DAPI标记的原理
DAPI染DNA的道理及使用方法
DAPI染DNA的原理及使用方法DAPI 即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，分子式为C16H15N5·2C3H6O3，分子量457.48。
DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。
它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处，一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。
结合到双链DNA上DAPI 分子的荧光强度提高大约20倍，常用与荧光显微镜观测，根据荧光的强度可以确定DNA的量。
另外，因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。
单独DAPI的最大吸收波长为340nm，最大发射波长为488nm；当DAPI与双链DNA结合时，最大吸收波长为364nm，最大发射波长为454nm（10 mM Tris pH7.0，100 mM N aCl，10 mM EDTA），其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。
DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度只有与DNA结合的荧光强度的1/5，其发散光的波长范围约在500nm左右。
DAPI的配制及贮存固体粉末：避光，2-8 ℃保存，3年没有问题。
贮存液：用无菌水配制成浓度1 mg/ml的贮存液，配好后用锡纸包起来，避光，可在-20 ℃下长期保存。
（DAPI易溶于水，在PBS中溶解度不高）使用浓度：贮存液用1xPBS稀释到终浓度100 ng/ml。
荧光封片液：0.5 mol/L碳酸盐缓冲液与甘油等体积混合，pH9.5染色与观察：制好的玻片上滴加几滴DAPI染液，染色10分钟，流水冲去染液，滤纸吸除多余水分，加一滴荧光封片液，置于荧光显微镜下观察，激发波长360-400nm。
注意事项：DAPI可能具有致癌性，全部操作过程中必须带塑料或乳胶手套。
推荐厂商：Invitrogen，Sigma资料下载：点击下载结构式：DAPI结构式DAPI与DNA的复合物晶体结构以下英文介绍摘自Wikipedia。
DAPI和HoechstPI染料
D A P IDAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，是一种能够与DNA强力结合的荧光染料，常用于荧光显微镜观测。
因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
DAPI介绍在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。
当DAPI与双股DNA结合时，最大吸收波长为358nm，最大发射波长为461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。
DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度不及与DNA结合的结果，其发散光的波长范围约在500nm左右。
DAPI的发散光为蓝色，且DAPI和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染剂(红色荧光染剂)的发散波长，仅有少部分重叠，研究员可以善用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。
DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，因此DAPI对生物体而言，也被视为一种毒性物质与致癌物。
使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。
中文名：4，6-联脒-2-苯基吲哚()英文名：4',6-diamidino-2-phenylindole，2-(4-amidinophenyl)-1H -indole-6-carboxamidine，DAPI dihydrochloride分子式：C16H15N5分子量：277.324CAS number：28718-90-3光谱性质：DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm与双链DNA结合时最大吸收/最大发射为358 nm/461 nm；与RNA结合时，最大发射移动到400 nm左右。
DAPI染色原理：DAPI 为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。
DAPI染色
DAPI染色1．原理DAPI为4’，6二脒基-2-苯吲哚(4’，6—diamidino-2—phenylindole)能与双链DNA小槽，特别是AT碱基结合，也可插入少于3个连续AT碱基对的DNA序列中。
当它与双链DNA结合时，荧光强度增强20倍，而与单链DNA结合则无荧光增强现象，因此是一种简易、快速和敏感地检测DNA的方法。
DAPI的荧光强度虽较Hoechst低，但荧光稳定性优于Hoechst；其特异性较溴化乙啶(ethidlium bromide，EB)和碘化丙啶(propidium iodide，P1)高。
2．溶液配制(1)0．01mol／L PBS(pH7．0)：取0．1mol／L NaH2PO4·H2O 34ml、0．1mol／LNa2HPO4 66ml、NaCl 0．9g，溶于900m1双蒸水；(2)DAPI储存液：将0．5mgDAPI溶于5．0ml PBS中，分装，低温长期保存；(3)DAPI工作液：用PBS稀释DAPI储存液，终浓度为0．1ug／ml。
