大豆制品脲酶活性测定
脲酶快速检测方法(1)
大豆制品中尿素酶活性的测定方法
方法一尿素酶活性快速测定法——酚红法（粗略法）
1. 原理：尿素酶 +
尿素 氨气（用酚红作指示剂） 2.试剂
（1） 0.1N 氧化钠：称0.4g 氢氧化钠溶于100ml 水中。
（2） 0.1N 硫酸：将1.4ml 浓硫酸溶于l000ml 水中（先加水后加入硫酸） 3.尿素—酚红溶液：
0.14g 酚红溶于35ml 水中+7ml0.1N 氢氧化钠
混合 0.1N 硫酸滴定 琥珀色 21g 尿素溶于300ml 水中
方法：将一匙粉碎过的黄豆粕放入小玻皿中，将已调好的尿素——酚红溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至完全锦湿，停留5min ，观察豆粕的红色反应。 稀硫酸0.2N
尿素—酚红试剂：将1.2g 酚红溶解于30ml0.2N 的氢氧化钠中，用蒸馏水将之稀释至约300ml,加入90g 尿素（分析纯）并溶解之，用蒸馏水稀释至2L ，加入14ml1.0N 硫酸或70ml0.2N 的硫酸；用蒸馏水稀释至最后体积3L ；溶液应具有明亮的琥珀色。（过段时间溶液变为深桔红色，可滴入稀硫酸溶液搅拌之，直至溶液再次成为琥珀色。 方法：将一匙粉碎过的黄豆粕放入小玻皿中，将已调好的尿素——酚红溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至完全锦湿，停留5min ，观察豆粕的红色反应。
溶液保质期最好3个月，最好一个月内用完。
脲酶活性的测定
大豆制品中脲酶活性的测定
定性法：
酚红法
一、原理：
酚红指示剂在pH 6.4-8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶在pH=7.0，T=30℃时可将尿素水解产生氨，释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红的时间长短来判断脲酶活性的大小。
二、仪器和试剂：
粉碎机：粉碎时不产生强烈发热；
分析天平；
25ml纳式比色管；
恒温水浴锅；
0.1%酚红指示剂：0.1g苯酚红溶于100ml 95%乙醇溶液；
结晶尿素；
三、方法：
将试样粉碎，准确称取0.05±0.001g试样于25ml纳式比色管，加入0.2g结晶尿素及5滴酚红指示剂，加入25ml蒸馏水，摇动10s，立即置于30±0.5℃水浴锅中，开始计时，观察溶液颜色变化， 5min 后，取出比色管，摇匀，观察溶液颜色。
空白试验：不加尿素，其他同上。
品质判定：如果溶液为明显的粉红色，则认为该大豆制品脲酶活性超标，为不合格产品。
•0-1min变红，活性非常强（＞1.0）；
•1-2min变红，活性大概0.5-1.0；
•2-5min变红，活性大概0.3-0.5。
四、注意事项：
1.粉碎样品时，不应产生大量热，否则会影响结果判定；
2.称量样品时，一定要将样品混合均匀，否则会造成试验误差；
3.试样和空白试验同时操作，过程要迅速，防止时间影响。
尿素-酚红法
一、原理：
酚红指示剂在pH 6.4-8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶可将尿素水解产生氨，释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红样品占所有样品的比例来判断脲酶活性的大小。
二、仪器和试剂：
表面皿；
0.2N氢氧化钠溶液：称取0.8g氢氧化钠溶于100ml蒸馏水；
豆粕脲酶活性相关资料
V：消耗氢氧化钠体积，ml。
滴定法（续）
操作方法
称取0.2000g试样，转入比色管中，加入10ml尿素缓冲液， 立即盖好盖子并剧烈摇动。置于30±0.5℃恒温水浴上准确保 持30min后立即加入10ml0.1mol/l盐酸，迅速冷却到20℃， 将比色管内容物全部转入烧杯，用水冲洗比色管2～3次，立 即用标准氢氧化钠溶液滴定至PH＝4.7。
生产实践中人们常将脲酶活性和蛋白质溶解度结合起来评价
