物样品通常需要在一定的缓冲液中进行处理，而PBST中的吐温20可以增加溶液与生物样品之间的相容性，减少可能对生物样品造成的损伤。

3.增强抗原和抗体之间的结合能力：在免疫学实验中，PBST中添加吐温20可以促进抗原和抗体之间的结合，提高抗体结合分子的检测灵敏度。

吐温20作为表面活性剂，可以减小非特异性结合，同时提高特异性结合，增加试剂与目标物质之间的亲和性。

4.减少非特异性结合：非特异性结合是在实验中经常遇到的问题之一、PBST中加入吐温20可以减少非特异性结合的发生，提高实验的特异性，减少干扰因素。

5.增强离子束制备试剂的效果：在离子束制备的过程中，PBST中的吐温20可以起到增溶的作用，提高离子束制备试剂的有效含量，加强离子束制备试剂对靶物质的捕获效果。

总之，PBST中吐温20的加入在各个实验条件下可以发挥相应的作用，从而提高实验的效果和结果的准确性。

它们的使用广泛且多样化，可以根据实验的具体需求进行调整和优化。

动物骨髓细胞染色体的制备

7、去掉上清液，沿离心管壁缓慢、轻轻加入新鲜配置的甲醇：冰醋酸（3：1）固定液10ml，加固定液时注意不要冲动细胞团快。立即用吸管将细胞轻轻吸打均匀，静置固定30min后，1000rpm离心8min。
8、吸去上层固定液，视管底细胞多少加入少量新配制的固定液，将细胞团快轻轻吸打成悬液。（ 0.20.5mL）
低渗蒸发
实验用品
1．器材：解剖器具、注射器（2ml）、离心机、刻度离心管、玻璃吸管、载玻片、盖玻片、显微镜、恒温水浴锅等；
2．试剂 0.01%秋水仙素溶液、固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.4%KCl低渗溶液、Giemsa 染液、0.01M磷酸缓冲液(PH6.8)、0.85%生理盐水、2%柠檬酸钠等。
4、将细胞悬液转入尖底离心管中，配平后，以 1000rmp离心8min，弃去上清液，留沉淀。
5、加入8ml 0.4%KCL溶液，吸打混合均匀，随即将离心管置于26℃（小鼠为37℃）水浴中低渗45分钟。（细胞膨胀，使滴片时细胞膜破碎，染色体分散）
6、预固定：加入2mL新鲜固定液，混匀，以1000rpm 离心8min。
可在1～1.5m间进行预实验，用1.5m较好。
实验报告
记录所观察蟾蜍骨髓细胞染色体的数目和形态。说明在骨髓细胞染色体的制备过程中的关键步骤，
秋水仙素对染色体制备的影响？你制备的蟾蜍染色体标本，分裂相是否多，染色
体分散程0转/分，离心8分钟，弃上清，加入固定液，混匀后，室温放置30分钟，离心后，向沉淀中加入0.5 ml预冷的固定液，将细胞重悬。
预冷的玻片
滴片后，将片子晾干，滴加适量Giemsa染液染色15分钟，弃去染液，水洗，镜检。
结果显示

实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备

实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备一、实验目的1. 学会小鼠骨髓细胞的采集和处理方法。

2. 掌握细胞较好的贴壁与生长条件，以保证细胞的好。

3. 学会最常用的Gimsa染色方法，使出现的幻觉具有明朗的色调，以便细胞的编号与统计。

二、实验原理骨髓细胞是一种多能性细胞，可分化为血液成分或骨骼系统的成分。

骨髓细胞被用于检测细胞遗传学异常，在染色体物质遗传及细胞迁移等方面具有潜在用处，并可为结构遗传学提供信息。

作为染色体标本制备的来源，一般选用小鼠骨髓细胞是最为经常采用的试验模型之一，常常作为各类染色体研究、映射和诊断的标本；其区别如来源易得、繁殖成本低、染色体数量较少，易于研究、成熟度高等因素显得优越。