3．染色程序(1)培养的单层细胞(未固定)或新鲜组织的冰冻切片等，PBS漂洗5分钟；(2)DAPI工作液室温染色5～20分钟(可根据实验材料的染色结果而定)；(3)PBS漂洗；(4)水溶性封片剂封片，游离细胞也可直接用含DAPI的PBS封片；(5)荧光显微镜观察。
结果：正常的细胞核呈强荧光，细胞质无荧光；固定的组织细胞同样处理，亦可得到相似的染色结果。
在有支原体污染的细胞质和细胞表面可见孤立的点状荧光，在感染痘苗病毒的细胞质中存在独特的“星状”荧光簇(star-like fluorescent clusters)，腺病毒感染早期胞质中也可出现荧光。
DAPI分子式C16H17Cl2N5 分子量350.25 性质 1. 外观黄色粉末2. 纯度≥95%HPLC3. 产品描述DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。
和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。
dapi染色原理
dapi染色原理Dapi染色原理。
Dapi（4',6-diamidino-2-phenylindole）是一种广泛应用于细胞和组织染色的荧光染料。
它的荧光特性使得它成为生物学研究中常用的标记物之一。
那么，Dapi是如何实现对细胞和组织的染色的呢？接下来，我们将详细介绍Dapi染色的原理。
Dapi染色的原理主要基于其与DNA结合的特性。
DNA分子中含有丰富的腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）碱基，而Dapi分子则具有亲和力，能够与这些碱基发生氢键结合。
当Dapi染料与DNA结合时，会发生荧光激发和发射，从而使得DNA在荧光显微镜下呈现出蓝色荧光。
在进行Dapi染色时，通常需要将细胞或组织固定后，用含有Dapi染料的缓冲液进行染色处理。
Dapi分子会穿透细胞膜，进入细胞内部，并与DNA结合。
随后，通过荧光显微镜观察，可以清晰地看到细胞核内DNA的分布情况，从而对细胞核的形态和数量进行分析。
Dapi染色具有高度的选择性和灵敏度，能够清晰地显示DNA的分布情况。
同时，Dapi染色还可以与其他荧光染料进行共染色，如荧光素二异氰酸酯（FITC）等，从而实现多色荧光染色，用于同时观察多种细胞结构和功能。
除了在细胞生物学研究中的应用，Dapi染色还被广泛运用于组织学和病理学领域。
通过Dapi染色，可以清晰地显示组织中细胞核的形态和数量，为病理诊断提供重要的依据。
总之，Dapi染色是一种简单而有效的细胞和组织染色方法，其原理基于Dapi与DNA的结合特性，能够清晰地显示DNA的分布情况。
在生物学研究和临床诊断中具有重要的应用价值，为科学研究和医学诊断提供了有力的技术支持。
dapi激发光范围
DAPI激发光范围引言DAPI（4’,6-diamidino-2-phenylindole）是一种荧光染料，常用于细胞核染色，结合DNA分子的特异性，可用于细胞核的定位和形态学研究。
DAPI激发光范围是指DAPI在其吸收光谱中的有效激发范围，本文将深入探讨DAPI激发光范围的相关知识。
DAPI的特性及应用DAPI的荧光特性•DAPI是一种DNA特异性染料，能通过与DNA结合发出荧光。
•它结合DNA后的发射光谱峰值在蓝紫色光的范围内。
•DAPI在紫外光（UV）激发下的最大吸收峰位于350nm左右。
DAPI在细胞核染色中的应用•DAPI可以用于对细胞核的观察定位，常与其他荧光标记物（如FITC、TRITC 等）配合使用，可以观察到荧光染色的细胞核。
•DAPI染色可用于检测细胞数量、核结构和核分裂等，对细胞学研究、细胞周期研究等具有重要意义。
•DAPI还可用于流式细胞术、显微镜分析等实验中，对细胞核的定位和形态学研究提供便利。
DAPI的激发光范围及适用条件DAPI的激发光范围•绝大多数激发光源的光谱范围可激发DAPI。
•DAPI的最大吸收峰位于350nm左右的紫外光范围。
DAPI的激发光源•常用的激发光源包括氘灯、汞灯和激光等。
•氘灯是非常常见的用于DAPI激发的光源，其输出光谱包括紫外光区域。
•汞灯是另一种常用的激发光源，其输出光谱也能够激发DAPI。
•激光器也可以用于DAPI的激发，其输出波长（wavelength）可以根据实验需求进行选择。
•实验中应根据DAPI的吸收特性和实验目的合理选择适合的激发光源。
DAPI的激发器•DAPI的激发通常需要用到相应的激发器。
•常用的激发器有滤光片和镜片等，以滤除其他波长光线而选择激发DAPI所需的波长。
•通过选择合适的激发器，可以提高DAPI的照射效果、减少背景干扰并提高信噪比。
DAPI激发光范围的影响因素染料浓度•DAPI染色液的浓度会影响其吸光度和发光强度。
DAPI染DNA的原理及应用方法
DAPI染DNA的原理及使用方法DAPI 即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，分子式为C16H15N5·2C3H6O3，分子量457.48。
DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。
它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处，一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。
结合到双链DNA上DAPI 分子的荧光强度提高大约20倍，常用与荧光显微镜观测，根据荧光的强度可以确定DNA的量。
另外，因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。
