疏水性相讲义互作用色谱
反相 液相色谱柱 类型
反相液相色谱柱类型
1.引言
1.1 概述
反相液相色谱（reversed-phase liquid chromatography, RP-LC）是指在液相色谱中使用极性流动相和非极性固定相的一种分离技术。相比于传统的正相液相色谱，反相液相色谱更为常用，其应用领域涵盖了许多不同的样品类型和化学物质。
在反相液相色谱中，固定相通常由选择性的疏水性填料组成，而流动相则是一种较为极性的有机溶剂和水的混合物。当样品在流动相中被注入柱子时，根据样品分子与固定相之间的相互作用力，不同成分将以不同的速率被分离。这种分离的基本原理是根据分析物分子的极性差异来实现的。
反相液相色谱柱的选择也是非常重要的，不同类型的柱子具有不同的特点和分离效果。例如，C18柱是最常用的反相液相色谱柱之一，其固定相表面上有十八个碳原子，对中等极性物质具有良好的分离效果。另外，还有C8柱、C4柱等，它们根据碳原子数的不同而具有不同的分离能力。
总体而言，反相液相色谱柱是一种非常重要和广泛应用的色谱技术。它在药物分析、环境监测、食品安全检测等领域发挥着重要的作用。本文将详细介绍反相液相色谱柱的类型以及它们的特点和应用，希望能够为读者对该领域的了解提供一定的帮助。
1.2 文章结构
本文将按照以下结构来展开讨论反相液相色谱柱类型。
在引言部分，我们将首先进行概述，介绍反相液相色谱柱的基本概念
和重要性。接着，我们会详细说明全文的结构和组织方式，以便读者能够清楚地了解文章的整体框架。最后，我们会明确阐述本文的目的，即为读者提供关于反相液相色谱柱类型的全面指南。
(完整版)第九节疏水作用色谱
第九节疏水作用色谱
疏水作用色谱（Hydrophobic interaction chromatography HIC）是采用具有适度疏水性的填料作为固定相，以含盐的水溶液作为流动相，利用溶质分子的疏水性质差异从而与固定相间疏水相互作用的强弱不同实现分离的色谱方法。
关于在疏水作用色谱条件下进行分离的概念最早在1948年就由Tiselius提出，该技术真正得到发展和应用是在20世纪70年代早期开发出一系列适合进行疏水作用色谱的固定相以后。此后随着新型色谱介质的开发生产和对机理认识的逐步深人，该技术得到了广泛的应用，并且随着高效疏水作用色谱介质的出现，HIC已在HPLC平台上被使用，称为高效疏水作用色谱（High performance hydrophobic interaction chromatography HP-HIC）。
由于疏水作用色谱的分离原理完全不同于离子交换色潜或凝胶过滤色谱等色谱技术，使得该技术与后两者经常被联合使用分离复杂的生物样品。目前该技术的主要应用领域是在蛋白质的纯化方面，成为血清蛋白、膜结合蛋白、核蛋白、受体、重组蛋白等，以及一些药物分子，甚至细胞等分离时的有效手段。
一、疏水作用色谱基本原理
(一) 疏水作用
疏水作用是一种广泛存在的作用，在生物系统中扮演着重要角色，它是球状蛋白高级结构的形成、寡聚蛋白亚基间结合、酶的催化和活性调节、生物体内一些小分子与蛋白质结合等生物过程的主要驱动力，同时也是磷脂和其他脂类共同形成生物膜双层结构并整合膜蛋白的基础。
根据热力学定律，当某个过程的自由能变化(△G)为负值时，该过程在热力学上是有利的，能够自发发生，反之则不能。而根据热力学公式
c18、c8、氨基、苯基、氰基色谱柱的区别
c18、c8、氨基、苯基、氰基色谱柱的区别
c18色谱柱是一种常用的反相色谱柱，它具有较高的碳链长度（18个碳原子），适用于分离疏水性化合物，特别是有机化合物。它在常见的官能团和它们的聚合物上进行表面修饰，以提供良好的分离性能。
c8色谱柱也是一种反相色谱柱，和c18色谱柱类似，但其碳链长度较短（8个碳原子），因此适用于分离相对疏水性较低的化合物。
