Module 4a 仪器介绍,软件示范

Module 4a: 仪器介绍，软件示范

荧光定量PCR系统

7500荧光定量PCR系统

7500系统共有硬件特征-光源•卤钨灯光源

−额定2,000小时

−光源监测器可监测光源使用时间和寿命

−用户可自行更换灯泡

多色检测

滤光片7000和7300荧光定量

PCR系统

7500荧光定量PCR系统

A SYBR®Green I,

FAM™dyes

SYBR®Green I,

FAM™dyes

B VIC®, JOE™dyes VIC®,JOE™dyes

C NED™,TAMRA™dyes NED™,TAMRA™, CY3™dyes

D ROX™dye ROX™, Texas Red®dyes E-CY5™dye

AB 7500荧光定量PCR系统5色滤光片

4重–5色检测(FAM,VIC,NED,CY5™& ROX)

Cy5

VIC FAM

NED

7500系统共有硬件特征-门

•新型门和上样系统

−手动上样系统: 支架

−按压―按压型门闩系统

−机械板夹钳

−基座清洁位置

关闭打开清洁

反应板支架:

正确放置入抽屉狭槽并确保对齐标签向上

对齐标签向上

抽屉狭槽

不正确放置:精密反应板支架放入抽屉狭槽对齐标签向下对齐标签向下

精密反应板支架凸缘应当放置于抽屉支架上部。

凸缘放置于抽屉支架下方是错误的。

凸缘错误地放置于抽屉支架下方

抽屉支架

精密反应板支架凸缘

StepOne™和StepOnePlus ™

StepOne™Real-Time PCR 系统：共有特征StepOne

•三色仪器

−FAM™/SYBR®Green

−VIC®/JOE™

−ROX™

StepOne Plus

•四色仪器

−FAM™/SYBR®Green

−VIC®/JOE™

−ROX™

−TAMRA™

h1

StepOne™Real-Time PCR系统：共有特征

●同一个基座，两种速度可选

–快速模式：40分钟完成40个循环

–标准模式：2小时完成40个循环

–10-30µl 反应体积

4

幻灯片 14

h1 Look at the image. The band is baby blue... it should be silver metallic to be consistent.

habisah, 2007-6-13

StepOne™Real-Time PCR 系统：共有特征●可支持的耗材:

–48、96 孔板和光学贴膜

–48、96 孔板和光学盖

–快速单管

–快速8联管

StepOnePlus™系统

•VeriFlex TM Block 技术

−更加灵活:

>6个可独立控制的帕尔贴block可

提供精确的温度控制，并加强PCR

的功能

−更精确的PCR优化:

>具有更佳温度控制，用于在不同

的退火温度下优化的引物和探针

当仪器到货：现成可用

•StepOne 和StepOne Plus已经预校准了以下染料:−FAM™/SYBR®Green

−VIC®/JOE®

−ROX™

•StepOne Plus 还包括TAMRA ™

•电脑已经预装操作软件

•很简单运行已加样的RNaseP板作性能检测就可以开始使用

StepOne™升级到StepOnePlus™•StepOne 升级

−针对已有StepOne系统的客户

−邮寄StepOne之后会收到一台临时机直到仪器升级完毕

>升级包括从StepOne升级到StepOnePlus，运输费用以及临时机−升级完的仪器会邮寄回客户实验室

触摸屏

X

校准开始界面准备就绪界面

可以使用USB存储的程序开始实验

多组分算法

定义

多组分算法:

一种通过荧光光谱用于辨别区分每种染料和背景贡献的组分计算方法 多组分视图（Multicomponent）:

在一个反应中可以看到每个染料的软件视图

多组分视图

TAMRA淬灭探针在7500或StepOne Plus Tm

正常ROX (红) 和FAM (蓝)信号ROX (红)水平由于使用TAMRA淬灭

探针而下降

定义

纯荧光光谱

标准荧光的光谱组分是用于荧光定量分析。ROX™, SYBR®, FAM™VIC ™，这些信息存储于计算机中，在数据分析的时候使用。荧光基团在PCR反应中与纯荧光比较得到准确的荧光计量。

光谱染料

FAM™VIC®ROX™Cy5

SYBR®Green NED™Cy3Texas Red

纯染料光谱

TAMRA™dye FAM™dye

VIC®dye

ROX Dye™

NED™dye

SYBR ®Green dye

纯染料光谱

StepOne TM光谱

StepOnePlus TM光谱