大豆饼粕的品质，用脲酶活性反映大豆饼粕是否过生，用蛋 白质溶解度反映大豆饼粕是否受热过度。
适宜的脲酶活性值
大多数美国的测定表明：为破坏抗营养物质尿 酶值应在0.20或以下。美国饲料工业协会建议 的尿酶值为0.05-0.20。反刍家畜的日粮中往 往加有尿素，因而过高的尿酶值有可能导致氨 中毒。因此，在美国，反刍动物饲养者对豆粕 尿酶值的要求是≤0.20。在欧洲则认为0.5是 可接受的尿酶值（Deschrifver，1977）。
尿素酶活性与抗胰蛋白酶之间关系，Wright(1981)
脲酶活性测定的局限性
局限性
尿酶活性没有负值，它对任何过熟豆粕的最低值为零；对于 加热过度的豆粕尿酶测定值不是一个可靠的指标 。
解决办法：
利用蛋白质溶解度去评价。原理是：加热使游离氨基酸与其 它化合物的基团形成不能为消化酶所打开的分子间和分子内 的结合键，因而降低了蛋白质的溶解度 。一般要求蛋白质溶 解度（0.2%KOH溶液）应在70%～85%之间。PS＞85% 时，表示加热不足，PS＜70%时则表示加热过度
不同方法测定大豆脲酶活性的比较研究
不同方法测定大豆脲酶活性的比较研究
杨奇慧舒璐钟剑锋
摘要：用滴定法和增值法测定大豆粉在85℃和140℃下分别热处理0、45、90、135、180min的脲酶活性，并用0.2%KOH溶解法测定大豆粉在不同热处理下的蛋白质溶解度。结果表明：在85℃条件下，处理0～180min 大豆粉的脲酶活性和蛋白质溶解度随着时间延长无明显变化；而在140℃条件下，大豆粉的脲酶活性和蛋白质溶解度随着处理时间的延长显著降低。通过测定结果可见，同一样品用滴定法和增值法测得的脲酶活性在数值上不相等，不能互用，但蛋白质溶解度更能反映大豆粉受热过度的程度。
关键词：大豆粉；脲酶活性；蛋白质溶解度；pH增值法；滴定法
众所周知，大豆含有较丰富的蛋白质、脂肪、碳水化合物等，是饲料生产中主要的植物蛋白质源之一，具有较高营养价值。但是，大豆中含有多种抗营养因子，如蛋白酶抑制因子、植物凝集素、胃肠胀气因子、抗维生素因子、抗原蛋白等，这些抗营养因子阻碍营养物质在动物体内的利用，尤其是胰蛋白酶抑制因子的存在不仅会降低饲料营养成分的消化率和适口性，而且也会影响动物对蛋白质的消化吸收，对动物生长发育也产生不良的影响。但是，胰蛋白酶抑制因子的测定较困难，而豆粕中脲酶活性与胰蛋白酶抑制因子活性呈正相关，所以通常通过测定脲酶活性来反映蛋白酶抑制因子的活性。
目前，脲酶活性的测定方法有滴定法（国标法）、pH增值法等，目前，对脲酶活性不同测定方法差异性的研究较少，本文拟对两种方法进行研究，以比较不同方法对测定结果的影响，为实际生产和理论研究提供依据和参考。
大豆中脲酶活性的测定
4.操作步骤
准确称取0.4克样品2份, 分别置 于2支试管中。一支试管加入20ml 的 磷酸缓冲液, 作为空白试验（A管）, 另一支加入20ml尿素缓冲液（B管）。 盖塞混匀, 在30℃恒温水浴中准确保 持30min。在此期间, 每隔5min摇匀 一次。取出立即在流水中冷却, 5min 内测定溶液的PH值。
大豆饼粕中脲酶活性的测定
豆粕的蛋白质含量为45%左右, 是一 种优质的蛋白质饲料, 但是由于其中的抗 营养因子较多, 极大的限制了豆粕在饲料 中的应用。
大豆中的抗营养因子
▪ 胰蛋白酶抑制剂 ▪ 植物红细胞凝集素 ▪ 皂甙 ▪ 胃肠胀气因子 ▪ 植酸 ▪ 抗维生素 ▪ 致甲状腺肿因子
这些抗营养因子大多是不耐热的, 在大豆饼粕的加工过程中由于加热而失活, 从而降低或者失去其有害作用 , 因此, 在 大豆加工生产饲用饼粕时, 必须对大豆粕 进行充分而又适当的加热, 这样才能使其 中的抗营养因子失活 。
5.计算
溶液PH值与试剂空白PH值之差即为脲酶活 性，公式如下:
UA=B-A B——B管的PH值 A——A管的PH值
滴定法
a.原理: 将粉碎的大豆制品与中性的尿酸缓冲液 混合，在30℃保持30min，尿酸酶催化尿素产生 氨，用过量的盐酸中和氨，再用氢氧化钠溶液回 滴。酶的活性用1克分析材料在30℃下1min 产 生氨态氮的毫克数表示。（mgN/g）
A12大豆脲酶的提取及其活性测定.
