实验四 种子粗脂肪的提取
索氏抽提法实验报告
索氏抽提法实验报告
一、实验目的
1.了解索氏抽提法测定粗脂肪含量的原理；
2.掌握索氏抽提法测定粗脂肪含量操作方法；
3.测定脂肪的含量，可以作为鉴别样品品质优劣的一个指标。
二、实验原理
脂肪含量的测定有很多方法，如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和核磁共振法等。
目前国外普遍采用抽提法，其中索氏抽提法（Soxhlet extractormethod）是公认的经典方法，也是我国粮油分折首选的标准方法。
本实验采用索氏抽提法中的残余法，即用低沸点有机溶剂（乙醚或石油醚）回流抽提，除去样品中的粗脂肪，以样品与残渣重量之差，计算粗脂肪含量。由于有机溶剂的抽提物中除脂肪外，还或多或少含有游离脂肪酸、甾醇、磷脂、蜡及色素等类脂物质，因而抽提法测定的结果只能是粗脂肪。
三、实验试剂和器材
1.实验材料
油料作物种子(花生)、中速滤纸.
2.仪器
①SZF-06A脂肪仪
②干燥器(直径15～18cm，盛变色硅胶)
③不锈钢镊子（长20cm）
④培养皿
⑤分析天平
⑥称量瓶
⑦恒温水浴
⑧烘箱
⑨样品筛（60目）
3.试剂
无水乙醚或低沸点石油醚（A.R.）
四、操作步骤
1.准备
①将滤纸切成4cm×4cm，叠成一边不封口的纸包，用硬铅笔编写顺序号，按顺序排列在培养皿中。将盛有滤纸包的培养皿移入105±2℃烘箱中干燥2h，取出放入干燥器中，冷却至室温；
②按顺序将各滤纸包称重（记作a）、(称量时室相对湿度必须低于70％)。
2.包装和干燥
①将花生研碎,放入105±2℃的烘箱中干燥3h，移至干燥器中冷
却至室温；
②称取约0.5g 左右研碎的样品放入上述已称重的滤纸包中装入，封好包口，按顺序号依次放入称量瓶中称重（记作b ）。
油料作物中粗脂肪的提取及油脂的性质判定[宝典]
![油料作物中粗脂肪的提取及油脂的性质判定[宝典]](https://img.taocdn.com/s3/m/298946e8f605cc1755270722192e453610665b3e.png)
油料作物中粗脂肪的提取及油脂的性质鉴定
09级制药工程一班李楠
摘要：该文研究了用浸出法从油料作物花生中提取粗脂肪。浸出法是一种较先进的制油方法,它是应用固液萃取的原理,选用某种能够溶解油脂的有机溶剂,经过对油料的接触(浸泡或喷淋) ,使油料中油脂被萃取出来的一种方法[1]。其仪器主要为索氏提取器。然后通过皂化反应，酸碱反应等鉴定出油脂的性质。
关键词：粗脂肪提取油脂鉴定
Extraction of crude fat in oil crops and the
identification of the nature of oil
09 Class1 pharmaceutical Engineering
Abstract: This paper studies the leaching method used to extract fat from the peanut oil crops. Leaching method is a more advanced-oil method, which is the application of the principle of solid-liquid extraction, the choice of some organic solvent to dissolve oil, after the contact of oil (soak or spray), so that fuel oil is extracted in the A method [1]. The mainly instrument is the Sechelt extractor. Then we can identify the nature of oil by specification, acid-base reaction.
