革兰氏染色(1)
革兰氏染色1
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师、细菌学家Christain Gram创立。 细菌先经碱性染料结晶染色,而经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌此色不被脱去,有的可被脱去,因此可把细菌分为两大类,前者叫做革兰氏阳性菌(G+),后者为革兰氏阴性菌(G—)。为观察方便,脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色,阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌,以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应;弧菌,螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。革兰氏阳性菌对青霉素敏感,革兰氏阴性菌对链霉素敏感。可根据革兰氏染色法鉴别不同菌种并对症下药。 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别,染色反应不一样。现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物,它与碘和结晶紫的复合物结合很牢,不易脱色,阴性菌复合物结合程度底,吸附染料差,易脱色,这是染色反应的主要依据。另外,阳性菌菌体等电点较阴性菌为低,在相同PH条件下进行染色,阳性菌吸附碱性染料很多,因此不易脱去,阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。例如,在强碱的条件下进行染色,两类菌吸附碱性染料都多,都可呈正反应;PH很低时,则可都呈负反应。此外,两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致,阳性菌透性小,故不易被脱色,阴性菌透性大,易脱色。
所以脱色时间,脱色方法也应严格控制。 革兰氏染色原理: G+菌:细胞壁厚,肽聚糖网状分子形成一种透性障,当乙醇脱色时,肽聚糖脱水而孔障缩小,故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 Gˉ菌:肽聚糖层薄,交联松散,乙醇脱色不能使其结构收缩,其脂含量高,乙醇将脂溶解,缝隙加大,结晶紫-碘复合物溶出细胞壁,沙黄复染后呈红色。 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是: 1)涂片固定。在无菌操作条件下,用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀,固定。 2)草酸铵结晶紫染1分钟。 3)自来水冲洗,去掉浮色。 4) 用碘-碘化钾溶液媒染1分钟,倾去多余溶液。 5)用中性脱色剂如乙醇或丙酮酸脱色,革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色,革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。 6)用蕃红染液复染1分钟,革兰氏阳性菌仍呈紫色,革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。
革兰氏染色的过程和原理
革兰氏染色的过程和原理
革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法,通过此方法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。该染色方法基于不同细菌细胞壁组成的差异,通过特定的染色步骤使细菌在显微镜下呈现不同的颜色。
革兰氏染色的过程包括以下几个步骤:
1. 取一片细菌培养物,涂抹在玻片上,使其形成薄膜。
2. 将涂片在火焰中烘烤,以使细菌附着在玻片上。
3. 将烘烤后的涂片浸入革兰氏紫染色剂中,静置数分钟。
4. 用蒸馏水冲洗涂片,直至洗涤液不再有紫色溢出。
5. 在涂片上滴加碘酒,静置一段时间。
6. 用蒸馏水冲洗涂片,直至洗涤液不再有颜色溢出。
7. 滴加脱色剂(乙醇或乙醚)在涂片上,迅速冲洗。
8. 用蒸馏水冲洗涂片,直至洗涤液不再有颜色溢出。
9. 滴加革兰氏染色剂(碱性洋红)在涂片上,静置1-2分钟。
10. 用蒸馏水冲洗涂片,直至洗涤液不再有颜色溢出。
11. 用纸巾或吹风机轻轻吹干涂片。
12. 使用显微镜观察涂片下的细菌。
革兰氏染色的原理是基于细菌细胞壁的差异。革兰氏阳性菌的细胞壁含有较厚的层状壁,并富含肽聚糖和穿孔蛋白,所以在革兰氏紫染色剂作用下会显现紫色。而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄,内层有脂多糖包裹,所以在革兰氏紫染色剂作用下不易显现出紫色。