济南大学山东省医学科学院
成员：许玉灿 李乐凯 赵 华
目录
1
实验背景
2
实验目的与原理 实验步骤
实验结果与分析
3
4
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1.实验背景
大豆脲酶
脲酶（Uease）又称尿素酶,主要来源于豆类植物，能将 特异性的将尿素分解为氨和二氧化碳，大豆脲酶主要用来检 测尿和血液中的尿素。 目前我国脲酶多依赖进口，且生产工艺多采用丙酮来提纯，
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3.实验步骤
大豆制粉 30％乙醇两次浸提
硫酸铵多级盐析提纯
抽滤，40℃烘干得到样品 考马斯亮蓝法测蛋白质含量
SDS-PAGE检测样品纯度 利用脲酶分解脲素为氨的特性检测 大豆脲酶的活性
Page 7
4.实验结果与分析
4.1
样品中蛋白质含量检测
4.实验结果与分析
4.2
大豆脲酶SDS-PAGE检测 M 1 2 3 4
生产操作复杂、危险性大。
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3
2.实验目的与原理
2.１
实验目的
1、本实验针对脲酶的生产工艺进行改进，用乙醇代替丙酮，
操作简便、安全无毒且生产成本大大降低。
2、测定脲酶粗品的活性，获得较高活性的脲酶，为后续获 得更高活性的脲酶打下基础。
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4
2.实验目的与原理
大豆制品中尿素酶活性的两种快速检测法
大豆制品中尿素酶活性的两种快速检测法
饲料公司酚红法
1原理
酚红指示剂在pH6.4~8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶，在室温下可将尿素水解产生氨。释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红的时间长短来判断尿素酶活性的大小。
2仪器和试剂
2.1粉碎装置粉碎时应不产生强烈发热（如研钵、球磨机）；
2.2天平感量0.01 g；
2.3 试管直径18 mm，150 mm；
2.4尿素；
2.5酚红试剂1g/L乙醇溶液。
3测定步骤
将试样研细，称取0.02 g试样，称准至0.01 g，转入试管中。加入0.02 g结晶尿素及2滴酚红指示剂，加20~30 mL
蒸馏水，摇动10 s。观察溶液颜色，并记下呈粉红色的时间。4尿素酶活性的测定结果表示
1 min内呈粉红色为：活性很强；1~5 min内呈粉红色为：活性强；5~15 min内呈粉红色为：有点活性；15~30 min内呈粉红色为：没有活性。
注：通常，10 min以上不显粉红色或红色的大豆制品，其尿素酶活性即认为合格。
饲料公司pH-增值法
本法是美国、日本和前苏联等国常用方法。尿素水解释放的氨是碱性的，可使溶液pH值升高。试样反应30 min后，与空白溶液的pH之差数，可间接用来表示氨量的多少。1. 仪器设备
1.1 恒温水浴须能保持温度于30℃±0.5℃；
1.2 酸度计（pH计）具有玻璃电极、甘汞电极、可测试5 mL 的溶液。此为一种精密仪器，须装有温度补正器，其敏感度应为±0.02 pH单位或更佳。仪器操作及pH值测定均应依照制造商的说明，该pH计应在测定前以标准缓冲液加以校正。
大豆制品脲酶活性测定解读
（4）注意事项： • 1.对于样品较粗、具有大块状的样品， 最好将其稍微粉碎，亦不可太细， 否则不容易观察； • 2.样品一定要铺平，容易观察； • 3.溶液保质期为3个月，最好1个月内 用完； • 4.此方法容易受颗粒度影响。
（二）定量法 1、 pH增值法 （1）原理： 脲酶水解尿素产生氨，使溶液的 pH值升高，通过测定样品溶液的pH 值和空白的pH值之差来计算脲酶的 活性。脲酶活性定义为：在30℃和 pH=7的条件下，每分钟每克大豆制 品分解尿素后所释放的氨态氮的毫 升数。