实验三 粗脂肪的提取和定量测定—索氏提取法
实验三粗脂肪的提取和定量测定—索氏提取法
一、实验目的
1、掌握粗脂肪的提取方法，熟悉索氏提取法的操作。
2、学习如何测定样品的粗脂肪含量。
3、加深对生物大分子的认识，了解脂肪在生物体中的重要性。
二、实验原理
1、粗脂肪提取
脂肪具有亲油性，可以被有机溶剂提取。索氏提取法是一种常用的粗脂肪提取方法。
在索氏提取法中，采用乙醚/醋酸乙酯（1：1）的溶液作为提取剂。样品加入一定量
提取剂中，经过适当的震荡、离心、蒸发浓缩和干燥等步骤，得到脂肪提取物。
将脂肪提取物加入硫酸中，经过酸解、加热、冷却和干燥等步骤后，得到脂肪酸甲酯。通过气相色谱仪测定脂肪酸甲酯的含量，进而计算出样品中粗脂肪的含量。
三、实验操作
（1）取适量已干燥样品，称重，记录质量。
（2）将样品放入索氏提取器的提取篮中，加入10mL乙醚/醋酸乙酯（1：1）溶液。
（3）起动提取器，以回流的方式进行提取，搅拌速度要适中，避免溅出溶液。
（4）提取30分钟后关闭提取器，将提取篮取出，用5mL提取液将其冲洗，并将提取
篮放置于洗涤瓶上，使其流干。
（5）将提取篮置于已预热至100℃的蒸发皿内，用热风器将乙醚/醋酸乙酯挥发干燥。
（6）将蒸发皿置于70℃恒温箱中干燥至常重，取出，并记录质量。
（2）将粗脂肪提取物转移到20mL玻璃瓶中，加入2mL浓硫酸。
（3）在冷水浴上，加热约2小时，待样品变成棕色液体后取出，冷却。
（4）加入1mL冰醋酸冷却，混匀。
（5）加入0.2g氯化钠，混匀。
（6）转移待测样品到10mL移液管中。
（7）在10mL皮囊中，加入4mL正己烷，混匀。
南京农业大学有机化学考研实验题第四章
D-(-)麻黄碱 L-(+)假麻黄碱 D-(-)假麻黄碱 （从天然产物中提取） 一般情况下，是把提取得到的 D-(-)麻黄碱做成盐保存。D-(-)麻黄碱性味微苦，是中 草药麻黄的有效成分。其盐酸盐为斜方针状结晶，m.p.216～220℃。在水中的比旋光度 [α] D =-33 。 三、仪器与试剂 仪器：见图1.6（c），图1.10。 试剂：麻黄草 25.Og，0.1% 盐酸，乙醚，粒状氢氧化钠，丙酮或氯仿，氯化氢的无水 乙醇饱和溶液，生石灰。 四、实验步骤 （1） 溶剂提取法 在 500mL 的烧杯中加入麻黄草 25.Og， 然后用 200mL0.1%～0.5% 稀盐酸溶液浸泡一昼 夜以上。刚浸泡的麻黄草溶液 pH=1，浸泡一昼夜以上为 pH 4～5，溶液呈橘黄色。滤去麻 黄草及其残渣，并收集浸取液。浸取液用碳酸钠调节溶液酸度至 pH 5.5～6。再把浸取液减 压浓缩至原体积的 1/3 左右。浓缩液用碳酸钠中和至 pH=10，这时浓缩液有浅橘黄色絮状 沉淀析出，过滤，澄清的浸取液用氯化纳进行饱和。用 40mL 乙醚分三次提取用氯化钠饱和 过的浸取液，合并乙醚提取液。乙醚提取液为无色透明液体，其 pH 8～9。最后用粒状氢氧 化钠干燥。滤去干燥剂，在常压下蒸去乙醚，残余物为橘红色油状物。在残余物中加入 2～ 5mL 饱和的氯化氢无水乙醇溶液，即有大量斜方针状结晶析出。待结晶完全析出后，过滤， 用 10mL 氯仿或丙酮分三次进行洗涤，以除去混杂在产品中的 L-（+）假麻黄碱。产品进行 干燥，挑选其斜方针状结晶，测其熔点（218～221）℃。然后把干燥好的产品放于真空保干 器内保存，产品可用无水乙醇重结晶。 （2） 水蒸气蒸馏法 将 25.Og 麻黄草用 200mL0.1% 的稀盐酸溶液浸泡一昼夜以上，然后滤去麻黄草及残 渣，得到浸泡过的浸取液。将浸取液浓缩至一定体积后，加入石灰使呈碱性，再用食盐饱和 后进行水蒸气蒸馏，收集蒸出液。在蒸出液中加入草酸使呈酸性，D-(-)麻黄碱草酸盐即沉 淀析出。过滤收集沉淀，母液待处理。将沉淀放入小烧杯中，加入饱和的氯化钙水溶液进行 复分解反应，D-(-)麻黄碱草酸盐就变成 D-(-)麻黄碱盐酸盐而溶解。滤去析出的草酸钙沉 淀。然后把滤液浓缩到一定体积后，加入活性炭进行脱色，煮 10min 左右，趁热滤去活性
