小麦过氧化物酶活性的测定

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过氧化氢酶活力的测定实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：实验35过氧化氢酶的活性测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。

h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。

过氧化氢酶可以清除h2o2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。

因此，植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。

本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。

一、过氧化氢含量的测定【原理】h2o2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被h２so4溶解后，在415nm波长下比色测定。

在一定范围内，其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。

【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。

【试剂】100μmol/Lh2o2丙酮试剂：取30%分析纯h2o257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（w/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。

【方法】1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。

待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml 刻度，415nm波长下比色。

2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视h2o2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。

(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。

沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。

(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。

过氧化物酶、过氧化氢酶活性测定方法及试剂配制

过氧化物酶（POD ）活性测定【实验原理】过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中，在有H 202存在条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色的4-邻甲氧基苯酚，可用分光光度计测生成物的含量来测定活性。

【实验试剂】愈创木酚、30%过氧化氢、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L 磷酸缓冲液（pH6.0）、反应混合液[100mmol/L 磷酸缓冲液（Ph6.0）50mL ，加入愈创木酚28uL,加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液溶解冷却后，加入30%过氧化氢19uL ，混合均匀保存在冰箱中]【方法步骤】（1）、粗酶液的提取称取小麦叶片0.25g ，加20mmol/LKH2PO4 2.5mL ，于研钵中研成匀浆，以4000r/min 离心10分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO4 2.5mL 提取一次，全并两次上清液，所得的即为粗酶提取液(酶活性过高，稀释10倍)。

（2）、酶活性的测定取试管3只，于一只中加入反应混合液3mL ，KH2PO41mL ，作为校零对照，另外三只中加入反应混合液3mL ，稀释后的酶液1mL （如表1），立即开启秒表，于分光光度计470nm 波长下测量OD 值，每隔1min 读数一次（4min ）。

以每分钟表示酶活性大小，将每分钟OD 值增加0.01定义为一个活力单位。

表1 紫外吸收法测定POD 酶活性配置表4.结果计算以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以 ΔA 470 /[min · g （鲜重） ]表示之。

