浅析血凝抑制试验中易出现的问题及其纠正措施

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探讨血凝和血凝抑制试验常见问题及解决方法

探讨血凝和血凝抑制试验常见问题及解决方法发表时间：2017-04-11T14:21:49.713Z 来源：《航空军医》2017年第3期作者：郭博[导读] 随着社会经济文化的不断进步与发展，国家综合国力日益提升，在科学技术日渐更新和网络信息化时代的基础上，医学卫生事业也取得显著的进步。

黑龙江省齐齐哈尔市建华医院 161000【摘要】血凝和血凝抑制的试验，对于医学事业的发展具有十分重要的影响，尤其是对于当前社会中相关疫病的检查和检测，能够起到一定的积极作用。

在医学发展进程中，血凝和血凝抑制试验是当前我国医疗卫生发展的重要项目，同时也是我国各地区域开展疫病诊断和疫病调查的重要手段之一。

在血凝和血凝抑制试验中涉及到了关于红细胞和抗原体的反应，因此试验过程容易受诸多因素的影响，而造成试验结果的偏差。

本篇文章主要对血凝和血凝抑制试验常见的问题进行分析，同时着重探讨血凝和血凝抑制试验常见问题的解决措施。

【关键词】血凝抑制试验；常见问题；解决方法[Abstract] hemagglutination and hemagglutination inhibition test，has very important influence on the development of medical industry，especially for inspection and detection of related diseases in the current society，can play a positive role. In the process of medical development，hemagglutination and hemagglutination inhibition test is an important item in the development of China's medical and health care，but also one of the important means to carry out the disease diagnosis and epidemic investigation. In the hemagglutination and hemagglutination inhibition test，the reaction of red blood cell and antigen body is involved，so the test process is easy to be influenced by many factors，which leads to the deviation of test results. This article mainly analyzes the common problems of hemagglutination and hemagglutination inhibition test，and focuses on the solutions to the common problems of hemagglutination and hemagglutination inhibition test.[Methods] common problems of hemagglutination inhibition test前言：随着社会经济文化的不断进步与发展，国家综合国力日益提升，在科学技术日渐更新和网络信息化时代的基础上，医学卫生事业也取得显著的进步。

分析血凝试验检测结果质量的影响因素及质量改善对策

0 引言
血凝试验检测属于临床检验科较为常见的检验手段之一，能为患者疾病的诊断、治疗提供相应的参考依据。因此，提高血凝试验检测质量显得尤为重要。但在实施血凝试验检测过程中由于各种因素的影响会导致血凝试验检测质量受到影响，检测结果出现较大偏差，不利于患者疾病的诊断及治疗方案的制定 [1]。为了分析血凝试验检测结果质量的影响因素及质量的改善对策，我院检验科针对实施血凝试验检测的患者 156 例进行了临床观察。
主要包括人为操作、环境影响、试验材料及患者自身因素等。
3 讨论
在对血凝试验检测结果质量的影响因素探究过程中发现，影响其质量的因素主要包括如下：（1）人为操作：在对患者血液采集之前未告知患者采集血液当天应保证空腹状态，多数患者采集血液当天吃过的东西，使得血液内的乳糜微粒对检测结果产生一定影响。加上采血过程中未能选择合适的采血部位、止血带绑扎的过松或过紧、穿刺技术不到位等导致血液质量受到影响，或血液采集量不符合试验检测的需求 [2]。（2）环境影响：在采集血液完成后未能对采集的血液在固定时间内实施离心处理，血液放置的时间过长，导致血液质量受到影响，进一步的影响了检测结果的质量。或由于在实施离心操作过程中未能符合相关要求控制室温，导致检测结果受到影响 [3]。（3）试验材料：在实施血液标本的检验及处理之前，未能按照检测流程及要求对仪器设备等的稳定性进行检查，未能实施仪器的预热处理，导致检测质量受到影响的现象出现。还可能由于试验检测过程中收集血液的真空采集管密闭程度不过关，采集血液过程中产生了气泡现象、未能结合血液标准的实际剂量合理选择适量的抗凝剂用量及比例等导致检测结果质量受到影响的现象出现 [4]。（4）患者自身因素：由于接受检测的近期或当天服用过阿司匹林、吲哚美辛、肝素及双香豆素等药物的治疗，导致患者血凝时间延长、凝血酶原活性受到抑制、血小板黏附聚集受到阻碍等现象，影响了最终的血凝试验检测结果的质量 [5]。