单独DAPI的最大吸收波长为340nm，最大发射波长为488nm；当DAPI与双链DNA结合时，最大吸收波长为364nm，最大发射波长为454nm（10 mM Tris pH7.0，100 mM N aCl，10 mM EDTA），其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。
DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度只有与DNA结合的荧光强度的1/5，其发散光的波长范围约在500nm左右。
DAPI的配制及贮存固体粉末：避光，2-8 ℃保存，3年没有问题。
贮存液：用无菌水配制成浓度1 mg/ml的贮存液，配好后用锡纸包起来，避光，可在-20 ℃下长期保存。
（DAPI易溶于水，在PBS中溶解度不高）使用浓度：贮存液用1xPBS稀释到终浓度100 ng/ml。
荧光封片液：0.5 mol/L碳酸盐缓冲液与甘油等体积混合，pH9.5染色与观察：制好的玻片上滴加几滴DAPI染液，染色10分钟，流水冲去染液，滤纸吸除多余水分，加一滴荧光封片液，置于荧光显微镜下观察，激发波长360-400nm。
注意事项：DAPI可能具有致癌性，全部操作过程中必须带塑料或乳胶手套。
推荐厂商：Invitrogen，Sigma资料下载：点击下载结构式：DAPI结构式DAPI与DNA的复合物晶体结构以下英文介绍摘自Wikipedia。
dapi和merge染色原理
dapi和merge染色原理Dapi和Merge染色是生物医学研究中常用的染色方法，它可以通过荧光显微镜观察细胞内的染色体、细胞核以及其他细胞器的分布情况，帮助研究员们更加深入地了解细胞的结构和功能。
本文将详细介绍Dapi和Merge染色的原理和步骤。
一、Dapi染色原理Dapi染料的名称是4’,6-diamidino-2-phenylindole，它是一种荧光染料，能够通过自然荧光发射出蓝色的光，进而染色观测细胞内的DNA、染色体和细胞核。
Dapi染色的步骤如下：1.将组织或细胞样品固定。
2.用PBS或其他缓冲液冲洗细胞，以去除污染物质和杂质。
3.将Dapi染料加入样品中，使其能够进入细胞并与DNA结合。
4.在荧光显微镜下观察样品，Dapi染料自发发射出蓝色光线，并通过荧光镜头捕捉到光的信号，从而观察样品内DNA的分布情况。
二、Merge染色原理Merge指的是多种染色剂混合使用的染色方法，简单来说就是将多种不同颜色的染料混合在一起，能够同时染色显示不同的细胞组分结构。
Merge染色的步骤如下：1.将细胞或组织样品固定。
2.用PBS或其他缓冲液清洗样品。
3.将多个生物染色剂混合而成的Merge染剂加入样品中。
4.在荧光显微镜下观察样品，各种染剂自发发射不同的荧光信号，观察样品内不同的组分结构和分布情况。
需要注意的是，Merge染色结果的可视性和检测灵敏度，一定程度上取决于样品的样质量和染色试剂的稳定性。
总结：Dapi和Merge染色是生物医学研究中常用的染色方法，直接观察生物样品内的各种结构和细胞器分布情况。
学会掌握这两种染色方法的原理和步骤，有助于研究员能够从不同角度更深入地研究细胞及其相关治疗方法，为生命科学领域的发展做出更大的贡献。
tunel和dapi染色原理
TUNEL 和 DAPI 染色原理近年来，细胞生物学和病理学领域的研究对于细胞凋亡和核酸染色方法的需求逐渐增加。
TUNEL 和 DAPI 染色方法作为常用的细胞学染色技术，被广泛运用于细胞凋亡和核酸检测方面。
下面将对 TUNEL 和DAPI 染色原理进行详细介绍。
TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick End Labeling）染色原理：1. TUNEL 染色原理概述TUNEL 技术是一种用于检测细胞凋亡的方法。
在细胞凋亡过程中，DNA 断裂是一个重要的特征。
TUNEL 技术利用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）在 DNA 断裂端引入标记的 dUTP 的原理，通过检测 DNA 断裂端的标记来识别凋亡细胞。
2. TUNEL 染色方法步骤（1）取样处理：将样本固定和包埋后，进行脱水和脱脂等处理。
（2）蛋白酶预处理：利用蛋白酶处理打开细胞核膜，提高核酸的透过性。
（3）TUNEL 反应：在 TdT 的作用下，未修饰的末端脱氧核苷酸与荧光素化的 dUTP 形成共价结合。
（4）显微镜观察：使用荧光显微镜观察并拍摄图像。
3. TUNEL 染色原理应用TUNEL 染色方法被广泛应用于许多领域，如肿瘤研究、病理学、药理学等。
通过检测细胞中凋亡的程度，可以对生物样品进行定量和定性分析。
DAPI（4',6-diamidino-2-phenylindole）染色原理：1. DAPI 染色原理概述DAPI 是一种结合到 DNA 的蓝色荧光染料，具有高度亲和力和高度特异性。
DAPI 与 DNA 结合后在核型显微镜下会呈现出亮蓝色的荧光。
2. DAPI 染色方法步骤（1）细胞固定：利用适当的方式将细胞固定在载玻片上。
（2）DAPI 染色液：将含有 DAPI 的染色液滴在载玻片上，让细胞充分吸收。
（3）显微镜观察：利用蓝光激发荧光显微镜观察并拍摄图像。
3. DAPI 染色原理应用DAPI 染色方法在细胞学和病理学领域有着广泛的应用。
dapi法
DAPI法1. 什么是DAPI法？DAPI（4’,6-diamidino-2-phenylindole）法是一种常用的荧光染色技术，用于检测DNA。
它是一种靶向DNA的荧光染料，可以结合到DNA的腺嘌呤和胸腺嘧啶碱基上，形成荧光复合物。
DAPI法广泛应用于细胞生物学和分子生物学领域，可以用于检测细胞核的数量、形态和结构，以及细胞周期的研究。