大豆制品中尿素酶（脲酶） 活性的测定
晁洪雨 2016.4.8
一、测定的原因： 生大豆含有多种能被热破坏的抗营 养因子（如抗胰蛋白酶）。大豆中脲酶 的含量与抗胰蛋白酶成正相关，且能很 快、很经济地予以测定。所以，测定脲 酶的活性（UA），就可以预测大豆饼 粕的加工程度是否适当及营养品质的优 劣。
源自文库
二、影响大豆制品脲酶活性的因素： • • • • • ①大豆加热过程中的温度； ②大豆原料最初的水分含量； ③大豆粒度的大小； ④加热时所用压力的大小； ⑤大豆加热时间的长短。
若干试样经粉碎前的预干燥处理时， 则其计算如下： UA=14×C(V0-V)×(1S)/(30×m) S—预干燥时试样失重的百分率 饲料用的大豆粕尿素酶活性不能超 过0.4
(3)仪器与设备 样品筛：孔径200μm 酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅 拌器和滴定装置 恒温水浴：可控温30±0.5℃ 试管：直径18mm，长150mm，有磨 口塞子
大豆制品中尿素酶活性测定方法_1
大豆制品中尿素酶活性测定方法
中华人民共和国专业标准蛋白酶活力测定法
ZBX66030-87
Measurementofproteinaseactivity
本方法适用于酿造酱油时在制品菌种、成曲的蛋白酶活力测定。
1福林法
试剂及溶液:以下试剂都为分析纯
福林试剂(Folin试剂):于2000mL磨口回流装置内,加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g,钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g,蒸馏水700mL,85%磷酸50mL,浓盐酸100mL,文火回流10h。取去冷凝器,加入硫酸锂(Li2SO4)50g,蒸馏水50mL,混匀,加入几滴液体溴,再煮沸15min,以驱逐残溴及除去颜色,溶液应呈黄色而非绿色。若溶液仍有绿色,需要再加几滴溴液,再煮沸除去之。冷却后,定容至1000mL,用细菌漏斗(No4～5)过滤,置于棕色瓶中保存。此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释。即成已稀释的福林试剂。
碳酸钠溶液:称取无水碳酸钠(Na2CO3),定容至1000mL。
三氯乙酸(TCA)溶液:称取三氯乙酸(CCL3COOH),定容至1000mL。
磷酸盐缓冲液:称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O),定容至1000mL,即成溶液(A液)。称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O),定容至1000mL,即成溶液(B液)。取A液28mL和B液72mL,再用蒸馏水稀释1倍,即成的磷酸盐缓冲液。
2%酪蛋白溶液:准确称取干酪素2g,称准至,加入氢氧化钠10mL,在水浴中加热使溶解(必要时用小火加热煮沸),然后用磷酸盐缓冲液定容至100mL即成。配制后应及时使用或放入冰箱内保存,否则极易繁殖细菌,引起变质。
不同因素对大豆脲酶影响的实验假设
文章标题：探讨不同因素对大豆脲酶影响的实验假设
1.引言
在生物化学和食品科学领域，大豆脲酶是一个重要的酶类蛋白质，它在大豆发酵、食品加工和营养学研究中扮演着重要的角色。然而，不同因素对大豆脲酶的影响并不完全清楚，因此有必要进行深入的实验研究来探讨这一问题。
2.实验假设设定
针对不同因素对大豆脲酶的影响，我们提出以下实验假设：
- 温度：不同温度对大豆脲酶的活性和稳定性有影响，我们假设在一定范围内，温度对大豆脲酶的影响呈现一定的规律性。