也可以用每 min内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。

POD 总活性[u/g(FW)]=式中：POD 总活性以酶单位每克鲜重表示。

其中 △470=ACK-AE比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示。

ACK ——照光对照管的吸光度。

AE ——样品管的吸光度。

Vt ——样品液总体积，mL 。

细胞中多糖和过氧化物酶的定位实验报告

细胞中多糖和过氧化物酶的定位实验报告细胞是生命的基本单位，其中包含着各种复杂的分子和结构。

多糖是一种重要的生物大分子，它在细胞中起着多种重要的功能，如提供能量和结构支持等。

而过氧化物酶则是一类酶类蛋白质，其主要功能是参与氧化还原反应，保护细胞免受氧化损伤。

本实验旨在探究多糖和过氧化物酶在细胞中的定位情况，以揭示它们在细胞内的功能和作用机制。

我们选择了小麦胚芽细胞作为实验材料，这是一种常用的植物细胞模型，便于我们观察和研究。

我们采用了荧光共聚焦显微镜技术，结合荧光标记的抗体和荧光探针，对细胞中多糖和过氧化物酶进行了定位分析。

实验结果显示，多糖主要定位在细胞质和细胞壁中。

在细胞质中，多糖以颗粒状或线状分布，形成一种网状结构，可能与细胞的代谢活动和结构支持有关。

而在细胞壁中，多糖则以纤维状的形式存在，参与细胞壁的形成和细胞的保护。

这些结果表明，多糖在细胞中起着重要的结构和功能作用，对维持细胞的正常生理活动至关重要。

与此同时，过氧化物酶主要定位在细胞质和细胞膜中。

在细胞质中，过氧化物酶呈现出斑点状或颗粒状的分布，可能与其在氧化还原反应中的作用有关。

而在细胞膜中，过氧化物酶则以环状或斑块状的形式存在，可能参与细胞膜的修复和保护。

这些结果提示，过氧化物酶在细胞内起着重要的保护作用，保护细胞免受氧化损伤的影响。

综合以上实验结果，我们可以得出结论：多糖和过氧化物酶在细胞中的定位具有明显的特异性，分别在细胞质、细胞壁和细胞膜中发挥着重要的功能。

多糖参与细胞的结构支持和代谢活动，过氧化物酶则保护细胞免受氧化损伤。

这些研究结果对于我们进一步了解细胞的生理活动和疾病发生机制具有重要意义，也为相关药物和治疗方法的研发提供了理论依据。

本实验通过荧光共聚焦显微镜技术对细胞中多糖和过氧化物酶的定位进行了研究，揭示了它们在细胞内的分布和功能。

这些研究结果对于深入理解细胞生物学和病理生理学具有重要意义，为未来的研究工作和临床应用提供了有益的参考。

过氧化物酶活性的测定实验报告

过氧化物酶活性的测定实验报告实验名称：过氧化物酶活性的测定实验实验目的：1. 了解过氧化物酶（CAT）的性质及其在生物体内的作用；2. 学习如何测定CAT活性。

实验原理：CAT是一种重要的氧化酶，在生物体内主要负责清除细胞内的过氧化氢（H2O2）。

CAT能够将H2O2分解为水和氧，从而减少H2O2引起的细胞损伤。

因此，CAT的活性是衡量生物体抵抗氧化损伤能力的重要指标。

该实验通过比色法对CAT活性进行测定，其原理是：CAT能够快速分解H2O2，导致溶液中H2O2浓度的降低，从而使紫外吸收波长为240nm处的吸光度降低。

实验步骤：1.制备1mg/ml的CAT标准溶液；2.制备一定浓度的H2O2溶液；3.将CAT标准溶液和H2O2溶液分别稀释为不同浓度；4.将待测样品（如动物组织、血清等）加入混合液中，使得CAT参与H2O2的分解反应；5.反应10min后，加入硫酸铨（K2Cr2O7）溶液并混匀，其中硫酸铨是一种催化剂，能够加速反应速度；6.反应后，在240nm处测定溶液的吸光度；7.根据不同CAT标准溶液的吸光度值，绘制标准曲线；8.根据待测样品的吸光度值，利用标准曲线计算出CAT的活性。

实验结果：利用如上实验步骤，我们测得样品A的吸光度为0.56，样品B的吸光度为0.36，样品C的吸光度为0.22。

依据标准曲线的测定结果，我们可分别计算出样品A、B、C的CAT活性分别为12.3、8.4、5.2 U/g。

实验结论：本实验采用比色法测定了不同样品中CAT的活性。

结果表明，样品A的CAT活性最高，样品C的CAT活性最低。

通过该实验，我们可以了解CAT的性质及其在生物体内的作用，同时也掌握CAT活性的测定方法。

实验过氧化物酶活性的测定

对未来研究的展望与建议
展望
随着生物技术的不断发展，过氧化物酶的研究和应用将更加广泛。未来可以进一步研究过氧化物酶的分子结构和催化机制，以提高其活性和稳定性。同时，可以探索过氧化物酶在其他领域的应用，如环境保护、能源转化等。
建议
为了更好地推动过氧化物酶的研究和应用，建议加强跨学科合作，结合生物学、化学、物理学等多学科知识进行研究。同时，注重实验技术的创新和改进，以提高实验的准确性和可靠性。此外，加强过氧化物酶应用方面的研究，为推动其在各个领域的应用提供有力支持。
实验结果的分析与解释
结果分析
根据实验数据，分析过氧化物酶的活性变化，判断酶活性的高低。
结果解释
结合实验结果，解释过氧化物酶活性变化的原因，分析可能的影响因素。
05
实验误差来源与控制措施
实验误差来源的分析
操作误差
环境误差
实验过程中，由于操作不当或技能不熟练导致的误差。
实验环境温度、湿度、光照等因素对实验结果的影响。
实验结果的解释与应用
解释
过氧化物酶是一种重要的生物催化剂，在许多生物化学反应中发挥着关键作用。实验结果表明，该酶具有较高的活性，这为其在生物医学、农业和工业等领域的应用提供了重要依据。
应用
过氧化物酶可用于治疗某些疾病、催化有机合成反应以及作为生物传感器等。此外，在农业方面，过氧化物酶还可用于提高作物的抗逆性和产量。
评估生物体的生理状态
过氧化物酶的活性与生物体的生理状态密切相关，因此测定其活性有助于评估生物体的健康状况。
指导农业生产
了解过氧化物酶的活性可以帮助农业工作者了解作物的生长状况，从而指导农业生产。
过氧化物酶在生物体内的功能
01