三、实验步骤1. 实验前准备工作（1）保存干燥灭菌的小鼠骨髓细胞培养基，避免接触灰尘。

（2）检查各种器械的完整性，保证手段的杀菌处理。

（3）使用有缩小五倍功能的显微镜，以确保细胞图片清晰度与细胞形态的准确。

（4）打开红外线灯，以增强视觉效果并避免光损伤。

（5）按实验方案准备各种试剂和设备。

（6）实验室内准备50 mL恒温水浴和常规离心机。

2. 骨髓细胞的采集（1）设备：小鼠解剖刀片、50mL离心试管、海绵、抽管等。

（2）用70%酒精清洗瓶子的注射器，使用注射器收集小鼠间隔内的骨髓，放入存储试管中。

（3）轻轻摇动骨髓，使其中的细胞与上清液充分混合均匀。

3. 细胞的处理（1）细胞浓度的调整：从建立骨髓细胞培养物开始，骨髓细胞培养物可以在50mL培养基中存在。

使用试管取出足量细胞，可用比值0.2 mL的浓度悬液被移入12孔文化板中，吸入的细胞细胞数为2×106个左右。

（2）添加培养基到细胞培养物中，以充分覆盖细胞。

（3）将板加入约为35℃，5%二氧化碳环境下的恒温培养箱中，进行配队。

（4）半小时后使用显微镜检查细胞的附着，然后循环补充适量接种。

在24小时之前，每隔2小时更换于第一个。

4. Gimsa染色法（1）准备细胞标本：从培养基中取出涂片架，然后“组织培养板”模式的检测做法，将液体在上面包括涂片架移至吸满液体。

小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备方法的改进

小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备方法的改进刘星;冯昆;张青峰;姬可平;王燕【摘要】目的改进小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备的方法,以利于在实验教学中应用.方法设定不同浓度梯度的秋水仙素,分别作用于小鼠4小时和14小时,调整低渗液浓度及低渗时间、预固定和固定时间、离心速度及离心时间、滴片高度等,制作出分散良好、形态清晰的染色体标本.结果经过多次反复实验比较,秋水仙素注射剂量为10 μg/g BW作用4小时和5μg/gBW作用14小时,低渗液处理15分钟,预固定2分钟,固定10分钟,2500转/分,离心5分钟,滴片高度50～80 cm,可获得理想的实验结果.结论改进后的实验方法不仅能有效地缩短实验操作时间,而且可以提高实验教学质量,可应用于相关实验教学.【期刊名称】《卫生职业教育》【年(卷),期】2015(033)018【总页数】2页(P101-102)【关键词】小鼠;骨髓细胞;中期染色体;制备方法【作者】刘星;冯昆;张青峰;姬可平;王燕【作者单位】遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041【正文语种】中文【中图分类】G424.31染色体的结构和数目是研究生物体遗传、变异、发育等的基础［1］，染色体制备对人类遗传病的研究和诊断有着非常重要的意义［2］，也是进行染色体原位杂交、染色体畸变、染色体核型分析和显带分析等研究的重要基础。

制备小鼠染色体标本是各大农业、生物和医学院校细胞生物学、遗传学、医学遗传学等实验课程中重要的实验内容之一。

通过实验，学生可了解小鼠染色体的数目及形态特征，掌握中期染色体制备的实验原理和方法。

该实验操作步骤简单，但每个步骤稍有不慎将导致实验失败，不能在镜下观察到清晰的、分散好的中期染色体。

另外，实验要求提前对实验动物进行预处理，因此对实验课程开设的时间有所限制。

三项条件改变制备小鼠骨髓细胞染色体的分析

三项条件改变制备小鼠骨髓细胞染色体的分析
李芳;王文青
【期刊名称】《青海医学院学报》
【年(卷),期】1990(000)002
【摘要】小鼠骨髓细胞染色体制备技术是一种常用的教学及科研实验手段。

目前,在制备小鼠骨髓细胞染色体过程中所采用的条件如秋水仙素量、骨髓冲洗液,低渗液等各不一致。

为此,我们做了此三项条件改变的情况下小鼠骨髓细胞染色体制备实验。

【总页数】3页(P153-155)
【作者】李芳;王文青
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R329－33
【相关文献】
1.小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法的改进 [J], 刘庆军;孙永君
2.小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备方法的改进 [J], 刘星;冯昆;张青峰;姬可平;王燕
3.小鼠骨髓细胞染色体G显带制备实验的问题与改进 [J], 李栋;张亚龙;刘俊;徐艳岩
4.小鼠骨髓细胞有丝分裂染色体标本制备方法的优化 [J], 高振华;吴浩浩;赵志辉;
许英梅;Aguzey Harry;程贵兰;生冉;许嫣红
5.小鼠骨髓细胞染色体制备实验优化与探索 [J], 雷宇华; 赵娟; 廖峥嵘; 赵俊霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