2. DAPI法的原理DAPI是一种DNA特异性染料，在紫外线激发下发出蓝色荧光。
它通过与DNA中富含的腺嘌呤和胸腺嘧啶碱基发生π-π堆积作用而结合到DNA分子上。
DAPI与DNA 结合后，可以通过荧光显微镜观察到细胞核中的荧光信号。
DAPI法主要有以下几个步骤：2.1 样本制备首先需要准备待测样本。
样本可以是细胞培养物、组织切片等含有DNA的材料。
对于细胞培养物，需要将细胞收集并进行固定处理，以保持细胞形态的完整性。
对于组织切片，需要将组织切片固定并进行脱水、透明化等处理，以便于DAPI染色和观察。
2.2 DAPI染色将样本进行DAPI染色。
首先，将样本固定在载玻片上，并用PBS（磷酸盐缓冲液）进行洗涤，去除杂质。
然后，加入DAPI溶液。
DAPI溶液的浓度一般为1μg/ml至5μg/ml。
将DAPI溶液加到样本上，并遮盖玻片以防止其干燥。
在室温下或4°C条件下孵育样本约10分钟至30分钟。
不同的样本类型和实验目的可能需要不同的孵育时间。
2.3 洗涤孵育完成后，用PBS洗涤载玻片上的样本。
洗涤时间和次数根据实验需求而定。
洗涤的目的是去除未结合的DAPI分子和其他杂质，保证观察到的荧光信号准确可靠。
2.4 观察与图像获取使用荧光显微镜观察载玻片上的样本。
DAPI发出的蓝色荧光可以通过选择合适的滤光片来观察。
通过调整显微镜的聚焦和光源强度等参数，可以获得清晰、明亮的荧光图像。
可以使用相机或图像采集系统记录下图像。
2.5 数据分析对于获得的荧光图像，可以使用图像处理软件进行进一步分析。
根的dapi染色原理
根的dapi染色原理
根的dapi染色原理
植物的根是植物体的重要组成部分，主要负责吸收水分和养分，并为
植物提供支持。
研究根的生长和发育对于植物学和生物学都有着重要
的意义。
在根的研究中，使用dapi染色是一种常见的方法，本文将介
绍根的dapi染色原理。
dapi染色是一种核酸染色方法，主要通过结合核酸分子的特殊化学性
质来染色。
在dapi染色中，染料分子会通过静电作用和氢键作用与其
他带有电荷的分子结合。
这种静电作用和氢键作用的条件是分子带有
一些特定的基团，如氨基和甲基。
对于根的dapi染色，我们需要使用dapi染料溶液和显微镜。
首先，将
待染色的植物根样品在水中清洗。
接下来，将根样品置于dapi染料溶
液中，在黑暗环境下孵育5至10分钟，让染料渗透到根细胞中。
然后，将根样品移入显微镜盖玻片上并覆盖漆黑的封片。
最后，在荧光显微
镜下观察根细胞的染色情况。
使用dapi染色后，根细胞的染色情况非常明显。
通过dapi染料的选择
性结合，使细胞核染成绿色，细胞质染成暗蓝色。
这使得研究者可以
更清晰地观察和分析根细胞的结构和形态。
此外，通过dapi染色，还
可以检测细胞核内的DNA含量和分布，以及核仁和核糖体等细胞器的
分布。
总的来说，dapi染色是一种快速而有效的根细胞染色方法，可用于研
究根的结构和功能，以及分析细胞器分布和细胞核的DNA含量和分布。
通过对根的dapi染色的了解，更深入地了解植物的生长和发育，对于
植物学和生物学的研究有很大的帮助。
DAPI标记的原理
DAPI标记的原理，应用以及优缺点一、DAPI的特性DAPI荧光染料是由Dann等人于1971年合成的，共化学名称为4',6-diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride (DAPI) 的中文名称是4，6-联脒-2-苯基吲哚，其结构式为是一种常用的荧光染料，分子量为350．3．这种二价阳离于的荧光染料是一种黄色晶体易镕于水，最大溶解度为2．5％．可按高浓度的两价或高价阴离于(硫酸盐离子和磷酸盐离子)所沉淀，其作用机理与溴化乙锭等染色剂的机理类似：DAPI具有与各种来源的、富古A—T碱基对的DNA专一结合的特点．DAPI与DNA形成的复合物发出志强度的浅蓝色荧光．共最大的激发波长为372nm，最大的发射波长为454nm，其荧光可按适当浓度的SO42－加强．DAPI最初是作为一种杀锥虫剂合成的，以后用于DNA的检测．Brunk等和Coleman 等人证明了DAPI荧光强度与细胞内的DNA含量呈正比，并指出，在pH4—8范围内，DAPI －DNA 复合物的荧光强度不受pH变化的影响．用DAPI染色法可以测出2x10－16g DNA。
近年来，DAPI多用于细胞生物学和细胞遗传学的研究，由于死、活细胞的细胞膜对DAPI的通透性不同，极低浓度(0.5ug／ml)的DAPI就可与死亡细胞的DNA结合，产生明亮而稳定的荧光，所以人们开始把这一理想的话体荧光染科用于微生物、植物和动物细胞的细胞生物学和生物化学的研究。
作为一种新型的DNA荧光染科，它具有专一性强、灵敏度高、稳定性好等特点，而且迄今尚来见到DAPI致癌。
致畸等毒性报告．有文献称之为无毒性荧光染料(Renard，1982)．利用DAPI能与细胞DNA稳定结合这一特性，最近被人们用于干细胞的体内示踪。
如造血干细胞和间充质干细胞的体内移植。
SsxDAPI是一种标记细胞核的荧光染料，因其与dsDNA有高度的亲和力，与DNA结合后会发出强烈的荧光。
dapi最大激发波长
dapi最大激发波长DAPI是一种荧光染料，被广泛应用于生物学和细胞学研究中，特别是在细胞核染色和DNA定位研究中。
DAPI最大激发波长为358纳米，是一种特殊的荧光探针，可以选择性地与DNA结合，从而使细胞核染色成为可能。
本文将探讨DAPI的应用、原理以及与其相关的研究进展。
DAPI在细胞核染色中起到了关键的作用。
细胞核是细胞的重要组成部分，其中包含着细胞的遗传信息。
通过使用DAPI染色，科学家可以清晰地观察和分析细胞核的形态、结构和功能。
DAPI与DNA 结合后会发出蓝色荧光，使细胞核在显微镜下呈现出明亮的蓝色。
