微生物实验报告:测定细菌生长曲线
细胞生长曲线的绘制实验报告
细胞生长曲线的绘制实验报告
篇一:实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制
一、实验目的
学习了解微生物生长量测定的方法
学习了解细菌生长曲线的绘制方法
学习掌握血细胞计数板的使用方法
微生物生长量的测定
计数法重量法生理指标法
1、显微镜直接计数法
利用血细胞计数板计数
涂片计数
2、活菌菌落计数法
3、滤膜法
细菌生长曲线
将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中,不补充营养物或移去培养物,细菌以二分裂方式繁殖,以时间为横坐标,细菌数目的对数值为纵坐标,可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线,称为生长曲线
篇二:细胞生长曲线的测定
细胞生长曲线的测定
一、实验目的
掌握测定细胞生长曲线的方法。
二、实验器具
24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。
三、实验方法
1. 培养细胞:首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞,计数并记录接种的细胞悬液密度,接种时间记为0小时。
2. 计数细胞密度:从接种时间算起,每隔24小时计数3孔的细胞密度,算出平均值。为提高准确率,对每孔细胞可计数2-3次,如此操作至第七天结束。
3. 绘制曲线:以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标,将全部结果在坐标纸上绘图,即得所培养细胞的生长曲线。
篇三:MTT法绘制生长曲线
实验材料:
1,5%FBS-L-DMEM, 5x104个/ml细胞悬液,5mg/mlMTT溶液,DMSO,0.01M PBS,2, 96孔板共7个,酶标仪,50ml离心管,1.5ml离心管,0.22μm滤膜,锡箔纸,MTT工作液
细菌生长曲线及特点
细菌生长曲线及特点
细菌生长曲线及特点
细菌是微生物界中数量繁多的一类生物,它们的生长规律是生物学研究的重要内容之一。细菌的生长曲线是描述细菌在培养基中生长繁殖过程中细胞数量随时间的变化规律的图表。通过研究细菌生长曲线及其特点,可以更好地了解细菌的生长机理、调控因素和生物学特性,对于生态学、医药学以及食品工业的微生物控制等领域有着重要的意义。
一、细菌生长曲线的基本形态
细菌生长曲线通常呈现出经典的四个阶段:潜伏期、指数期、平稳期和死亡期。
1. 潜伏期(Lag phase):细菌刚转入新环境时,需要适应新的生长条件,此时细菌的生长速度较慢,细菌数量几乎不变。细菌在此期通过合成必要的酶、蛋白质等物质来适应环境。
2. 指数期(Log phase):此阶段为快速增长期,细菌开始进入高度增殖状态。细菌数量呈指数级增长,代表着细菌的快速繁殖。这是因为细菌在此时处于最适合生长的温度、pH值、营养成分等条件下,利用培养基中的营养物质大量繁殖。
3. 平稳期(Stationary phase):该阶段细菌的繁殖速度逐渐减慢,细菌数量达到一个相对稳定状态。此时细菌的分裂速度与死亡速度相互平衡,其中营养物质的消耗和废物的积累是导致生长停滞的主要原因。
4. 死亡期(Death phase):此阶段细菌数量开始逐渐减少,细菌中的死亡速度远远大于新细菌的产生速度。营养物质的枯竭、有毒物质的积累以及母细胞的衰老等因素,都会导致细菌的死亡和生长的终止。
二、细菌生长曲线的特点
1. 不同种类细菌具有不同的生长周期和生长速度。一般而言,细菌的生长周期可从几小时到几天不等。某些嗜热菌能在高温下迅速繁殖,而一些室温菌对温度的要求较低。
微生物实验报告:测定细菌生长曲线
测定细菌生长曲线
一、实验目的
1.了解细菌生长曲线特征,测定细菌繁殖的代时;
2.学习液体培养基的配制以及接种方法;
3.反复练习无菌操作技术;
4.了解不同细菌,不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同;
5.掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法;
二、实验原理