吐温20制备工艺-概述说明以及解释

吐温20制备工艺-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述是文章引言的一部分，主要介绍吐温20制备工艺这个主题的背景和重要性。

我们可以按照以下方式编写概述部分的内容：在工业应用领域中，吐温20（又称为聚乙烯醇-聚丙烯醇共聚物或PVP-PVA共聚物）是一种重要的功能性高分子材料。

其独特的化学结构和优异的性能使得吐温20在医药、食品、纺织等许多领域具有广泛的应用前景。

吐温20具有一系列独特的特点，如高稳定性、可调节性和生物相容性。

这使得它成为一种理想的控释材料、药物载体、抗菌材料以及纤维增强剂。

然而，要实现这些应用，制备高质量的吐温20材料是至关重要的。

本文旨在探讨吐温20的制备工艺，并介绍其中关键的步骤和参数。

通过深入研究各种制备方法，我们可以更好地了解吐温20材料的性质和应用潜力。

同时，本文还将对吐温20制备工艺的未来发展进行展望，探讨可能的改进和创新。

通过本文的阅读，读者将能够全面了解吐温20的特点、用途以及制备工艺的重要性。

希望本文能够为相关领域的研究人员和工程师提供有用的参考，并为吐温20的应用和开发提供新的思路和方法。

1.2 文章结构文章结构部分的内容应该是对整篇文章的结构进行说明和概括。

下面是一个可能的编写内容：文章结构：本文分为引言、正文和结论三个部分。

引言部分主要对本文的主题进行引言，并概述了吐温20的制备工艺的重要性和应用价值。

正文部分主要包括吐温20的特点、用途和制备工艺三个方面的内容。

在吐温20的特点部分，将介绍吐温20的化学结构、物理性质以及与其他材料的比较等内容。

在吐温20的用途部分，将详细介绍吐温20在化妆品、医药等领域的广泛应用。

在吐温20的制备工艺部分，将重点介绍吐温20的合成方法和制备工艺流程，并对吐温20的制备技术进行深入分析和讨论。

结论部分主要对本文进行总结，并展望吐温20制备工艺的发展前景。

在总结吐温20的重要性部分，将总结吐温20在化妆品和医药领域的广泛应用，以及吐温20制备工艺研究的重要性。

染色体的制备方法

染色体的制备方法
染色体的制备方法主要有以下几种：
1. 细胞培养法：通过细胞培养的方法，从活体或死体组织中获得细胞，然后使用染色体解链剂和有机溶剂处理细胞，使其逐渐膨胀、变形和破裂，最终释放出染色体。

2. 细胞分离法：通过细胞分离的方法，从组织或器官中获得单个细胞，然后使用低渗透压溶液处理细胞，使其逐渐肿胀、破裂，最终释放出染色体。

3. 放射线照射法：通过将细胞暴露在放射线（通常是X射线或γ射线）下，使染色体发生断裂和破裂，然后使用染色体解链剂溶解细胞核膜和蛋白质，最终得到染色体。

4. 高压法：通过将细胞置于高压环境中，如用注射器将细胞悬浮液喷射到高压室中，或使用高压装置将细胞悬浮液注入对高压有抵抗能力的微孔滤纸上，然后用染色体解链剂处理细胞，最终释放出染色体。