- pH值：溶液的pH值对酶活性有一定影响，我们假设在不同pH值条件下，大豆脲酶的活性会有所不同。
- 金属离子：一些金属离子对酶类蛋白质的活性有促进或抑制作用，我们假设不同金属离子对大豆脲酶的影响存在差异。
- 底物浓度：底物浓度对酶反应速率有影响，我们假设不同浓度的底物对大豆脲酶的活性会有一定影响。
3.实验设计和结果分析
在实验中，我们将针对以上不同因素进行系统的实验设计，从简单到复杂逐步展开。通过对大豆脲酶在不同温度下的活性和稳定性进行测试，确定其在不同温度条件下的最适工作范围；我们将调整不同pH
值下的溶液环境，观察大豆脲酶活性的变化；我们会添加不同金属离子，观察其对大豆脲酶的影响；我们会在不同底物浓度条件下进行酶活性测定，得出对底物的亲和力和反应速率的影响情况。
4.总结和回顾
在实验中，我们发现不同因素对大豆脲酶的确存在一定影响。温度对大豆脲酶的活性和稳定性有明显影响，呈现出一定的规律性。在不同pH值条件下，大豆脲酶活性也有所不同，表明溶液的酸碱度对大豆脲酶的影响较大。在金属离子的实验中，我们发现一些金属离子的添加可以促进大豆脲酶的活性，而另一些则有抑制作用。在底物浓度实验中，我们也观察到底物浓度对大豆脲酶活性有一定的影响，但并非线性关系。
06[1].8大豆制品中脲酶活性的测定
![06[1].8大豆制品中脲酶活性的测定](https://img.taocdn.com/s3/m/c2d680c44028915f804dc2f7.png)
1适用范围
本标准适用于由大豆制得的产品和副产品中尿素酶活性的测定。本法可确认大豆制品的湿热处理程度。
2参考标准
GB8622 -88
3定义
本标准所指尿素酶活性定义如下：
在30±0.5℃和pH7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。
4原理
将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30 min，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。
5仪器设备
5.1样品筛：孔径200 μm；
5.2酸度计：精度0.02 pH，附有磁力搅拌器和滴定装置；
5.3恒温水浴：可控温30±0.5℃；
5.4试管：直径18 mm，长150 mm，有磨口塞子；
5.5精密计时器；
5.6粉碎机：粉碎时应不生强热（例如球磨机）；
5.7分析天平：感量0.1 mg；
5.8移液管：10 mL。
6试剂和溶液
6.1尿素（GB 696—77）：分析纯；
6.2磷酸氢二钠（GB 1263—77）：分析纯；
6.3磷酸二氢钾（GB 1274—77）：分析纯；
6.4尿素缓冲溶液（pH6.9至
7.0）：4.45 g磷酸氢二钠（5.2）和3.40 g磷酸二氢钾（5.3）溶于水并稀释至1000 mL，再将30 g尿素（5.1）溶在此缓冲溶液中，可保存1个月。
6.5盐酸（GB 622—77）：分析纯，c（HCl）＝0.1 mol/L溶液；
6.6氢氧化钠（GB 629—77）：分析纯，c（NaOH）＝0.1 mol/L标准溶液，按GB 601标准溶液制备方法的规定配制。
7试样的制备
用粉碎机（4.6）将10 g试样粉碎，使之全部通过样品筛（4.1）。对特殊试样（水分或挥发物含量较高而无法粉碎的产品）应先在实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失重计算在内。
脲酶活性测定方法pH增值法、盐酸中和法
MM_FS_CNJ_0315出口大豆饼粕脲酶活性 pH增值法盐酸中和法
MM_FS_CNJ_0315
出口大豆饼粕脲酶活性测定方法pH增值法、盐酸中和法
1.适用范围
本方法适用于大豆饼粕类脲酶活性的测定。
2.方法一
2.1.术语
