恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备及质量评价

恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备及质量评价李军1,2,邓艳芸2,黄庭龙2,任芬2(1.教育部热带生物资源重点实验室(海南大学),海口 570228;2.海南大学制药工程系,海口 570228)[收稿日期]2008 09-15 [文献标识码]A [文章编号]1002 1280(2008)12 0043 04 [中图分类号]S859.796[摘 要] 研制恩诺沙星肺靶向明胶微球(E NR-GMS)并对其进行质量评价。

采用乳化-化学交联法制备恩诺沙星肺靶向明胶微球,油镜下观察微球粒径大小及形态,并用显微照相机(O ly m pus DP12-2)拍照做记录。

通过紫外分光光度法检测微球中恩诺沙星(ENR)的含量,进而计算得出其载药量和包封率,并通过溶出度测定法探讨其体外释放规律。

制成的恩诺沙星肺靶向明胶微球为淡黄色粉末,油镜下大小较均匀,形态圆整、分散性较好,其内可见被包裹的黄色E NR粉末,平均直径约10.26 m。

就粒径分布而言,5~12 m的微球占86.66%,载药量为4.51%,包封率为31%,在p H7.4的PBS缓冲液中的释药符合缓释特征,t1/2约为3.8h,比单纯的ENR延长3个多小时。

体外释放实验显示前2.5h时释药量约37.02%,至第5.0h之间释药量达80.87%,之后逐步释放,至10h时药物释放累积量占总药量的87.96%。

结果表明,制备出的恩诺沙星明胶微球符合肺靶向给药系统的要求,具有较好的缓释性和肺靶向性。

[关键词] 恩诺沙星;明胶微球;肺靶向给药系统Preparati on and E valuation of Lung Targeti ng G el ati nM icrospheres of Enrofl oxaci nLI Jun1,2,DENG Y an-yun2,HUANG T i n g-long2,REN Fen2(1.K e y L abora t ory of Tro p ic B iolo g ical R esources(H ainan Universit y),M inistry of Educa ti on,H aikou570228;2.De part men t of P har m ace u tic a l Engineeri ng,Ha i nan Un i versit y,H aikou570228;Ch i na)Abst ract:This article studied t h e preparati o n techn i q ues and c haracteristics of lung-tar geting gelatin m icr ospheres of enrofloxac i n.l u ng-targeti n g gelatin m icr ospheres of enrofloxac i n(ENR-GM S)w ere prepared by e mulsion-corssli n k i n g m ethod,the m icorpheres w ere observed by o il lens o fm icroscope,the d ia m eter o f the m icr ospheres w as m easured and the m icrospheres w as pho toed by m icro-ca m era.The conetnt o f E NR w as deter m i n ed by UV-spectrophoto m etry and e mbedding rati o and dr ug l o ading were ca lculated.And the re l e asing characterw as evaluated by disso luti o n m ethod.The lung-targeting gelati n m icrospheres of enrofloxaci n w ere stra w yello w po w der w it h globu lar shape and good dispersion by oil lens.The average d ia m eter o f the E NR-GM S w as about10.26 m.There w ere86.66%of the m i c rospheres rang i n g fro m5to12 m.The drug contentw as4.51%and e mbedd i n g rati o w as 31%.The re lease profile i n vitro(p H7.4phosphate buffer)w as fit for slo w-release features.The t1/2va l u e o f E NR-G M S w as about3.8hours.The percent o fENR released fro m ENR-G M S w as37.02%before2.5hours, after tha t they w ere re leased g raduall y,and t h e87.96%of ENR w ere released i n10hours duri n g the drug-基金项目:海南省自然基金项目(项目号80615)作者简介:李军(1969年 ),药学博士,副教授,主要从事药物新剂型新技术的研究工作。

E-m a i:l lij unn@j yahoo.co re leasi n g experi m ents in vitro.The resu lts sho w ed tha t ENR-G M S had good sl o w re lease character and l u ng-tar geti n g property and w as fit for the de m and of lung-tar geti n g drug de livery syste m.K ey w ords:enrofloxac i n;gelatin m icrospheres;l u ng targeti n g dr ug deli v ery syste m作为一种新型、安全、高效的药物制剂转运系统,靶向给药系统(或称靶向制剂,TDDS)诞生于20世纪70年代,它是药物传输系统(简称DDS)理念的具体体现。