氨基色谱柱是一种亲和色谱柱，属于极性色谱柱的一种。它通过具有氨基官能团的化合物进行表面修饰，能够与一些带有酸性或碱性官能团的化合物进行特异性相互作用，实现对这些化合物的选择性分离。
苯基色谱柱是一种反相色谱柱，具有苯基官能团的表面修饰。它适用于分离芳香族化合物，因为芳香族化合物和苯基官能团之间有相互作用。
氰基色谱柱是一种亲和色谱柱，通过氰基官能团对化合物进行表面修饰。它适用于分离带有羧基、酮基、酰胺基等官能团的化合物，能够与这些化合物进行选择性相互作用。
蛋白质的疏水色谱法
蛋白质的疏水色谱法
一、样品准备
在进行疏水色谱法之前，需要先准备好蛋白质样品。通常采用细胞或组织提取的方法来获取蛋白质样品。首先，将细胞或组织放入匀浆器中，加入适量的缓冲液，然后进行研磨和匀浆。接着，将匀浆液进行离心处理，分离出上清液和沉淀。最后，通过滤膜过滤上清液，收集滤液并测定蛋白质浓度。
二、柱平衡
在进行疏水色谱之前，需要对色谱柱进行平衡。这是因为色谱柱中的固定相具有吸附作用，如果不进行平衡，会影响后续的分离效果。通常采用缓冲液作为平衡液，将色谱柱装入平衡液中，进行充分的平衡，直到色谱柱的流出液中不再含有杂质峰。
三、疏水作用
疏水作用是蛋白质在疏水色谱法中的主要分离原理。蛋白质分子具有疏水性和亲水性两种特征。疏水性蛋白质在遇到非极性固定相时，会被吸附并滞留在固定相中，而亲水性蛋白质则会被流动相带着流出色谱柱。通过调整流动相的组成和条件，可以控制蛋白质的疏水作用力，从而实现蛋白质的有效分离。
四、洗脱
洗脱是疏水色谱法中的重要步骤。通常采用改变流动相的pH值、离子强度或添加有机溶剂等方法来降低蛋白质分子与固定相之间的相互作用力，使蛋白质分子被洗脱下来。根据不同的实验需求，可以选
择不同的洗脱方式和洗脱液。
五、检测
在疏水色谱法中，需要对蛋白质样品进行检测。常用的检测方法包括紫外检测、示差扫描和质谱检测等。这些方法可以测定蛋白质的分子量、等电点等基本信息，并对其纯度进行评估。根据实验需求选择合适的检测方法。
六、数据处理
在完成疏水色谱实验后，需要对实验数据进行处理和分析。通常采用表格或图示的形式来表示实验结果。表格中可以列出各个时间点的洗脱液体积、洗脱峰的面积和蛋白质浓度等信息。图示则可以直观地展示蛋白质分子的分离效果和纯度等数据。通过对数据的处理和分析，可以评估疏水色谱法的分离效果和蛋白质样品的纯度。
反相液相色谱原理
反相液相色谱原理
反相液相色谱（reversed-phase liquid chromatography）是一种
常用的色谱技术，适用于分离和分析不同极性的化合物。其原理基于样品分子和固定相之间的相互作用。
在反相液相色谱中，固定相是一种具有疏水性的材料，通常是由碳链构成的硅胶。溶剂系统是由两种互不混溶的溶剂组成，即流动相和静相。
样品溶解在流动相中，然后通过一个进样器进入色谱柱。色谱柱内的固定相表面上具有一层亲水基团，这些基团与水分子有相互作用，而对于疏水性的分析物分子则较弱。因此，在流动相中，疏水性的分析物分子会被更多地吸附在固定相上，从而滞留时间更长，而亲水性的分子会较快地通过柱子。
滞留时间长的化合物会在柱上积累，直至达到平衡，然后逐渐被洗脱。洗脱过程是通过改变流动相的极性来实现的，通常是通过一个渐变的溶剂系统。分子的相互作用力会随着流动相的极性改变而减弱，从而促进分子的洗脱。洗脱后，分子会进入检测器进行检测和分析。
反相液相色谱具有灵敏度高、分离效果好、分析速度快等特点。它广泛应用于药物分析、环境监测、食品检测等领域。
疏水相互作用色谱
Purity & characterization
■ Purpose
• Downstream purification • Separation of biomolecuoles • Exploits differences in hydrophobicity. → Number of hydrophobic aminoacids. → Distribution of these aminoacids.