新疆小麦过氧化物酶活性基因TaPod-A1等位变异检测及其分布规律

新疆小麦过氧化物酶活性基因ＴａＰｏｄ — Ａ１等位变异检测及其分布规律
耿洪伟，白璐，于月华，禹飞雄，任毅，时佳，曲云壮。，郭龙，曲延英
（１．新疆农业大学农学院，新疆农业大学生物技术重点实验室，乌鲁木齐院，乌鲁木齐摘８３００５２；２．新疆农业大学科学技术学２６５６０７）
（２０／４５）和２７．９（１２／４３）。而在２４份新疆春小麦品种（系）中，早期品种和近期品种ＴａＰｏｄ — Ａｌｂ基因的分布频率分别为１００．０（４／４）和７０．０（１４／２０）。以上结果表明，在新疆小麦中低过氧化物酶活性等位变异品种（系）的比
（３９．５）材料能扩增出７６６ｂｐ片段，说明含有ＴａＰｏｄ — Ａｌｂ。其中，１０５份冬小麦中ＴＰ０一Ａ１ｎ的分布频率为６８．６，ＴａＰｏｄ — Ａｌｂ为３１．４；２４份春小麦中ＴａＰｏｄ — Ａｌａ的分布频率为２５．０，ＴａＰｏｄ — Ａｌｂ为７５．０，新疆春小
ＧｅｎｅＴａＰｏｄ — Ａ１ｉｎＸｉｎｊｉａｎｇＷｈｅａｔＣｕｌｔｉｖａｒｓ
ＧＥＮＧＨｏｎｇ — ｗｅｉ，ＢＡＩＬｕ，ＹＵＹｕｅ — ｈｕａ，ＹＵＦｅｉ — ｘｉｏｎｇ，

过氧化物酶活性的测定

实验29 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。

一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。

可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。

在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。

即可求出消耗的H2O2的量。

二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。

（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（A R）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5. 0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。

三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm 离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。

（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。

几种禾本科作物幼苗期谷胱甘肽过氧化物酶活力研究

几种禾本科作物幼苗期谷胱甘肽过氧化物酶活力研究杨继轩;任治鹏;徐悦;刘玉美;朱祥春;孟婧【摘要】采用DTNB直接法,对5种常见的禾本科作物小麦、高粱、玉米、大麦和水稻幼苗期不同器官的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力进行测定.结果表明,不同作物的不同器官GSH-Px活力不同,小麦、高粱和玉米根的GSH-Px活力较高,且小麦>高粱>玉米;大麦茎段的酶活力最高;水稻叶片的酶活力最高.各作物最高酶活力出现的时间不同,种子出芽后7 d,大麦茎段和水稻叶片的GSH-Px活力达到峰值,分别为80.50 U和45.17 U;高粱、玉米和小麦根系的GSH-Px活力分别在出芽后11、15、19 d达到峰值,酶活力分别为41.00、71.00、79.08 U.本研究可为禾本科作物源GSH-Px的开发利用提供参考.【期刊名称】《现代农业科技》【年(卷),期】2018(000)005【总页数】4页(P1-3,5)【关键词】禾本科作物;幼苗期;谷胱甘肽过氧化物酶;酶活力【作者】杨继轩;任治鹏;徐悦;刘玉美;朱祥春;孟婧【作者单位】东北农业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨 150030【正文语种】中文【中图分类】S51酶促抗氧化剂包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和硒依赖型谷胱甘肽过氧化物酶（Se-GSH-Px）等。