这种染色方法简单、可靠，且对细胞活性影响较小，因此在细胞学和遗传学研究中得到了广泛应用。
DAPI的荧光原理也是研究的重点之一。
DAPI是一种DNA结合荧光染料，它通过与DNA的碱基间氢键结合来实现荧光标记。
DAPI分子中含有多个芳香环和亚胺结构，这些结构使得DAPI能够与DNA 的碱基间发生氢键作用。
这种结合使得DAPI在特定波长下被激发后发出特定的蓝光。
同时，DAPI与RNA的结合较弱，因此在染色过程中可以选择性地染色细胞核而不影响胞浆的观察。
近年来，随着生物技术的发展，关于DAPI的研究也不断取得进展。
一方面，科学家们对DAPI的结构进行了改良，设计出了更加灵敏和稳定的DAPI衍生物。
这些改良的DAPI染料在细胞核染色中表现出更高的亮度和更低的背景噪音，提高了细胞核结构的可视化效果。
另一方面，研究人员还利用DAPI的特殊荧光性质，开展了一系列与DNA定位和DNA含量分析相关的研究。
这些研究为我们深入了解细胞核的结构和功能提供了重要的工具和方法。
总结起来，DAPI作为一种荧光染料在生物学和细胞学研究中具有重要的地位和应用价值。
通过与DNA的选择性结合，DAPI可以使细胞核在显微镜下清晰可见，为细胞核的研究提供了有力的工具。
随着对DAPI的深入研究，我们相信它在细胞学和遗传学领域的应用将会更加广泛和深入。
DAPI染色
DAPI染色1．原理DAPI为4’，6二脒基-2-苯吲哚(4’，6—diamidino-2—phenylindole)能与双链DNA小槽，特别是AT碱基结合，也可插入少于3个连续AT碱基对的DNA序列中。
当它与双链DNA结合时，荧光强度增强20倍，而与单链DNA结合则无荧光增强现象，因此是一种简易、快速和敏感地检测DNA的方法。
DAPI的荧光强度虽较Hoechst低，但荧光稳定性优于Hoechst；其特异性较溴化乙啶(ethidlium bromide，EB)和碘化丙啶(propidium iodide，P1)高。
2．溶液配制(1)0．01mol／L PBS(pH7．0)：取0．1mol／L NaH2PO4·H2O 34ml、0．1mol／LNa2HPO4 66ml、NaCl 0．9g，溶于900m1双蒸水；(2)DAPI储存液：将0．5mgDAPI溶于5．0ml PBS中，分装，低温长期保存；(3)DAPI工作液：用PBS稀释DAPI储存液，终浓度为0．1ug／ml。
3．染色程序(1)培养的单层细胞(未固定)或新鲜组织的冰冻切片等，PBS漂洗5分钟；(2)DAPI工作液室温染色5～20分钟(可根据实验材料的染色结果而定)；(3)PBS漂洗；(4)水溶性封片剂封片，游离细胞也可直接用含DAPI的PBS封片；(5)荧光显微镜观察。
结果：正常的细胞核呈强荧光，细胞质无荧光；固定的组织细胞同样处理，亦可得到相似的染色结果。
在有支原体污染的细胞质和细胞表面可见孤立的点状荧光，在感染痘苗病毒的细胞质中存在独特的“星状”荧光簇(star-like fluorescent clusters)，腺病毒感染早期胞质中也可出现荧光。
DAPI分子式C16H17Cl2N5 分子量350.25 性质 1. 外观黄色粉末2. 纯度≥95%HPLC3. 产品描述DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。
和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。
DAPI
染色原理：
DAPI 为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链 DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧 光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下 可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察细胞标记的效率高 (几乎为100 %) ，且对活细胞无毒副作用。DAPI染色常用于细胞 凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也 常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。 细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟，在荧光显微镜下可以看到 到细胞核的形态变化。 a、 正常的烟草细胞核：核形完整，染色质均匀。 b、 染色质固缩，向外周聚集，形成周边化。 c、 染色质进一步固缩，形成很多颗粒物质。 d、 细胞核破裂形成碎片‘,6-二脒基-2-苯 基吲哚(4’,6-diamidino2-phenylindole)，是一 种能够与DNA强力结合 的荧光染料，常用于 荧光显微镜观测。因 为DAPI可以透过完整 的细胞膜，它可以用 于活细胞和固定细胞 的染色。
• 在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光 线激发。当DAPI与双股DNA结合时，最大吸收波长为 358nm，最大发射波长为461nm，其发散光的波长范围 含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合，但产生 的荧光强度不及与DNA结合的结果，其发散光的波长范 围约在400nm左右。 • DAPI的发散光为蓝色，且DAPI和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染剂(红色荧光染剂) 的发散波长，仅有少部分重叠，研究员可以善用这项 特性在单一的样品上进行多重荧光染色。 • DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，因此DAPI对生物 体而言，也被视为一种毒性物质与致癌物。使用过程 中应注意操作与抛弃的处理程序。