5. 集落法：将细菌或酵母等微生物的细胞培养在富含染色体的培养基上，然后使用染色体解链剂处理细胞，最终从细胞中释放出染色体。

这些方法各有优点和局限性，选择合适的染色体制备方法要根据研究目的和样本
的特点来确定。

骨髓染色体制备

骨髓染色体制备
一、直接法（D）
1.肝素抗凝骨髓，根据细胞计数，将骨髓（约为培养法细胞的3～4倍），
加入20ml培养瓶中，加生理盐水至20ml。

2.加入秋水酰胺应用液320ul使终浓度为0.05ug/ml。

37℃温箱1小时（或
直接4℃过夜）。

3.离心：1000rpm10分钟，弃上清液。

4.低渗：加入预温至37℃的0.075MKCL液8ml左右，轻轻打均，置37℃
30分钟。

5.预固定：加入1ml固定液轻轻打匀，离心1000rpm10分钟。

6.第一次固定：离心后弃上清液，加入固定液约8ml，打匀，室温30分钟
以上。

7.第二次固定：离心1000rpm10分钟，离心后弃上清，加入固定液8ml，打
匀，室温15分钟以上。

8.第三次固定：离心1000rpm10分钟，离心后弃上清，加入固定液8ml，打
匀，室温15分钟以上。

9.离心1000rpm10分钟，离心后弃上清，加入适量固定液制成细胞悬液，
置4℃保存。

10.显带；Giemsa染色；镜检。

二、培养法（C24）
1.肝素抗凝骨髓，根据细胞计数，将有核细胞按1～2×106/ml加入1640培
养基内，37℃恒温箱放置24h。

2.加入秋水酰胺应用液80ul使终浓度为0.05ug/ml（如果是两瓶，一瓶加入
80ul，一瓶加入160ul）。

37℃温箱1小时。

3～10步同直接法。

注：细胞计数时，求得大方格平均数A，则50÷A=所加入骨髓的ml数或3600÷A=所加入骨髓的滴数（细胞浓度1～2×106/ml）。

实验九小鼠骨髓细胞染色体标本制备

固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、 Giemsa染液、0.01M磷酸缓冲液 (PH6.8)，0.85%生理盐水。
四、实验步骤
1、预处理：实验。作用：
2、处死动物：断颈处死小白鼠，解剖小鼠内生殖器官，鉴别雌雄性别
3、取股骨：剥取股骨，剔去肌肉组织，剪去两端的股骨头。
11、滴片：用吸管吸取细胞悬液，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干。预冷载玻片的作用：
12、染色：10% Giemsa染液染色30分钟。
13、镜检：低倍———高倍。
五、作业
1、选择染色体清晰，分散好的中期分裂相，计数染色体，显微摄影、并打印出照片。
2、分析成功或失败的原因。
4、取骨髓：注射器吸取0.6ml生理盐水, 针头插入股骨一端,反复冲洗骨髓到10ml的离心管中。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用
6、离心：离心之前加1ml固定液并用吸管轻轻吹匀，进行预固定；
同时秋水仙素作用能使染色体缩短、变粗。
三、实验材料、器具和药品：
1、材料：小白鼠 2、器具：
注射器（1ml,5ml）、5号针头、解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品： 0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞的原始细胞，具有高度的分裂增殖能力。

DMSO,tween20,trition 100区别

1%DMSODMSO对许多药物具有溶液性、渗透性、DMSO具有对角质的溶解渗透能力，所以能提高疗效0.1%吐温20原理：由于聚山梨酯分子中有较多的亲水性基团一聚氧乙烯基，故亲水性强，为一种非离子型去污剂。

作用与用途：1.生物学实验中乳化蛋白，在使用时，Tween 和同类型的Triton X-1OO(聚乙二醇辛基苯基醚)非离子型去污剂不破坏蛋白的结构，可减少对蛋白质之间原有的相互作用的破坏。

离子型去污剂如SDS则破坏蛋白的结构。

2. 在生物学实验中作封闭剂，封闭剂应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的标委、也不与抗体或检测试剂有交叉反应。

Tween-20有复性抗原的作用，可提高特异性的识别能力。

在做westen blot时，用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点，可以降低抗体的非特异性结合。

最常见的封闭剂是BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶和Tween-20（0.05 – 0.1%）稀溶液。