血凝和血凝抑制试验常见问题及解决方法

一
【】何书贵，晓红．强猪人工授精站管理，３初加大力推广生猪
牧业，０１４：５２１，）．（１【】罗旭芳，７张守全，３）化猪场Ａｓ授精技术应用研究等．２－－－【．Ｊ江西农业大学学报（］自然科学）２０，（）１－１，０２２４：３５６４５【】郭应林，彭辉，８伏公猪精液品质的影响因素及其改进途径ｆ．Ｊ畜禽业，０９￣）６４．Ｊ２０，：－９４
南放兽廛
ｄｉ．９９．ｓ．０６４０．０．５０ｏ：Ｏ３６￣ｉｎ１０－９７２１０．１ｌｓ２８
２１年第５总第１１０２期（７期）
血凝和血凝抑制试验常见问题及解决方法
蔡文杰 ’邱立新。邱美珍杜丽飞 ’ 。一，。
（．南畜牧兽医研究所，南长沙４０３；．南省动物疫病预防控制中心，南长沙４００）１湖湖１验是目前我国各地开展疫病诊断、流行病学调查、免疫程序制定及免疫效果监测等的主要手段之一。由于其涉及红细胞凝集及抗原抗体的特异性反应，作过程常受多种因素影响，易造成偏差。文操容章针对血凝和血凝抑制试验中常见问题，血凝和血凝抑制试验的缓冲体系、从血凝板或微量振荡器、％鸡红１细胞悬液配制等方面进行分析，总结经验和解决方法。并
技，０（５：６３８２１，）２～２．１１３
日期：０２７３２１－０－０

血凝试验影响因素浅析

血凝试验影响因素浅析血凝试验临床上常规的检查项目主要包括凝血酶原时间（PT）测定、活化部分凝血活酶时间（APTT）测定、凝血酶时间（TT）测定、纤维蛋白原（Fg）测定，是一组能反应凝血途径中各种凝血因子异常的筛查试验。

这些检查项目已广泛应用于出血、血栓性疾病诊断、鉴别诊断、疗效观察、抗凝药物剂量监测和患者手术前的检查。

血凝试验检验是一项比较复杂的过程，且容易出现误差，通常情况下，在血凝试验过程中其中的某些因子一旦被某些因素激活，会造成一系列的连锁反应，造成检测结果出现很大的偏差[1]。

这就要求我们检验人员必须了解和掌握与之相关的因素，尽量避免其对试验结果的影响。

本文对影响血凝试验以下几个方面因素进行探讨。

1 血液标本的采集、运送与处理1.1标本采集前患者的准备患者要处于平静和空腹状态，以免造成凝血因子、血小板和纤溶成分的激活。

采血前1w内不可服用对血凝试验有影响的药物，某些药物本身就具有影响凝血机制的功能或是有协同抗凝作用[2]，如水合氯醛、阿司匹林、保泰松、氯贝丁酯、吲哚美辛等可使口服抗凝药物在血液中浓度明显增高。

大剂量使用青霉素（血浆浓度达5000U/ml）可使PT、APTT明显延长，且随药物浓度的增加而延长[3]。

头孢哌酮分子中甲硫甲唑环的侧链与前凝血酶原相仿；羧酶可错误地与抗生素结合而导致凝血酶原的形成减少，干扰肝脏中维生素K的代谢，导致低凝血酶血症[4]。

口服避孕药、雌激素、妊娠、香豆素类药物、肝素、天冬酰胺酶、纳洛酮可影响APTT。

1.2采血用具采血建议使用真空管收集标本，或选择使用一次性塑料注射器、硅化玻璃注射器。

贮血使用塑料试管或硅化玻璃管，不宜使用普通玻璃器，避免血小板和凝血因子活化。

样本采集后，若不能立即测定，应将样本加塞保存，因为样本暴露于空气中可使pH值升高，引起血浆凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血活酶时间（APTT）延长。

1.3标本采集采血前不要拍打采血部位，采血人员技术熟练，“一针见血”，组织损伤后，组织液中的因子Ⅲ可激活外源性凝血途径，加速凝血酶原的消耗，造成结果偏低，应避免溶血及组织液污染。

血凝抑制试验易出现的问题与纠正方法

血凝抑制试验易出现的问题与纠正方法作者：吴召坤来源：《兽医导刊》 2016年第1期吴召坤/ 陕西省丹凤县畜牧兽医中心本人在兽医实验室工作十余年，最常做的就是血凝抑制试验，血凝抑制试验常用于鸡新城疫、禽流感等疫病的抗体检测与流行病学调查，疫病诊断、防疫监测、免疫程序的制定等工作中，该试验要求操作规范，精心细致，取量精确，判定及时准确，在操作的过程中，稍有失误，就会使试验出现偏差，导致试验失败。