革兰氏染色是一种常用的初步细菌分类方法,通过观察细菌在显微镜下的染色特性,可以初步判断细菌的类型,对于临床诊断和细菌研究都有重要意义。
革兰氏染色原理及步骤
革兰氏染色原理及步骤
革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法,可根据细菌的染色特性分为革兰氏阳性和革兰氏阴性。该染色方法主要通过酸碱性染料的交替作用,使革兰氏阳性和阴性细菌能够在显微镜下呈现不同的颜色。
革兰氏染色的步骤分为四个主要过程:准备、染色、洗涤和观察。
1. 准备:首先需要准备好细菌涂片。将细菌培养物均匀涂布在玻片上,使其干燥。
2. 染色:将涂片先用香精酊固定,使细菌附着在玻片上。然后将涂片浸入革兰氏碘液中,进行固定。固定后,将涂片通过酒精醇溶液脱色。接下来,将涂片浸入革兰氏紫水溶液中,染色时间一般为1分钟。染色完成后,用水冲洗涂片。
3. 洗涤:将涂片在水龙头下冲洗,直到液体变清澈。
4. 观察:将涂片在显微镜下观察。革兰氏阳性细菌会呈现紫色,而革兰氏阴性细菌则会呈现粉红色。
总的来说,革兰氏染色方法是一种简便而有效的细菌染色方法。通过该方法可以区分细菌的革兰氏阳性和阴性,有助于进一步分析细菌的形态结构和鉴定。
细菌的革兰氏染色1试验器材菌种
实验流程
1、 取载玻片用纱布擦干,涂菌的部位在火焰上烤一下,除去油脂。 2、 涂片:先在载玻片上滴一滴无菌水,再用接种环取少量菌体,涂在载
玻片上,使其薄而均匀。 3、 晾干:让涂片在空气中自然干燥(可适度靠近酒精灯火焰旁温干)。 4、 固定:让菌膜朝上,通过火焰2-3次固定(以不烫手为宜)。 5、 染色:将固定过的涂片放报纸上,滴加草酸铵结晶紫液,染1 min。 6、 水洗:用水缓慢冲洗涂片上的染色液,用吸水纸吸干。 7、 媒染:滴加1滴碘液,染1min,水洗。 8、 脱色:吸去残留水,连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色,立即水洗。 9、 复染:滴加蕃红复染2-3 min,水洗。至此,革兰氏染色结束。 10、镜检:干燥后用油镜观察。
革兰氏染色法步骤及注意事项
3. 严格遵Leabharlann Baidu安全操作规程,如避免将染料接触到皮肤或进入口鼻。
4. 使用优质的试剂和试验器材,以确保结果的准确性。
5. 注意控制染色时间和冲洗时间,过长或过短都可能影响染色效果。
6. 在观察细菌涂片时,使用适当的显微镜镜头和光源,以获得清晰的图 像。
这些步骤和注意事项将帮助您正确地进行革兰氏染色,并获得准确的细菌分类 和鉴定结果。请务必严格遵循实验室的安全规定,并在专业指导下进行操作。
洗:用蒸馏水或脱离水轻轻冲洗玻璃片,以去除多余的紫晶液。 c. 酒 精洗涤:滴加酒精洗涤玻璃片,使其被酒精覆盖,持续洗涤 15-30 秒。 d. 再次冲洗:用蒸馏水轻轻冲洗玻璃片,以去除酒精。 e. 涂上碘液: 滴加碘液覆盖细菌涂片,静置 1 分钟。 f. 冲洗:用蒸馏水轻轻冲洗玻璃 片,以去除多余的碘液。 g. 酒精洗涤:滴加酒精洗涤玻璃片,使其被 酒精覆盖,持续洗涤 15-30 秒。 h. 再次冲洗:用蒸馏水轻轻冲洗玻璃 片,以去除酒精。 i. 涂上脱色剂:滴加脱色剂覆盖细菌涂片,持续涂覆 15-30 秒。 j. 冲洗:用蒸馏水轻轻冲洗玻璃片,以去除脱色剂。 4. 染色:将细菌涂片滴上红色染料(如苏丹三染料)覆盖细菌,静置 1 分 钟。 5. 冲洗:用蒸馏水轻轻冲洗玻璃片,以去除多余的染料。 6. 干燥:将细菌涂片放在通风处晾干,或用吹风机低温吹干。 7. 观察:将干燥的细菌涂片放在显微镜下观察,细菌将呈现出紫色或蓝色 的革兰氏阳性颜色,而其他微生物将呈现出红色的革兰氏阴性颜色。 注意事项:
实验一 细菌的革兰氏染色
实验一细菌的革兰氏染色
实验一细菌的革兰氏染色
实验一_细菌的革兰氏染色
实验一细菌的革兰氏染色
生物科学贺冰冰[1**********]5周二9、0节
1自学显微镜油镜的采用方法
2学习微生物的无菌操作技术
3自学细菌的革兰氏染色法
1显微镜及油镜物镜的使用原理
1)油镜头的标志
油镜头上常刻有oi或hi字样,有的还刻有一圈红线或黑线标记。在低倍物镜、高被物镜和油镜3种物镜中,油镜的放大倍数和数值孔径最大,而工作距离最短。2)显微镜的分辨率
显微镜性能主要就是看看它的分辨率的大小,然后看看它的总压缩倍数。分瓣率是所指显微镜能够辨别出来物体两点间最轻距离(d)的能力。d值愈小说明分辨率愈低。d值与光线的波长(λ)成正比,与物镜的数值孔径(na)成反比:d=λ/2na2细菌的革兰氏染色原理
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家c.gram创立的。作为细菌学上最常用最重要的鉴别染色法。
革兰氏染色的基本步骤就是:先用初染剂结晶紫展开染色,再用碘液媒染,然后用乙醇脱色,最后里韦县染剂番红复染。革兰氏染色法可以将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(g+)和革兰氏阴性菌(g-)两大类.