将一定量的菌种接种在液体培养基内,在一定的条件下培养,可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性,如以细菌活菌数的对数做纵坐标,以培养时间做横坐标,可绘成一条曲线,称为生长曲线。单细胞微生物发酵具有4个阶段,即调整期(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线,同一种微生物在不同的培养条件下,其生长曲线也不一样。因此,测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多,有血细胞计数法,平板菌落计数法,称重法和比浊法。本实验才用比浊法,由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比,因此,可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。将所测得的光密度值(OD600)与对应的培养时间做图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意,由于光密度表示的是培养液中的总菌数,包括活菌和死菌,因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间,即代时,以G表示,其计算公式为:
G=(t2-t1)/[(lgW1-lgW2)/lg2]
式中t2和t1为所取对数期两点的时间,W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。
实验报告微生物的生长曲线实验
实验报告微生物的生长曲线实验实验报告
实验目的:
本实验旨在通过监测微生物的生长曲线,研究微生物的生长规律,并探讨其对环境因素的响应。
实验材料及方法:
1. 材料:
- 微生物培养基
- 无菌培养瓶或试管
- 微量移液器或移液管
- 无菌平板
- 培养箱或恒温摇床
- 显微镜
2. 方法:
(这里使用编号列表来列出具体的实验步骤)
实验步骤:
1. 实验前准备:
(这里写明实验前的准备工作,如准备培养基、灭菌操作等)
2. 微生物获取:
(这里描述如何获取微生物样品,如从环境中采样、有选择地分离微生物菌落等)
3. 微生物培养:
(这里阐述微生物的培养过程,包括制备培养基、接种微生物样品等步骤)
4. 生长曲线检测:
(这一部分是实验的重点,需要详细记录实验过程和结果。可以使用表格、图表等方式展示数据)
5. 结果分析:
(根据实验结果,对微生物生长曲线进行分析和解读,可结合图表进行说明)
6. 讨论与结论:
(根据实验结果的分析,进行讨论并得出结论,可以对实验中可能存在的问题进行分析,提出进一步改进的建议)
实验结论:
通过本实验对微生物的生长曲线进行监测,我们得出了如下结论:
(这里简洁地总结实验结果得出的结论,为了增加字数可以进一步展开阐述,如讨论生长曲线的不同阶段、影响微生物生长的环境因素等等)
实验报告结束。
注意:本实验报告以“实验报告”的格式为基础,根据实验内容进行适当的调整。其中,具体的实验步骤和结果可以根据实际情况进行修改和补充,以确保文章的准确性和完整性。
细菌生长曲线的测定实验报告
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篇一:细菌生长曲线
实验九测定细菌生长曲线
[实验目的]1.了解细菌生长曲线特征:2.学习液体培养基的配制以及注意事项。3.学习液体种子和固体种子的不同接种方法和注意事项。4.利用细菌悬液浑浊度间接测定细菌生长。
[仪器和材料]
1.实验材料
(1)大肠杆曲,枯草杆曲培养液及大肠杆菌平板。
(2)牛肉膏蛋门胨葡萄糖培养基(150ml/250ml三角瓶x4瓶/大组),配方:牛肉膏5g,蛋白胨10g,nacl5g,葡萄糖10g,加水至1000ml,ph7.5。
2.实验仪器
取液器(5000μl,1000μl,200tμl各一支);培养箱.摇
床,722s分光光度汁;1000μl无菌吸头100个;5000μl 无菌吸头2(:细菌生长曲线的测定实验报告)个;1ml或4ml 玻璃或塑料比色皿4个,共用参比杯一个。
[实验原理]
将一定量的细菌接种在液体培养基内.在一定的条件下培养,可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性,如以细菌活菌数的对数作纵坐标,以培养时间作横坐标,可绘成一条曲线,称为生长曲线(图91)。
单细胞微生物发酵具有4个阶段,即调整(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线,同一种微生物在不同的培养条件下,其生长曲线也不一样。因此,测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的.测定微生物生长曲线的方法很多,有血细胞计数法,平板菌落计数法,称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定,由于细菌悬液的浓度与浑浊度成正比,因此,可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值(测oD550或oD620或oD600或oD420,可任选一波长)与对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意,由于光密度表示的是培养液中的总菌数,包括活菌与死菌,因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