本人通过长期的实际工作，总结经验教训，现将试验过程中常出现的问题进行列举、分析、提出纠正方法。

1. 在测定抗原血凝效价时，1 ～ 11 孔全部百分之百凝集，判定不出抗原效价。

原因：抗原效价高，超出血凝板测定范围。

解决方法：将抗原做倍比稀释2 ～ 3 次再测即可。

2. 在测定抗原血凝效价或抗体抑制价时发现红细胞既不被抗原凝集，又不被抗体抑制凝集，1 ～ 12 孔全部为淡红色。

原因：红细胞溶血。

解决方法：重新配制1% 的红细胞，正常的1% 红细胞悬液静置4 ～ 6 h 后，红细胞沉于容器底部，上清液清亮透明。

红细胞发生溶血的原因有：(1) 红细胞保存时间太长，超过使用期限。

(2) 红细胞悬液冻溶。

(3)PBS 液配制不准确。

3. 标准阳性血清的抗体效价误差大于1 个滴度。

原因1 ：4 个血凝单位抗原配制不准确，4 单位抗原要现用现配，混合均匀，配好的抗原室温下放置不超过4 h，不可反复冻融。

为了防止4 单位抗原配制不准确，在做血凝抑制试验前必须做回归试验来测定4单位抗原是否准确。

解决方法：在血凝板的1 ～ 4 排1 ～ 5 孔各加0.025 ml PBS 液，取配好的4 单位抗原0.025 ml加入反应板的第一孔内，混匀后吸取0.025 ml 加入第二孔，依次倍比稀释至第4 孔，从第4 孔吸取0.025 ml 弃去，第5 孔做对照，1 ～ 5 孔各加0.025ml pbs 液，1 ～ 5 孔各加1% 红细胞悬液，震荡混匀，20℃～25℃静置40 min 后观察结果，若1 ～ 2孔红细胞完全凝集，3 ～ 4 孔不凝集，则说明4 单位抗原配制准确，否则需重新测定抗原效价，配制4 单位抗原，并做回归试验。

血凝与血凝抑制试验工作的几点心得体会

球。

吸液时必须充分摇匀疫苗。

（6）吸出的疫苗液切不可再注回于瓶内，针筒排气溢出的疫苗液应吸附于酒精棉球上，并将其收集于专用瓶内，用过的酒精棉球、碘酊棉球也应置于专用瓶内，与疫苗瓶一同进行无害化处理。

（7）羊只注射部位剪毛后用碘酊或70～75%酒精棉球消毒，再用挤干的酒精棉球擦干消毒部位。

（8）做好记录，填写免疫登记证（表），打上耳标，记录内容包括：耳标号、羊的品种、数量、日龄、疫苗的来源、批次、接种时间等。

参考文献[1]　蒋梅，杨仕标，张念祖.小反刍兽疫的流行趋势与防控[J].动物医学进展，2007，28（b08）：88-91.[2]　王昌建.小反刍兽疫[J].湖南农业，2003，（11）：19.[3]　李彦芳.小反刍兽疫的诊断与防控[J].新疆畜牧业，2014，（2）：53-54.摘　要：分析稀释液pH值、试验温度、红细胞浓度和种类等因素是如何影响血凝与血凝抑制试验结果的准确性，避免试验结果偏差的出现，以便更好的指导生产。

关键词：血凝；血凝抑制；偏差；pH值；试验温度；红细胞浓度血凝与血凝抑制试验普遍用于禽流感和新城疫的抗体检测，主要用于检验禽流感和新城疫免疫抗体的监测以便指导养殖场制定免疫程序，此试验方法虽简单但某些细节不注意，会引起结果偏差，造成严重的后果。

因此熟练的掌握检测方法得出正确的结果非常重要。

血凝与血凝抑制试验分为血凝实验和血凝抑制实验两个部分。

血凝实验的原理是利用某种病毒的血凝素能与某种动物的红细胞发生凝集的现象叫凝集实验，血凝抑制实验的原理是某种动物的病毒被相对应的特异性抗体中和，从而抑制了某种病毒的血凝素和某种动物的红细胞发生凝集的现象叫血凝抑制实验。

1　实验试剂制备中易出现的问题血凝与血凝抑制实验前期需要制备的试剂有阿氏液配制，PBS和1%鸡红细胞等。

实验对稀释液的pH值和盐浓度都有要求如下表PBS的PH值禽流感H5抗原效价（1-11孔）PBS对照（12孔）pH值7.29孔完全凝集完全沉淀pH值6.29孔完全凝集完全沉淀pH值5.811孔完全凝集完全凝集在血凝和血凝抑制实验中血凝实验的抗原效价标定异常重要，抗原标定太高检测出的抗体就偏低，抗原标定的偏低检测出的抗体就偏高。