粗脂肪的提取和定量测定
粗脂肪的提取和定量测定
一、目的
1．学习和掌握用索氏（Soxhlet）提取器提取脂肪的原理和方法。
2．学习和掌握用重量分析法对粗脂肪进行定量测定。
二、原理
利用脂类物质溶于有机溶剂的特性。在索氏提取器中用有机溶剂（本实验用石油醚，沸程为30～60℃）对样品中的脂类物质进行提取。因提取的物质是脂类物质的混合物，故称其为粗脂肪。
索氏提取器是由提取瓶、提取管、冷凝器三部分组成的（图9-1），提取管两侧分别有虹吸管和连接管。各部分连接处要严密不能漏气。提取时，将待测样品包在脱脂滤纸包内，放入提取管内。提取瓶内加入石油醚。加热提取瓶，石油醚气化，由连接管上升进入冷凝器，凝成液体滴入提取管内，浸提样品中的脂类物质。待提取管内石油醚液面达到一定高度，溶有粗脂肪的石油醚经虹吸管流入提取瓶。流入提取瓶内的石油醚继续被加热气化、上升、冷凝，滴入提取管内，如此循环往复，直到抽提完全为止。
本法为重量法，将由样品抽提出的粗脂肪，蒸去溶剂，干燥，称重，按后面给的公式计算，求出样品中粗脂肪的百分含量。
三、器材
四、试剂和材料
1．样品芝麻种籽
将洗净、晾干的芝麻种籽放在80～100℃烘箱中烘4小时。待冷却后，准确地称取2～4g，置于研钵中研磨细，将研碎的样品及擦净研钵的脱脂棉一并用脱脂滤纸包住用丝线扎好，勿让样品漏出。或用特制的滤纸斗装样品后，斗口用脱脂棉塞好。放入索氏提取器的提取管内，最后再用石油醚洗净研钵后倒入提取管内。
2．石油醚（化学纯，沸程30～60℃）。
五、操作
洗净索氏提取瓶，在105℃烘箱内烘干至恒重，记录重量。将石油醚加到提取瓶内约为瓶容积的1/2～2/3。将样品包放入提取管内。把提取器各部分连接后，接口处不能漏气。用70～ 80℃恒温水浴加热提取瓶，使抽提进行16小时左右，直至抽提管内的石油醚用滤纸检验无油迹为止。此时表示提取完全。
实验四 饲料粗脂肪的测定
实验四饲料粗脂肪的测定
一、适用范围
本标准适用于各种单一饲料，混合饲料配合饲料和预混料
二、原理
索氏脂肪提取器中用乙醚提取试样，称提取物的重量，除脂肪外还有有机酸，磷脂、脂溶性Vit，叶绿素等，因而测定结果称粗脂肪或乙醚提取物。
三、试剂
无水乙醚
四、仪器设备
1、粉碎机
2、分样筛
3、分析天平
4、电热恒温水浴锅
5、恒温烘箱
6、索氏脂肪提取器 7索氏脂肪提取仪
8、滤纸 9、干燥器
五、分析步骤
抽提瓶在105℃±2℃烘箱中烘干60min，干燥器中冷却30min，称重再烘干30min，同样冷却称重，两次重量之差小于0.0008g为恒重。
称取试样1g于滤纸筒中，或用滤纸包好，放入105℃烘箱中，烘干120min（或称测水分后的干试样）滤纸包长度应以可全部浸泡于乙醚中为准，将滤纸包放入抽提管，在抽提瓶中加入无水乙醚60-100℃在60-75℃的水浴上加热，使乙醚回流，控制乙醚回流次数为每小时约10次，共回流约50次，或检查抽提管流出的乙醚挥发后不留下油迹为抽提终点。
取出试样，仍用原提取器回收乙醚直至抽提瓶全部吸完，擦净瓶外壁，将抽提瓶放入105℃±2℃烘箱中烘干120min，干燥器冷却30min的称重，再烘干30min同样冷却称重，两次重量之差小于0.001g为恒重。
六、计算
粗脂肪=
%