大肠杆菌生长曲线实验报告
大肠杆菌生长曲线实验报告
抗生素能破坏细菌细胞壁的结构,使细菌的繁殖和生长受到抑制。但某些细菌对抗生素表现出抗性,原因是其基因发生了改变,产生能抵抗抗生素的性状。在自然情况下,细菌的基因突变率很低,而且突变是不定向的,因此在自然条件下,想要获得有抗性的细菌是很困难的。当给与适当的物理条件时,其突变率会大大增加。如当用α射线、β射线、γ射线、Χ射线、中子和其他粒子、紫外线、微波等物理因素辐射时,能够促进遗传物质突变。DNA对紫外线(UV)有强烈的吸收作用,尤其是碱基中的嘧啶,它比嘌呤更为敏感。紫外线引起DNA 结构变化的形式有DNA链断裂、碱基破坏、胸腺嘧啶二聚体等。因此,紫外线通常作为诱变剂,用于微生物菌种选育。一般细胞分裂越旺盛,诱变剂量越大,突变率高,诱变最有效的波长253~265 nm。选择合
适的诱变剂量对于获得较高突变率十分关键,过高或过低的辐射剂量会导致菌株死亡或诱变不充分而降低诱变效果。
在紫外线诱变下,菌株发生不定向的突变,想要得到需要的特向变异必须对诱变后的菌株做筛选。本实验想要得到的是能够抵抗抗生素的菌株,因此可以用抗生素培养基作为筛选培养基对菌种进行筛选。若菌株没有发生定向突变,则该菌株不能在抗性培养基上正常生长,只有发生了定向突变才可能在筛选培养基上正常生长。
紫外线对于菌株有诱变作用外,对菌株还有较强的致死作用,因为紫外线改变了菌株的基因结构导致菌株无法正常生长繁殖。
因此,通过本实验的操作,在合适的照射剂量的设置下,比较不同不同照射剂量下的致死效果和突变率,并初步分析两者的相关性。在分析死亡曲线和诱变率曲线的基础上,能了解诱变育种的机理和方法,为做进一步的诱变实验做准备。
实验6-2酵母菌等单细胞微生物生长曲线的测定
实验酵母菌等单细胞微生物生长曲线的测定
1 目的要求
(1)了解酵母菌、细菌等单细胞微生物生长曲线的特点及测定原理;
(2)学习用血球计数板计数法和比浊法分别测定酵母和细菌的生长曲线。
2 基本原理
生长曲线是单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。测定时一般将一定数量的微生物纯菌种接种到一定体积的已灭菌的适宜的新鲜培养液中,在适温条件下培养,定时取样测定培养液中菌的数量,以菌数的对数为纵坐标,生长时间为横坐标,绘制得到生长曲线。不同的微生物其生长曲线不同,同一微生物在不同培养条件下其生长曲线亦不同。但单细胞微生物的生长曲线规律基本相同,生长曲线一般分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。测定一定培养条件下的微生物的生长曲线对科研和实际生产有一定的指导意义。
测定生长曲线时需要对生长的单细胞微生物定时取样计数,对于酵母细胞和比较大的细菌细胞可采用血球计数板计数法计数,亦可采用比浊法计数,但对于小的细菌细胞一般采用比浊法。
比浊法是根据培养液中菌细胞数与混浊度成正比,与透光度成反比的关系,利用光电比色计测定菌悬液的光密度值(OD值),以OD值来代表培养液中的浊度即微生物量,然后以培养时间为横坐标,以菌悬液的OD值为纵坐标绘出生长曲线。此方法所需设备简单,操作简便、迅速。
血球计数板法是利用一块血球计数板来进行计数的。血球计数板是一块特制的厚玻璃片,中央平台比两边平台低0.1mm,上有两个被精细刻化为400个小方格的格网,面积为1mm2,加盖盖玻片后即构成0.1 mm3体积的计数室。血球计数板有两种规格:一种是将1 mm2面积的网格划分为25个大格,每个大格再分成16个小格,既25´16;另一种为16´25。计数时只需无菌操作将稀释到适宜浓度的菌悬液取一滴从盖玻片一侧渗入到计数室,待静置平衡后于显微镜高倍镜下计数,用下面公式算出菌液中细胞数。
微生物的生长曲线图及在实践中的意义
微生物的生长曲线图及在实践中的意义
微生物生长曲线是以微生物数量(活细菌个数或细菌重量)为纵坐标,培养时间为横
坐标画得的曲线。一般说,微生物(细菌)重量的变化比个数的变化更能在本质上反应出
生长的过程。曲线可分为三个阶段即生长率上升阶段(对数生长阶段)、生长率下降阶段
及内源呼吸阶段。
典型的微生物生长曲线包括四个时期:迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期。
1、迟缓期
该期菌体增大,代谢活跃,为细菌的分裂繁殖合成并积累充足的酶、辅酶和中间代谢
产物;迟缓期长短不一,按菌种本身的遗传特性、菌龄和菌量,以及营养物等不同而异,
一般为1~ 4小时。
2、对数期
生长速率常数r最大,细胞每分裂一次所需要的时间——代时(generation time,g,又称增代时间)最短;细胞进行平衡生长(balanced growth),菌体各部分的成分均匀;酶系活跃,代谢旺盛;细胞群体的形态与生理特性最一致;微生物细胞抗不良环境的能力
最强。
3、稳定期