血凝与血凝抑制试验的影响因素及解决方法

Ｐｏｕｌｔｒ＂￣Ｓｃｉｅｎｃｅ
中。
为了使结果同时出现．使用过程中不要停止等待。使用微量移液器要做到姿势正确、力度适中、手眼配合一气呵成吸头松紧适中．吸取抗原液体高度
整齐一致吹出时不留残液。同时吸头不要与孔内
收稿日期：２０１６ — １２－２３
作者简介：李振河，兽医师，从事动物疫病诊断、监测工
作
加入生理盐水０．０２５ｍ１．第１孔不加．用微量移液器
、第２孔科学养禽
第４孔红细胞５０％沉淀．第５孔１００％沉淀，说明
４ＨＡＵ抗原配制准确否则需要重新配制４ＨＡＵ抗原并进行反滴定３操作过程中的影响因素及解决办法血凝抑制试验是集科学性、严密性、准确性为
２．１标准阴阳性血清对照每次均需作一份标
准阴阳性血清的对照．对照成立方可判定结果．阴性血清滴度不应小于２１ｏｇ２：阳性血清滴度应与标定的滴度相差不超过１个稀释滴度
制４ＨＡＵ抗原．为检测４ＨＡＵ抗原的ＨＡ效价是否准确．每次进行Ｈｌ必须做４ＨＡＵ抗原的反滴定操作步骤：２．２．１在微量反应板上．于第２孔至第５孔每孔

血凝试验常见问题

仪器问题分析
仪器精密度差：管路堵塞，管道被压紧，管道连接不好，针堵了或者有沉积物放错试剂仪器污染分析区脏光路问题针的位置不对需要系统保养
系统问题
三、特殊问题
如果总是发现第一个样本出问题，则可能是吸样或流路问题。按下列流程检查：
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 检查试剂瓶有无气泡检查管路有无气泡冲洗，去除气泡执行针清洗程序Cleaning Procedure/Prime 确定针位，必要时调整在第一、第二个位置做质控如果问题依然存在，请维修工程师检查流路
血凝试验常见问题小结
陈永玲
常见问题小结
病人结果异常质控出控定标失败其它问题
出现病人结果异常怎么办？
病人结果异常
查看质控结果检查定标情况（定标项目）问题性质：偏高？偏低？区分问题原因：
样本问题系统问题
试剂问题仪器问题
病人结果异常
质控在控：则可能是样品本身的原因质控出控：参见质控失控处理
－－－有些在不同时间运输过来的试剂也可能会产生问题
试剂配置是否正确？
定标问题（详见定标失败问题分析）
质控结果突然变化（偶然误差）
如果有可能，试用另一盒试剂，另一批号运输的试剂或另一批号的试剂
运输问题-热应力（heat stress）通常受影响的试剂，反应性能降低
是否使用冻过的试剂? 试剂配置的问题？
试剂准备注意事项
复溶试剂时应当使用干净的吸管
如果使用清洗过的移液管，要保证不要残留清洗剂不要将移液管保存在盛有水的烧杯中，每次溶解试剂时要使用一根新的移液管
注意盛装稀释试剂用水的容器

血凝和血凝抑制试验常见问题浅解

检测禽流感抗体时，洗涤鸡红细胞离心转数为：1000 RPM，离心 10min；检测新城疫抗体时，洗涤鸡红细胞离心转数为：2000 RPM，离心 10min；1000 RPM 和 2000 RPM 离心转数离心鸡红细胞压积不一样，导致 1%鸡红细胞浓度不一样，影响检测结果。
试验研究
血凝和血凝抑制试验常见问题浅解
赵晖
（辽宁省大连市普兰店区动物疫病预防控制中心，辽宁大连 116200）
DOI:10援3969/J.ISSN援1671-6027援2018援06.021
兽医实验室中，常利用血凝和血凝抑制试验，对禽流感、新城疫等具有血凝性的病毒进行鉴定或对发病禽群进行疫病诊断、对禽群的免疫状态进行评价等。 1 定义与原理
感为例，HI≤3log2 Fra bibliotek定 HI 试验结果为阴性；HI 价＝4log2 试验结果为可疑，需要重复试验，HI≥5log2 试验结果为阳性。 3 血凝与血凝抑制试验注意事项
某些病毒或病毒的血凝素，能选择性的使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝。
当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接反应，也称血凝抑制反应。 2 血凝和血凝抑制试验的操作细节
自备器材、试剂；领取病毒抗原、标准阳性血清、标准阴性血清；制备 1%鸡红细胞；血凝试验，判定；4HAU 回滴；稀释抗原；血凝抑制试验；判定结果。
96 孔 V 型反应板，微量移液器、阿氏液、pH7.2 0.01mol/L PBS 液。
领取禽流感或新城疫抗原及相对应的标准阳性血清、标准阴性血清。
取 3 只或 3 只以上 SPF 公鸡或无禽流感和新城疫等病原感染的的健康公鸡的血液与阿氏液等体积混匀，用 PBS 液（pH7.2、0.01mol/L）反复洗涤 3 次，每次以 2000 转 /min（用于新城疫抗体检测)）或 1000 转 /min（用于禽流感抗体检测）离心 10min，洗涤后的红血球与 PBS 液混合均匀，配置成 1%的红细胞悬液，置 4℃冰箱冷藏。