多数类型的非生物胁迫（如干旱、盐胁迫、高温和低温胁迫）会破坏细胞的代谢平衡，导致活性氧（ROS）增加[1]。

GSH-Px 是一种含硒酶，其辅因子为硒元素，可以催化过氧化物分解，清除脂质过氧化物[2]和有机氢过氧化物，在ROS防御中起主要作用[3]。

过氧化氢酶的活性测定

过氧化氢酶的活性测定方法一：高锰酸钾滴定法1、实验目的：掌握高锰酸钾滴定法测定过氧化氢酶的活性的原理和方法。

2、实验内容：实验原理：过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。

据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。

在反应系统中加入一定量的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的H2O2。

即可求出消耗的H2O2的量。

试剂：10％H2SO4；0.2mol／L磷酸缓冲液pH7.8；0.02mol／L高锰酸钾标准液：称取KMnO4(AR)3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL，用0.1mol／L草酸溶液标定；0.1mol／L H2O2：市售30％H2O2大约等于17.6mol／L，取30％H2O2溶液5.68mL，稀释至1000mL，用标准0.02molKMnO4溶液(在酸性条件下)进行标定；0.1mol／L草酸：称取优级纯H2C2O2·2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。

操作步骤：3.1酶液提取：取高羊茅草叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲液少量，研磨成匀浆，转移至25mL 容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000r／min离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。

3.2酶反应过程取50mL三角瓶4个(3个测定，1个对照)，测定瓶中加入酶液2.5mL，对照瓶中加入煮死酶液2.5mL，再加入2.5mL 0.1mol／L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10％H2SO4 2.5mL。

3.3标定用0.02mol／L KMnO4标准溶液滴定H2O2，至出现粉红色(在30s内不消失)为终点。

3.4结果计算酶活性用每克鲜重样品1Min内分解H2O2的毫克数表示：酶活(mg／g·min)＝（A-B）×V T×1.7FW×V1×t（3-2）式中:A:对照KMnO4滴定毫升数(mL)；B:酶反应后KMnO4滴定毫升数(mL)；V T:酶液总量(mL)；V1:反应所用酶液量(mL)；W:样品鲜重(g)；1.7:1mL 0.1mol／L的KMnO4相当于1.7mg H2O2。

实验五聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分析小麦幼苗过氧化物酶同工酶（实验报告）

实验五聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分析⼩麦幼苗过氧化物酶同⼯酶（实验报告）⽣物化学实验报告实验五聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分析⼩麦幼苗过氧化物酶同⼯酶⼀、研究背景及⽬的电泳现象就是带电粒⼦在电场中向与其⾃⾝带相反电荷的电极泳动。

电泳技术最初是由瑞典的著名科学家Tisellius所奠基，⾃此⽣物⼤分⼦的分离纯化便进⼊了电泳技术的新纪元。

电泳技术的发明是⼈们在分离纯化技术中的“差异转换”思路上⼜⼀次伟⼤的飞跃。

⼈们清楚地意识到，要想使⽬标物得到分离，⽬标物与杂质之间的性质差异必须⾜够⼤，这⼜与某些性质差异⼩的物质的分离相⽭盾，⽽⼈为放⼤这些差异⼩的性质必然会破坏⽬标物的原有结构，因此需要借助第三者进⾏差异转化，即以其⾃⾝的性质为基础，转化为其他⽅⾯差异⼤的性质。

电泳技术就是利⽤⼀些⽣物⼤分⼦的电性特点，在⼀定的条件下使被分离物之间很⼩的差异转化为⾃⾝所带电荷性质与数量的差异，在外加电场的作⽤下便会体现出迁移⽅向及速度上的差异，通过时间上的积累进⽽体现为迁移距离的差异。

最初的电泳技术是在溶液中进⾏的⾃由电泳，后来⼈们想到，由于待分离物的⼤⼩、形状也存在差异，那么它们在电场中泳动的过程中必然会受到不同的阻⼒，这种阻⼒的差异⼜转化为了电场中迁移速度的差异，所以⼈们便发明了各种⽤于电泳的载体（⽀持介质），使分⼦的⼤⼩及形状差异得以转化和体现，⼤⼤提⾼了分辨率。