生长速率常数等于0,即新增细胞数和死亡细胞数几乎相等,二者处于动态平衡,活
菌数保持相对稳定并达到最高水平,菌体产量也达到最高点;细菌分裂速度降低,代时逐
渐延长,细胞代谢活力逐渐减退,开始出现形态和生理特征的改变;
细胞内已经开始累积储藏物质,例如肝糖粒、异染颗粒、脂肪粒等;多数芽孢细菌在
此期构成芽孢;许多关键的蒸煮产物主要在此期间大量累积并达至最高峰。
4、衰亡期
细胞形态发生变化(整体表现为多形态,例如管状或圆形的发育形态),甚至畸形;
细胞新陈代谢活力明显降低,有的微生物因蛋白水解酶活力的进一步增强引致菌体丧生并
细菌生长特点及生长曲线的测定
二、实验原理
理想中生长曲线
1.4 1.2 1 0.8 0.6
0.4
数 量
n y=2
0.2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 时间
理想中生长曲线
1.4 1.2 1 0.8 0.6
0.4 0.2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 时间
数 量
理想
实际
实验原理(分光光度计与比浊法)
朗伯-比尔定律 A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
比浊法虽只能测相对数量,但便捷。某些情况 下,我们重在数量的变化而不在数量本身
三、实验内容
1、分光光度计的使用
2、大肠杆菌生长曲线的测定与绘制
四、实验材料
1. 试剂
蛋白胨、氯化钠、酵母浸粉等。 2. 仪器 托盘天平、高压蒸汽灭菌锅、分光光度计、恒温箱、恒温振荡 器。 3. 玻璃器皿 试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、移液管等。 4. 其它物品
实验六 细菌生长特点及生长曲线的测定
一、实验目的
1、了解细菌生长的特点及其测定原理,掌握液体连
续培养测定细菌生长曲线的方法及操作。
2、了解分光光度计的原理和使用方法,掌握其在测
定细菌生长曲线上的应用。
二、实验原理
微生物学中,提及生长,一般指群体生长。群体生长= 个体生长+个体繁殖。群体生长可用培养物密度衡量,显然 个体繁殖对群体密度的影响更大。细菌通常采取二分裂方式 繁殖,X2=X1•2n,理论上,细菌的生长应呈现几何级数增 长的规律,但在一般培养情况下,细菌生长需先经历延滞期, 即适应期过后,才出现理论上的指数增长,并且高峰过后, 会出现衰亡。这就是细菌生长的典型特点。其根本原因在于 细菌代谢系统需要一定时间适应环境,而当既定环境条件满 足时,细菌开始展现微生物生长快、代谢旺盛的特点,但高 峰过后,养分的耗尽及培养环境的改变,越来越不利于细菌 生长,分解代谢超过合成代谢。
实验4测定细菌生长曲线
仪器:
摇床、分光光度计、取液器。
微生物材料
大肠杆菌菌液、枯草杆菌菌液
培养基
肉汤蛋白胨液体培养基
用具
玻璃比色皿,三角瓶,酒精灯,接种环。
2021/6/16
6
五、准备步骤
准备菌种:将大肠杆菌和枯草杆菌分别接到于肉汤 蛋白胨液体培养基中,37℃振荡培养14-18h。 另准备大肠杆菌和枯草杆菌斜面种子各1支。
细菌的生长曲线分为:迟缓期、对数期、稳定期和 衰退期。其表示细菌从开始生长到死亡全过程的动 态。测定微生物的生长曲线对于了解和把握生物的
生长规律是很有帮助的。
2021/6/16
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• 测定微生物生长曲线的方法有血球计数法、平板菌落 计数法、称重法和比浊法等。
• 比浊法:由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比。故可 用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
• 将所测的光密度值(OD)与其对应的培养时间作图, 即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线(注意:由于 光密度表示的是培养液的总数,包括活菌与死菌所测 的生长曲线衰亡期不明显)。
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微生物的典型生长曲线图 Ⅰ.延滞期,Ⅱ.指数期,Ⅲ.稳定期,Ⅳ.衰亡期
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四、实验仪器、材料和用具
每台分光光度计固定在1个参比杯,每人只能在同 一台分光光度计上测量(注意波长调好后,不要动 波长旋钮)。
实验七细菌生长曲线
细菌生长曲线测定
生05 边晔2010030026
四班
同组成员:竞国梁夏川两位学弟
实验时间2012年11月29日
一、实验目的
1.了解细菌生长曲线特征,测定细菌繁殖的代时
2.学习液体培养基的配制以及接种法
3.反复练习无菌操作技术