血凝试验和血凝抑制试验的影响因素及应对措施

产、新ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ瓶的生理盐水。
液、原、清等，抗血如果管嘴接触到孔内混合液，会造成各个孔内液体相互污染。以在使用移液器时，定要保持所一加样器管嘴与凝集板孔间的距离，以保证每个凝集孔内液体数量和浓度准确。
摘要：绍了血凝试验（Ａ和血凝抑制试验（Ｉ中的常见问题，介Ｈ）Ｈ）主要包：照孔凝集；括对全部凝集；细胞全部下红沉；标准阳性对照血清的抗体效价与原结果误差大于１个滴度；泪滴状流淌（完全血凝抑制）细等；线结果出现慢或结果出现快，且整板无凝集现象等。并分析了其影响因素，并提出了应对措施。
滴度；５）状流淌（（泪滴完全血凝抑制）细；６）线（结果出现慢或结果出现快，且整板无凝集现象；７）并（凝集板出现跳孔现象；８凝集不明显，（）无法判定结果。
（）１在使用微量移液器时，液体加入量发生误差。使在
年公鸡的血，一般要求用非免疫公鸡，如果用免疫公鸡代替，应增加洗涤次数和时间。但
ｌ血凝试验（Ａ和血凝抑制试验（中的常见问题Ｈ） …）
血凝试验（Ａ）Ｈ和血凝抑制试验（）ＨＩ中的常见问题主
（）集板不干净。４凝目前，验单位和基层多使用一次实
而成为我国各地动物防疫监督机构和养殖场户进行流行病学调查、免疫程序制定及免疫效果监测等的主要手段之一。尽管此监测方法操作简便、快捷、准确和实用，但是在实践中由于某些因素的影响，导致试验结果不准确，甚至无法判定。笔者根据多年的实践操作将实验中的影响因素浅析如下。

血凝抑制实验中常出现的误差及解决办法

浓度为１％时沉降的血点过大，浓度为０．５时，沉降的血点太小，不易判断，而且沉降速度慢。
［收稿日期］２０１５－０３ — ０３［作者简介］李旭蓉（１９７０一），女，甘肃甘州人，本科，兽医师，主
的浓度，至抗原回归试验成立为止。
４时间和温度
时间温度对实验结果也有影响，要求室内温度在２０￣２５℃进行实验，室内温度不适宜的应置于恒温箱内。因为温度低于４℃时红细胞有时会发生自凝现象，且反应速度慢，高于３７℃时，凝集的红细胞易洗脱，红细胞沉降很快，导致试验不成立，抗原与
不同从而影响ＨＩ效价，一般需要３只以上非免疫
５血清稀释的混合程度
稀释血清时，如果混合不均匀，结果会出现差异，因此稀释时要来回吹打１０次以上。在稀释前先要按下移液器再插入反应板的每一孔孔底，来回吹打时手不要完全按下放开，在一个小的范围内吹打，
公鸡提供的红细胞混合在一起，可以减少自凝现象的干扰。有抗体鸡提供的红细胞需要多洗涤几次，
以减少血液中抗体对试验结果的影响。洗涤时要去除表面的白细胞膜，洗好的红细胞浓度应在０．５
～
１间最为合适，经过多次实践０．７５比较合适，

血凝抑制实验常出现的错误

血凝抑制实验常出现的错误一、原理病毒能够与鸡红细胞发生凝集现象，这种红细胞凝集现象可被特异性免疫血清所抑制，即红细胞凝集抑制实验（HI）。

二.应用由于血凝反应可被特异性抗体所抑制，抗体与病毒结合后，血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上，因此血凝抑制实验可以用于：1.检测血清中的抗体水平。