100
m
m
m1
2⨯
-
m：风干试样重量
m1：已恒重的抽提瓶重量
m2：已恒重的盛有脂肪的抽提瓶重量g
粗脂肪的提取和定量测定--索氏提取法[1]
![粗脂肪的提取和定量测定--索氏提取法[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/19824a3f5a8102d276a22ff5.png)
十、总结
本次试验采用了两种虹吸的方法。 ㈠向平底烧瓶中装入1/3~1/2的石油醚，当提取管中的液 面从无至液面达到虹吸管上弯头部，正好虹吸一次。 ㈡向提取管中倒入石油醚，直至液面达到虹吸管上弯头 部，正好虹吸一次；再向提取管中倒入石油醚，使其 液面达到第一次液面的一半。 结论：经两组同学的实验数据初步得出，方法㈠提取的 粗脂含量较高，建议使用方法㈠提取粗脂。 （以上结论仅供参考）
5.其它器材：
不锈钢镊子、药勺、 滤纸、铁架台、十字 夹、龙爪、手套、乳 胶管。
五、实验试剂
①.花生仁。 ②.石油醚：C.P.，沸程30～60℃。
六、实验操作流程图
①平底烧 瓶质量 ②花生颗 粒质量 称样 折滤纸斗 滤纸斗 高度低 于提取 管上弯 头部 从下至 上安装 搭索氏提取仪装置，并 置于80℃水浴锅中
粗脂肪的提取和定量测定－－索 氏提取法
马康哲 王翔 钟伯良 张林丽 季永康 戴世城 潘立 董佳琦
一、实验目的
掌握用索氏提取法测定粗脂肪含量的原理及操
作。熟悉质量分析的基本步骤。
二、实验原理
脂肪是丙三醇（甘油）和脂肪酸结合成的脂类化合物，能溶于脂 溶性有机溶剂。
本实验利用脂肪能溶于脂溶性溶剂这一特性，用脂溶性溶剂将脂 肪提取出来，借蒸发除去溶剂后称量。整个提取过程均在索氏提 取器中进行，通常使用的脂溶性溶剂为乙醚，或沸点为30℃～ 60℃的石油醚。用此法提取的脂溶性物质除脂肪外，还有游离脂 肪酸、磷酸、固醇、芳香油及某些色素等，故称为“粗脂肪”。 同时，样品中结合状态的脂类（主要是脂蛋白）不能直接提取出 来，所以该法又称为游离脂类定量测定法。
索氏提取法
左：冷凝管的安装 右：水浴加热中的索氏提取仪
记录与计算汇总
虹 吸 次 数 虹 吸 时 间
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10 …
滤纸 斗质 量
滤百度文库 斗+ 样品 （g） 质量
（g）
样品 质量
烧瓶 烧瓶 粗脂 虹吸 提取 样品 +粗 质量 质量 时间 次数 中粗 （g） 脂质 （g） （g） （min） 脂的 量（g） 含量
回收石油醚：提取2h后，当石油醚在提取管中的 液面即将达到虹吸管的上弯头处时，从水浴锅中 取出索氏提取仪装臵，室温冷却5～10min；取下 平底烧瓶，将提取管的下端口插入回收瓶中，倾 斜装臵，提取管中的石油醚会虹吸而流入回收瓶 中，达到回收的目的。再装上平底烧瓶，继续放
入恒温水浴锅中加热直至冷凝管下端无石油醚滴
样品
含油量（%） 样品
含油量（%）
向日葵种籽 向日葵种仁 蓖麻种籽 蓖麻种仁 芝麻种籽 油菜种籽 花生种仁
23.5～45.0 40.0～67.8 45.1～58.5 50.7～72.0 46.2～61.0 41.1～42.9 40.2～60.7
大豆种籽 油桐种仁 玉米谷粒 小麦谷粒 稻子谷粒 豌豆种籽
（%）
打开自来水（冷凝用），将索氏提取仪整个装置放入恒温水浴锅中加
热提取（水温80℃左右），请观看软件中的视频《索氏提取仪的安 装》。提取时间2～4h，约虹吸20次以上，记录每次虹吸所需的时间和 虹吸次数。附注：若要将样品的粗脂提取完全，提取时间至少为12h以 上。由于实验时间的限制，我们的提取率只能达到80％左右。