4.了解不同细菌,不同接种法在同一培养基上生长速度的不同
5.掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的法
二、实验原理
将一定量的菌种接种在液体培养基,在一定的条件下培养,可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性,如以细菌活菌数的对数做纵坐标,以培养时间做横坐标,可绘成一条曲线,称为生长曲线。单细胞微生物发酵具有4个阶段,即调整期(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线,同一种微生物在不同的培养条件下,其生长曲线也不一样。因此,测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的法很多,有血细胞计数法,平板菌落计数法,称重法和比浊法。
本实验才用比浊法,由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比,因此,可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。将所测得的光密度值(OD600)与对应的培养时间做图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意,由于光密度表示的是培养液中的总菌数,包括活菌和死菌,因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
三、实验仪器、材料和用具
大肠杆菌,枯草杆菌,金黄色葡萄球菌菌液及平板;
培养基(100mL/250mL三角瓶X10瓶/大组),牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基;
细菌生长曲线的测定的实验步骤
细菌生长曲线的测定的实验步骤
一、
实验目的
1. 了解细菌生长曲线特征,测定细菌繁殖的代时;
2. 学习液体培养基的配制以及接种方法;
3. 反复练习无菌操作技术;
4. 了解不同细菌,不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同;
5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法
二、 实验原理
将一定量的细菌接种在液体培养基内,在一定条件下培养,可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性,如以细菌的活菌数的对数作纵坐标,以培养时间作横坐标,可绘成一条曲线,成为生长曲线(如图一)。
图一 微生物生长曲线示意图
单细胞微生物的发酵具有四个阶段,即Ⅰ调整期(延滞期)、Ⅱ对数期(生长旺盛期)、Ⅲ平衡期(稳定期)、Ⅳ死亡期(衰亡期)。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。不同的微生物有不同的生长曲线,同一种微生物在不同的培养条件下,其生长曲线也不一样。因此,测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多,有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定,由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比,因此,可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值(OD600)与其对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意,由于光密度表示的是培养液中的总菌数,包括活菌与死菌,因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间,即代时,以G 表示。其计算公式为:
2
lg /)lg (lg 121
生长曲线的测定
实验日期:2017.11.1 实验班级:生物技术指导教师:张建丽
姓名:高熹学号:1120152430
测定细菌生长曲线
一.实验目的
1.通过对大肠杆菌生长曲线的测定,了解细菌生长的特点,综合训练微生物实验的基本实验技能。
2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。
3.掌握用比浊法测定细菌的生长曲线。
二.实验原理
将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中,在适宜的条件下进行培养,一定时间测定培养液中的菌量,以菌量的数量作纵坐标,生长时间作横坐标,绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同,一般可把生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。将每一种一定量的细菌转入新鲜液体培养基中,在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段。