2.鉴定病毒。

3.辅助诊断病毒性疾病。

4.作为适时免疫的辅助手段，能避免免疫失败、免疫空挡及重复免疫造成的损失。

三、HA、HI实验结果示意图HA、HI实验示意图A、C：HA实验：凝集到第9孔；凝集价512B、D：HI实验：抑制到第6孔；抗体水平6个滴度四、HI实验易出现的错误1、对照孔凝集（如图1）①盐类凝集：所谓盐类凝集即稀释液中氯化钠达至一定高浓度时，即使没有血清抗体也能发生凝集反应。

②当生理盐水被细菌污染时也可出现对照孔凝集。

③血清变质或受细菌污染。

图（1）2、全部凝集（如图2）①当红细胞受细菌污染或保存时间过长可出现此现象。

②抗原滴加时出现失误，工作抗原效价过高。

③生理盐水受细菌污染或其它因素.图（2）3、红细胞全部下滑（如图3）①当配制抗原时，配制工作抗原效价过低，不足以凝集鸡红细胞。

②加样时所有孔全部加成生理盐水亦出现下图现象。

图（3）4.工作抗原效价过高或过低对结果都有一定的影响。

过高，测定抗体效价偏低；过低，测定效价过高，甚至很高。

（见图4）图（4）同一血清A为工作抗原效价过低，第12孔抗原对照孔没有100%凝集，这样测定抗体就过高（211以上）B为正确的工作抗原效价对照，实际抗体为28C为工作抗原效价过高，测定抗体偏低，为255.不同来源、不同浓度的红细胞会使结果差异很大，所以红细胞来源一定要相同：一般需要3只或3只以上公鸡来提供红细胞，将3只以上公鸡红细胞混合在一起。

也可由1只公鸡来提供红细胞，但必须经临床多次使用证明是可行的。

有抗体鸡提供的红细胞需要更多次数洗涤。

但要注意有时不同的公鸡提供的红细胞对禽流感H5亚型抗体测定，效价差异很大。

关于血凝抑制试验中存在的十种问题及解决方法

４＂Ｃ冰箱 ຫໍສະໝຸດ 保存，要力求新鲜，如暂时不测定可冷冻保存，血清使用前要充分摇匀。
５病毒悬液和红细胞悬液在使用前没有摇匀
病毒悬液和红细胞悬液如没有摇匀，加入时浓度高低不一，会造成人为误差。抗原和红细胞使用前一定要振荡摇匀，保证每一孔中加入的浓度准确一致。
刘娟（江苏省邳州市动物卫生监督所）
中图分类号：￥８５１．４文献标识码：ｃ文章编号：１００７．１７３３（２０１３）０３－００４２－０２
及红细胞，防止红细胞溶血，离心的转速为１０００转／ｍｉｎ，
抑制。在基层工作中，微量血凝抑制试验（ＨＩ）广泛应用
于禽流感、新城疫、产蛋下降综合征和传染性支气管炎等母源抗体的检测、雏鸡首免日龄的确定、疫苗免疫后免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。凝抑制试
４被检血清的保存不当
剂抽到采血器中，再去采血（一般采用翅静脉采血），将采
出的３￣４份鸡血混合、离心，制备１％鸡红细胞。避免先采血后加抗凝剂，加入时间、方法不当易产生血凝块，影响检测结果。翅静脉采鸡血时，由于血管较细，进针后
第２孔，依次倍比稀释至第４孔，从第４孔吸取ｏ．０２５ｍｌ弃之。每孔均加入０．０２５ｍ１１％鸡红细胞悬液，轻轻混匀，室
随着人们对动物源性食品质量卫生安全要求的日益

血凝和血凝抑制实验常见问题及解决方法

血凝和血凝抑制实验常见问题及解决方法作者：李晓菲来源：《健康周刊》2017年第26期【摘要】随着社会经济经济的不断发展，科学技术也日新月异，以及互联网的普及，对我国的医学事业起到了极大的促进作用。

血凝和血凝抑制实验就是取得一个巨大进步的表现。

血凝和血凝抑制实验是实验室中进行动物免疫检测最常见的方法。

生活中发挥了巨大的作用。

但是由于操作过程受到很多因素的影响。

所以它的实验结果可能会出现较小或者较大的偏差，本文举例出了血凝和血凝与抑制实验中常见的问题，比如在试验过程中血细胞调配的浓度不够，以及检测中，抗原血凝单位存在着误差的现象，还有实验中加样的方式缺乏规范性等等的问题。