脲酶活性：在规定的操作条件下，使试样中的脲酶分解尿素释放出氨基氮，以溶液pH值的变量表示。
2.2.原理概要
将研细的试样与缓冲尿素溶液混合，在30℃作用30min后，测定溶液的pH值。
2.3.主要试剂和仪器
2.3.1.主要试剂
磷酸缓冲溶液：将3.403g KH
2PO
4
和4.355g K
2
HPO
4
溶解并稀释至1000mL。临用前，
以强酸或强碱调节其pH至7.0，其使用期限不超过90d；
缓冲的尿素溶液：溶15g尿素（NH
2CONH
2
）于500mL磷酸缓冲溶液中。加入5mL甲
苯，用于防腐和防止霉菌生长。按上法调节其pH至7.0。
2.3.2.仪器
分析天平：感量0.1mg；
研磨器：易于清理，研磨过程中不发热，并能达到要求的磨粉细度；
恒温水浴：能控制于30±0.5℃；
pH计：备有玻璃电极和甘汞电极，灵敏度不低于±0.02pH单位，同时附有温度补偿；
试管：直径22mm，长150mm，具橡胶塞；
烧杯：容量10mL；
单刻度移液管：10mL；
精密计时器；
标准筛。
2.4.试样的制备
用研磨器将约10g的样品，在不升高温度的条件下尽可能研细，使其通过60目标准筛的量不少于60％。收集全部磨碎物于广口瓶中，小心混合并立即进行分析。
2.5.过程简述
准确称取试样0.200g，放入试管内，加10mL缓冲的尿素溶液，塞好橡胶塞，混匀。置于30±0.5℃水浴中，记下时间。隔5min放入第二个与此相同的试管作重复试验。另称试样0.200g，放另一试管内，加10mL磷酸缓冲溶液，塞好橡胶塞，混匀，作为空白试验。与上管间隔5min置于同一水浴中。
大豆制品脲酶活性测定 PPT
（2）仪器与器皿
❖酸度计（pH计）：具有玻璃电极、 甘汞电极
❖恒温水浴：须能保持温度30±0.5℃ ❖试管：20×150mm并配有橡皮塞
（50mL）
（3）试剂
磷酸缓冲液0.05mol/L：称取 3.403gKH2PO4溶于100mL蒸馏水中。 再称取4.355gK2HPO4溶于100mL蒸馏 水中，合并两者并配成1000mL，用 强酸或强碱调节pH=7.0。
（2）仪器和试剂： • 粉碎机：粉碎时不产生强烈发热 • 分析天平：感量0.01g • 25ml纳式比色管 • 恒温水浴锅 • 0.1%酚红指示剂：0.1g苯酚红溶于
100ml 95%乙醇溶液 • 结晶尿素：分析纯
（3）方法：
粉碎→称取0.05±0.001g→放入试 管→加入尿素0.2g、指示剂5滴→加 蒸馏水25mL→摇动10s→立即置于 30±0.5℃水浴锅→计时观察溶液变 红时间→5 min后取出试管，摇匀继 续观察
尿素缓冲液：称取15g尿素，溶于 500mL磷酸缓冲液中，调节pH=7.0。
样品粉碎：至少60%通过400微米 试验筛。
（4）操作步骤
准确称取0.400±0.00lg样品2份， 分别置于2支试管中。一支试管加入 20mL磷酸缓冲液，作为空白试验（A 管），另一支加入20mL尿素缓冲液 （B管）。
盖塞混匀，在30℃恒温水浴中准 确保持30min。在此期间，每隔5min 摇匀一次。取出立即在流水中冷却， 5min内测定溶液pH值。
10大豆制品中尿素酶活性测定方法GBT8622-1988(精)
GB/T 8622-1988
• 1 适用范围 本标准适用于由大豆制得的产品和副产品中 尿酶活性的测定。本法可确认大豆的湿热处 理程度。 • 2 定义 本标准所指尿素酶活性定义如下：在 （30±0.5）℃和pH7的条件下，每分钟每克 大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。
• 式中：S——预干燥时试样失重的百分率。 • 8.2 重复性 同一分析人员用相同方法，同时或连续两 次测定结果之差不超过平均值的10%，以 其算术平均值报告结果。