延迟期:又叫调整期。细菌接种至培养基后,对新环境有一个短暂适应过程(不适应者可因转种而死亡)。此期曲线平坦稳定,因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异,一般为1~4小时。此期中细菌体积增大,代谢活跃,为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。
对数生长期:又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长,可持续几小时至几天不等(视培养条件及细菌代时而异)。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型,对外界环境因素的作用敏感,因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用,对该时期的细菌效果最佳。
稳定期:该期的生长菌群总数处于平坦阶段,但细菌群体活力变化较大细菌浓度达到最大即环境最大容纳量。由于培养基中营养物质消耗、毒性产物(有机酸、过氧化物等)积累PH下降等不利因素的影响,细菌繁殖速度渐趋下降,相对细菌死亡数开始逐渐增加,此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。细菌形态、染色、生物活性可出现改变,并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽孢等。
细菌生长曲线测定实验方法的研究
细菌生长曲线测定实验方法的研究
一、本文概述
细菌生长曲线测定实验方法的研究对于深入了解细菌的生长规律、生长环境、生长条件以及生长过程中的代谢变化等方面具有重要意义。本文旨在探讨细菌生长曲线测定的实验方法,包括实验原理、实验步骤、实验条件的选择与优化等方面,以期为提高细菌生长曲线测定的准确性和可靠性提供理论支持和实践指导。
本文将介绍细菌生长曲线测定的基本原理,包括细菌生长曲线的定义、特点以及影响因素等。在此基础上,本文将详细阐述细菌生长曲线测定的实验步骤,包括实验材料的准备、实验条件的设置、实验过程的操作以及实验结果的记录与分析等。
本文将重点讨论实验条件的选择与优化。实验条件是影响细菌生长曲线测定结果的关键因素,包括培养基的成分、温度、pH值、接种量等。本文将通过对比实验和数据分析,探讨不同实验条件对细菌生长曲线的影响,从而确定最佳的实验条件组合。
本文将总结细菌生长曲线测定实验方法的优缺点,并提出改进意见和建议。通过本文的研究,将为细菌生长曲线测定的实验方法提供更为
准确、可靠的理论支持和实践指导,有助于推动细菌学研究的深入发展。
二、细菌生长曲线的理论基础
细菌生长曲线测定实验方法的理论基础主要源自微生物生长动力学。微生物生长动力学描述了微生物在特定环境下的生长规律,其中包括细菌生长曲线的形成机制。细菌生长曲线是反映细菌群体生长状态的重要指标,通过对细菌生长曲线的分析,可以了解细菌生长的不同阶段,以及影响细菌生长的各种因素。
细菌生长曲线通常可分为四个主要阶段:延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期。在延迟期,细菌适应新的生长环境,进行必要的代谢准备,此阶段细菌数量增长缓慢。进入对数生长期后,细菌以指数方式迅速增长,这是细菌生长最为旺盛的阶段。稳定期时,由于营养物质的消耗和代谢产物的积累,细菌增长速率逐渐减缓,细菌数量趋于稳定。进入衰亡期,细菌由于营养物质的耗尽和代谢产物的毒性作用,生长速率急剧下降,细菌大量死亡。
实验五用大肠杆菌生长曲线的测定
三、实验器材
样品的采取
自来水 取自自来水管道。 橙汁 购于超市。 口腔、人民币、门把手和实验环境中的微生物。 南湖水 距水面10-15 cm的深层水样。
培养基
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 。
仪器或其他用具
灭菌培养皿,无菌枪头,涂棒等。
比色皿经蒸馏水清洗后,必须经待测样 品润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干,而光 面只能用吸水纸吸干,以免光面被划破。
比色皿之间吸光度进行比较。
四、实验结果
记录不同大肠杆菌培养液的OD600值, 并绘制大肠杆菌的生长曲线。
培养时间 (h)百度文库
光密度值 OD600
4 8 12 16 20 24
五、思考题
•光电比浊计数的原理是什么?这种计数法有何 优缺点? •如果用活菌计数法制作生长曲线,你认为会有 什么不同?两者各有什么优缺点?