并相应的提出了它所对应的解决办法，不断的进行深入研究，让血凝和血凝抑制实验，更好地为社会服务。

【关键词】血凝和血凝抑制实验；常见问题；解决办法1 血凝和血凝抑制实验的常见问题1.1 实验中血细胞的调配浓度不够在血凝和血凝抑制实验操作过程中，受到许多外来因素的影响，血细胞的浓度就是影响其实验结果的一个重要因素。

红细胞在一定程度上影响血凝抑价的高低，而在实验的过程中工作人员对血细胞浓度的调配，并不能进行非常精准的把握，在稀释的过程中会出现偏差，从而导致血细胞的浓度低于实验要求的浓度，进而影响实验的结果。

这个稀释的过程中，并不能完全的用装置进行，所以主导的还是医学工作人员，其实验结果所存在的误差，主要也是归结为工作人员的操作误差，所以在实验中血细胞的调配浓度不够，从而影响血凝和血凝抑制实验的实验结果的主要原因是人为原因。

但随着科学技术的不断进步，实验中学习宝的调配办法也会不断的更新和进步，从而实验的精确性也会不断的提高。

1.2 检测中抗原血凝单位存在着误差现象血细胞浓度调配不够，只是影响血凝和血凝抑制实验结果的其中一个因素，而另一个影响血凝和血凝抑制实验的因素，是检测中抗原血凝单位存在着误差。

对缓冲液的配置不当可能会影响血凝和血凝抑制实验结果，在实验的过程中，检测抗原血凝单位的数据对血凝和血凝抑制实验有着至关重要的影响。

浅析血凝试验检测结果质量的影响因素及质量改善对策

浅析血凝试验检测结果质量的影响因素及质量改善对策摘要：目的探讨并分析影响血凝试验的检验结果的因素。

方法此次研究的对象是选择2011年10月~2012年10月期间内来我院检验科做血凝试验的患者，将其试验结果及病程记录进行回顾性分析，并对影响血凝试验结果准确性的因素进行大范围的资料搜集整理，分析血凝试验结果的影响因素。

结果影响血凝试验检验结果的因素有人为操作因素、环境因素、试验材料因素以及患者自身因素等。

结论血凝试验是医学检验工作领域中常用的一种检验手段，为了提高医学检验结果的精确性和科学性，对血凝试验结果的影响因素进行探讨十分必要。

关键词：血凝试验；检验结果；影响因素[Abstract] Objective To discuss and analyze the factors that affect the results ofthe hemagglutination test. The object of the research method is selected during the October 2011 ~2012 year in October in our hospital for blood coagulation tests of patients，the retrospective analysis of the test results and record the course of，and the factors of influence on the blood coagulation test accuracy of a wide range of data collected，analysis of the factors influencing the blood coagulation test results. Results the factors affecting the results of hemagglutination test were artificial factors，environmental factors，experimental material factors and the patient's own factors. Conclusion hemagglutination test is a commonly used test method in the field of medical laboratory work. In order to improve the accuracy and scientificity of medical examination results，it is necessary to discuss the influencing factors of hemagglutination test results.[Key words] hemagglutination test；test results；influencing factors血凝试验是临床检验工作中经常开展的试验工作之一，止凝血和抗凝血检验是血凝试验的主要内容。

影响血凝试验的检验结果的因素分析及改进策略

影响血凝试验的检验结果的因素分析及改进策略摘要：血凝试验是临床实验室中常用的检验方法之一，用于评估患者的凝血功能。

本文通过分析影响血凝试验的检验结果的因素，并提出改进策略，旨在提高血凝试验的准确性和可重复性。

改进策略包括标本采集的培训、规范操作程序、质量控制和标本处理条件的优化。

这些改进策略有望为临床实验室提供更可靠的检验结果，有助于医生更准确地诊断和治疗患者的凝血障碍。

关键词：血凝试验；因素分析；改进策略引言血凝试验在临床诊断和治疗中起着重要的作用，但其准确性和可重复性受到多种因素的影响。

本文将重点关注血液标本处理因素，这是影响血凝试验结果的一个关键因素。

不正确的血液标本采集和处理可能导致偏差，从而影响医生对患者的诊断和治疗决策。

为此，我们将分析血液标本处理因素的影响，并提出一系列改进策略，以提高血凝试验的可靠性和实用性。

1.血凝试验的检验方法血凝试验是一项关键的临床实验室检查方法，旨在评估患者的血液凝血功能。

这个测试的主要目的是检测血液的凝固性能，以帮助医生诊断和监测各种血液凝血障碍，如出血病、血栓病和血液稀释等。

血液的凝固功能对于正常的生理功能至关重要，因为它确保了在出血时能够迅速止血，同时也防止了不必要的凝血事件。

血凝试验的基本原理是观察血液在外部刺激下形成凝块的时间。

首先，需要采集患者的血液样本，通常是从患者的静脉中抽取。

采血时需要使用无菌的采血针和试管，以防止任何外部污染影响检验结果。

目前，血凝试验的方法有多种，包括活化部分凝血时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、国际标准化比值（INR）等，下面将详细介绍血凝试验的检验方法。