3.常作为水包油（O/W）型乳化剂，使其他物质均匀在溶液中分散，主要用于农药、食品、化妆品。

与其他乳化剂如月桂醇硫酸钠或司盘类合用，能增加乳剂的稳定性。

吐温可用来使精油乳化后溶解于水液体中，完全发挥作用。

相对来说，吐温20更温和一些，吐温80的乳化性更强一些。

4.药用：（1）可作某些药物的增溶剂。

（2）有溶血作用，以吐温-80作用最弱。

（3）水溶液加热后可产生混浊，冷后澄明，不影响质量。

（4）在溶液中可干扰抑菌剂的作用。

Triton X-100Triton X-100是一种非离子型表面活性剂（或称去污剂），它能溶解脂质，以增加抗体对细胞膜的通透性。

1%的Triton X-100常用于漂洗组织标本，0.3%的Triton X-100则常用于稀释血清，配制BSA等，0.25%的Triton X-100 常用于细胞的通透。

小鼠骨髓细胞染色体制备

小鼠骨髓细胞染色体制备染色体制备是生物学研究中常用的实验技术之一，通过染色体制备可以获得染色体的形态和结构信息，从而进一步研究其功能和遗传特性。

本文将介绍小鼠骨髓细胞染色体制备的方法和步骤。

一、材料准备1. 小鼠骨髓细胞2. 10% 碘酒3. 0.075M KCl 溶液4. 甲醛溶液（4%）5. 甲基绿染液6. 预热37°C恒温水浴7. 玻片和载玻片夹二、实验步骤1. 将小鼠安乐死并取出骨髓，将骨髓切碎并转移到15ml离心管中。

2. 加入适量的10%碘酒，使得骨髓完全被浸泡，放置室温下静置15分钟，使细胞均匀染色后固定。

3. 使用离心机以1000rpm离心10分钟，将碘酒倒掉。

4. 加入适量的0.075M KCl 溶液，使骨髓细胞悬浮，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

5. 再次加入适量的0.075M KCl 溶液，使骨髓细胞悬浮，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

6. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

7. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

8. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

9. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

10. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

11. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

12. 将悬浮的骨髓细胞滴于预热的玻片上，并用载玻片夹轻轻压平。

13. 将载玻片夹放入预热37°C的恒温水浴中，静置10分钟。

14. 将载玻片夹取出，用甲醛固定液稍微洗净，并用酒精进行脱水。

15. 将载玻片夹放入洗净过的甲醛固定液中浸泡10分钟，然后用酒精进行脱水。

Westernblot中Tween-20的作用是什么？应该怎么用？

Westernblot中Tween-20的作用是什么？应该怎么用？文章转自英格恩生物技术博客！Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体，对于TBST 的配方也基本上相差不多，其中配方中就有一种组分是Tween-20，一种黄色或琥珀色澄明的油状液体，具有特殊的臭气和微弱苦味。

用移液枪吸取时会有一种滞后感。

为什么在Western blot的洗液TBST 中要加入这么一种试剂，Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用呢？Tween-20首先了解一下什么是Tween-20。

Tween-20也写作Tween 20，也称Polyethylene glycol sorbitan monolaurate，中文名为吐温-20或吐温20。

Tween-20为黄色或琥珀色澄明的油状液体，具有特殊的臭气和微弱苦味。

分子中含有较多的亲水性基团，可与水、甲醇、乙醇、异丙醇、丙二醇、乙二醇、棉子油等混溶。

是常用的非离子性去垢剂。

Tween-20的应用Tween-20是一种非离子型表面活性剂。

用途为水包油乳化剂、可用作溶剂、扩散剂、稳定剂、润滑剂和抗静电剂等。

气相色谱固定液(最高使用温度120℃)分离分析挥发油、脂肪酸酯、醇、酮和卤化物。

Tween-20在Western blot 中的作用？Western blot的操作流程中大部分都用到TBST洗液，而且还是封闭，一抗二抗孵育这种比较关键的步骤。

通常Tween-20作为一种非离子型表面活性剂，效果和SDS、BSA作用差不多，主要是封闭膜上蛋白的非结合位点，以降低背景，增强抗体的特异性结合。

理想的封闭剂应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的表位、也不与抗体或检测试剂有交叉反应。

如果脱脂牛奶封闭效果不好可以提高吐温浓度。

在WB洗液里的吐温是和BSA一样，对抗原抗体蛋白提供保护作用，同时因为是表面活性剂（司盘加成亲水的环氧乙烷基团后的化合物），可以减少抗体对抗原的非特异性作用，用于洗脱未结合的抗体、减少非特异性结合。