此时,显示器显示“0.000”。 将被测溶液推入光路,显示器显示为被测样
品的吸光值。
在600 nm波长下,用未接种的LB液体培 养基作空白对照,分别对培养了0、4、8、12、 16和20 h的大肠杆菌培养液,进行光电比浊 测定。对于高浓度的大肠杆菌培养液,要用未 接 种 的 LB 培 养 基 进 行 稀 释 , 使 其 吸 光 值 在 0.1-0.65范围内。
细菌的典型生长曲线
细菌的典型生长曲线
1. 引言
细菌是一类微生物,其数量庞大且广泛分布于地球上的各个环境中。细菌的生长对于人类和环境具有重要影响,因此了解细菌的典型生长曲线对于研究微生物学和应用领域具有重要意义。本文将介绍细菌的典型生长曲线,包括不同阶段的特征、影响因素以及应用。
2. 细菌的典型生长曲线概述
细菌的典型生长曲线通常可以分为四个阶段:潜伏期、指数期、平台期和死亡期。这些阶段反映了细菌在特定条件下的数量变化。
2.1 潜伏期
在潜伏期,细菌适应新环境并准备进行繁殖。在这个阶段,细菌数量相对稳定,并且没有明显增加或减少。这是由于细胞进行代谢调整和适应新环境所需时间。
2.2 指数期
指数期是细菌最快速增殖的阶段。在这个阶段,细菌数量呈指数增长,也被称为对数增长。细菌在此期间以最快的速度进行分裂和繁殖,每个细菌细胞通过二分裂产生两个新的细胞。
2.3 平台期
平台期是指当细菌数量达到一定水平后,其增殖速率减缓并趋于稳定的阶段。在这个阶段,细菌数量保持相对稳定,并且新生细菌数量与死亡细菌数量之间达到平衡。
2.4 死亡期
死亡期是指当环境条件恶化或资源耗尽时,细菌数量开始减少的阶段。在这个阶段,死亡速率超过了新生产生的速率,导致总体上细菌数量下降。
3. 影响细菌生长曲线的因素
3.1 温度
温度是影响细菌生长曲线的主要因素之一。不同类型的细菌对于温度有着不同的适应范围和最适生长温度。通常来说,较低温度下会延缓细菌繁殖速率,而较高温度下会加速细菌繁殖速率。
3.2 pH值
pH值是指环境的酸碱度,也是影响细菌生长曲线的重要因素。不同类型的细菌对于pH值有着不同的适应范围和最适生长pH值。极端酸性或碱性条件下会抑制细菌生长。
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测定细菌生长曲线
一、实验目的
1.了解细菌生长曲线特征,测定细菌繁殖的代时;
2.学习液体培养基的配制以及接种方法;
3.反复练习无菌操作技术;
4.了解不同细菌,不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同;
5.掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法;
二、实验原理
将一定量的菌种接种在液体培养基内,在一定的条件下培养,可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性,如以细菌活菌数的对数做纵坐标,以培养时间做横坐标,可绘成一条曲线,称为生长曲线。单细胞微生物发酵具有4个阶段,即调整期(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线,同一种微生物在不同的培养条件下,其生长曲线也不一样。因此,测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多,有血细胞计数法,平板菌落计数法,称重法和比浊法。本实验才用比浊法,由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比,因此,可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。将所测得的光密度值(OD600)与对应的培养时间做图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意,由于光密度表示的是培养液中的总菌数,包括活菌和死菌,因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间,即代时,以G表示,其计算公式为:
G=(t2-t1)/[(lgW1-lgW2)/lg2]