一种常用的血凝试验是活化部分凝血时间（APTT）检查。

在这个试验中，首先向血浆中加入一种活化剂，通常是磷脂质和激酶。

这个活化剂会模拟体内的凝血过程，促使血浆中的凝血因子相互作用。

然后，加入一种钙离子激活剂，启动凝血反应。

此时，计时开始，观察血浆凝固的时间。

通常，APTT的测定结果以秒为单位表示，用于评估体内凝血因子的功能以及检测出血倾向。

血凝和血凝抑制试验中的常见问题及解决方法

次检测标准抗原的血凝单位配制标准抗原，进行Ｉ缸凝抑制试验．这样有可能影响血凝抑制试验结果。因此每次配制红细
胞后，都要对标准抗原的血凝单位进行重新检测，
凝抑制试验，才能不影响试验结果。
抟黄秋英（福建省建阳市动物疫病预防控制中心３５４２００）
（１）衄凝试验结果判定误差，ｍ凝试验结果一定要严格血凝和血凝抑制试验是Ｊ｛ｊ于检测受榆ｍ清抗体的试验。ｍ凝（直接血凝）反应（ＨＡ）：某些病毒或病毒的ｍ凝素，
验用液吸人不准造成试验结果不准确．．（２）移液枪在９６孔Ｖ型板的试验使用巾，不要紧靠Ｖ
如果红细胞配制浓度偏低，血凝抑制价就可能偏低。反之血凝抑制价就町能偏高
（】）使用微量加样器吸取液体时，吸头需碰触管壁以除
去多余的液体。（２）加样时应将所加物加枉Ｖ型板的底部，避免加在孔
壁匕部，并注意不要溅ｍ。（３）倍比稀释时，要注意避免产生过多的泡沫，引起混合不均，影响检测结果的准确性。６待检血清的处理不当（１）一般情况下，在５灭内测定的血清样品可放置于

血凝试验和血凝抑制试验的影响因素及质量控制

可能是血内的脂类成分过高所致，可用针尖挑至ＥＰ管中挤压，短２．４试验温度时内重复离心后即可分离。环境温度对ＨＩ试验值的影响比较大，呈正相关，环境温度２．１．２被检血清腐败变性从５ ℃升至３５％，同样血清禽流感ＨＩ滴度平均上升２ｌｏｇ：。同时环血样采集时要无菌操作，避免污染，血样采集后要及时分离境温度影响出现结果的快慢，温度高，出现结果快；但温度过血清，分离后即时测定或放置在４ ℃冰箱内保存，要力求新鲜。高，会出现反应物解离和红细胞溶血现象。有条件的试验室最好
１血凝试验（ＨＡ）和血凝抑制试验（ … ）中的常见问题
（１）对照孔凝集；（２）全部凝集；（３）红细胞全部下沉；
（２）在稀释血清时，产生气泡移液器。使用时有２个阻力位置，压到第１个阻力位置为所调刻度的量值，为吸取液体时使用，
（４）标准阳性对照血清的抗体效价与原结果误差大于１个滴度；压到第２个阻力位置为释放液体时使用。因此，不要在吸取液体时（５）泪滴状流淌（完全血凝抑制）线细；（６）结果出现慢或结将移液器压过第１个阻力位置，这样会造成吸取液体偏多使试验结
缓冲液（ＰＢＳ）尽可能现配现用，浓度和酸碱度要准确，可用要慢，往往需要超过４０ｍｉｎ才能出现清晰的结果，当试验温度低ＨＣ１和№ Ｏ｝啵调节酸碱度，并用［试纸进行测试到ｐＨ值合适为止。于４。ｃ时红细胞有时会发生自凝现象。当试验过程中的环境温度超稀释液的ｐＨ值５．８以下，红细胞容易产生自凝现象；ｐＨ值在７．８以过３０ ℃时，试验结果出现的就快，往往在１５ｍｉｎ左右就可读数；上凝集图形易消失，也会造成实验误差。而ｐＨ值为７．０时，红细胞