Additives
Salts that cause “salting-in” will weaken protein-ligand interactions. ‰ Alcohols and detergents (non-polar parts) can compete with protein for HIC absorbent sites and may displace proteins.
Hydrophobic interaction chromatography
Umair Saleem Methods in protein chemistry
■ Alternatives
• Gel filtration chromatography • Ion exchange chromatography • Reverse phase chromatography Why HIC? • Different basis of separation • Weaker interactions → Less structural damage → Maintain high activity
液相色谱的分类及各自的原理应用
液相色谱的分类及各自的原理应用
1. 引言
液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是分析化学中常用的一种分离和定性分析技术。通过溶液中的化合物在固定相上的分配和吸附作用来实现分离。液相色谱广泛应用于药物分析、环境分析、食品安全等领域。本文将介绍液相色谱的分类及各自的原理应用。
2. 液相色谱的分类
液相色谱根据固定相的性质和样品与固定相之间的相互作用方式可以分为以下几种分类。
2.1 亲水性交换色谱（HILIC）
亲水性交换色谱（Hydrophilic Interaction Chromatography，简称HILIC）是一种基于极性交互作用分离机制的液相色谱技术。它主要用于分离极性化合物和水溶性化合物。在HILIC中，固定相是具有较高亲水性的材料，如硅胶或氨基硅胶。样品溶液中的极性化合物与固定相之间的极性相互作用使得它们在固定相上发生分配和吸附作用，实现分离。
2.2 反相色谱（Reversed Phase Chromatography，简称RPC）
反相色谱是液相色谱中应用最广泛的一种技术。它主要用于分离非极性和低极性溶质。在反相色谱中，固定相是一种非极性材料，如疏水性的碳链。样品中的非极性或低极性溶质与固定相之间发生疏水作用，实现分离。
2.3 离子交换色谱（Ion Exchange Chromatography，简称IEC）
离子交换色谱是一种基于电荷交互作用的液相色谱技术。它主要用于分离带电的离子化合物。固定相是具有离子交换基团的材料，如阴离子交换剂或阳离子交换剂。样品中的离子化合物与固定相之间发生离子交换反应，实现分离。
反相色谱中极性大小出峰顺序
反相色谱中极性大小出峰顺序
阴极反相色谱，简称CNP，是一种常用的高效分离技术，通常用来分离和检测药物、激素等药物类物质。它利用极性大小和其他物理和化学特性，以改变物质之间的相互作用，有效地从溶液中分离和测定物质。根据极性的强度差别，阴极反相色谱中的出峰顺序可以分为四类：疏水性、中间性、亲水性和自由基性。
疏水性介质，具有极弱的水杂质结合力，是反相色谱中的最先出峰物质。它们
的分子量大，分子内部结构复杂，具有良好的晶体结构，例如类固醇类药物，其能量摩尔体积化学势低和高极性面积，使它们具有一定的极性，从而使它们具有良好的出峰性能。
中间性介质是经过缓和处理的水溶液，与疏水型介质相比，它没有明显的极性团，但具有一定的水合力和水杂质结合力，是CNP中极性差异较小的出峰物质，如抗生素、食品添加剂等混合药物。
亲水性介质是溶液中的水溶性介质，具有极强的水杂质结合力，其大侧链会与
水分子结合，其小侧链由hydrophobicgroup组成，其分子极性较高，从而可以出峰，例如，脂质、糖类等物质。
自由基介质，由断裂键构成，具有极大的极性，其分子不能紧缩，因此不能形