粗脂肪的提取和定量测定--索氏提取法
将样品在80℃～100℃电热鼓风干燥箱内烘去 水分，一般烘4h，烘干时要避免过热。样品 颗粒不宜太大，一般要在研钵中研碎样品。样 品若是液体，应将一定体积的样品滴在滤纸上， 在60℃～80℃电热鼓风干燥箱内烘干后，再 进行实验。
表1111几种干的植物种子和种仁中油脂的百分含量样品含油量样品含油量向日葵种籽向日葵种仁蓖麻种籽蓖麻种仁芝麻种籽油菜种籽花生种仁235450400678451585507720462610411429402607大豆种籽油桐种仁玉米谷粒小麦谷粒稻子谷粒豌豆种籽1002504786893090162613240719?将样品在80100电热鼓风干燥箱内烘去水分一般烘4h烘干时要避免过热
24
滤纸 斗质 量
（g）
滤纸 斗+ 样品 质量
（g）
样品 质量
（g）
烧瓶 烧瓶 +粗 质量 脂质 （g） 量（g）
粗脂 质量
（g）
虹吸 时间
（min）
提取 次数
样品 中粗 脂的 含量
（%）
25
汇报结束
谢谢大家! 请各位批评指正
10
5.其它器材：
不锈钢镊子、药勺、滤 纸、铁架台、十字夹、 龙爪、手套、乳胶管。
11
四、实验试剂
粗脂肪的提取
花生仁中粗脂肪的提取
浸泡萃取浸泡萃取将固体混合物研细后放在容器里用溶剂长期静止浸泡萃取，或用外力振荡萃取，可以在温室也可以加热回流萃取。然后用过滤或倾析的方法把萃取液和残留固体分开。缺点：消耗溶剂量大，时间长，萃取效率不高。
一、实验原理溶剂浸取法是油脂植物中最常用的提取方法之一。它的具体工艺如下：样品用丙酮或其他溶剂抽提后，蒸去溶剂所得的物质称为粗脂肪。因为除脂肪处还含有色素及挥发油、蜡、树脂等物，这种抽提法所得的脂肪为粗脂肪。超声波具有空化作用，在溶剂浸出的过程中，如果加上超声波的辅助作用，将能够促进油脂的浸出.
二、实验仪器与药品仪器：电炉抽虑装置烘干箱超声仪器200mL小烧杯药品：花生仁丙酮
三、实验步骤1 花生仁去皮，研碎；2 分别称取10g花生于200mL烧杯中；3 在电炉上加热4-5分钟，用玻璃棒不断搅拌，防止烧焦；4 稍微冷却后加入30mL丙酮5 用超声波超洗30分钟。6 抽滤，得到含有丙酮的花生油。7 在100度的烘箱中烘烤15分钟，除去丙酮得到花生油。8 称重，计算粗脂肪含量。W1 粗脂肪% = —— W × 10 W1 ——测得的粗脂肪的质量g W ——花生仁的质量g
四、注意事项1. 花生仁研磨的越细越好；2.加入丙酮时注意安全，防止液体溅出伤到人3.控制电炉温度，防止花生仁粉烧焦；4.注意抽滤设备的使用。
索氏抽提法实验报告
索氏抽提法实验报告
一、实验目的
1.了解索氏抽提法测定粗脂肪含量的原理；
2.掌握索氏抽提法测定粗脂肪含量操作方法；
3.测定脂肪的含量，可以作为鉴别样品品质优劣的一个指标。
二、实验原理
脂肪含量的测定有很多方法，如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和核磁共振法等。
目前国内外普遍采用抽提法，其中索氏抽提法（Soxhlet extractormethod）是公认的经典方法，也是我国粮油分折首选的标准方法。
本实验采用索氏抽提法中的残余法，即用低沸点有机溶剂（乙醚或石油醚）回流抽提，除去样品中的粗脂肪，以样品与残渣重量之差，计算粗脂肪含量。由于有机溶剂的抽提物中除脂肪外，还或多或少含有游离脂肪酸、甾醇、磷脂、蜡及色素等类脂物质，因而抽提法测定的结果只能是粗脂肪。
三、实验试剂和器材
1.实验材料
油料作物种子(花生)、中速滤纸.