g-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质,而且肽聚糖层较薄、交联度低,故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质,增加了细胞壁的通透性,使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结果细菌就被脱色,再经番红复染后就成红色。g+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高,类脂质含量少,经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小,通透性降低,因此细菌仍保留初染时的颜色。
实验1-细菌的革兰氏染色
环境微生物学实验(参见课本P388-392)
实验1 细菌的革兰氏染色
一.实验目的
(1)了解细菌的涂片和染色在微生物学试验中的重要性。
(2)掌握革兰氏染色法的基本操作技术。
二.实验材料
(1)器皿:显微镜、接种环、载玻片、酒精灯。
(2)试剂:草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、95%乙醇、5g/L沙皇染色液。
(3)材料:常见菌种。
三.实验内容
各种细菌经革兰氏染色法染色后,能区分成两大类,一类最终染成紫色,称革兰氏阳性细菌(Gram positive bacteria,G+);另一类被染成红色,称革兰氏阴性细菌(Gram negative bacteria,G-)。其过程如下:
(1)涂片、固定(干燥)
取干净的载玻片于试验台上,在正面边角作几号,并滴一滴无菌蒸馏水于载玻片的中央,灼烧接种环,待冷却后从斜面挑取少量菌种与玻片上的水滴混匀后,在载玻片上涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过多。
干燥过程最好在空气中自然晾干,为了加速干燥,也可在微小火焰上方烘干。烘干后再在火焰上方快速通过3~4次,使菌体完全固定在载玻片上。但不宜在高温下长时间烤干,否则急速失水会使菌体变形。
(2)初染
滴加草酸铵结晶紫染色液1―2min,水洗。
(3)媒染
滴加革兰氏碘液,染1-2min,水洗。
(4)脱色
滴加体积分数为95%的乙醇,约45s后即水洗;或滴加体积分数为95%的乙醇后将玻片摇晃几下即倾去乙醇,如此重复2-3次后即水洗。
(5)复染
滴加沙黄液(番红),染2-3min,水洗并使之干燥。
(6)镜检
按显微镜的操作步骤观察菌体形态,及时记录。根据呈现的颜色判断该菌属是G+还是G-细菌。观察时先用低倍镜观察,发现目的物后用油镜观察。四.注意事项
实验1(实验二:细菌的革兰氏染色)实验报告
实验二细菌的革兰氏染色
一、目的与要求
了解革兰氏染色的原理,掌握革兰氏染色的主要操作步骤,学会革兰氏染色的方法。
二、实验原理
革兰氏染色法能将细菌分成两大类,即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。在用乙醇进行脱色时,两种菌的细胞壁结构不同,阳性菌细胞壁为网状结构,比较厚,结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内,而阴性菌细胞壁比较薄,颜色更容易洗脱出来,所以最终革兰氏阴性菌为红色,阳性菌为紫色。
三、实验材料
菌种:大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
染色液:草酸铵结晶紫染液、路戈氏碘液、95%酒精、番红染液。
器皿及材料:洁净载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、酒精灯、接种环、镊子、无菌水、洗瓶、染色盘、载玻片架、记号笔、75%消毒酒精瓶、废玻片缸、火柴等。
仪器:显微镜。
四、实验方法与步骤
1.染色步骤:
(1)制片:接种环蘸取细菌液置于载玻片,酒精灯外焰加热玻片进行细菌固定。
(2)初染:添加结晶紫染色,1min后倾去染色液,蒸馏水冲洗至无色。
(3)媒染:吸干残留蒸馏水后,加入一滴碘液,作用1min,水洗。
(4)脱色:吸干残液后,加入95%酒精进行脱色,30s后水洗。
(5)复染:吸干残液后,用番红液复染,1min后,水洗。
(6)镜检:吸干残液后,低倍镜寻找目标物体,再用高倍镜放大目标物,目标视野添加香柏油进行观察。
2.平板划线
(1)左手中指、无名指和小拇指托住无菌平皿。
(2)盖子用食指和拇指掰开,右手持接种环进行第一区划线。
实验一 革兰染色法
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研究细菌的致病性
• 革兰阳性菌可产生外毒素使人致病。 • 革兰阴性菌主要以内毒素使人致病。( LPS作为G-菌内毒
素致病 )
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细菌的特殊结构形态观察
实验步骤 • 观看鞭毛、荚膜、芽孢的示范片 • 绘图、写实验报告
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细菌的特殊结构
• 复染法(鉴别染色):采用两种或两种以上的不同 染料进行先后染色,使不同种类的细菌、同种细 菌的不同结构,分别染上不同的颜色,以便鉴别 细菌。
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革兰染色法