成水杂质结合，如氧化药物等具有自由基特性的物质。CNP中的自由基介质出峰时
间最长，但他们的极性最强，可以用紫外检测等指标做出良好的判断。
总而言之，阴极反相色谱中出峰的极性大小排序为：疏水性>中间性>亲水性>
自由基性，分离物质有助于研究药物组成、物理性质和化学结构，为药物研究、检测和开发提供了高效方法。
疏水性相互作用色谱
二、原理
组成蛋白质的氨基酸中包括一些疏水性氨基酸基团，如苯丙 氨酸，酪氨酸；这些基团大部分处于蛋白质内部，但有部分 疏水基团暴露于蛋白质表面。
在高离子强度盐溶液中，蛋白质表面的水化层被破坏，更多 的疏水部分暴露在外，这些暴露在外的疏水基团与介质上的 弱疏水性配基发生疏水性作用，被固定相(疏水性吸附剂)所吸 附。 被固定相吸附蛋白质在疏水性吸附剂上的分配系数随流动相 盐析盐浓度的提高而增大。 HIC采用高盐下吸附，低盐下洗脱。
盐浓过高， 沉淀不可
原理图示
Mechanism of HIC
三、疏水性吸附剂
常用配基
苯基、短链烷基、 烷氨基、聚乙二醇聚醚
修饰密度
疏水配基修饰密度一般在10~40 umol/ml
疏水性吸附作用与配基的疏水性和配基密度成 正比，故配基的修饰密度应根据配基的疏水性 而异。
四、 影响疏水性吸附的因素
8mol/L 脲素溶液 。
应用
主要用于分离纯化大分子物质。
六、疏水性相互作用色谱的应用及特点
应用
HIC主要用于蛋白质类生物大分子的分离纯化。这种方法 与IEC的离子交换作用完全不同。 它不仅是一种有效的分离纯化手段，而且还可与IEC互补短 长，分离纯化利用IEC难以分离的蛋白质。
但是，疏水性相互作用机理比较复状。吸附剂的选择和洗脱 分离条件不易掌握。
色谱分配系数k的特点
色谱分配系数k的特点
色谱分配系数的特点如下：
1.反映物质的亲水性与疏水性：分配系数是描述溶质在两相中溶
解度差异的参数，可以反映物质的亲水性或疏水性。亲水性物质在流
动相中具有更高的溶解度，分配系数较小；疏水性物质则更容易被固
定相吸附，分配系数较大。
2.用于物质的分离和富集：分配系数可以用于物质的分离和富集。在分离技术中，根据溶质在两相中的不同分配行为，可以通过调节流
动相的性质以实现物质的分离。分配系数越大，溶质更容易被固定相
吸附，也就更容易被分离和富集。
3.偏析效应：色谱分配系数还可以反映溶质在两相中的偏析效应。当两相中有多种物质存在时，溶质与固定相和流动相之间的相互作用
会导致分配系数的变化。这种偏析效应可以用来研究混合物中各成分
的分离特性。
4.与物质结构相关：分配系数的值与溶质的结构和性质有关。通
常来说，具有较大分子量、较长碳链、较高极性或较多官能团的物质
具有较大的分配系数。这是因为这些结构特征使得溶质更容易与固定相相互作用，从而被固定相吸附。
5.温度依赖性：分配系数的值通常随着温度的升高而增大。这是因为在较高的温度下，溶质的扩散速率增加，有利于固定相和流动相之间的相互作用，从而增大了分配系数。
【国家自然科学基金】_疏水相互作用色谱_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140731
科研热词 纤溶酶 酶学性质 计量置换保留模型 蛹虫草 蛹拟青霉 蛋白质分离 色谱分离 纯化 离子交换色谱 疏水相互作用色谱 深层培养 手性识别 多功能色谱填料 分离纯化 分子模拟 β -环糊精 α -环己基扁桃酸 pm3
推荐指数 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2008年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
科研热词 高效疏水色谱 重组人干扰素-γ 蛋白预分离 蛋白质组学 蛋白折叠液相色谱法 纯化 离子交换色谱 疏水相互作用色谱 复性 二维液相色谱
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
2013年 序号