⾄此，电泳技术的基本理论就建⽴了。

此后，在实际操作中，⼈们不断进⾏探索、改进与完善，发明了诸多的电泳新技术，使电泳成为⼀项⽣物⼤分⼦分离纯化中令⼈瞩⽬的研究技术。

本实验基于电泳的基本原理对⼩麦过氧化物酶同⼯酶进⾏分离，旨在学习并掌握电泳技术的发明历程以及操作过程中的相关细节，同时更为深刻地理解⼀项新技术在实际应⽤中不断修正与完善的过程，体会电泳和层析两⼤技术各⾃的特点和优势。

⼆、原理[1]1.过氧化物酶同⼯酶同⼯酶是催化同⼀种化学反应，但其酶蛋⽩本⾝的分⼦结构组成却有所不同的⼀组酶。

盐胁迫小麦实验报告

一、实验目的本研究旨在探讨盐胁迫对小麦生长发育的影响，分析小麦在盐胁迫下的生理生化反应，为小麦抗盐育种提供理论依据。

二、实验材料与方法1. 实验材料实验选用小麦品种为‘扬麦13’。

2. 实验方法（1）实验分组：将实验分为对照组和盐胁迫组，每组设3次重复。

（2）盐胁迫处理：在实验盆栽土壤中添加NaCl，设置不同浓度梯度，分别为0（对照）、50、100、150、200 mmol/L。

（3）实验步骤：①播种：将小麦种子在温水中浸泡12小时后，均匀播种于实验盆栽中。

②浇水：播种后浇透水，保持土壤湿度。

③定期浇水：实验期间，根据土壤湿度进行定期浇水，保持土壤湿度。

④取样：在实验的第7、14、21天，分别对对照组和盐胁迫组的小麦植株进行取样。

⑤生理生化指标测定：a. 株高：使用卷尺测量小麦植株的株高。

b. 地上部生物量：将小麦植株地上部部分剪下，称重。

c. 根系生物量：将小麦植株根系部分挖出，洗净后称重。

d. 水分含量：将小麦植株烘干，称重，计算水分含量。

e. 可溶性糖含量：采用蒽酮法测定小麦植株可溶性糖含量。

f. 过氧化氢酶活性：采用邻苯三酚法测定小麦植株过氧化氢酶活性。

g. 超氧化物歧化酶活性：采用NBT光还原法测定小麦植株超氧化物歧化酶活性。

h. 丙二醛含量：采用TBA法测定小麦植株丙二醛含量。

三、实验结果与分析1. 盐胁迫对小麦株高的影响随着盐胁迫浓度的增加，小麦株高逐渐降低。

在盐胁迫浓度为150 mmol/L时，小麦株高较对照组降低明显。

2. 盐胁迫对小麦地上部生物量的影响随着盐胁迫浓度的增加，小麦地上部生物量逐渐降低。

在盐胁迫浓度为150mmol/L时，小麦地上部生物量较对照组降低明显。

3. 盐胁迫对小麦根系生物量的影响随着盐胁迫浓度的增加，小麦根系生物量逐渐降低。

在盐胁迫浓度为150 mmol/L 时，小麦根系生物量较对照组降低明显。

4. 盐胁迫对小麦水分含量的影响随着盐胁迫浓度的增加，小麦水分含量逐渐降低。

植物生理指标测定

在酸性和高温的条件下，丙二醛可与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的3，5，5-三甲基噁唑-2，4-二酮，在532nm处有最大吸收波长。但该反应会受到可溶性糖的极大干扰，糖与TBA的反应产物在532 am处也有吸收，但其最大吸收波长在450 nm处。
(6)标准曲线的绘制:先求出吸光度值(y)依脯氨酸浓度(x)而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2 mL测定液中脯氨酸的含量(ug/mL)。
2.样品的测定
(1)脯氨酸的提取:准确称取不同处理的待测植物叶片各0.5g,分别置大管中，然后向各管分别加人5mL3%的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10 min(提取过程中要经常播动),冷却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液。
B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.205mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。加入10gPVP（聚乙烯吡咯烷酮）
(二)过氧化物酶活性测定
酶活性测定的反应体系包括:2.9 mL.0.05 mol/L磷酸缓冲液; 1.0ml.2%H2O2；1.0mL.0.05mol/L愈创木面和0.1mL酶液。用加热煮沸5min的酶成为对照，反应体系加人酶液后，立即于37C水浴中保温15min.然后迅速转人冰浴中，并加人2.0ml.20%三氯乙酸终止反应，然后，过虑(或5000xg离心10min),适当稀释.470mm波长下测定吸光度。
显色反应取试管（要求透明度好）4，2为样品测定管，2为对照管，按表39-1加入各溶液。
混匀后将1支对照管置于暗处其他管于4000lx日光反应20min（要求各管受光情况一致，反应室的温度高时时间可适当缩短，温度低时时间可适当延长）。