dapi激发波长和发射波长
dapi激发波长和发射波长DAPI（4',6-diamidino-2-phenylindole）是一种DNA荧光染料，广泛应用于生物学和医学研究领域，用于检测细胞核和染色体。
DAPI荧光显微镜广泛应用在生物学技术中。
DAPI可以通过吸收UV光来激发，发射出蓝紫色的荧光信号。
在进行DAPI荧光显微镜观察时，需要注意激发波长和发射波长，下面将会详细介绍。
第一步：概述DAPI荧光显微镜观察必须了解激发波长和发射波长。
激发波长是荧光染料在吸收光子后进入激发状态的波长。
DAPI需要使用紫外线来激发，激发波长为350 nm。
发射波长是荧光染料返回基态并发出荧光时所发射的波长。
DAPI发射波长为 460nm的蓝色荧光。
第二步：激发波长和荧光显微镜在进行DAPI荧光显微镜观察时，需要使用可以激发紫外线的荧光显微镜。
常用的激发波长为350nm的紫外线。
通过调节荧光显微镜的滤镜，可以选择合适的发射波长进行观察，DAPI发射的蓝紫色荧光可以容易地被分辨和捕捉。
第三步：DAPI的特点及应用DAPI荧光染料是一种极具选择性和敏感性的DNA标记，特别适用于细胞核或染色体的染色。
同时，DAPI荧光染料也可用于菌落计数。
DAPI可以穿透多层细胞膜，通过紫外线激发后可以将DNA很容易地染成紫色，可用于快速、灵敏地检测微生物。
DAPI还可以用于开展细胞生物学领域的其他研究，例如细胞核数量的计数以及观察细胞的有丝分裂现象等。
总而言之，DAPI是一种灵敏、实用并且广泛应用于多种生物学领域的DNA荧光染料。
在进行DAPI荧光显微镜观察时，需要了解激发波长和发射波长。
通过合适的荧光显微镜和滤镜选择，我们可以快速、准确地观察到样品中的细胞核和染色体等微小结构。
dapi染色原理
dapi染色原理DAPI染色原理。
DAPI（4',6-diamidino-2-phenylindole）是一种广泛应用于细胞生物学和生物医学研究中的荧光染色剂，主要用于DNA的染色。
DAPI染色原理基于其与DNA结合的特性，使得DNA在荧光显微镜下呈现出蓝色荧光。
下面将详细介绍DAPI染色的原理及其在实验中的应用。
DAPI是一种紫外光激发的荧光染色剂，其最大激发波长为358纳米，最大发射波长为461纳米。
在细胞实验中，DAPI通常与细胞固定剂一起使用，如乙醇或甲醛，以固定并渗透细胞膜，使得DAPI能够进入细胞内部并结合DNA。
DAPI与DNA结合后，由于其特异性和高亲和力，能够发出强烈的蓝色荧光，从而使得细胞核在荧光显微镜下清晰可见。
DAPI染色的原理主要基于其与DNA的结合。
DAPI是一种双腺嘌呤类似物，其分子结构中含有两个氨基苯基吲哚环，这些结构使得DAPI能够通过π-π堆积和氢键相互作用与DNA中的腺嘌呤和胞嘧啶结合。
在细胞实验中，DAPI能够与DNA的碱基对结合，形成稳定的DAPI-DNA复合物，从而实现对DNA的高度选择性染色。
由于DAPI与DNA的特异性结合，因此在细胞实验中被广泛应用于DNA染色和细胞核标记。
在免疫荧光染色实验中，DAPI通常与抗体共染色，用于观察细胞核的位置和形态。
此外，DAPI还可用于细胞凋亡的检测，因为在凋亡过程中，细胞核会出现形态上的改变，DAPI染色能够清晰地显示这些变化。
在细胞遗传学研究中，DAPI也被用于观察染色体的数量和形态。
总之，DAPI染色原理是基于其与DNA的特异性结合，使得DNA在荧光显微镜下呈现出蓝色荧光。
由于其高度选择性和特异性，DAPI在细胞生物学和生物医学研究中得到了广泛的应用，成为了观察DNA和细胞核的重要工具。
希望本文对DAPI染色原理有所帮助，谢谢阅读！。
免疫荧光染色技术
免疫荧光染色技术标签: 荧光免疫染色技术2009-04-07 22:28最近看了几篇文章，文中都涉及一项技术叫：免疫荧光染色。
感觉这项技术不错，实验的图片经过染色很漂亮，再一merge，更加说明问题，今日网上搜来有关介绍，恶补一下。
竟觉也不是和特别，所谓难者不会，会者不难，大概也就是如此了。
将该项技术介绍如下：（转载）荧光免疫染色和DAPI染色实验1．实验原理免疫染色的实验原理类似于Western Blotting，两者都是运用抗体的特异性识别作用来显示目的蛋白，但是由于免疫染色需要在原位进行，而且蛋白没有经过富集，因此其实验难度较高。
实验的基本原理是：利用固定剂（通常是甲醛或多聚甲醛）将细胞固定，使得细胞膜的通透性大大增加，并且利用Triton-X-100使得一部分膜蛋白变性，从而使通透性进一步加强。
利用正常羊血清封闭，可以令许多蛋白先与血清内的非特异性抗体结合，而特异性的抗体由于动力学的关系可以通过竞争性的反应与目的蛋白结合，这一过程可以保证抗体识别的特异性。
二抗可以特异性识别一抗的Fc区域，利用二抗连接不同的荧光基团，就可以在荧光显微镜下观察到不同的荧光，从而显示目的基因的表达情况。
另外，免疫荧光实验由于其较高的敏感性可以显示出基因表达的亚细胞情况(核内，核外，膜上以及一些较大的细胞器上)，所以通常被用来作为基因定位的方法。
DAPI的中文名称是4，6-联脒-2-苯基吲哚，是一种常用的荧光染料，其作用机理与溴化乙锭（EB）等染色剂的机理类似：它们与DNA双螺旋的凹槽部分可以发生相互作用，从而与DNA的双链紧密结合。
结合后产生的荧光基团的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好UV（紫外光）的激发波长是356nm，使得DAPI成为了一种常用的荧光检测信号。
Jagielski M. et. Al在1976年首次运用该技术检测细胞培养中的支原体感染。