科研热词 1 铜配合物 2 荧光光谱 3 人血清蛋白
推荐指数 2 2 2
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22
科研热词 推荐指数 纯化 2 牛血清白蛋白 2 圆二色谱 2 高效疏水相互作用色谱法 1 重组人flt3配体 1 荧光猝灭 1 荧光光谱 1 脂质体电动色谱 1 聚己内酰胺 1 缩宫素 1 紫外光谱 1 磷脂膜色谱 1 疏水相互作用色谱 1 琼脂糖凝胶 1 热力学参数 1 氟氯氰菊酯 1 正辛醇/水系统 1 恩替卡韦 1 复性 1 包涵体 1 亲脂性 1 亲水相互作用色谱 1
色谱的分离原理
色谱的分离原理
色谱的分离原理是基于样品分子在固定相（静态相）和流动相（移动相）之间的不同吸附和分配行为进行的。流动相可以是液体色谱中的流动溶剂或气体色谱中的气体载体。静态相可以是液相色谱中的固定液相或气相色谱中的固定固相。
在液体色谱中，根据分离机理的不同，分为亲水性色谱、离子交换色谱、逆相色谱、手性色谱等。亲水性色谱是根据样品分子与固定液相之间的亲水性相互作用进行分离的。离子交换色谱是利用样品分子与固定液相中离子交换介质之间的离子交换作用进行分离的。逆相色谱是根据样品分子与固定液相之间的疏水性相互作用进行分离的。手性色谱是利用手性固定相和手性样品分子之间的选择性相互作用进行分离的。
在气体色谱中，根据分离机理的不同，分为气相色谱和气液色谱。气相色谱是利用样品分子与固定固相之间的疏气性相互作用进行分离的。气液色谱是在气相色谱的基础上，引入液体静态相来增强样品分子与固定相之间的相互作用，以实现更高的分离效果。
总之，色谱的分离原理是通过样品分子在固定相和流动相之间的吸附和分配行为，利用不同的相互作用机制，实现样品分子的分离。
正相色谱和反相色谱
正相色谱和反相色谱
引言
正相色谱和反相色谱是两种常用的液相色谱技术，被广泛应用于分析化学、生物化学以及制药等领域。这两种技术在色谱柱填料和流动相的选择上存在着反向的原理，因此在分离和分析样品时具有不同的特点和优势。本文将详细介绍正相色谱和反相色谱的原理、应用和比较。
一、正相色谱的原理与应用
1. 原理
正相色谱是一种以极性填料和非极性流动相进行的色谱技术。在正相色谱柱中，填料通常是由含有阳离子基团（如羟基、氨基等）的材料组成，这些填料具有较高的极性。而流动相则是一种非极性溶剂，如烷烃或醚类溶剂。样品分子在正相色谱柱中通过与填料表面的相互作用来分离。在非极性流动相的作用下，样品中的较极性分子将与填料表面发生相互作用，滞留时间较长，而较非极性分子则滞留时间较短。
2. 应用
正相色谱主要应用于分离和定量分析极性化合物。由于填料的选择
通常是具有阳离子基团的材料，因此它们能与极性化合物发生相互
作用，从而实现其分离。正相色谱在分析生物样品中的极性分子（如氨基酸、核苷酸等）以及天然产物中的极性成分具有广泛的应用。
二、反相色谱的原理与应用
1. 原理
反相色谱是一种以非极性填料和极性流动相进行的色谱技术。在反
相色谱柱中，填料通常是由疏水性材料组成，如碳链或含有碳链的
硅胶材料。而流动相则是一种极性溶剂，如水-有机溶剂混合物。样品分子在反相色谱柱中通过与填料表面的相互作用来分离。在极性
流动相的作用下，样品中的非极性分子将与填料表面发生相互作用，滞留时间较长，而极性分子则滞留时间较短。
2. 应用
反相色谱广泛应用于定性和定量分析非极性化合物。由于填料的选
疏水性相互作用色谱
目录
一、概念 二、原理 三、疏水性的吸附剂 四、影响疏水性吸附的因素 五、疏水性相互作用色谱的操作 六、HIC的特点及应用
疏水性相互作用色谱
一、概念
疏 水 性 相 互 作 用 色 谱 (Hydrophobic interaction chromatography，HIC)是利用表面偶联弱疏水性基团(疏水性配 基)的疏水性吸附剂为固定相，根据蛋白质与疏水性吸附剂之间 的弱疏水性相互作用的差别进行蛋白质类生物大分子分离纯化 的洗脱层析法。
被固定相吸附蛋白质在疏水性吸附剂上的分配系数随流动相 盐析盐浓度的提高而增大。