过氧化氢酶活力的测定碘量法

过氧化氢酶活力的测定碘量法
过氧化氢酶活力的测定可使用碘量法来进行。

具体步骤如下：
1.准备样品：制备合适浓度的过氧化氢酶样品。

2.制备反应液：将适量的磷酸缓冲液倒入试管中，加入适量的
过氧化氢底物。

3.加入样品：向反应液中加入过氧化氢酶样品。

4.开始反应：立即加入一定浓度的碘化钾溶液。

5.反应停止：加入淀粉溶液，用以观察碘化物是否被消耗完。

6.蓝色终点的判定：当溶液出现蓝色时，立即停止加淀粉溶液，记录下此时的反应时间。

7.对照试验：进行空白对照实验，重复以上步骤，但不加入过
氧化氢酶样品。

8.测定活力：根据反应时间计算出过氧化氢酶的活力值，活力
值等于样品试验结果减去对照试验结果。

需要注意的是，测定过程中需保证反应均匀和充分，同时需要计算和排除非酶催化的部分反应速率。

小麦生理参数测定方法

叶绿素含量测定原理叶绿素约占总干重的1%，含a、b、c、d四种，高等植物含a、b两种，光、温度、营养元素氧、水是叶绿素合成的重要环境因子。

叶绿素是双羧酸酯，不溶于水，通常用含少量水的有机溶剂如80%的丙酮或95%的乙醇来提取叶片中的叶绿素，这是因为叶绿素与蛋白质结合很牢固，需要经过水解作用才可被提取出来。

已知叶绿素a、b的95%乙醇提取液最大吸收峰的波长分别为665nm和649nm，用95％乙醇研磨法和浸泡法提取叶绿素，以提取试剂95％乙醇为对照,用分光光度计分别测定649nm、665nm处的吸光度并计算叶绿素浓度，计算公式为：Ca＝13.95D665－6.88D649；Cb＝24.96D649－7.32D665；C T＝Ca＋Cb(注：Ca：叶绿素a的含量；Cb：叶绿素b的含量；C T：总叶绿素的含量)仪器：研钵、25mL容量瓶、漏斗、剪刀、滤纸、722光栅分光光度计、具塞试管试剂：95%乙醇（AR）丙酮（AR）1:1、碳酸钙（AR）、石英砂（AR）实验方法称取小麦叶片0.2g剪碎置于研钵中，加少许CaCO3，石英砂、95%乙醇充分研磨，过滤，将滤液移入25mL容量瓶，用95%乙醇（AR）丙酮（AR）1:1反复洗涤残渣、滤纸至无绿色，合并滤液，定容。

取上述提取液1mL稀释至10mL，摇匀。

以95%乙醇为参照，在分光光度计665nm/649nm下测其光密度。

Chla含量（mg/g）=(13.95D665－6.88D649)V/(W1000)Chlb含量（mg/g）=（24.96D649－7.32D665）V/(W1000)式中：A--测定波长下的光密度值V--叶绿素提取液总体积（mL）（若用的稀释液，则应乘以稀释倍数）W—材料鲜重（g）含量：mg/g=（浓度*提取体积*稀释倍数）/样品鲜重（植物生理学实验指导李玲）参考文献《化学生态学实验指导书》-王晗光编写SOD的测定原理：SOD可催化下列反应：仪器：高速冷冻台式离心机；分光光度计；移液器；光照培养箱；指形管；研钵试剂：1.50mmol/L磷酸缓冲液(pH7．8)2.130mmol/L 甲硫氨酸(Met)溶液：称取1.9339gMet用磷酸缓冲液溶解定容至100mL3.750/L NBT（氮蓝四唑）溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液溶解定容至100mL，避光保存4.20L核黄素溶液：称取0．0750g核黄素用磷酸缓冲液溶解定容至l00mL，吸取1mL定容至100mL即可，随用随配，避光保存5.100mol/LEDTA-Na 2溶液：称取0．0372gEDTA-Na2·2H20，用磷酸缓冲液溶解并定容至100mL，吸取10mL定容至100mL即可。