• 该染色法是丹麦细菌学家革兰于1884年创建的, 至今仍广泛应用用于细菌分类和鉴别
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革兰染色法的原理
无菌生理盐水、显微镜等
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涂片
染
色
干燥
标
本
固定
检
查
基
染
本
色
程
镜
序
检
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革兰氏染色步骤与现象
初染1min
媒染1min
脱色15-20s
复染1min
G-
G+
革兰氏染色的染色流程
革兰氏染色的染色流程
Gram staining is a commonly used differential staining technique in microbiology to categorize bacteria into two groups based on their cell wall compositions. The process involves staining the bacterial cells with crystal violet, iodine, alcohol, and safranin. 革兰氏染色是微生物学中常用的差异染色技术,根据细菌细胞壁组成将细菌分为两组。这个过程涉及使用结晶紫、碘酒、酒精和藏红染色细菌细胞。
The first step in the Gram staining process is to use crystal violet dye to color the bacterial cells. This dye binds to the peptidoglycan layer of the cell wall, imparting a purple color to all cells. 革兰氏染色过程的
第一步是使用结晶紫染料染色细菌细胞。这种染料结合到细胞壁的肽聚糖层,使所有细胞呈紫色。
Following the crystal violet staining, iodine is added to form a crystal violet-iodine complex within the cell. This complex serves to stabilize and trap the dye within the cell, ensuring that it does not wash out during subsequent steps of the Gram staining process. 在结晶紫染色后,加入碘形成细胞内的结晶紫-碘复合物。这种复合物稳定并固定细胞内
简述革兰氏染色法
简述革兰氏染色法
革兰氏染色法是由19世纪德国医学家威廉革兰发展的一种医学
染色方法,是一种利用化学特性显示细胞中各种结构的常用技术。1882年,威廉革兰开创了这种技术,被公认为医学染色的先驱。革
兰氏染色法也称革兰染色法,简称革兰氏染色。
革兰氏染色是一种化学反应技术,通过配制特定的染料与植物、细菌细胞或血液中的其他活体物质发生反应,其反应结果是使得特定的染料在物体表面形成明亮的染色,从而可以简单准确地观察、分类和研究植物、细菌、血液、病毒等活体结构的特性。
革兰氏染色的原理是,活体的细胞结构具有固有的电荷,当染料与活体细胞发生反应时,染料就会因为电荷的作用而在活体细胞表面结合,产生染色。根据染料结合细胞表面的类型和强度,可以得出不同的深浅程度和颜色。
革兰氏染色法的应用非常广泛,它不仅可以用来研究细胞的结构,而且还可以用于检测血液中的疾病,如感染性疾病、肿瘤等,还可以检测细菌的抗药性,以及病毒、血液中抗原和抗体的存在。此外,由于革兰氏染色法反应和结果都很明显,也常常用于活体组织学研究,如病理检查、局部病原学研究和病理病理学研究。
在革兰氏染色法中,染料是细胞杂质检测的关键因素,它们必须是安全、可以长期存储,具有良好的抗氧化性和可溶性,能够在活体组织中稳定存在,同时能够与活体细胞中的其他物质发生反应,以达到染色的效果。常用的染料包括绿唑酮(Gram)、南方染料(Safranin)、
血蛋白(Haematoxylin)和紫色素(Purple)等。
革兰氏染色法在19世纪被发明出来,是一种广泛应用于医学检测、医学研究和病理学研究的重要技术。它有助于研究细胞结构特性,进一步提高活性物质的筛选,提高疾病的检测效率,也有助于解决很多医疗难题,为现代医学技术提供了重要的帮助。
细菌的简单染色(Simple stain)和革兰氏染色(Gram stain)(1
细菌的简单染色(Simple stain)和革兰氏染色(Gram stain)(1
虽然各种类型的显微镜能够观察到微生物的各种形态结构,但一般实
验室常用的是普通光学显微镜。由于细菌体积小且透明,在活体细胞
内又含有大量的水分,因此,对光线的吸收和反射与水溶液相差不大。当把细菌悬浮在水滴内,放在显微镜下观察时,由于与周围背景没有
显著的明暗差,难于看清它们的形状,更谈不上识别其细微结构。而
经过染色,就可借助颜色的反衬作用比较清楚地看到菌体形态,亦即
菌体表面及内部结构着色与背景形成鲜明对比,这样便可在普通光学
显微镜下清晰地观察到微生物的形状和结构,而且还可以通过不同的
染色反应来鉴别微生物的类型和区分死、活细菌等,因此,微生物染
色技术是观察微生物形态结构的重要手段。