HIC采用高盐下吸附，低盐下洗脱。
盐浓过高， 沉淀不可
原理图示
Mechanism of HIC
三、疏水性吸附剂
常用配基
苯基、短链烷基、 烷氨基、聚乙二醇聚醚
修饰密度
疏水配基修饰密度一般在10~40 umol/ml 疏水性吸附作用与配基的疏水性和配基密度成 正比，故配基的修饰密度应根据配基的疏水性
它不仅是一种有效的分离纯化手段，而且还可与IEC互补短 长，分离纯化利用IEC难以分离的蛋白质。
但是，疏水性相互作用机理比较复状。吸附剂的选择和洗脱 分离条件不易掌握。
六、疏水性相互作用色谱的应用及特点
特点
HIC可作为IEC的补充工具。 可直接分离盐析后的蛋白质 可通过调节疏水性配基链长和密度调节HIC的吸附力 疏水性吸附剂种类多，选择余地大，价格与离子交换
(完整版)第九节疏水作用色谱
第九节疏水作用色谱
疏水作用色谱（Hydrophobic interaction chromatography HIC）是采用具有适度疏水性的填料作为固定相，以含盐的水溶液作为流动相，利用溶质分子的疏水性质差异从而与固定相间疏水相互作用的强弱不同实现分离的色谱方法。
关于在疏水作用色谱条件下进行分离的概念最早在1948年就由Tiselius提出，该技术真正得到发展和应用是在20世纪70年代早期开发出一系列适合进行疏水作用色谱的固定相以后。此后随着新型色谱介质的开发生产和对机理认识的逐步深人，该技术得到了广泛的应用，并且随着高效疏水作用色谱介质的出现，HIC已在HPLC平台上被使用，称为高效疏水作用色谱（High performance hydrophobic interaction chromatography HP-HIC）。
由于疏水作用色谱的分离原理完全不同于离子交换色潜或凝胶过滤色谱等色谱技术，使得该技术与后两者经常被联合使用分离复杂的生物样品。目前该技术的主要应用领域是在蛋白质的纯化方面，成为血清蛋白、膜结合蛋白、核蛋白、受体、重组蛋白等，以及一些药物分子，甚至细胞等分离时的有效手段。
一、疏水作用色谱基本原理
(一) 疏水作用
疏水作用是一种广泛存在的作用，在生物系统中扮演着重要角色，它是球状蛋白高级结构的形成、寡聚蛋白亚基间结合、酶的催化和活性调节、生物体内一些小分子与蛋白质结合等生物过程的主要驱动力，同时也是磷脂和其他脂类共同形成生物膜双层结构并整合膜蛋白的基础。
根据热力学定律，当某个过程的自由能变化(△G)为负值时，该过程在热力学上是有利的，能够自发发生，反之则不能。而根据热力学公式
反相高效液相色谱法原理
反相高效液相色谱法原理
《反相高效液相色谱法原理》
反相高效液相色谱（RP-HPLC）法是一种广泛应用于分离和定量分析的色谱技术。它基于溶液中化合物与填充柱中反相固定相之间的亲疏水性相互作用，实现化合物的分离。
该方法的原理可以用以下步骤来解释：
1. 反相固定相选择：填充柱中的反相固定相通常是由表面修饰的硅胶或其他亲疏水性材料制成。这样的固定相能够与溶液中的化合物通过静电作用和亲疏水性相互作用发生相互作用。
2. 流动相选择：流动相是在反相HPLC中起分离作用的溶液。它通常是由溶解有机溶剂（如甲醇、乙腈）和水所组成的混合物。这种溶剂体系能够改变溶液中化合物与反相固定相之间的亲
疏水性相互作用，从而实现分离。
3. 样品注射和柱温控制：待分离的化合物通常是通过自动或手动方式注入填充柱中。柱温也是
一个重要参数，因为改变温度能够对分离产物的保留时间和分离度产生重要的影响。
4. 色谱条件优化：选择合适的柱尺寸、填充物粒径、流速和温度等参数以优化色谱条件。这些
参数的调整可以影响分析的分辨率、保留时间和峰形。
5. 检测器使用：通常使用紫外-可见吸收检测器来检测色谱分离的化合物。其他常见的检测器
包括荧光检测器和质谱仪（MS）。
通过反相高效液相色谱法，样品中的化合物能够在填充柱中发生亲疏水性相互作用，实现各化
合物分离。可通过控制反相固定相和流动相的选择，实现对色谱分离的优化。这种方法在药物
分析、环境监测、食品检验等领域得到了广泛应用。