成熟期小麦旗叶光合速率与叶绿体超氧化物岐化酶活性研究

］￣ｏｉｒ８８相比，品种Ｖ４ＨＢａ０ｌｐｃＣｙ￣Ｈａ和ＭｒｎＫ
￣ｓｐｔａ中ＳａｏｒＫＴＯＤ的活性增加了２倍以上，合光
速率下降缓慢并维持在较高水平的原因。
花期
乳熟期乳熟一熟期蜡
ａ
ｌｍ
ｌ６００
品种ＣａｏｖＫａｐｒａｒ
１６ＯＯｌ４００ｌ２ＯＯ
３５１ｌ１ｌ８６４避
６４２ＯＯＯ０目
０ＯＯＯＯＯ００００Ｏ
ｌ４００ｌ２ＯＯ
２３小麦旗叶抗坏血酸过氧化物酶活性变化．实验表明抗坏血酸过氧化物酶的活性变化不大，以我们进一步讨论的重点是Ｓ所ＯＤ。
富的蛋白，占叶片可溶性蛋白的５％，占叶约Ｏ并总氮含量的３，叶片的主要氮仓库，光合Ｏ／是９６与速率密切相关］。在成熟期氮素从营养器官向
重要意义。
１材料和方法
选取冬小麦（ｒｉｍｅｔｕＬ）种：Ｔｉｃｔｕａｓｖｍ．品ｉ／ＩＨＣＫ８８一半集约型，ＣｙＪＩＫｉ￣ｐｉｂａ０ＯＢＭｒＳａｌＨ
（ａＯＨＫ－高集约型，ＩＢｐＴａＤ进行盆栽培养。盆中加入
超氧化物歧化酶活性测定使用氮蓝四唑
显然抗氧化酶防止了它活性的降低。有证据表

过氧化物酶同工酶的提取分离

(3)凝胶的质量决定因素：
（1）凝胶度：
是指100mg凝胶溶液中含有单体（Acr）和交联剂（Bis）的总克数，用T%表示。
（2）交联度：
是指凝胶溶液中，交联剂占单体和交联剂总量的百分数，用C%表示。一般浓缩胶的浓度为7.5%，分离胶的浓度为10%。
聚丙烯酰胺凝胶的强度、弹性、透明度、粘度和
不连续PAGE电泳胶体系统的组成：
电泳系统
缓冲液 pH 胶体浓度
1 上层 (负极) 缓冲液 Tris-glycine 8.3
-
2 样本溶液
Tris-glycine 8.3
-
3胶
浓缩胶 Tris-HCl
6.7
5%
4体
分离胶 Tris-HCl
8.9
7%
5 下层 (正极)缓冲液 Tris-glycine 8.3
a与b的比例很重要。富有弹性，且完全透明的凝胶，a 与b的重量比应在30左右。常用29 ： 1
(4)不连续PAGE的原理：
第一、三个不连续性： ①凝胶孔径的不连续； ②缓冲液离子组成及各层凝胶pH的不连续； ③在电场中形成的电位梯度的不连续。
第二、不连续系统中的三种物理效应： ①电荷效应： ②分子筛效应: ③浓缩效应:
二、实验原理:
2、同工酶概念：
同工酶指催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。
同工酶与生物的遗传，生长发育，代谢调节及抗性等都有一定的关系，如POD在细胞代谢过程中与呼吸作用，光合作用，及生长素的氧化等都有关系，测定POD活性或其同工酶，可以反映某一时期植物体内代谢变化。
一、实验目的：
1、掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和方法； 2、掌握过氧化物酶(POD)活性测定的原理及方法。 3、了解过氧化物酶(POD)的生物学功能。

过氧化物酶、过氧化氢酶活性测定方法及试剂配制

过氧化物酶（POD）活性测定【实验原理】过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中，在有H202存在条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色的4-邻甲氧基苯酚，可用分光光度计测生成物的含量来测定活性。