本实验通过对细菌的染色观察,使同学们在掌握细菌染色技术的基础上,了解各种其他的染色制片技术;观察微生物的各种形态结构,以
巩固课堂知识,增强感性认识。
一、目的要求
1.学习微生物涂片、染色的基本技术,掌握细菌的单染色方法及无菌
操作技术。
2.巩固显微镜的使用方法。
二、基本原理
1.简单染色法:所谓单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种
方法。此法操作简便,适用于菌体一般形态的观察。
在中性、碱性或弱酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,所以常用碱
性染料进行染色。碱性染料并不是碱,和其他染料一样是一种盐,电
离时染料离子带正电,易与带负电荷的细菌结合而使细菌着色。例如,美蓝(亚甲蓝)实际上是氯化亚甲蓝盐,它可被电离成正、负离子:
带正电荷的染料离子可使细菌细胞染成蓝色。常用的碱性染料除美蓝外,还有结晶紫(crystal violet)、碱性复红(basicfu-chsin)、
实验一 细菌革兰氏染色
思考题: 思考题:
1、涂片后为什么要固定?固定时应注意什么? 、涂片后为什么要固定?固定时应注意什么? 2、革兰氏染色过程中,哪些操作是成败关键?为什么? 、革兰氏染色过程中,哪些操作是成败关键?为什么?
利用油镜不但能增加照明度, 利用油镜不但能增加照明度,更主要的是能增加数值口 径,因为显微镜的放大效能是由数值口径决定的。。所谓数 因为显微镜的放大效能是由数值口径决定的。。所谓数 。。 值口径,即光线投射到物镜上的最大角度的一半正弦, 值口径,即光线投射到物镜上的最大角度的一半正弦,乘上 玻片与物镜间介质的折射率所得的乘积。 玻片与物镜间介质的折射率所得的乘积。 N.A=nsina 其中N.A为数值口径; 为数值口径; 其中 为数值口径 a为最大入射角的半数 为最大入射角的半数 a越大,N.A就越大 越大, 越大 就越大 n为介质折射率 ; 为介质折射率
图6 无菌操作过程
涂片、 图1 涂片、干燥和热固定
1、结晶紫染1min 、结晶紫染 2、水洗 、 3、碘液媒染1min 、碘液媒染 4、水洗 、 5、乙醇脱色30秒 、乙醇脱色 秒 6、水洗 、 7、番红复染2min 、番红复染 8、水洗 、 9、吸水纸吸干 、
1.归纳革兰氏染色法操作步骤、注意事项和实验结果
1.归纳革兰氏染色法操作步骤、注意事项和
实验结果
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革兰氏染色的操作流程及操作技术要点
英文回答:
Geran dyeing is a widely used means of bacteriological analysis for the objective identification of bacteria ' dyeing characteristics and morphological characteristics。 The technical processes are clear, including preparation of bacterial cultures,sample fixing, dyeing, washing and observation。 High—quality bacterial cultures will need to be prepared, with a few samples painted with thin film on the tablet, followed by sample fixation。 Fixed bacterial samples are coated with gland dye and sedated for a moment at room temperature。 Lightly wash the film with distilled water and wash the excess dye until the water is cleared。 Use of suction paper to dry up the moisture and put the film under the microscope。 This technical step is clear, operational and consistent with national scientific policy guidance, and contributes to the development of scientific research and medical practice。
革兰氏染色法染色流程
革兰氏染色法染色流程
Gram staining, also known as the Gram stain, is a microbiological technique used to differentiate bacteria into two groups: Gram-positive and Gram-negative. 革兰氏染色,也称为革兰染色,是一种微生物学技术,用于区分细菌为革兰阳性和革兰阴性两大类。
This staining method was developed by Hans Christian Gram in 1884 and remains one of the most commonly used techniques in microbiology. 这种染色方法是由汉斯·克里斯蒂安·格拉姆在1884年发展出来的,至今仍是微生物学中最常用的技术之一。