2.仪器
① SZF-06A脂肪仪
②干燥器(直径15～18cm，盛变色硅胶)
③不锈钢镊子（长20cm）
④培养皿
⑤分析天平
⑥称量瓶
⑦恒温水浴
⑧烘箱
⑨样品筛（60目）
3.试剂
无水乙醚或低沸点石油醚（A.R.）
四、操作步骤
1.准备
①将滤纸切成4cm×4cm，叠成一边不封口的纸包，用硬铅笔编写顺序号，按顺序排列在培养皿中。将盛有滤纸包的培养皿移入105±2℃烘箱中干燥2h，取出放入干燥器中，冷却至室温；
②按顺序将各滤纸包称重（记作a）、(称量时室内相对湿度必须低于70％)。
2.包装和干燥
①将花生研碎,放入105±2℃的烘箱中干燥3h，移至干燥器中
冷却至室温；
② 称取约0.5g 左右研碎的样品放入上述已称重的滤纸包中装入，封好包口，按顺序号依次放入称量瓶中称重（记作b ）。
索氏提取法测定花生中粗脂肪的含量作业指导书
索氏提取法测定花生中粗脂肪的含量作业指导书
一、实验目的
1. 学习索氏抽提法测定脂肪的原理与方法。
2. 掌握索氏抽提法基本操作要点及影响因素。
二、实验原理
利用脂肪能溶于有机溶剂的性质，在索氏提取器中将样品用无水乙醚或石油醚等溶剂反复萃取，提取样品中的脂肪后，蒸去溶剂，所得的物质即为脂肪或称粗脂肪。
三、主要仪器设备
索氏提取器、电热恒温鼓风干燥箱、干燥器、恒温水浴箱、研钵、精密天平、蒸馏装置
四、所需原料药品试剂
花生、无水乙醚（不含过氧化物）或石油醚（沸程30-60℃）、滤纸筒、线绳、脱脂棉
五、实验步骤
1. 样品处理
准确称取烘干、研细后的样品2-5g（精确至0.01mg），装入滤纸筒内。
2. 索氏提取器的准备
将索氏提取器各部位充分洗涤并用蒸馏水清洗后烘干。脂肪烧瓶在103℃±2℃的烘箱内干燥至恒重（前后两次称量差不超过2mg）。
3. 样品测定
(1) 将滤纸筒放入索氏提取器的抽提筒内，连接已干燥至恒重的脂肪烧瓶，由抽提器冷凝管上端加入乙醚或石油醚至瓶内容积的2/3 处，通入冷凝水，将底瓶浸没在水浴中加热，用一小团脱脂棉轻轻塞入冷凝管上口。
(2) 抽提温度的控制：水浴温度应控制在使提取液在每7-10min 回流一次为宜。
(3) 抽提时间的控制：抽提时间视试样中粗脂肪含量而定，一般样品提取6-12h，坚果样品提取约16h。提取结束时，用毛玻璃板接取1滴提取液，如无油斑则表明提取完毕。
(4) 提取完毕。取下脂肪烧瓶，回收乙醚或石油醚。待烧瓶内乙醚仅剩下1-2mL时，在水浴上赶尽残留的溶剂，于95-105℃下干燥2h后，置于干燥器中冷却至室温，称量。继续干燥30min后冷却称量，反复干燥至恒重（前后两次称量差不超过2mg）
生化实验报告 实验
生化实验报告实验
实验一考马斯亮蓝G-250 染色法测定蛋白质的含量（p24）一、目的要求掌握考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法测定蛋白质含量原理和方法。二、实验原理考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质─染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。考马斯亮兰G-250 染料在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色。在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰（lmax）的位置，由465nm变为595nm。且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。研究发现，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。考马斯亮蓝染色法的突出优点是：（1）灵敏度高，据估计比Lowry 法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry 法要大的多。（2）测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5 分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2 分钟即可完成，其颜色可以在1 小时内保持稳定，且在5 分钟至20 分钟之间，颜色的稳
定性最好。因而完全不用像Lowry 法那样费时和严格地控制时间。（3）干扰物质少。如干扰Lowry 法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris 缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA 等均不干扰此测定法。此法的缺点是：（1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。（2）仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）等。三、材料、试剂与器具（一）、试剂：1、考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg 溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H 3 PO 4 ，用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,4.7% （W/V）乙醇，8.5%（W/V）H 3 PO 4 。