• 另取试管作空白试验，移入10mL尿素缓冲 液，10mL盐酸溶液。称取与上述试样量相 当的试样，也称准至0.1mg，迅速加入此 试管中。立即盖好试管并剧烈摇动。将试 管置于（30±0.5）℃的恒温水浴，同样 准确保持30min，冷却至20℃，将试管内 容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两 次，并用氢氧化钠标准溶液滴定至pH4.70。
• 8 测定结果的计算 8.1 计算方法 以每分钟每克大豆制品释放氮的毫克量表示的 尿素酶活性U，按下式计算：
• 式中：c ——氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L； V0 ——空白试验消耗氢氧化钠溶液体积，mL V ——测定试样消耗氢氧化钠溶液体积，mL； m ——试样质量，g。
• 注： 若试样经粉碎前的预干燥处理时，则
• 6 试Leabharlann Baidu的制备 用粉碎机将10g试样粉碎，使之全部 通过样品筛。对特殊试样（水分或挥发 物含量较高而无法粉碎的产品）应先在 实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎， 当计算结果时应将干燥失重计算在内。
豆浆中脲酶的测定
2 待检 豆 浆 于 离 心 管 中 ( 份 ) 其 中 一 份 加 l o m g 尿 素作 为 测 定 管 另 一 份 不 加 尿 素 作 为 阴 性 对 照 管 2 份 同时 放
,
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（2）仪器和试剂：
表面皿；
0.2N氢氧化钠溶液：称取0.8g氢氧化 钠溶于100ml蒸馏水；
1.0N硫酸溶液：移取14.0ml浓硫酸溶 于500ml蒸馏水；
尿素-酚红试剂：用500ml烧杯将 0.8g酚红溶于20ml 0.2N氢氧化钠溶 液，用蒸馏水稀释至约300ml，加入 60g尿素，并溶解之，转移至2L容量 瓶，冲洗烧杯数次,加蒸馏水至约 1.5L，加入9.4ml 1.0N硫酸溶液，用 蒸馏水定容至2L；
大豆制品中尿素酶（脲酶） 活性的测定
2016.4.8
一、测定的原因：
生大豆含有多种能被热破坏的抗营 养因子（如抗胰蛋白酶）。大豆中脲酶 的含量与抗胰蛋白酶成正相关，且能很 快、很经济地予以测定。所以，测定脲 酶的活性（UA），就可以预测大豆饼 粕的加工程度是否适当及营养品质的优 劣。
二、影响大豆制品脲酶活性的因素：
此时溶液应具有明亮的琥珀色； （过 段时间溶液会变为深橘红色，
可滴入稀硫酸溶液搅拌之，直至溶 液再次变为琥珀色）
（3）方法：
将一满匙样品放入表面皿中， 摊平，将以调好的尿素-酚红试剂滴 入表面皿中的样品上，直至完全浸 湿，停留5min，观察样品的颜色反 应。
如果红斑面积多于20%，则认为 该样品脲酶活性超标，为不合格产 品。
（5）计算 UA=pH(B管)-pH(A管)
2、滴定法
（1）原理：
将粉碎的大豆制品与中性尿素缓 冲溶液混合，在30℃保持30min后， 尿素酶催化尿素水解产生氨，用过 量的盐酸溶液中和氨，再用氢氧化 钠标准溶液回滴。
（2）脲酶活性定义
在30℃和pH＝7的条件下，每分 钟每克大豆制品分解尿素后，所释 放的氨态氮的毫克数。
(3)仪器与设备 样品筛：孔径200μm 酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅
拌器和滴定装置
恒温水浴：可控温30±0.5℃ 试管：直径18mm，长150mm，有磨
口塞子
精密计时器
粉碎机：粉碎时应不生强热（如球 磨机）
分析天平：感量0.1mg 移液管：10m1
（4）试剂 尿素：分折纯。 磷酸氢二钠：分析纯。 磷酸二氢钾：分析纯。 尿素缓冲液（pH 6.9至7.0）：4.45g