The process involves staining bacterial cells with crystal violet, followed by iodine treatment, alcohol decolorization, and counterstaining with safranin. 这个过程涉及使用结晶紫染色细菌细胞,接着进行碘处理,酒精脱色,最后用伯氏红对比染色。
Gram-positive bacteria retain the crystal violet and appear purple, while Gram-negative bacteria lose the crystal violet and appear pink after the counterstain. 革兰阳性细菌保留了结晶紫并显示紫色,而革兰阴性细菌在对比染色后失去了结晶紫并显示为粉红色。
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染色结果
革兰氏阳性菌都呈紫色,革兰氏阴性菌都呈红色。 其中变形杆菌被染成红色为阴性菌,四联球菌被染成紫 色为阳性菌。
变 形 杆 菌
四 联 球 菌
在实验中经常会出现假阳性和假阴性的结果
影响实验成功的因素:
涂片过厚 结晶紫染色过度 导致脱色不完全 (假阳性)
细胞固定过度 细胞培养 时间太长
造成细胞壁通透性的改变 (假阴性)
革兰氏染色
菌种鉴定
菌种获取
分离鉴定 保存复壮 革 兰 氏 染 色
Gram与革兰氏染色:
革兰氏染色法(Gram stain)是细菌学中广泛使用 的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师、细菌学家Hans Christain Gram创立并以其名字命名的。 Gram在对死于 肺炎的患者肺部组织进行检查时发现某些细菌对特定的染 料有很高的亲和力。他的染色方法是:首先采用苯胺-结 晶紫染液进行初然,然后用卢戈式碘液媒染,最后用乙醇 脱色。经过这样的染色后,发现肺炎球菌保持蓝紫色,肺 部组织背景为浅黄色,达到了将细菌与被感染的肺部组织 区分开的目的。几年以后,德国病理学家Carl weigert (1845-1904)在Gram染色方法基础上加上番红复染, 使其成为微生物学研究领域最常用的染色方法之一。
实验器材
1.菌种
变形杆菌平板培养物,四联球菌平板培养物
2.溶液和试剂
结晶紫,路氏碘液,95%乙醇,番红复染液
3仪ຫໍສະໝຸດ Baidu及其他用品
酒精灯,载玻片,电镜,擦镜纸,接种环,镊子, 载玻片,滤纸,滴管,无菌水及香柏油二甲苯等
操作步骤
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、 复染等四个步骤,具体操作方法是:
1)制片 取活跃生长期菌种按常规方法涂片(不宜过厚)干燥和固 定。 2)初染 滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位染色1~2min后倾去染 液水洗至水流为无色。 3)媒染 加碘液覆盖涂面染约1分钟,水洗至水流为无色。 4)脱色 将玻璃片上残留水用吸水纸吸去,在白色背景下用滴管流 加95%乙醇脱色(一般20~30s)当流出液无色时立即用水 洗去乙醇。 5)复染 将玻片上残留水用吸水纸吸去,用番红复染液染色2min, 水洗,吸去残水晾干。 6)镜检
因此,在实验过程中应注意:
• 选择活跃生长期菌种染色
• 涂片不宜过厚
• 染色及脱色时间得当
实验报告
1》结果
(1)绘出油镜下观察的图像 (2)填表
菌名 大肠杆菌 四联球菌 菌体颜色 细菌形态 结果(G+ G- )
思考题:
现有一株未知菌,个体明显大于大肠杆菌 请你鉴定该菌是革兰氏阳性还是革兰氏阴 性,如何确定你的染色结果的正确性?
1》革兰氏染色原理 2》基本操作步骤
3》染色结果 4》注意事项
基本原理
通过革兰氏染色细菌可以被分为G+菌和G-菌,细菌通过 结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结 晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚 糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇或丙酮脱色处理时,因 失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会 出现缝隙,,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使 其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含 量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主 的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘 复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等 红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色。 染色的差异主要是由于阴性与阳性细菌细胞壁的差异所 应起的。
谢 谢 大 家