式中t2和t1为所取对数期两点的时间,W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。
三、实验器材
大肠杆菌,枯草杆菌菌液及平板;
培养基(100mL/250mL三角瓶×10瓶/大组):牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基;
取液器(5000ul, 1000ul 各一支),无菌1000ul吸头若干,无菌5000ul吸头若干,比色皿10个及共用参比杯一个,培养箱3台,722s分光光度计;
四、实验步骤
1.活化菌种
将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中,37℃振荡培养18h,另外准备单菌落平板各1块;
2.接种
6人大组分为3个小组,按表1接种。
表1.各培养基接入菌种及培养条件
3.培养并测量
每培养一小时取样一次:取500ul培养液到2000ul蒸馏水中,以蒸馏水为对照,测OD600,固定参比杯,不要调动波长旋钮;固定一台分光光度计; 零小时也要测。全班同时取样,同时开始振荡, 取样期间时间不算。
培养开始时,测0号瓶pH。实验结束后,测1-9号瓶pH。
五、结果
1.OD600
OD600记录结果见表2。
表2. 发酵过程OD600测量值。划线结果表示明显错误,作图时弃去;绿色表示用于计算代时。
对各组数据做生长曲线图,可得图1。
图1.生长曲线。a~i图分别绘出1~9号培养瓶的OD600-发酵时间曲线,每幅图上
方小标题表示该图的培养条件。g~i组2.7和3.3小时数据明显错误,未绘入图。
2.pH
对照组初始pH=7.0,
用实验室的两种试纸:6.4~8.0,4.0~5.0,各实验组均未测出准确pH值。看来pH都处在5.0~6.4之间,精确值未知。
3.代时计算
根据表1中的红色数字对应的时间及OD600,我们用公式:
G=(t1-t2)/[(lgW1-lgW2)/lg2]
来计算各瓶的代时。计算结果见表2。
表2.各发酵条件下的代时
理论上,大肠杆菌代时为37min,枯草杆菌代时为25min,我们的计算结果还与之相去甚远。原因主要是培养条件不行,不是连续发酵,没有营养补充,而且细菌生长时经常被我们“打扰”,不能一直保持高速生长状态。而且我们都是用原始数据点进行计算的,可能会
有较大偏差。可以利用软件对生长曲线进行拟合,得到平滑的S型曲线再计算。可惜我没有相关软件,只好凑活用Excel。
六、讨论
从上面的实验结果可以看出,不同菌种、不同温度、不同转速条件下,发酵的生长曲线和代时有很大差异。下面我们分别对这些影响因素进行讨论。
1.温度
我们选取培养瓶1号和6号、7号和8号分别做对比,在同一张图内做生长曲线(图
图2.温度对于生长曲线的影响。上图菌种为大肠杆菌,下图菌种为枯草杆
菌。除温度外,其余条件均一样。
由图可以看出,大肠杆菌在37℃条件下调整期较短,迅速进入对数期。在30℃条件下,调整期、对数期均有明显增长,稳定期到来较晚,且维持在一个较高的水平上。
可以认为37℃更利于大肠杆菌的生长,30℃条件下细菌需要更长的时间来适应温度。
但是比较代时发现,37℃的代时要长于30℃,这与生长曲线数据矛盾,可能是OD600测量中的微小误差积累起来所致,下面将讨论。
而在枯草杆菌中,37℃的调整期较短,代时也短于30℃。说明37℃更利于枯草杆菌生长。
2.转速
我们选取培养瓶1号和5号、7号和9号分别做对比,在同一张图内做生长曲线(图
3)。
不同转速下枯草杆菌的生长曲线
图3.转速对于生长曲线的影响。上图菌种为大肠杆菌,下图菌种为枯草杆
菌。除转速外,其余条件均一样。
从图3看出,转速对于调整期和对数期没有太大影响,但是高转速带来的高溶氧可以显著缩短大肠杆菌的代时。大肠杆菌是兼性厌氧,在高溶氧条件下生长较快,在低溶氧条件下也可生长,只是速度较慢而已。对于枯草杆菌,从生长曲线、代时上看都没有显著改变。但是枯草杆菌是需氧菌,理论上讲应该高转速有利生长。可能是因为振荡作用不足以使溶氧增加到影响枯草杆菌生长的阙值,或是低转速已经足够提供其快速生长所需氧气。
3.细菌种类
我们选取培养瓶1号和7号、5号和9号、6号和8号分别做对比,在同一张图内