2、标准蛋白质溶液：纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl 配制成100ug/ml 蛋白溶液。（二）标准和待测蛋白质溶液1．标准蛋白质溶液纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl 配制成100ug/ml 蛋白溶液。2．待测蛋白质溶液。人血清，使用前用0.15mol/L NaCl 稀释200 倍。（二）、器材：1、试管1.5×15cm（×6）和试管架。2、移液管管0.5mL（×2）；
生物化学实验报告
实验一考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质的含量（p24）
一、目的要求
掌握考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法测定蛋白质含量原理和方法。
二、实验原理
考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质─染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。
考马斯亮兰G-250染料在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色。在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰（lmax）的位置，由465nm变为595nm。且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。研究发现，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。
考马斯亮蓝染色法的突出优点是：
（1）灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。
（2）测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。
（3）干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。
花生油的提取及油脂的性质实验报告
花生油的提取及油脂的性质实验报告
一、目的要求
1.掌握液-固萃取的原理和方法;
2掌握用油重法测定油料作物种子的含油量;
3掌握空气浴干燥的方法。
二、基本原理
油脂是由高级脂肪酸和甘油所形成的酯。油脂的特点是不溶于水而溶于脂溶性溶剂，如乙醚、石油醚、氯仿、丙酮、苯等，而蛋白质、碳水化合物和无机盐则不溶于以上的溶剂中故可借此将油脂和它们分开。将含油脂的样品放在索氏(Soxhlet)提取器中，用脂溶性溶剂反复抽提，即可把油脂浸提出来。
由于浸出的物质除油脂外，还含有一部分类似脂肪的物质，如游离脂肪酸、磷酸、蜡色素及脂溶性维生素等，因此称为粗脂肪。提取粗脂肪的方法常用的有残余法和油重法等。
残余法适用于谷类、油料大批样品粗脂肪含量的测定。它是将样品经脂溶性溶剂反复抽提，使全部脂肪除去，再从样品剩余的残渣量计算出粗脂肪的含量。
油重法适用于准确测定油料作物种子的粗脂肪含量。它是国际标准推荐方法，仲裁时以油重法为准。即将样品放在索氏提取器中，经乙醚
反复抽提使脂肪萃取出来，然后蒸馏除去脂肪中的乙醒，经空气浴叫干燥后再称取油脂的质量。
花生中含油量达40~61%
本实验以乙醚作溶剂，用油重法测定花生的含油量。
三、仪器用品
索氏提取器、水浴锅、托盘天平、研钵、蒸发皿、玻璃漏斗、蒸馏装置、滤纸等。
澳、氢氧化钠等。
四氢化碳、乙酥、荐牛仁、猪油、桐油。
四、实验步骤
1.样品的准备
先将被抽提的固体样品花生仁)在100~110℃的烘箱内烘2-4小时，冷却后，研成粉末。称取花生粉14g，装入事先准备好的滤纸筒内
2.抽提
在索氏提取器的烧瓶中加入乙醚约达到容积的一半，再把提取器各部分连接好，借助漏斗从冷凝管口加入乙醚至虹吸管高度的23处,然后放在热水浴中加热(水浴温度大约75~80℃)抽提。
索氏抽提法实验报告
索氏抽提法实验报告
一、实验目的
1.了解索氏抽提法测定粗脂肪含量的原理；
2.掌握索氏抽提法测定粗脂肪含量操作方法；
3.测定脂肪的含量，可以作为鉴别样品品质优劣的一个指标。
二、实验原理脂肪含量的测定有很多方法，如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和核磁共振法等。
目前国内外普遍采用抽提法，其中索氏抽提法（Soxhlet extractormethod ）是公认的经典方法，也是我国粮油分折首选的标准方法。
本实验采用索氏抽提法中的残余法，即用低沸点有机溶剂（乙醚或石油醚）回流抽提，除去样品中的粗脂肪，以样品与残渣重量之差，计算粗脂肪含量。由于有机溶剂的抽提物中除脂肪外，还或多或少含有游离脂肪酸、甾醇、磷脂、蜡及色素等类脂物质，因而抽提法测定的结果只能是粗脂肪。
三、实验试剂和器材
1.实验材料
油料作物种子（花生）、中速滤纸.