后来随着技术的进步，该技术被运用于各种微生物的检测、生长监测，胚胎发育过程的检测，细胞周期的检测和各种核定位的实验。
二氨基吖啶原理
二氨基吖啶原理二氨基吖啶（DAPI）是一种常用的荧光染料，它是一种具有高亲和力的碱性染料，可以与DNA结合形成稳定的复合物。
DAPI的原理主要涉及其荧光性质和与DNA的相互作用。
首先，DAPI具有很强的荧光性质。
DAPI的化学结构中含有一个苯基和两个胺基，胺基能与DNA中的磷酸盐基团形成电荷转移复合物。
当DAPI与DNA结合时，由于电子转移现象的存在，可以导致DAPI分子的激发态发生非辐射性能量转移，并发出可以被肉眼或荧光显微镜观察到的荧光信号。
其次，DAPI与DNA的相互作用是基于静电吸引力和碱基对的识别。
DNA是由四种碱基（腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤和胞嘧啶）组成的长链生物分子，它具有正电荷的磷酸盐基团和负电荷的糖磷酸基团。
DAPI的两个胺基能与DNA中的磷酸盐基团形成静电吸引力，使DAPI与DNA结合形成非共价键的复合物。
此外，DAPI的苯基可以与DNA的碱基对进行特异性的识别，这进一步增强了DAPI与DNA之间的结合。
DAPI与DNA的结合使得DAPI分子在DNA上形成准规则的排列，从而形成可观察到的荧光信号。
最后，DAPI染色技术广泛应用于细胞生物学和遗传学研究中。
通过DAPI染色，可以观察到细胞核的结构和形态，判断细胞的质量和染色体的数量。
在细胞周期研究中，DAPI染色可以确定细胞所处的具体阶段。
此外，DAPI还可以用于血细胞计数和性染色体鉴定等领域。
总结起来，DAPI染色原理的核心是基于DAPI与DNA之间的相互作用。
DAPI利用其荧光性质与DNA结合形成稳定的复合物，从而实现对DNA的染色和观察。
DAPI染色技术在生物科学研究中具有重要的应用价值，可为研究者提供有关细胞和遗传学的重要信息。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
DAPI标记的原理，应用以及优缺点一、DAPI的特性DAPI荧光染料是由Dann等人于1971年合成的，共化学名称为4',6-diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride (DAPI) 的中文名称是4，6-联脒-2-苯基吲哚，其结构式为是一种常用的荧光染料，分子量为350．3．这种二价阳离于的荧光染料是一种黄色晶体易镕于水，最大溶解度为2．5％．可按高浓度的两价或高价阴离于(硫酸盐离子和磷酸盐离子)所沉淀，其作用机理与溴化乙锭等染色剂的机理类似：DAPI具有与各种来源的、富古A—T碱基对的DNA专一结合的特点．DAPI与DNA形成的复合物发出志强度的浅蓝色荧光．共最大的激发波长为372nm，最大的发射波长为454nm，其荧光可按适当浓度的SO42－加强．DAPI最初是作为一种杀锥虫剂合成的，以后用于DNA的检测．Brunk等和Coleman等人证明了DAPI荧光强度与细胞内的DNA含量呈正比，并指出，在pH4—8范围内，DAPI－DNA 复合物的荧光强度不受pH 变化的影响．用DAPI染色法可以测出2x10－16g DNA。
近年来，DAPI多用于细胞生物学和细胞遗传学的研究，由于死、活细胞的细胞膜对DAPI的通透性不同，极低浓度(0.5ug／ml)的DAPI 就可与死亡细胞的DNA结合，产生明亮而稳定的荧光，所以人们开始把这一理想的话体荧光染科用于微生物、植物和动物细胞的细胞生物学和生物化学的研究。
作为一种新型的DNA荧光染科，它具有专一性强、灵敏度高、稳定性好等特点，而且迄今尚来见到DAPI致癌。
致畸等毒性报告．有文献称之为无毒性荧光染料(Renard，1982)．利用DAPI能与细胞DNA稳定结合这一特性，最近被人们用于干细胞的体内示踪。
如造血干细胞和间充质干细胞的体内移植。
DAPI是一种标记细胞核的荧光染料，因其与dsDNA有高度的亲和力，与DNA结合后会发出强烈的荧光。
DAPI对活细胞无毒性，不改变细胞器的超微结构，荧光保持时间较长。
文献显示DAPI标记的肌卫星细胞移植到宿主心肌2月后仍然可以看到。
但DAPI在电镜下没有显示，若进行超微结构追踪观察需结合其它特殊的抗体标记。
二、方法Cells主任介绍了利用DAPI染色标记细胞核的方法：实验用具及材料试剂：PBS, 胎牛血清（FBS）,固定液, DAPI染色液, DMEM培养基, 胰酶（Trypsin）器材：培养皿, 15ml离心管, 试剂瓶, 微量移液器, 脱色摇床, 锡箔, 荧光显微镜和CCD溶液配制（1）固定液：将4g多聚甲醛加入80mlPBS中，搅拌过夜或者搅拌过程中微热直至固体全部溶解，定容至100ml就成为4％的多聚甲醛固定液。
（2）DAPI染色液：在500ml水中加入8.5gNaCl和1.2gTris碱，用盐酸调pH值至7.4，再加入4ml 500mM的CaCl2和44ml 500mM的MgCl2以及0.05g的BSA；最后加入10mg的DAPI和100ml的DMSO，定容至1L，4度保存。
实验步骤（1）转染两天后的细胞吸取培养基后，PBS洗一次。
（2）用4%的多聚甲醛PBS在室温固定15分钟。
（3）用PBS在室温漂洗三次，每次10分钟。
（4）用含0.5%Triton-X-100的PBS在室温穿孔15分钟（5）用PBS在室温漂洗三次，每次10分钟。
（6）加入DAPI染色液室温作用15分钟以上，此后用锡箔包裹。
（7）用PBS在室温漂洗三次，每次10分钟。
（8）再荧光显微镜下观察，用UV波段激发，照相保存实验结果。
Cells主任由介绍了MSC的标记方法：MSC-DAPI 标记（心肌细胞）:将无菌的DAPI 储存液(美国Sigma 公司) 加入培养的MSC 上清中,至终浓度为50 mg/ L ,37 ℃孵育染色至少30 min。