骨髓染色体制备流程

①前处理:在实验前24~36小时,按0.5ml/25g体重的剂量往小鼠腹腔内注射预温至37℃的10℅的酵母葡萄糖溶液。

②注射酵母液24~36小时后,往小白鼠的腹腔内注射秋水仙素(注射量按8.4ug/1g体重计算),注射后10~12小时取材。

③取股骨:用颈椎脱臼法处死小鼠,立即用剪刀剪掉大腿上的皮肤和肌肉,暴露股骨及其两端相连的关节和膝关节。

然后从肌骨两端关节头处剪下股骨,用卫生纸擦净股骨上残余的肌肉和血液。

④收集骨髓细胞:剪掉股骨两端膨大的关节头,暴露出骨髓腔,用吸有适量生理盐水的注射器从股骨一端插入注射针头,将骨髓冲入10ml刻度离心管内,可反复冲洗数次,直至股骨变白为止。

此时离心管中的细胞悬液可达6~8ml,将离心管平衡后放入离心机以1000rpm/min离心8分钟。

⑤低渗处理:吸去上清夜,留沉淀物,加入6~ 8ml0.075mol/L氯化钾低渗液(低渗液需先置37℃水浴箱内预温),用吸管将细胞团吹打均匀,置37℃水浴箱内低渗处理15分钟。

⑥预固定:低渗处理完成后,立即加入1ml新配制的固定液,混匀后以1000rpm/min离心8分钟。

⑦固定:吸去上清夜,加入固定液6~8ml(甲醇∶冰乙酸=3∶1),用吸管吹打混匀静置15分钟。

然后以1000rpm/min离心8分钟,吸去上清夜。

⑧重复第7步骤。

⑨制备细胞悬液:吸弃上清夜后,视离心管底细胞沉淀量的多少而加入3~8滴固定液,用吸管轻轻吹打成细胞悬液。

⑩滴片:吸取细胞悬液滴到预冷的载波片上,每片滴2~3滴,然后立即对准玻片吹一口气,使细胞悬液散开,并迅速将玻片在酒精灯火焰上来回过几次以助染色体分散。

〖医学〗动物骨髓细胞染色体标本的制备

实验材料
小鼠或青蛙
实验仪器、用具
天平离心机温箱显微镜酒精灯
注射器解剖盘解剖剪刀片离心管吸管烧杯冰冻载玻片
方法和步骤
低渗处理
离心后加入适量蒸馏水,用吸管轻轻吹打成细胞悬液,置37℃低渗20min
固定
沿管壁逐滴加入固定液,吹打成悬液,室温固定20min,离心。重复此操作一次。最后用少量固定液将沉淀悬浮。
式”近代发展起来的西医，20世纪西医又发展到“ 社会-心理-生物医学 ”或综合医学模式，后基因组时代系统生物学的兴起，形成了系统医学在全球的迅速发展，成为继传统医学、西医学之后中、西医学汇通的未来医学。当代中国医学类专业比较优秀的学校有北京大学、华中科技大学、郑州大学等学校。
У
Ю砺厶逑 - 东方医学和西方医学（即西医）的融合形成现代系统医学。该体系所涉及的一切问题不管从广度上，还是从深度上，都应该远远超过现有的中西医学理论，并将现有中西医学理论纳入自己的理论框架范围之内。为了肩负起这一历史使命，原创人生、医学理论体系 ——灵魂医学 soul medicine应运而生，她不但从宏观上或战略上圆满解释并解决了存在于人类医学及人文社会科学史上的一切疑难模糊问题，而且还能够使人们得以启迪人生，不得不重新认识人类自身、不得不重新认识人类赖以生存的这个多维世界对象的医学科学，故不能解现今医学分为传统医学、基于“ 生物-医学模
⌒ SARS、禽流感面前竟束手无策，在糖尿病、癌症、心脑血管疾病、尿毒症等相当多疾病面前更是不得不求助或借助中医治疗。一个是疗效不确实，一个是有些甚至相当多疾病无法治疗，这就是中西医学结合的缘由。然而，由于二者是两套理论、两股道上跑的车，风马牛不相及，从理论上讲就没薪