• ①大豆加热过程中的温度； • ②大豆原料最初的水分含量； • ③大豆粒度的大小； • ④加热时所用压力的大小； • ⑤大豆加热时间的长短。
高温、高湿、高压，粒度小，时间 长脲酶活性低。但是，加工过度， 一些氨基酸会被破坏。所以脲酶活 性过高（豆制品过生）或过低（豆 制品过熟）都表明豆制品质量较差。
尿素缓冲液：称取15g尿素，溶于 500mL磷酸缓冲液中，调节pH=7.0。
样品粉碎：至少60%通过400微米 试验筛。
（4）操作步骤
准确称取0.400±0.00lg样品2份， 分别置于2支试管中。一支试管加入 20mL磷酸缓冲液，作为空白试验（A 管），另一支加入20mL尿素缓冲液 （B管）。
盖塞混匀，在30℃恒温水浴中准 确保持30min。在此期间，每隔5min 摇匀一次。取出立即在流水中冷却， 5min内测定溶液pH值。
（4）注意事项： • 1.对于样品较粗、具有大块状的样品，
最好将其稍微粉碎，亦不可太细， 否则不容易观察； • 2.样品一定要铺平，容易观察； • 3.溶液保质期为3个月，最好1个月内 用完； • 4.此方法容易受颗粒度影响。
（二）定量法
1、 pH增值法
（1）原理：
脲酶水解尿素产生氨，使溶液的 pH值升高，通过测定样品溶液的pH 值和空白的pH值之差来计算脲酶的 活性。脲酶活性定义为：在30℃和 pH=7的条件下，每分钟每克大豆制 品分解尿素后所释放的氨态氮的毫 升数。
磷酸氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于 水并稀释至1000mL，再将30g尿素 溶于此缓冲溶液中，
盐酸：分析纯，0.1mol/L溶液
（2）仪器和试剂： • 粉碎机：粉碎时不产生强烈发热 • 分析天平：感量0.01g • 25ml纳式比色管 • 恒温水浴锅 • 0.1%酚红指示剂：0.1g苯酚红溶于
100ml 95%乙醇溶液 • 结晶尿素：分析纯
（3）方法：
粉碎→称取0.05±0.001g→放入试 管→加入尿素0.2g、指示剂5滴→加 蒸馏水25mL→摇动10s→立即置于 30±0.5℃水浴锅→计时观察溶液变 红时间→5 min后取出试管，摇匀继 续观察
空白试验：不加尿素，其他同上。
品质判定：如果溶液为明显的粉红 色，则认为该大豆制品脲酶活性超 标，为不合格产品。
•0-1min变红，活性非常强（＞ 1.0）；
•1-2min变红，活性大概0.5-1.0； • 2-5min变红，活性大概0.3-0.5。
（4）注意事项： • 1.粉碎样品时，不应产生大量热，
（2）仪器与器皿
酸度计（pH计）：具有玻璃电极、 甘汞电极
恒温水浴：须能保持温度30±0.5℃ 试管：20×150mm并配有橡皮塞
（50mL）
（3）试剂
磷酸缓冲液0.05mol/L：称取 3.403gKH2PO4溶于100mL蒸馏水中。 再称取4.355gK2HPO4溶于100mL蒸馏 水中，合并两者并配成1000mL，用 强酸或强碱调节pH=7.0。
否则会影响结果判定； • 2.称量样品时，一定要将样品混合
均匀，否则会造成试验误差； • 3.试样和空白试验同时操作，过程
要迅速，防止时间影响。
2、尿素酚红法 （1）原理：酚红指示剂在pH 6.4-8.2
时由黄变红，大豆制品中所含的尿 素酶可将尿素水解产生氨，释放的 氨可使酚红指示剂变红，根据变红 样品占所有样品的比例来判断脲酶 活性的大小。
百度文库、测定原理： 脲酶活性测定实际上是在一定条件
下(pH=7.0，T=30℃)，测定每克试 样、每分钟分解尿素所产生的氨的 量。
脲酶 NH2CONH2→→2NH3↑+CO2
•
四、测定方法： （一）定性法： 1、酚红法 （1）原理：
酚红指示剂在pH 6.4-8.2时由黄变 红，大豆制品中所含的脲酶pH=7.0， T=30℃时可将尿素水解产生氨，释 放的氨可使酚红指示剂变红，根据 变红的时间长短来判断脲酶活性的 大小。