细胞至少用Hanks 平衡盐溶液冲洗6 遍以除去未结合的DAPI。
离心收集细胞,用无血清的DMEM 悬浮至移植所需浓度,置于冰上至少1 h 备用。
贴张图，比较形象生动。
摘自：中华医学杂志2003 年11 月25 日第83 卷第22 期骨髓间充质干细胞在激光损伤大鼠视网膜下分化的观察。
DAPI为半通透性，用于常规固定细胞的染色。
储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用终浓度一般为0.5 ~1mg/ml。
三、不足但DAPI也有一定的不足：1、DAPI除与DNA双链结合外，还可与细胞浆中的微管蛋白结合，故胞浆也着蓝色。
DAPI标记细胞的很大不足就是当标记细胞死亡后，就可以释放出DAPI，将周围未标记的细胞标记，从而产生假阳性，这也是我们用这类荧光染料标记细胞时必须考虑的问题。
文献报道骨髓间充质干细胞可以用绿色荧光蛋白（GFP）来标记，但具体方法操作起来比较复杂，也有用DAPI来标记的，但是假阳性率较高。
参考文献DAPI荧光技术在动物生产中的应用东北农学院学报第23卷第2期1992年6月DAPI标记细胞也存在随细胞分裂荧光减弱的现象，DNA结合型荧光染料标记的方法，有一个难以克服的问题：细胞在受体内是否存活难以证明，因为这些经过荧光染料标记的细胞被巨噬细胞吞噬后，细胞碎片在巨噬细胞内也可以有荧光表达的。
Y染色体原所以，仅使用这样的标记方法是很难在国际杂志发表论文的。
比较可信的标记方法是位杂交和转基因标记，如果大家准备研究干细胞移植，就应当首先建立这样的技术平台，否则，最后的实验结果可能不被接受！注意：DAPI能维持时间的长短与被标记细胞分裂周期有关，分裂的次数越多持续时间越短，细胞死了当然另算了。
体外培养, DAPI会缓慢排出体外，一般在1-2个月左右。
如果是对心肌细胞染色，进入体内移植，可以持续2-3个月。
常规干细胞跟踪技术1.遗传性地改变细胞的基因，使其表达特异性的标志物。
（1）绿色荧光蛋白（GFP）及增强GRP报告基因的转染。
（2）β半乳糖苷酶（β-Gal、LacZ）基因转染细胞标记技术。
这是目前鉴定移植心肌细胞最常用的方法。
将携带有β半乳糖苷酶基因的质粒载体、逆转录病毒载体或腺病毒载体转染待移植的EG细胞，通过检测受体心肌或其他组织中的β半乳糖苷酶活性，可以对移植的EG细胞进行定性和定位观察。
2.选用雌性供体和雄性宿主，利用W染色体作为标志物。
鸡染色体组成是雌杂合型(ZW型)：雌性个体性染色体组成为ZW,雄性个体性染色体组成为ZZ。
移植后，通过检测雄性宿主不同组织中的W染色体出现的情况，来判定外源性的EG细胞在宿主体内的分布。
3.利用染料标记细胞。
用hochst33342标记胚胎生殖瘠细胞。
将染料与EG细胞孵育。
优点：标记率高，95%以上的细胞可被标记。
操作简单，不需要进行染色等操作。
标记时间长，有报道称细胞染色后体内移植，结果半年后取细胞检测，仍有hochst阳性。
缺点：主要是不能观察细胞的形态，只能用于定位。
4.移植前用5溴-2脱氧尿苷（BrdU）或氚标记去氧胸腺嘧啶核苷来标记正在分裂的细胞。
用BrdU标记骨髓干细胞的优点是：①简单、快速、安全，检测的敏感性好；②在免疫细胞化学技术中，可产生一种对比度高的标记，且在低倍镜中亦可见，因此，适合于大块组织的快速检查，尤适于定量研究；②BrdU既可用于活体标记，亦可用于细胞或组织细胞增殖、分化的标记。
在石蜡包埋的组织或冰冻组织切片中，均可被显示，背景低、阳性和阴性易区分。
④使用BrdU对活体动物无任何副作用。
此方法的缺点为标记时间较短。
5.DAPI染色标记示踪技术DAPI 为一种荧光染料,能与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用,在紫外光激发下,DAPI 在波长为345nm 的条件下荧光强度最高, 镜下可以看到显蓝色荧光的细胞,荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100 %) ,且对活细胞无毒副作用。
在细胞移植前,将DAPI 以一定的浓度加入培养基中,与细胞共同孵育过夜,用PBS 缓冲液漂洗至少6 次以洗掉未结合的DAPI , 在用酶消化后离心收集细胞, 加入DMEM 培养基制成细胞悬液以备用。
就细胞死后释放DAPI的问题：我们做过相关实验，将细胞DAPI标记后“杀死”，加入没有标记的细胞，过一段时间后观察，发现后加入的细胞被染上的程度极轻，与细胞移植的心脏切片中观察到的标记细胞有明显不同（明亮的兰色荧光）（有时间我会上传一些图片）。
同时做HE染色，在1000倍下面观察，并与荧光相片做同一视野的对照，发现标记细胞核浆比很大，胞浆很少，稍嗜碱性，与心肌细胞有明显的差异（1000倍）。
显然兰色荧光来自移植细胞。
如果要求100%把握，可以将细胞做双标。
hoechst只能标记出核，细胞的形态看不见，就是说只能定位用，不能用于观察细胞了。
我用hochst33342（SIGMA)标记的神经干细胞。
效果很好。
细胞核在荧光下很清晰。
hochst33342用PBS配成10UG/ML，将细胞PBS洗上2-3遍后，加入hochst33342，37度孵育30min，然后再用pbs洗2-3遍，就可镜下观察了。
我觉得优点很明显：1、标记率高，个人感觉95%以上的细胞可被标记。
2、操作简单，不需要进行染色等操作。
3、标记时间长，我们有同学号称细胞染色后体内移植，结果半年后取细胞检测，仍有hochst 阳性！（但是我对体外培养的细胞染色后，养了半个月，基本看不见明显的荧光了，可能是由于体外不断的光线作用，还有细胞分裂使得荧光量减少）缺点主要是1、不能观察细胞的形态，只能用于定位。
2、随着细胞的分裂，荧光量好像减弱。