细胞免疫荧光的染色方法

不通透的染色方法：封闭液:3％BSA 用PBS 配制不加吐温—20，一抗，二抗用封闭液配制.1。

4% PFA(多聚甲醛)室温固定15min。

2。

1xPBS 洗三次，每次5min。

3。

3%BSA（不加吐温—20）封闭1hr。

4。

一抗4度过夜5。

1xPBS 洗三次,每次5min。

6.二抗37度2hr。

7。

1xPBS 洗三次，每次5min。

8.DAPI 染色5min。

9.1xPBS 洗三次，每次5min。

蔺红方法染色：蔺红用的方法封闭液里不加土温20 。

我们模拟这个方法封闭液里加了土温20。

1.4％ PFA（多聚甲醛）固定15min.2.1xPBS 洗三次，每次5min。

3.0.2％ tritonX—100 通透15min。

4.1xPBS 洗三次，每次5min。

5.3%BSA封闭0。

5hr。

6.一抗4度过夜。

7.1xPBS 洗三次，每次5min。

8.二抗37度 1hr。

9.1xPBS 洗三次，每次5min。

10.DAPI 染色5min。

11.1xPBS 洗三次，每次5min。

12.封片。

通透的染色方法:封闭液：：3％BSA 用PBS 配制，加千分之一吐温—20一抗，二抗用封闭液配制。

1、细胞铺板，处理2、弃上清，甲醇—20℃固定10min3、预冷的1X PBS 冲洗两遍4、0。

2％ NP40（PBS配)室温通透8min5、1X PBS 洗5min X 3次6、1％BSA(PBS+1千分之一的土温20配）室温封闭40min7、一抗4℃（1％BSA配制）孵育过夜8、1X PBS 洗5min X 3次9、二抗（1％BSA配制）室温避光孵育1h10、1X PBS 洗5min X 3次,拍照。

实验二小鼠骨髓细胞染色体标本制备

实验二小鼠骨髓细胞染色体标本制备实验目的：通过制备小鼠骨髓细胞染色体标本，了解染色体结构、形态和变异等方面的知识，为后续核型分析、染色体异常检测等实验打下基础。

实验原理：小鼠骨髓细胞染色体标本制备是指将小鼠骨髓组织中的细胞进行处理后制备成适合观察的染色体标本。

该标本制备方法包括细胞处理，染色体制备和染色体观察等环节。

1.小鼠骨髓细胞处理将小鼠放入固定夹，使用无菌注射器向小鼠腹腔注入适量的钾盐缓冲液（KCl，0.074mol/L）。

钾盐缓冲液的功能是使细胞发生肿胀，探头区别正常细胞和异常细胞。

此外，钾盐缓冲液也有不利的作用，可以导致一些染色体脱落或断裂。

接下来，在小鼠固定夹上进行剖腹，取出骨髓。

骨髓组织放置在一滴含有10%甘露醇的氯仿中进行易位。

在显微镜下观察细胞的形态结构，进行可行性检测。

2.染色体制备取干净的药片，滴入细胞悬液，热外片变性塔。

药片的材料使用高价值玻璃药片，这样可以保证药片平整和染色体不能和药片表面黏附。

加入甘醇一定要多加就能快速促进水分的蒸发，避免液体反应产生气泡而影响结果。

不需要太用力，在药片的表面轻轻涂抹，使液体均匀分布。

接下来，将药片吸入液、95%甲醇，以及3%乙酸中每个5分钟，直到药片完全干燥。

3.染色体观察将药片上的细胞标本置于显微镜上，根据染色体数目和形态等信息进行染色体分析。

在显微镜下观察染色体的特征，包括染色体数量、形态、大小、位置以及异常情况等。

对观察到的染色体进行记录和描述。

实验结果：通过对小鼠骨髓细胞进行染色体制备和检测，我们可以观察到染色体的结构、形态等方面的特征。

此外，通过对染色体的数量和形态进行观察，还可以发现染色体的变异情况，进一步了解染色体的异常情况。

在实际操作过程中，需要注意细胞处理和染色体制备的每一个环节，以保证实验的准确性和可靠性。