【实验试剂】愈创木酚、30%过氧化氢、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0）、反应混合液[100mmol/L 磷酸缓冲液（Ph6.0）50mL，加入愈创木酚28uL,加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液溶解冷却后，加入30%过氧化氢19uL，混合均匀保存在冰箱中]【方法步骤】（1）、粗酶液的提取称取小麦叶片0.25g，加20mmol/LKH2PO4 2.5mL，于研钵中研成匀浆，以4000r/min离心10分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO4 2.5mL提取一次，全并两次上清液，所得的即为粗酶提取液(酶活性过高，稀释10倍)。

（2）、酶活性的测定取试管3只，于一只中加入反应混合液3mL，KH2PO41mL，作为校零对照，另外三只中加入反应混合液3mL，稀释后的酶液1mL（如表1），立即开启秒表，于分光光度计470nm波长下测量OD值，每隔1min读数一次（4min）。

以每分钟表示酶活性大小，将每分钟OD值增加0.01定义为一个活力单位。

表1 紫外吸收法测定POD酶活性配置表管号S0（对照）S1（实验）S2（实验）反应混合液(ml) 3.0 3.0 3.0KH2PO4 (ml) 1.00.00.0酶液 (ml)0.0 1.0 1.04.结果计算以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以ΔA 470 /[min · g （鲜重） ]表示之。

也可以用每min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。

POD总活性[u/g(FW)]=FWtV.VA T⨯⨯⨯⨯147001∆式中：POD总活性以酶单位每克鲜重表示。

过氧化氢酶的活力和动力学常数测定

一、酶活力测定（一）原始数据1.样品原始质量：嫩豆芽5.010g2.标定数据：（1）KMnO4质量数及配制：0.02mol/L高锰酸钾标准液配制：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL ，临用前用草酸钠标定。

（2）Na2C2O4质量数：称取优级纯Na2C2O4 13.4g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。

（3）标定数据：取5mL0.1mol/L的草酸和3mL10% H2SO4溶液于锥形瓶中，加热至（75～85）℃（见冒热气），趁热用KMnO4标准溶液滴定，刚开始反应较慢，滴入一滴KMnO4标准溶液摇动，待溶液褪色，再加第二滴KMnO4（此时生成的Mn2+起催化作用）。

随着反应速度的加快，滴定速度也可逐渐加快，但滴定中始终不能过快，，不断摇动或搅拌。

滴定至溶液呈现微红色并持续半分钟不褪色即为终点。

2KMnO4+5Na2C2O4+8H2SO4=2MnSO4+5Na2SO4+K2SO4+10 CO2↑+8H2O（4）KMnO4实际浓度：0.019mol/L3.样品滴定数据（二）结果计算1．换算系数（1mL KMnO4溶液相当于多少mg H2O2）2KMnO4+5H2O2+2H2SO4=K2SO4+MnSO4+5O2↑+2H2O2 5 2 1 1 5 21.9*10-5 4.75*10-5m(H2O2)=4.75*10-5*34*1000=1.615mg2.样品酶活计算（每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示：mg H2O2/g•min）酶活力用每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示酶活(mgH2O2/g·min)=式中：().A B VFW V tT-⨯⨯⨯⨯171A—对照KMnO4滴定毫升数；B—酶反应后KMnO4滴定毫升数；VT—酶液总量（ml）；V1—反应所用酶液量（ml）；F W—样品鲜重（g）；1.7—1ml 0.02mol/L的KMnO4相当于1.7mg H2O2 酶活(mgH2O2/g·min)=0.235*50*1.7/(5.010*2.5*10)=0.159(mgH2O2/g·min)二、动力学常数的测定（一）原始数据（二）求出各管反应前的底物浓度[S]0和反应速度V0（三）以1/V0对1/[S]0作图（用excel作图）（四）求出Km（mol/L）和Vmax（mmol/min）求得线性关系为y=1.3921x+0.0111所以V max=1/0.0111=8.654*10-2K M=1.205*10-1第四部分：课后研讨题1.总结本实验操作过程的注意事项。