2.仪器
①SZF-06A 脂肪仪
②干燥器（直径15～18cm，盛变色硅胶）
③不锈钢镊子（长20cm）
④培养皿
⑤分析天平
⑥称量瓶
⑦恒温水浴
⑧烘箱
⑨样品筛（60 目）
3.试剂
无水乙醚或低沸点石油醚（A.R. ）
四、操作步骤
1.准备
①将滤纸切成4cm× 4cm，叠成一边不封口的纸包，用硬铅笔编写顺序号，按顺序排列在培养皿中。将盛有滤纸包的培养皿移入105 ±2℃烘箱中干燥2h，取出放入干燥器中，冷却至室温；
②按顺序将各滤纸包称重（记作a）、（称量时室内相对湿度必须低于70％）。
2.包装和干燥
① 将花生研碎, 放入105± 2℃的烘箱中干燥3h，移至干燥器中
冷却至室温；
② 称取约0.5g 左右研碎的样品放入上述已称重的滤纸包中装入，
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验四种子粗脂肪的提取
一、实验目的
脂肪广泛存在于油料植物种子和果实中，测定脂肪的含量，可以鉴别其品质的优劣，也是油料作物选种和种质资源调查的常规测定项目。
二、实验原理
在了解了实验目的之后，关于这个实验有以下几个问题需要大家思考：
1.种子成分很复杂，脂肪的提取如何进行？
2.什么是粗脂肪？
（答：脂肪不溶于水，易溶于有机溶剂（如石油醚）。利用这一特性，选用有机溶剂直接浸提出样品中的脂肪进行测定。提取物中除脂肪之外，还有游离脂肪酸、石蜡、磷脂、固醇、色素、有机酸等物质，故浸提物称粗脂肪。）通过以上问题的思考，我们知道了脂肪的提取主要是利用其易溶于有机溶剂的特性。具体的实验操作粗脂肪的提取，一般采用索氏脂肪提取器。
利用脂类物质溶于有机溶剂的特性。在索氏提取器中用有机溶剂（本实验用石油醚，沸程为 30 ～ 60 ℃）对样品中的脂类物质进行提取。
图索氏脂肪提取器
1. 浸提管
2. 通气管
3. 虹吸管
4. 小烧瓶
5. 冷凝管
索氏提取器是由提取瓶、提取管、冷凝器三部分组成的，提取管两侧分别有
虹吸管和连接管。各部分连接处要严密不能漏气。提取时，将待测样品包在脱脂滤纸包内，放入提取管内。提取瓶内加入石油醚，加热提取瓶，石油醚气化，由连接管上升进入冷凝器，凝成液体滴入提取管内，浸提样品中的脂类物质。待提取管内石油醚液面达到一定高度，溶有粗脂肪的石油醚经虹吸管流入提取瓶。流入提取瓶内的石油醚继续被加热气化、上升、冷凝，滴入提取管内，如此循环往复，直到抽提完全为止。
三、材料、仪器与试剂
（一）实验材料
大豆、花生、蓖麻、向日葵、芝麻等油料种子。
（二）仪器设备
索氏提取器（ 50 mL ），烧杯，干燥器，脱脂滤纸，镊子，分析天平，烘箱，恒温水浴，脱脂棉。
（三）试剂
石油醚（化学纯，沸程 30 ～ 60 ℃）。
四、实验操作
1.将洗净、晾干的芝麻种籽放在 80 ～ 100 ℃烘箱中烘 4 小时。待冷却后，准确地称取 2 ～ 4 g ，置于研钵中研磨细，将研碎的样品及擦净研钵的脱脂棉一并用脱脂滤纸包住用丝线扎好，勿让样品漏出。或用特制的滤纸斗装样品后，斗口用脱脂棉塞好。放入索氏提取器的提取管内，最后再用石油醚洗净研钵后倒入提取管内。
2. 洗净索氏提取瓶，在 105 ℃烘箱内烘干至恒重，记录重量。将石油醚加到提取瓶内约为瓶容积的 1/2 ～ 2/3 。把提取器各部分连接后，接口处不能漏气。用 70 ～ 80 ℃恒温水浴加热提取瓶，使抽提进行 16 小时左右，直至抽提管内的石油醚用滤纸检验无油迹为止。此时表示提取完全。
3. 提取完毕，取出滤纸包，再回馏一次，洗涤提取管。再继续蒸馏，当提取管中的石油醚液面接近虹吸管口而未流入提取瓶时，倒出石油醚。若提取瓶中仍有石油醚，继续蒸馏，直至提取瓶中石油醚完全蒸完。取下提取瓶，洗净瓶的外壁，放入 105 ℃烘箱中烘干至恒重，记录重量。
五、注意事项
1.本法采用沸点低于 60 ℃的有机溶剂，不能提取出样品中结合状态的脂类，故此法又称为游离脂类定量测定法。
2.待测样品若是液体，应将一定体积的样品滴在脱脂滤纸上在60～80℃烘箱中烘干后放入提取管内。
3.本法使用有机溶剂石油醚（沸程 30 ～ 60 ℃）故加热时不能用明火。
六、思考题
1. 索氏提取法提取的为什么是粗脂肪 ?
2. 做好本实验应注意哪些事项 ?