该制剂能将药物定向运送到靶器官、靶组织或靶细胞,而其他正常部位则几乎不受影响。

TDDS无论是通过局部定向传递还是利用体循环运送至全身各处,临床用药均需达到四个条件: (1)没有明显毒副作用;(2)在最小剂量范围发挥药效;(3)易被患者接受;(4)安全、廉价、有效[1]。

肺靶向明胶微球是骨架基质型的一种被动靶向制剂。

明胶是从动物胶中提炼的一种胶原蛋白,不仅生物相容性好,而且方便易得、价格低廉,在体内又相对易降解,没有明显毒副作用,所以很适合用作药物治疗的靶向载体。

同时,明胶骨架的溶蚀作用又可以起到一定的缓释作用,具有给药次数少,峰谷血药浓度波动小,刺激反应轻,疗效持久安全等特点[2]。

药物制成微球后,由于微球具有易被肺毛细血管床机械滤阻的性能,因而将肺靶向给药系统与微球技术结合制成的新型药物制剂进入机体后,药物从微球中释放后浓集于靶区 肺部,达到提高疗效、降低不良反应的目的。

明胶微球具有无免疫原性、可生物降解、靶向性、缓释性等特点,近年来得到广泛关注。

将三种技术加以结合,一种经济、安全、有效、方便的药物制剂就会产生。

近年来的各项研究已经表明,这种技术将对我国畜禽疫病的控制起到巨大的推动作用,也正是基于以上技术的价值和社会的需要,本试验尝试研究恩诺沙星的一种新型制剂 恩诺沙星肺靶向明胶微球,以确定最佳工艺,为社会创造价值。

1 材料与仪器1.1 主要试剂 A型明胶(湖南湘中化学试剂开发中心);盐酸(AR,广州市东红化工厂);司班80 (Span-80,CR,天津市福晨化学试剂厂);恩诺沙星(纯度 99.4%,东北兽药厂);液体石蜡(CR,天津市福晨化学试剂厂);异丙醇(AR,天津市大茂化学试剂厂);酸性明胶(等电点为p H7~9,北京化学试剂公司);甲醛溶液(AR,汕头市西陇化工厂有限公司)。

1.2 主要仪器 电子天平(BL-220H型,日本岛津);p H计(雷磁PH S-3C,上海精密科学仪器有限公司);电热恒温水温水浴锅(DK-98-1型,天津泰斯特有限公司);显微镜(J ONEC XS-200型,南京江南光电集团股份有限公司);恒温加热磁力搅拌器(CL-3型,巩义市予华仪器有限公司);匀浆机(FS H-2型可调高速匀浆机,常州澳华仪器有限公司);激光微粒分析仪(Z W F-J6,天津天河医疗仪器有限公司);紫外可见光分光光度计(UV-2000型,尤尼柯上海仪器有限公司);离心机(Ep pendrof centrifuge5810R,德国);制冰机(SI M-F140,Japan);超纯水仪(Pa ll PL-5124,Austra lia);显微镜(O ly m pus BX41);显微照相机(O l y m pus DP12-2)。

2 方法[3-4]与结果2.1 空白明胶微球(Ge lati n m icrospheres,GM S)制备工艺筛选 本研究采用乳化-化学交联法制备空白明胶微球。

由于微球粒径需控制在一定的范围内,故需通过正交试验对各项实验参数进行优化筛选,以得到更加符合要求的微粒。

参照相关文献[1,3-4]并根据单因素考察结果,选定对制备明胶微球影响较大的4个因素:明胶浓度、搅拌速度、乳化剂用量及油水相比例,每个因素选定3个水平,按L9(34)正交设计表(表1)设置正交试验步骤,筛选出最佳制备工艺条件。

现将正交试验设计如下。

A:明胶浓度设定为(W/W,%);B:匀浆搅拌速度(kilo-tur n/m i n); C:乳化剂用量(mL);D:油水相比例(O:W)。

表1 正交试验设计方案编号(水平)影响因素A B C D1550.43 10210100.73 20315151.03 30通过Z W F-J6型激光微粒分析仪对微球粒径进行测定后,比较、改进最终确定最佳工艺处方。

按最终处方制得的G M S粒径分布如图1所示。

2.2 恩诺沙星含量测定标准曲线和回归方程 精密称定0.1000g 恩诺沙星原料药药粉,溶解于N a OH 稀溶液中,继续稀释并定容于100m L 容量瓶中,用超纯水稀释一系列倍数,得到系列梯度浓度的恩诺沙星标准溶液,再用紫外可见光分光光度仪在272n m 波长下测其吸光度值。